LncRNA HOTAIR对胶质母细胞瘤细胞增殖的影响及在临床治疗中的意义

目的：探讨在胶质母细胞瘤（GBM）中lncRNA HOTAIR基因表达的生物学价值。方法：利用生物信息学技术挖掘癌症基因组图谱（TCGA）和中国胶质瘤基因组图谱计划（CGGA）的测序及芯片数据，评估HOTAIR表达水平与GBM患者预后的关系并分析其可能的机制，构建HOTAIR过表达质粒并转染U251人脑胶质瘤细胞系，细胞增殖及克隆实验研究HOTAIR对胶质瘤细胞的作用。利用癌症治疗反应数据库（CTRP）和PRISM数据库中的药敏数据探寻靶向HOTAIR的潜在药物。结果：HOTAIR在GBM中表达明显上调，其表达量越高患者预后越差。过表达HOTAIR显著提高U251细胞的增殖活力。烟酰胺磷酸核糖转移酶抑制剂等9种药物对HOTAIR高表达患者或许具有靶向治疗作用。结论：HOTAIR可能通过调控细胞周期影响GBM患者预后，有可能作为药物治疗的潜在靶点。     

miR-181b-5p调节EGR1/BIM通路对ALL细胞增殖、凋亡和迁移的影响

探讨miR-181b-5p在急性淋巴细胞白血病（ALL）中的作用及其潜在的分子机制。方法 采用qRT-PCR检测四川大学华西医院2019年1月—2021年1月80例ALL患者miR-181b-5p和早期生长反应因子1（EGR1） mRNA的表达水平。分别使用miR-181b-5p模拟物、miR-181b-5p抑制物或（和）EGR1过表达质粒转染人ALL细胞系NALM-6细胞。采用MTT、流式细胞仪和划痕愈合实验检测miR-181b-5p对细胞增殖、凋亡和迁移的影响。通过双荧光素酶验证miR-181b-5p和EGR1的相互作用关系。Western blot检测细胞中EGR1蛋白和细胞增殖、凋亡和迁移相关蛋白的表达水平。结果 miR-181b-5p在ALL中表达显著上调,EGR1表达下调（P＜0.05）。抑制miR-181b-5p不仅抑制细胞增殖、迁移,诱导细胞凋亡,而且上调EGR1和BIM蛋白表达（P＜0.05）;上调miR-181b-5p则具有与之相反的效果（P＜0.05）。EGR1是ALL细胞中miR-181b-5p的靶基因（P＜0.05）。miR-181b-5p过表达可明显削弱EGR1过表达对ALL细胞增殖、凋亡和迁移的影响（P＜0.05）。结论 抑制miR-181b-5p可通过靶向上调EGR1和BIM表达在ALL中抑制细胞增殖和迁移,促进细胞凋亡     

miR-106a对胶质瘤增殖和凋亡的影响及机制研究

目的 探讨微小RNA（miR）-106a对人胶质瘤细胞中腺瘤样息肉（APC）基因的靶向调控作用以及对细胞增殖和凋亡的影响。方法 收集2020年1月至2021年12月浙江省立同德医院减压切除的10例胶质瘤组织和10例对照组织。采用实时荧光定量PCR法检测miR-106a在胶质瘤组织和对照脑组织中、在胶质瘤LN229、U251和U87等细胞系中的表达水平并作比较。使用miR-106a抑制物转染LN229和U251细胞,采用克隆形成实验检测细胞增殖能力,通过流式细胞术检测细胞凋亡水平。通过TOP/FOP荧光素酶实验检测荧光素酶活性,采用Western blot法检测Wnt通路相关蛋白和核内β-连环蛋白（β-catenin）的表达。采用qRT-PCR和Western blot法检测APC的mRNA和蛋白表达水平。利用双荧光素酶报告基因实验确认miR-106a和APC的靶向关系。通过表型拯救实验检测miR-106a靶向APC对胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响。结果 miR-106a在胶质瘤组织和细胞系中高表达。抑制miR-106a表达降低胶质瘤细胞的增殖水平,提高胶质瘤细胞的凋亡水平,并抑制了Wnt/...     

