脂蛋白脂肪酶外显子9基因突变研究

目的 :筛查国人脂蛋白脂肪酶 (LPL)外显子9基因突变和Ser447→stop突变频率 ,并探讨该突变对血脂水平的影响。方法 :依血脂测定结果 ,将169例分为高甘油三酯血症组(HTG组 ) ,48例和正常甘油三酯组(对照组 )121例 ,利用聚合酶链反应 -单链构象多态性和聚合酶链反应 -限制性片段长度多态性分析技术对待测人群的LPL基因外显子9及其相邻内含子区域进行突变筛查 ,并对典型单链构象电泳图谱携带者进行PCR产物测序。结果 :在169例中检出1例Ser447→stop突变纯合子 ,50例Ser447→stop杂合子 ,未检出其它位点的突变 ;HTG组的Ser447→stop突变检出率 (25.0 % ,12/48)明显低于对照组 (31.4 % ,38/121) ,HTG组的Stop447 等位基因频率(12.5% )明显低于对照组 (16.5% ),两组比较差别均有统计学意义(P<0.01)。结论 :我国人群中LPL外显子9突变种类单一 ,Ser447→stop是一高频率的多态性位点 ,Stop447等位基因可能有轻微的降低血浆甘油三酯的作用。     

一种新的脂蛋白脂肪酶基因突变(C562→T)

目的:筛查国人(天津地区)脂蛋白脂肪酶基因突变情况,并探讨其对血脂水平的影响。方法:利用聚合酶链反应-单链构象多态性分析技术,对386例患者(血脂正常组278例,血脂异常组108例)的脂蛋白脂肪酶基因进行突变筛查,对可疑突变的扩增样品进行DNA序列测定。结果:在386例样本中,检出1例外显子3C562→T(Leu103→Leu)同义突变杂合子。结论:新LPL突变(C562→T)的发现,对进一步阐述LPL结构与功能的关系有重要的参考价值。     

一种新的脂蛋白脂肪酶基因突变（C^56→T）

目的：筛查国人（天津地区）脂蛋白脂肪酶基因突变情况，并探讨其对血脂水平的影响。方法：利用聚合酶链反应-单链构象多态性分析技术，对386例患者（血脂正常组278例，血脂异常组108例）的脂蛋白脂肪酶基因进行突变筛查，对可疑突变的扩增样品进行DNA序列测定。结果：在386例样本中，检出1例外显子3 C^56→T（Leu^103→Leu）同义突变杂合子。结论：新LPL突变（C^56→T）的发现，对进一步阐述IJPL结构与功能的关系有重要的参考价值。     

先天性肾上腺皮质增生症21羟化酶基因突变的研究

目的：检测32例21－OHD患儿CYP 21 3个点突变。方法：采用PCR－ACRS方法检测了32例21－OHD患儿及其家系3个点突变。结果：3例患儿为CYP 21第2内含子656位点突变，2例患儿为CYP 21第4外显子CD 172点突变，3例患儿为CYP 21第8外显子CD 356点突变。患儿为纯合子，家系成员为杂合子。结论：采用PCR－ACRS检测CYP 21点突变方法简便，结果可靠。     

PS-1基因外显子5～9的突变研究

目的：筛查PS-1基因外显子5-9的突变，了解PS-1基因突变在中国人群中的分布情况及在中国人群阿尔茨海默病（AD）发病中可能产生的影响。方法：利用PCR-SSCP分析技术对120例正常体检人群PS-1基因外显子5-9进行突变筛查。结果：在这5个外显子中未发现任何突变，但在内含子9中第16位核苷酸处发现一种基因多态性位点，T／G基因型频率为65．8％，T／T基因型的频率为34．2％，未发现GiG基因型；等位基因T的频率为67．1％，等位基因G的频率为32．9％。结论：PS-1基因外显子5-9的突变频率较低，可能不是中国人群AD的主要危险因素：内含子9多态性与AD之间的关系还需进一步研究证实。     

