芹菜素对子宫内膜癌HEC-1-B细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的　研究芹菜素对子宫内膜癌细胞HEC-1-B增殖、侵袭、迁移、凋亡的影响及其作用机制。方法　取对数生长期的HEC-1-B细胞,加入0、20、40和80 μmol/L的芹菜素,采用CCK-8法检测培养24、48和72 h后细胞的光密度,计算增殖抑制率。流式细胞术检测细胞凋亡水平,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力变化。Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2以及磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、磷酸化PI3K（p-PI3K）、蛋白激酶B（AKT）和磷酸化AKT（p-AKT）的表达水平。结果　20~80 μmol/L范围内,随着芹菜素干预浓度的升高,HEC-1-B细胞的增殖明显受到抑制,细胞凋亡率升高,同时促凋亡蛋白Bax表达增高,抗凋亡蛋白Bcl-2表达下降。0、5、10和20 μmol/L范围内,随着芹菜素干预浓度的升高,HEC-1-B细胞侵袭和迁移能力下降。Western blot结果显示,40 μmol/L芹菜素能够下调PI3K/AKT通路蛋白p-PI3K和p-AKT的表达。结论　芹菜素能够抑制HEC-1-B细胞增殖、侵袭、迁移并促进其凋亡,其作用机制可能与PI3K/AKT信号通路有关。     

血府逐瘀合剂对PDGF-BB诱导的血管平滑肌细胞增殖、迁移及PI3K/AKT/GSK-3β/β-catenin信号通路的影响

摘要：目的:探究血府逐瘀合剂对血小板衍生生长因子（PDGF）-BB诱导的血管平滑肌细胞增殖、迁移及磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶/糖元合成酶激酶3β/β-连环蛋白（PI3K/AKT/GSK-3β/β-catenin）信号通路的影响。方法:利用重组鼠PDGF-BB体外刺激大鼠胸大动脉平滑肌细胞A7R5诱导增殖、迁移模型,分为6组：对照组、PDGF-BB组、低剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组、高剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组、PI3K激活剂+PDGF-BB组、PI3K激活剂+高剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组,CCK-8法检测A7R5细胞增殖活力;流式细胞术检测A7R5细胞周期;细胞划痕实验检测A7R5细胞迁移情况;免疫印迹检测A7R5细胞增殖、迁移相关蛋白及PI3K/AKT/GSK-3β/β-catenin信号通路相关蛋白。结果:与对照组比较,PDGF-BB组A7R5细胞增殖率、迁移面积、S期比例,PCNA、cyclin D1、MMP9蛋白及p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-GSK-3β/GSK-3β、胞核β-catenin/总β-catenin蛋白比值显著增加,G0/G1期比例、E-cadherin蛋白显著减少（P＜0.05）;与PDGF-BB组比较,低、高剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组A7R5细胞增殖率、迁移面积、S期比例,PCNA、cyclin D1、MMP9蛋白及p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-GSK-3β/GSK-3β、胞核β-catenin/总β-catenin蛋白比值显著减少,G0/G1期比例、E-cadherin蛋白显著增加,且高剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组优于低剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组（P＜0.05）;与高剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组比较,PI3K激活剂+高剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组A7R5细胞增殖率、迁移面积、S期比例,PCNA、cyclin D1、MMP9蛋白,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-GSK-3β/GSK-3β、胞核β-catenin/总β-catenin蛋白比值显著增加,G0/G1期比例、E-cadherin蛋白显著减少（P＜0.05）。结论:血府逐瘀合剂可抑制PDGF-BB诱导的血管平滑肌细胞增殖、迁移,可能通过抑制PI3K/AKT/GSK-3β/β-catenin信号通路而实现。     