miR-181a靶向作用CARF基因抑制胰腺癌细胞凋亡

目的：探讨miR-181a与CARF基因是否存在靶向关系,并研究其在调节胰腺癌细胞增殖凋亡过程中的作用。方法：利用Real-time PCR检测胰腺癌组织细胞中miR-181a的表达水平,通过miR-181a拮抗剂下调胰腺癌细胞中miR-181a浓度,并用MTT检测其细胞增殖能力变化。建立包含CARF基因3’-UTR序列的PGL-3载体,结合双荧光素酶报告基因系统验证CARF基因是否存在miR-181a的作用靶点,然后通过激动剂及拮抗剂调节胰腺癌细胞中miR-181a浓度,用Western blot检测相应细胞CARF基因蛋白表达情况。结果：miR-181a在胰腺癌组织/细胞中的表达水平明显高于正常胰腺组织/细胞（P＜0.05）。转染miR-181a拮抗剂可显著下调胰腺癌细胞中miR-181a的表达,并使其增殖能力明显下降（P＜0.05）。双荧光素酶报告基因系统提示miR-181a与包含CARF基因3’-UTR序列的载体共转染,可明显下调荧光素酶活性,且下调水平与miR-181a剂量呈负相关（P＜0.05）;CARF蛋白表达情况和胰腺癌细胞中miR-181a水平呈显著负相关（P＜0.05）。结论：miR-181a在胰腺癌细胞中存在高表达,通过下调CARF靶基因促进细胞增殖而推动胰腺癌的发展。     

斑蝥素酸镁对人星形胶质瘤细胞U-251MG生长、凋亡和侵袭的影响

目的 探讨斑蝥素酸镁对人星形胶质瘤细胞U 251MG生长、凋亡和侵袭的影响及机制。方法 体外培养人星形胶质瘤细胞U 251MG,分为空白组（Control组）、低剂量斑蝥素酸镁组（Canthardin 5μM组）、中剂量斑蝥素酸镁组（Canthardin 10μM组）和高剂量斑蝥素酸镁组（Canthardin 20μM组）。采用克隆形成实验检测细胞增殖情况;Hocest染色检测细胞凋亡情况;Transwell法检测细胞侵袭情况;Western blot 检测相关蛋白表达情况。结果 平板克隆实验结果显示,斑蝥素酸镁可以明显抑制人星形胶质瘤细胞U 251MG的增殖,且呈剂量依赖性（P＜0.05）;Hocest染色结果显示,斑蝥素酸镁可以明显促进人星形胶质瘤细胞的凋亡,且呈剂量依赖性（P＜0.05）;Transwell小室实验显示,斑蝥素酸镁可以显著抑制细胞的侵袭,且呈剂量依赖性（P＜0.05）;Western blot 检测结果显示,斑蝥素酸镁处理后,人星形胶质瘤细胞中PCNA蛋白、VEGF蛋白、Bax蛋白及p-AKT蛋白表达均显著降低（均P＜0.05）,Caspase 3蛋白、Bcl 2蛋白表达显著升高（P＜0.05）,AKT总蛋白表达无显著差异（P＞0.05）。 结论 斑蝥素酸镁可以通过调控Akt信号通路抑制人星形胶质瘤细胞U-251MG的增殖和侵袭,并促进其凋亡,且在一定浓度范围内呈剂量依赖性。     

MiR-586对胶质瘤细胞增殖及周期的影响

目的探讨miR-586对胶质瘤细胞增殖及细胞周期的影响。方法采用实时荧光定量PCR检测miR-586在非肿瘤脑组织（NBT）及胶质母细胞瘤组织中的表达。同时检测miR-586在人正常星形胶质细胞（NHA）及4株胶质瘤细胞株（U87、U251、T98、LN229）中的表达。在胶质瘤细胞株中通过转染miR-586 inhibitor下调miR-586的表达后,采用CCK-8检测细胞增殖能力,流式细胞术检测胶质瘤细胞周期阶段。结果 miR-586在胶质母细胞瘤组织中表达显著比非肿瘤脑组织中高（P<0.001）;在胶质瘤细胞系中,U87中的表达显著升高（P<0.01）。CCK-8实验结果显示:U87细胞转染miR-586 inhibitor后细胞增殖能力显著下降（P<0.01）。此外,miR-586 inhibitor转染U87后诱导细胞周期阻滞在G0/G1期（P<0.01）。结论 miR-586在胶质瘤组织和细胞中高表达,抑制miR-586的表达可以抑制胶质瘤细胞增殖并诱导细胞周期阻滞。     