连接酶-ELISA反应检测循环DNA基因突变研究

摘要： 目的 研究一种简便、 灵敏的单核苷酸多态性 （SNP） 分型方法, 使其能够在简单实验条件下进行常规的临床样本检测。方法 设计针对突变位点的检测探针, 通过检测探针的连接、 通用扩增、 标记和 ELISA 反应, 根据检测位点对应反应管显色值判定突变位点的基因型。以表皮生长因子受体（EGFR）基因外显子 21 和 18 上的 3 个 SNP 突变位点 L858R、 L861Q 和 G719C 为检测对象, 对 62 例肺癌血浆循环 DNA 样本进行检测, 并与直接测序结果进行比较。结果 通过对 3 个突变位点的检测, 2 种方法均在 L858R 位点检出杂合子突变。直接测序法仅能够明确检出 2 例杂合子突变, 另外 1 例样本因在突变位点出现不明显的套峰而无法明确判定突变类型。而新方法能够明确检出 6 例杂合子突变。结论 建立了一种基于连接酶-ELISA 的简便、 灵敏的 SNP 突变检测方法, 适合于在简单实验条件下对不均一样本进行常规突变检测。     

2型糖尿病GLUT4的基因突变筛查和方法学探讨

目的：探讨2型糖尿病(DM)患者葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)基因外显子4a的基因突变在2型DM发病机制中的作用。方法：采用聚合酶链反应—单链构象多态性分析(PCR-SSCP)方法对220例2型DM患者和150例健康对照者的GLUT4基因外显子4a进行筛查，并对筛选的突变基因进行测序分析。结果：在220例2型DM患者中，共检出4例在外显子4a内AAC→AAT（Asn^130）的突变，1例纯合子，3例杂合子，突变率为1．82％。在150例健康对照者中，未发现任何突变。两组突变率无差别(P＝0．157)。结论：GLUT4基因突变在2型DM患者中的发生率较低，不是2型DM致病的主要原因。但2型DM是一种多基因疾病，单个基因突变可能与胰岛素信号途径中的其他突变及环境因素相互作用，导致2型DM的易感性增加。     

13例Wilson病患者基因8号外显子778密码子碱基突变的SSCP及酶切分析

目的 寻找山东籍Wilson病患者WND基因突变热点,以便易于用SSCP及酶切分析方法检出。使无先证者及独生子女家系易于作出基因诊断,同时可用于杂合子筛查。方法 PCR扩增WND基因8号外显子778密码子区域,SSCP检洲点突变,用MSPI内切酶进一步验证G-T突变的正确性。结果 13例Wilson患者,检出778密码子G-T纯合突变2例,杂舍突变7例,未突变4例,共计26条染色体,突变染色体11条,总染色体突变率为42.3％。结论 WND基因8号外显子,778密码子G-T突变是山东WD患者的一个突变热点。SSCP和酶切分析是诊断此位点突变的便捷方法,可用于WD患者及杂合子检出。     

2 型糖尿病患者胰岛素受体胰岛素结合域基因突变的研究

目的研究胰岛素受体结合域基因突变与胰岛素受体(INSR)功能异常的关系。方法采用聚合酶链反 应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析法和核酸银染法,对70例2型糖尿病患者INSR结合域基因第2,3,6三个外 显子(exon)及部分相邻内含子进行基因突变检测。结果在对外显子6的检测中发现有9例突变,突变又可分为 B,C两种不同的SSCP带型。其中B型7例,C型2例,C型突变经测序结果,与外显子6的3＇端毗邻的内含子的第 43位A→C突变。在外显子3中发现了2例突变,为同一带型。在外显子2中尚未发现突变带型。结论INSR结 合域基因的突变在2型糖尿病中出现的频率较低。C型突变对INSR结合域的影响及其在2型糖尿病发病中的作 用尚待进一步研究。     

肝豆状核变性患者ATP 7B基因外显子8、12、18的DNA测序突变

目的 对肝豆状核变性(WD)患者ATP7B基因外显子(exon)8、12、18进行PCR扩增测序,研究其突变特点.方法 对30例患者(WD组)和10例健康者(对照组)提取外周血基因组DNA,PCR扩增ATP7B基因外显子8、12、18相关片段,并对扩增产物进行测序和分析测序结果 .结果 对照组未见异常,WD组发现12例患者外显子8有突变,突变率为40.0%,测序发现有6例患者外显子Arg778leu呈复合杂合子突变;发现4例外显子12有突变,有2例患者存在双重突变,外显子18未检出突变.结论 WD的ATP7B基因外显子8、12为突变的热点区,18号外显子不是突变热点.