PD-L1反义寡核苷酸纳米颗粒对胃癌细胞侵袭和免疫因子分泌作用

摘要：目的:探讨细胞程序性死亡蛋白配体1(PD-L1)反义寡核苷酸纳米颗粒对胃癌细胞侵袭和免疫因子分泌的作用。方法:人胃癌细胞AGS分成对照(Control)组、聚氰基丙烯酸丁酷纳米粒(PBCA-NP)组、PD-L1正义寡核苷酸(SOND)组、PD-L1反义寡核苷酸(ASOND)组、PD-L1反义寡核苷酸纳米颗粒(ASOND-NP)组、ASOND-NP+胰岛素样生长因子1(IGF-1)组,采用Western Blot法检测PD-L1、磷酸化的磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、PI3K、磷酸化的苏氨酸激酶(p-AKT)、AKT、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白的表达,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell小室检测细胞迁移和侵袭,ELISA法检测血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子-β(TGF-β)、白细胞介素-6(IL-6)水平。结果:与Control组和SOND组比较,ASOND组胃癌细胞中PD-L1、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白表达减少,细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高,Bax蛋白表达增多,Bcl-2、PCNA蛋白表达减少,细胞侵袭数目、迁移数目和MMP-2、MMP-9蛋白表达均减少,细胞分泌的VEGF、TGF-β、IL-6均减少(P<0.05);与PBCA-NP组和ASOND组比较,ASOND-NP组胃癌细胞中PD-L1、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白表达减少,细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高,Bax蛋白表达增多,Bcl-2、PCNA蛋白表达减少,细胞侵袭数目、迁移数目和MMP-2、MMP-9蛋白表达均减少,细胞分泌的VEGF、TGF-β、IL-6均减少(P<0.05);与ASOND-NP组比较,ASOND-NP+IGF-1组胃癌细胞中p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白表达增多,细胞增殖活性升高,细胞凋亡率降低,Bax蛋白表达减少,Bcl-2、PCNA蛋白表达增多,细胞侵袭数目、迁移数目和MMP-2、MMP-9蛋白表达均增多,细胞分泌的VEGF、TGF-β、IL-6均增多(P<0.05)。结论:PD-L1反义寡核苷酸纳米颗粒通过抑制PI3K/AKT信号抑制胃癌细胞侵袭、迁移并减少免疫因子VEGF、TGF-β、IL-6分泌。     

青藤碱通过调控PI3K/AKT通路介导的上皮间质转化抑制胰腺癌AsPC-1细胞侵袭和转移

目的 探讨青藤碱对胰腺癌AsPC-1细胞上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition，EMT）、侵袭和转移的影响及机制。方法 采用不同浓度青藤碱作用胰腺癌AsPC-1细胞后，划痕愈合试验检测细胞愈合能力，Transwell试验检测迁移细胞数和侵袭细胞数，Western blotting检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达。结果 青藤碱降低AsPC-1细胞相对迁移率、迁移细胞数、侵袭细胞数。青藤碱上调E-cadherin蛋白表达、下调N-cadherin、Vimentin蛋白表达。青藤碱降低p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值。胰岛素生长因子-1逆转青藤碱对E-cadherin蛋白表达的上调和对N-cadherin、Vimentin蛋白表达的下调作用。TGF-β逆转青藤碱对AsPC-1细胞相对迁移率、迁移细胞数、侵袭细胞数的降低作用。结论 青藤碱通过调控PI3K/AKT通路介导的EMT，抑制AsPC-1细胞侵袭和转移。     

异补骨脂查耳酮对鼻咽癌CNE1细胞增殖和转移的影响及作用机制的研究

摘要：目的:探讨异补骨脂查耳酮对鼻咽癌CNE1细胞增殖和转移的影响及作用机制。方法:采用CCK-8、克隆平板、划痕和Transwell实验检测不同浓度(10,20,40μmol·L-1)异补骨脂查耳酮对鼻咽癌CNE1细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力的影响;利用生物信息学技术分析异补骨脂查耳酮的核心作用靶点;Western Blot检测异补骨脂查耳酮对其核心作用靶点表皮生长因子（EGFR）及其下游通路蛋白磷脂酰肌醇-3-羟激酶（PI3K）、磷酸化磷脂酰肌醇-3-羟激酶（p-PI3K）、蛋白激酶B（AKT）、磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）和雷帕霉素靶蛋白（mTOR）蛋白的影响。CNE-1细胞分别予以DMSO、40μmol·L-1异补骨脂查耳酮、40μmol·L-1异补骨脂查耳酮联合100μmol·L-1?EGFR激动剂NSC 228155以及40μmol·L-1异补骨脂查耳酮联合10μmol·L-1?AKT激动剂SC79处理,应用CCK-8、克隆平板、划痕及Transwell实验检测各组细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力的改变。结果:异补骨脂查耳酮显著抑制鼻咽癌CNE1细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力（P<0.05或P<0.01）。通过生物信息学分析,异补骨脂查耳酮有104个作用靶点,作用靶点主要富集在肿瘤发生通路上;其中,作用靶点EGFR与其他靶点蛋白联系最广泛,且在多个通路上均有富集,被认为是异补骨脂查耳酮的核心作用靶点。Western Blot结果显示,异补骨脂查耳酮显著抑制鼻咽癌CNE1细胞中EGFR、p-PI3K、p-AKT和mTOR蛋白的表达（P<0.05或P<0.01）。此外,EGFR激动剂NSC228155和AKT激动剂SC79能够显著减轻异补骨脂查耳酮介导的CNE-1细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力的抑制（P<0.01）。结论:异补骨脂查耳酮可能是通过抑制EGFR/PI3K/AKT/mTOR信号通路减少鼻咽癌CNE1细胞增殖和转移能力。     