3种胶质瘤细胞株(U87、U251及T98G)体外趋化组织细胞淋巴瘤细胞(U937)的实验研究

目的 观察胶质瘤细胞株U87(人脑星形胶质母细胞瘤细胞)、U251(人神经胶质细胞瘤细胞)及T98G(人胶质母细胞瘤细胞)对U937(组织细胞淋巴瘤细胞)的趋化活性.方法 体外传代培养U87、U251、T98G及U937细胞,应用Transwell法观察3种胶质瘤细胞株(U87、U251及T98G)对U937细胞的趋化活性.结果 Transwell小室下孔细胞离心浓缩后白血球计数板计数;3种胶质瘤细胞株对于U937细胞趋化活性明显高于正常对照组(P＜0.05);U87对于U937细胞趋化活性明显高于U251及T98G (P＜0.05);U251及T98G对于U937细胞趋化活性差异无统计学意义(P＞0.05).结论 3种胶质瘤细胞株(U87、U251及T98G)可促进U937细胞的趋化迁移,U87趋化活性更为明显.     

miR-18b-5p调控WWOX对胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响

目的研究miR-18b-5p对胶质瘤U251细胞增殖、凋亡的影响和潜在的分子机制。方法qRT-PCR检测癌旁组织和胶质瘤组织中miR-18b-5p的表达,MTT法和流式细胞术检测胶质瘤U251细胞增殖和凋亡率,Western blotting检测包含WW域的氧化还原酶基因（WWOX）、Cyclin D1、p21、Bax和Bcl-2蛋白表达,双荧光素酶报告系统验证miR-18b-5p和WWOX的调控关系。结果与癌旁组织相比,胶质瘤组织中miR-18b-5p的表达量升高（P < 0.01）。抑制miR-18b-5p表达可以抑制胶质瘤U251细胞增殖并促进细胞凋亡;miR-18b-5p靶向负调控WWOX的表达;过表达WWOX可抑制U251细胞增殖并诱导细胞凋亡;抑制WWOX表达逆转了抑制miR-18b-5p表达对U251细胞增殖、凋亡的影响（P < 0.01）。结论miR-18b-5p可能通过靶向调控WWOX表达抑制胶质瘤U251细胞增殖并诱导细胞凋亡,miR-18b-5p是胶质瘤潜在的分子靶点。     

胶质瘤中hsa-miR-20a的表达及对细胞增殖的影响

摘要：目的探讨hsa-miR-20在胶质瘤中的表达情况及对胶质瘤细胞增殖的影响。方法应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反
应方法检测正常脑组织和不同级别脑胶质瘤组织中miR-20a的表达情况;脂质体转染miR-20a模拟物后,通过MTT比色法及流
式细胞术观察胶质瘤U251 细胞增殖的变化。结果（1）与正常脑组织相比,胶质瘤组织miR-20a 的表达水平显著增高（P=
0.035）;（2）胶质瘤组织恶性程度越高,miR-20a表达越高（P<0.001）;（3）U251细胞转染miR-20a模拟物后,增殖能力明显加快,S
期细胞比例明显增多（P<0.001）。结论miR-20a能促进胶质瘤细胞的增殖,其高表达在脑胶质瘤的发生、发展中起重要作用。
     

MiR-148a-3p靶基因的预测与验证

目的:预测和验证miR-148a-3p的靶基因.方法:利用生物信息学方法预测miR-148a-3p的靶基因;在神经胶质瘤细胞U87/U251中建立miR-148a过表达及抑制表达稳定细胞系.利用qPCR实验验证miR-148a-3p与靶基因的靶向关系;利用Western Blot实验检测靶蛋白表达水平.结果:生物信息学方法预测结果显示dynein light chain LC8-type 2(DYNLL2)为miR-148a-3p靶基因之一;qPCR实验结果显示DYNLL2在神经胶质细胞HA1800与神经胶质瘤细胞U87/U251中的表达有差异,在神经胶质瘤细胞miR-148a过表达及抑制表达的细胞中表达有差异;Western Blot实验结果显示DYNLL2的蛋白表达水平在神经胶质细胞HA1800与胶质瘤细胞U87/U251中有差异.结论:miR-148a-3p与DYNLL2有确切的靶向关系,DYNLL2在神经胶质细胞与胶质瘤细胞中均有表达,与正常胶质细胞相比,DYNLL2在神经胶质瘤细胞中表达下调,包括基因水平和蛋白水平,miR-148a-3p能够负向调控DYNLL2的表达.