单酰基甘油脂肪酶抑制药通过磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶信号通路对胃癌细胞生物学活性的影响北大核心CSCD

目的 探究单酰基甘油脂肪酶(MAGL)抑制药对胃癌细胞侵袭、迁移及磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)信号通路的影响。方法 体外培养人胃癌细胞系MKN-45,分为空白组和低、中、高剂量实验组。空白组给予正常DMEM培养基培养,不作任何处理;低、中、高剂量实验组分别用含1,10和20μmol·L^(-1) MAGL抑制药的DMEM培养基进行培养。用噻唑蓝法、划痕实验、Transwell实验分别检测细胞增殖、迁移、侵袭能力,用蛋白质印迹法检测PI3K/AKT信号通路蛋白的表达情况。结果 中、高剂量实验组和空白组的细胞抑制率分别为(9.12±0.48)%,(23.78±0.65)%和0.00%,侵袭细胞数分别为(221.64±28.66),(118.58±18.75)和(308.21±36.36)个,划痕愈合率分别为(18.36±2.88)%,(11.03±1.72)%和(27.05±4.10)%,PI3K蛋白相对表达水平分别为0.64±0.05,0.48±0.07和1.18±0.08,p-AKT蛋白相对表达水平分别为0.74±0.06,0.45±0.09和0.97±0.07。中、高剂量实验组的上述指标与空白组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 MAGL抑制药可能通过调控PI3K/AKT信号通路,抑制胃癌MKN-45细胞增殖、侵袭及转移。     

扁蓄苷对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡、周期及PI3K/AKT信号通路的影响

目的探讨扁蓄苷对乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡、周期及PI3K/AKT信号通路的影响。方法以不同浓度的萹蓄苷作用于体外生长至对数期的MDA-MB-231细胞48 h后,采用噻唑蓝染色(MTT)法检测扁蓄苷对细胞增殖的影响,Hoechst 33258染色观察细胞染色质固缩情况,流式细胞术检测细胞周期,Western-blot检测PI3K/AKT信号通路核心蛋白PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT表达水平,RT-PCR技术检测通路下游细胞凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl及周期相关蛋白CDK2基因表达情况。结果不同浓度的扁蓄苷(6.25、12.5、25、50、100μmol·L~(-1))作用于MDA-MB-231细胞48 h后,细胞增殖活性受到抑制(P <0.01),且具有浓度依赖性;扁蓄苷(12.5、50、100μmol·L~(-1))作用细胞48 h后,细胞核染色质固缩;当扁蓄苷浓度为50μmol·L~(-1)时,S期细胞所占百分比显著增高(P <0.05),当扁蓄苷浓度为100μmol·L~(-1)时,G2/M期细胞所占百分比显著增高(P <0.05);随着扁蓄苷浓度的增加,通路核心位点PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达水平明显降低(P <0.01),细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Bcl-xl、细胞周期蛋白CDK2基因表达水平下调(P <0.05)。结论扁蓄苷可抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,使细胞周期阻滞于S期、G2/M期,并诱导细胞凋亡。其机制可能是通过抑制PI3K/AKT信号通路下调Bcl-2、Bcl-xl、及CDK2基因表达进而诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡。     

吲哚-3-原醇对人肺癌细胞株A549的促凋亡和增殖抑制作用

目的探讨吲哚-3-原醇(Indol-3-carbinol,I3C)对肺腺癌细胞株A549细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法将对数生长期的A549细胞分别用不同浓度的I3C处理(0、25、50、100μg/m L)。细胞培养72 h后,采用M TT观察I3C对A549细胞的增殖抑制作用;Annexin V-PI/FITC检测细胞凋亡;Western blotting检测细胞中PI3K、p-AKT、Bax、Bcl-2、Cleavage-PARP、Clevage-Caspase3蛋白的变化。结果 I3C可以呈浓度依赖性地诱导A549细胞的增殖抑制和凋亡,上调Bax和Cleavage-PARP、Cleavage-Caspase3表达,下调PI3K、p-AKT和Bcl-2,对AKT表达无明显影响。结论 I3C可通过抑制PI3K/AKT信号通路而诱导A549细胞增殖抑制和凋亡。     

阿托伐他汀对人胃癌AGS细胞增殖、自噬和糖代谢的影响及机制

目的 探究阿托伐他汀对人胃癌AGS细胞增殖、自噬和糖代谢的影响及机制。方法 通过预实验考察低、中、高浓度（12.5、25、50μmol/L）阿托伐他汀对AGS细胞活力的影响,筛选作用浓度。正式实验分为对照组（不做干预）、阿托伐他汀组（25μmol/L）、阳性对照组（50 mg/L 5-氟尿嘧啶）、抑制剂组[25μmol/L阿托伐他汀+10μmol/L磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B(Akt)信号通路抑制剂LY294002]和激活剂组（25μmol/L阿托伐他汀+10μmol/L PI3K/Akt信号通路激活剂SC79）,干预24 h,检测细胞糖代谢情况（葡萄糖和乳酸含量）和细胞增殖率,以及细胞中自噬相关蛋白轻链3(LC3)Ⅰ、LC3Ⅱ及PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达。结果 中、高浓度阿托伐他汀均能显著抑制AGS细胞活力（P<0.05）,正式实验选择25μmol/L阿托伐他汀进行后续实验。与对照组相比,阳性对照组和阿托伐他汀组细胞中葡萄糖和乳酸含量、细胞增殖率以及p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt比值均显著降低（P<0.05）,LC3Ⅰ、LC3Ⅱ蛋...     

雷公藤多苷抑制 PI3K/AKT信号通路对肺腺癌细胞迁移和血管形成的影响

目的 探讨雷公藤多苷(TWP)对肺腺癌A549细胞迁移、血管生成及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路的影响.方法 人肺腺癌细胞株A549体外培养,分别用TWP(0、20、40、80μmol/L)处理24、48和72 h,采用CCK-8法、流式细胞仪和Transwell法分别检测A549细胞的增殖、凋亡和迁移情况,Matrigel胶小管形成实验检测血管生成情况,蛋白质印迹法(Western blotting)检测A549细胞中PI3K、磷酸化PI3K(p-PI3K)、AKT、磷酸化AKT(p-AKT)蛋白表达情况.结果 随培养时间延长,20、40、80μmol/L TWP组A549细胞增殖抑制率均显著升高(P<0.05);20、40、80μmol/L TWP组A549细胞凋亡率[(8.78±0.69)％、(10.36±1.13)％、(21.68±2.11)％]均显著升高(P<0.05),穿膜细胞数[(122.08±30.72)、(83.34±19.75)、(43.58±13.29)个]、p-PI3K/PI3K比值[(0.76±0.13)、(0.55±0.12)、(0.36±0.09)]、p-AKT/AKT比值[(0.53±0.14)、(0.35±0.09)、(0.21±0.05)]均显著降低(P<0.05);0、20、40、80μmol/L TWP组A549细胞诱导静脉内皮细胞(HUVEC)成管数量较对照组均显著升高[(35.85±8.72)、(24.13±6.86)、(15.34±4.66)、(9.15±2.25)个比(6.31±1.49)个,P<0.05],A549细胞诱导HUVEC成管数量均随TWP浓度升高而显著降低(P<0.05).结论 TWP可能通过抑制PI3K/AKT信号通路激活,抑制肺腺癌A549细胞的增殖、迁移、血管生成行为,并诱导细胞凋亡.     

莪术醇通过调控PI3K/AKT通路促进人肝癌HepG2细胞凋亡

目的探讨莪术醇促进人肝癌HepG2细胞凋亡的作用是否与PI3K/AKT通路有关。方法采用MTT法检测不同浓度(0、10、25、50、100μmol·L~(-1))莪术醇干预HepG2细胞24、48 h的增殖抑制率,Hoechst 33258染色法观察细胞核凋亡形态,Western blot法检测不同浓度莪术醇及PI3K/AKT通路阻断剂LY294002对HepG2细胞p-PI3K、p-AKT、Caspase-3蛋白表达的影响。结果莪术醇对HepG2细胞的增殖有明显抑制作用,呈浓度依赖性,但干预48 h对比24 h差异无统计学意义;Hoechst 33258染色发现,莪术醇干预后,同一视野下细胞数目明显减少,细胞透亮,部分细胞核碎裂,核固缩,呈现典型的凋亡形态学特征;Western blot结果显示,莪术醇能显著降低细胞p-PI3K、p-AKT蛋白的表达,上调凋亡执行蛋白Caspase-3的表达,与LY294002联用后表现出良好的协同作用,对各蛋白表达的调控较单独用药更加明显。结论莪术醇能通过抑制PI3K/AKT通路诱导人肝癌HepG2细胞凋亡。     

红景天苷对人舌癌细胞的凋亡作用及机制研究

目的：探讨红景天苷对人舌癌细胞增殖和凋亡的影响,并解释其分子机制,为舌癌的临床治疗提供新的思路。方法：CCK-8法和克隆形成实验检测红景天苷药物对人舌癌细胞增殖能力的影响;Annexin V/PI双染法和TUNEL法检测细胞凋亡情况;PI染色法检测红景天苷对细胞周期的影响;细胞迁移法检测红景天苷对舌癌细胞迁移的影响;免疫印迹法和实时荧光定量PCR法检测细胞内凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase 3的表达水平;免疫印迹法检测细胞内ERK和PI3K/AKT信号通路关键蛋白的表达水平的变化。结果：红景天苷能显著抑制人舌癌细胞的增殖且呈剂量依赖性。Annexin V/PI双染法和TUNEL法显示,随着红景天苷浓度的增加,Tca-8113细胞凋亡明显增多。PI染色法显示,红景天苷处理细胞后,G2/M期细胞明显减少。细胞迁移实验表明,红景天苷作用于舌癌细胞后,随着给药浓度的逐渐升高,细胞的迁移能力明显降低。免疫印迹结果表明,红景天苷可以使Bax和Cleaved caspase 3蛋白表达水平升高,Bcl2的蛋白表达水平降低。同时,红景天苷可以抑制ERK和PI3K/AKT信号通路。结论：红景天苷可以明显抑制人舌癌Tca-8113细胞的增殖,诱导其凋亡,其作用机制可能与抑制ERK和PI3K/AKT信号通路有关。     

生长抑素联合人转录因子叉头框蛋白 D1通过磷脂酰肌醇 3激酶 /蛋白激酶 B通路调控胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的探讨生长抑素联合人转录因子叉头框蛋白 D1(FOXD1)通过磷脂酰肌醇 3激酶 /蛋白激酶 B(PI3K/AKT)通路调控胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究。方法研究于 2018年 12月至 2019年 12月进行,通过体外培养 PANC-1细胞,过不同浓度( 0 mg/L、100 mg/L、200 mg/L、400 mg/L)的生长抑素( SST)处理细胞,记为生长抑素各剂量组,其中 0 mg/L和 400 mg/经L的生长抑素作为对照组( Control)和生长抑素组( SST);将过表达载体( pcDNA)和过表达 FOXD1(FOXD1)转染至 PANC-1细胞,经过 400 mg/L的生长抑素及 20 mol/L的 PI3K抑制剂 LY294002处理细胞,记为 SST+pcDNA组、 SST+FOXD1组和 SST+ FOXD1+LY294002组。四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法( MTT)检测细胞增殖; Transwell检测细胞迁移和侵袭;蛋白质印迹法( Western blotting)检测增殖细胞核抗原( PCNA)、基质金属蛋白酶 -2(MMP-2)、基质金属蛋白酶 -9(MMP-9)、 FOXD1和 PI3K/ AKT相关蛋白的表达;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应( qRT-PCR)检测 FOXD1 mRNA的表达。结果与 Control组相比, SST组可以抑制 FOXD1 mRNA(0.47±0.03)及蛋白表达( 0.42±0.04)、增殖( 0.52±0.05)、迁移( 66.8±7.2)和侵袭( 63.7±6.5)能力,下调 p-PI3K(0.43±0.04)、 p-AKT(0.39±0.03)蛋白表达;与 SST+pcDNA组相比, SST+FOXD1组可以促进以抑制 FOXD1 mRNA(0.67±0.05)及蛋白表达( 0.64±0.06)、增殖( 0.71±0.07)、迁移( 86.9±8.5)和侵袭( 81.5±7.3)能力,上调 p-PI3K(0.62±0.05)、 p-AKT(0.65±0.06)蛋白表达。与 SST+FOXD1组相比, SST+FOXD1+LY294002组可以抑制 FOXD1 mRNA(0.37±0.04)及蛋白表达(0.35±0.03)、增殖( 0.53±0.05)迁移(67.2±6.5)和侵袭( 62.5±5.2)。结论生长抑素通过调控 FOXD1的表达抑制胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,其作用机制可能与抑制 PI3K/AKT通路有关。     

低频超声联合微泡对比剂通过PI3K/AKT通路对乳腺癌耐药株MCF-7/ADR多药耐药的逆转机制研究

目的 探索低频超声联合微泡（LFUSMB）通过磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）通路对乳腺癌 耐药株MCF-7/阿霉素（ADR）多药耐药的逆转效果及机制。方法 CCK-8法筛选LFUSMB作用时间并测定ADR对 MCF-7/ADR 细胞的半抑制浓度（IC50）。将 MCF-7/ADR 细胞分组为：对照（C）组,采用 MCF 细胞培养基正常培养; ADR组,采用加入ADR（终质量浓度20 mg/L）的MCF细胞培养基培养;LFUSMB+ADR组,采用加入ADR（终质量浓度 20 mg/L）的MCF细胞培养基培养并经LFUSMB处理30 s;LFUSMB+ADR+740 YP（PI3K/AKT通路活化剂）组,采用加 入 ADR（终质量浓度 20 mg/L）和 740 YP（终质量浓度 50 mg/L）的 MCF 细胞培养基培养并经 LFUSMB 处理 30 s。 Annexin V-FIFC/PI 法检测 MCF-7/ADR 细胞凋亡率,Western blot 检测 P 糖蛋白（P-gp）、抗多药耐药蛋白（MRP）1、 MRP2、乳腺癌抗性蛋白（BCRP/ABCG2）、PI3K、AKT、p-PI3K、p-AKT蛋白表达。结果 采用LFUSMB干预30 s进行 后续研究。LFUSMB 30 s组ADR对MCF/ADR细胞的IC50低于未超声处理组,相对耐药逆转倍数约为8.20倍。ADR 组细胞凋亡率较C组增高（P＜0.05）,MRP1、MRP2、P-gp、BCRP/ABCG2、p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT 蛋白水平无明 显变化;LFUSMB+ADR组细胞凋亡率较ADR组增高,MRP1、MRP2、P-gp、BCRP/ABCG2、p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT 蛋白水平显著下调（P＜0.05）。与 LFUSMB+ADR 组比较,LFUSMB+ADR+740 YP 组细胞凋亡率显著降低,MRP1、 MRP2、P-gp、BCRP/ABCG2 蛋白水平显著增高（P＜0.05）。结论 LFUSMB 可通过抑制 PI3K/AKT 通路活化,下调 MRP1等腺苷三磷酸结合盒（ABC）家族蛋白表达,逆转乳腺癌MCF-7/ADR细胞耐药性。     

UNBS5162对脑胶质瘤细胞增殖和转移的抑制作用及机制

目的 通过体外实验,研究UNBS5162对脑胶质瘤细胞增殖和转移的抑制作用,并对其分子机制进行初步探究。方法 采用10 μmol/L UNBS5162处理脑胶质瘤细胞U251细胞为实验组,二甲基亚砜处理为对照组,分别应用CCK8实验、Transwell实验、流式细胞凋亡实验检测UNBS5162对U251细胞增殖、迁移和侵袭、凋亡的影响,应用蛋白免疫印迹法检测PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达水平。结果 实验组细胞增殖能力低于对照组（P<0.05）;并且其细胞迁移数和侵袭数均低于对照组;与对照组相比,实验组细胞凋亡率提高,且抗凋亡蛋白Bcl-2表达量降低、促凋亡蛋白Bax和Caspase-3表达量增加（P<0.05）。与对照组相比,PI3K/AKT信号通路的关键蛋白AKT和mTOR的磷酸化水平受到抑制,其下游p70S6K蛋白表达水平也相应降低（P<0.05）。结论 UNBS5162通过促进细胞凋亡对脑胶质瘤细胞的增殖和转移具有抑制作用,其机制与UNBS5162可以抑制PI3K/AKT信号通路的激活有一定相关性。     

姜黄素与卡铂联合用药对鼠卵巢癌转基因细胞系的影响

目的探讨姜黄素与卡铂联合用药对鼠卵巢癌转基因细胞系T1、T2、T3的影响。方法采用MTT法检测卡铂、姜黄素单独及联合用药对鼠卵巢癌转基因细胞系增殖的影响,RT-PCR及Western blot检测各组细胞中K-RAS、PI3K、AKT的表达水平。结果通过MTT法检测细胞增殖抑制率,各浓度卡铂单独作用于鼠卵巢癌转基因细胞系T1、T2、T3的增殖抑制率<30%,与姜黄素联用后,增殖抑制率均>30%(P<0.05),对转染了AKT的T2、T3作用更明显。联合组T1、T2、T3细胞的K-RAS、PI3K(p-PI3K)、AKT(p-AKT)的mRNA及蛋白表达量低于卡铂单用组。结论鼠卵巢癌转基因细胞系T1、T2、T3对卡铂具有耐药性。姜黄素可逆转其对卡铂的耐药性,且对含有AKT的T2、T3作用更加明显。姜黄素的逆转作用可能与抑制K-RAS、PI3K、AKT的表达有关,其也可能直接抑制PI3K/AKT信号通路。     

雷公藤红素通过PI3K/AKT/mTOR信号通路对胃癌MFC细胞增殖和凋亡的影响

目的研究雷公藤红素对胃癌MFC细胞内PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响及其对胃癌MFC细胞增殖的抑制和促凋亡作用机制。方法分别设置对照组和雷公藤红素低、中、高剂量(5、10、20 mmol/L)组,采用MTT法检测雷公藤红素对胃癌MFC细胞增殖的影响;采用流式细胞技术检测雷公藤红素对胃癌MFC细胞周期的影响及MFC细胞凋亡的情况;Western blotting检测雷公藤红素对胃癌MFC细胞内凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和PI3K、AKT和mTOR蛋白表达的影响;实时定量PCR检测雷公藤红素对胃癌MFC细胞内PI3K、AKT和mTORm RNA表达的影响。结果与对照组比较,雷公藤红素能够呈剂量相关性地显著抑制胃癌MFC细胞的增殖(P0.05);与对照组比较,雷公藤红素能够呈剂量相关性地显著引起MFC细胞G2/M期阻滞(P0.05);与对照组比较,雷公藤红素能够呈剂量相关性地显著促进MFC细胞的凋亡(P0.05);与对照组比较,雷公藤红素能够呈剂量相关性地显著抑制MFC细胞内抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白和PI3K、AKT、mTOR蛋白的表达(P0.05),显著促进MFC细胞内促凋亡蛋白Bax的表达(P0.05);与对照组比较,雷公藤红素能够呈剂量相关性地显著抑制MFC细胞内PI3K、AKT和mTORm RNA的表达(P0.05)。结论雷公藤红素能够抑制胃癌MFC细胞的增殖并促进胃癌MFC细胞凋亡,其作用机制可能是通过抑制胃癌MFC细胞内PI3K/AKT/mTOR信号通路中PI3K、AKT、mTOR等蛋白的表达而抑制胃癌MFC细胞的增殖,进而促进胃癌MFC细胞内促凋亡蛋白Bax的表达,同时抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,从而促进胃癌MFC细胞凋亡。     

吴茱萸碱通过TRIB2/AKT信号通路诱导人白血病细胞K562凋亡

目的探讨吴茱萸碱(evodiamine,EVO)对人白血病细胞K562增殖与凋亡的影响,并初步探究其潜在的分子机制。方法以CCK-8法测定不同浓度的EVO处理K652细胞不同时间后的增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡,qRT-PCR检测TRIB2 mRNA表达,Western blot检测TRIB2/AKT信号通路;以EVO作用于AKT激活剂SC79预处理后的K562细胞,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测TRIB2/AKT信号通路。以EVO作用于Wnt激活剂SKL2001预处理后的K562细胞,Western blot检测TRIB2/AKT信号通路。结果EVO对K562细胞的增殖抑制作用呈时间及浓度依赖性;流式结果显示EVO体外可促细胞凋亡且呈浓度依赖性;EVO处理后,TRIB2mRNA的表达降低,TRIB2/AKT信号通路被抑制;SC79削弱了由EVO诱导的K562细胞凋亡,且SC79和SKL2001均能逆转EVO对AKT信号通路的抑制作用。结论EVO可诱导人白血病细胞K562凋亡,从而抑制其增殖,其机制可能是通过抑制TRIB2的表达,进而抑制AKT的磷酸化,最终抑制下游基因NF-κB p65的磷酸化,从而诱导细胞凋亡并抑制其生长。     

藤黄酸抑制人卵巢透明细胞癌ES-2细胞增殖和促进其凋亡的机制研究

目的 研究藤黄酸对人卵巢透明细胞癌ES-2细胞增殖和凋亡的影响及其潜在分子机制。方法 采用CCK-8检测藤黄酸对不同类型人卵巢癌细胞增殖的影响;克隆形成实验检测藤黄酸对ES-2细胞克隆形成的影响;细胞划痕愈合实验及Transwell实验分别检测藤黄酸对ES-2细胞迁移与侵袭的影响;Caspase-Glo 3/7试剂盒检测藤黄酸对ES-2细胞内Caspase 3/7活性的影响;Annexin V-FITC/PI双染色法分析藤黄酸对ES-2细胞凋亡的影响;Western blotting检测不同浓度藤黄酸对ES-2细胞中Bcl-2、Bax、PTEN、PI3K、p-AKT、p-mTOR水平的影响。结果 人卵巢癌ES-2、HO8910、SKOV3、OVCAR3细胞中,藤黄酸对卵巢透明细胞癌ES-2细胞的增殖抑制作用最明显,且随着藤黄酸浓度和作用时间的增加而增强;藤黄酸可抑制ES-2细胞的克隆形成、迁移及侵袭、增强Caspase 3/7活性并促进细胞凋亡,且呈浓度依赖性;藤黄酸可下调ES-2细胞中Bcl-2、PI3K、p-AKT及p-mTOR的表达,上调Bax、PTEN的表达,且呈浓度依赖性。结论 藤黄酸能够抑制卵巢透明细胞癌ES-2细胞的增殖、迁移和侵袭,并诱导其凋亡,其作用机制可能与调控PI3K/AKT/mTOR信号通路相关。     

智脑胶囊调控PI3K/AKT/GSK-3β信号通路诱导阿尔茨海默病模型细胞增殖的研究

目的:探讨智脑胶囊(Zhinao Capsule,ZNC)对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)体外细胞模型增殖的影响及其作用机制。方法:采用全反式维甲酸(all trans retinoic acid,ATRA)+冈田酸(okadaic acid,OA)刺激人神经母细胞瘤细胞(human neuroblastoma cell,SK-N-SH)建立AD体外模型,CCK8法筛选ZNC含药血清最佳作用浓度和时间;流式细胞术、RT-qPCR和Western blot法检测最佳浓度ZNC含药血清作用最佳时间后,对SK-N-SH细胞周期、凋亡及PI3K、AKT、GSK-3β mRNA、总蛋白和磷酸化蛋白表达的影响。结果:ATRA＋OA刺激后,SK-N-SH细胞活力降低,细胞凋亡增加,p-PI3K、p-AKT和p-GSK-3β蛋白表达显著降低,GSK-3β mRNA和总蛋白表达明显升高;给予ZNC干预后,不仅可明显促进SK-N-SH细胞增殖,抑制其凋亡,还可显著升高p-PI3K、p-AKT和p-GSK-3β蛋白表达,降低GSK-3β mRNA和总蛋白表达。结论:智脑胶囊可促进AD模型细胞增殖,其机制可能与调控PI3K/AKT/GSK-3β信号通路有关。