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1.
目的检测新疆15个城市自来水和河水隐孢子虫污染情况。方法采集水样,分别应用改良美国环保局(EPA)1622法及巢式PCR(nested-PCR)方法进行检测。1)改良EPA1622法:水样经微孔滤膜抽滤、淘洗,磁抗体分离法分离纯化后免疫荧光染色鉴定。2)Nested-PCR法:用试剂盒提取纯化的隐孢子虫卵囊基因组DNA,针对隐孢子虫小亚单位核糖体RNA(18SrRNA)部分基因,依据文献设计并合成引物,用巢式PCR扩增,产物纯化后经SspⅠ及VspⅠ单酶切,并进行RFLP分析。结果2种方法检测新疆15个地区的自来水隐孢子虫卵囊均为阴性,改良EPA1622法检测乌鲁木齐市、昌吉市、伊宁市和吐鲁番市的河水隐孢子虫卵囊阳性。巢式PCR检测乌鲁木齐市和伊宁市水样,均扩增出约830 bp的特异片段,RFLP初步鉴定为小鼠隐孢子虫基因;昌吉市和吐鲁番市河水水样PCR检测阴性。结论新疆乌鲁木齐市、伊宁市河水检出隐孢子虫,初步鉴定为小鼠隐孢子虫。而当地的饮用水未受污染。  相似文献   

2.
目的用PCR和免疫荧光染色镜检法检测城市现场水源中蓝氏贾第鞭毛虫(简称贾第虫)和隐孢子虫,了解上海市水源地贾第虫和隐孢子虫污染状况。方法采集上海市8个区的自来水和3个区的环境水,PCR检测水样本中的贾第虫磷酸丙糖异构酶(triosephosphate isomerase,Tim)基因和隐孢子虫18S rRNA的基因;按《生活饮用水标准检验方法》(GB5750.12-2006)Filta-Max Xpress快速方法进行免疫荧光染色镜检。计算比较两种方法检测贾第虫和隐孢子虫的阳性率。结果共采集200份水样;其中自来水出厂水48份,PCR和荧光镜检法均未检出贾第虫和隐孢子虫;检测原水、动物饲养场周边池水、污水处理厂出水、游泳池水和餐馆养渔池等水样分别为62、25、29、20、16份,PCR法贾第虫阳性率分别为8.1%、36.0%、17.2%、0和0,总阳性率为12.5%;隐孢子虫阳性率分别为6.5%、40.0%、13.8%、0和0,总阳性率为11.8%。免疫荧光染色镜检法贾第虫阳性率分别为9.7%、40.0%、24.1%、0和0,总阳性率为15.1%;隐孢子虫阳性率分别为8.1%、44.0%、17.2%、0和0,总阳性率为13.8%。两种方法检测贾第虫和隐孢子虫一致性分别为96.1%和95.4%,经Kappa检验,两种方法一致性较好(Kappa=0.83和0.79,Kappa0.75),PCR与荧光镜检结果无显著性差异(χ~2=0.44和0.26,P0.05)。结论两种方法均可用于城市现场水源中贾第虫和隐孢子虫污染的调查。自来水未检出贾第虫和隐孢子虫,但在原水和环境水中检测到贾第虫和隐孢子虫污染,需加强监测。  相似文献   

3.
隐孢子虫(Cryptosporidium)是Tyzzer于1907年首先在实验小鼠胃肠道内发现的一种能广泛感染脊椎动物的寄生原虫。该虫已被公认为人和动物腹泻的重要病原体,是引起三大肠道病病原体之一,已受到国内外学者的重视,在发达国家与发展中国家腹泻病人中,隐孢子虫感染率分别为0.6-7.3%与3%-13%,国内1986年陈义民等在兰州犊牛中首次发现隐孢子虫,次年韩范等在南京首次发现人体病例^[1],此后许多地区均报道有隐孢子虫感染,该病多发于免疫抑制的患者,而免疫功能正常虽无临床症状者但也能够排出卵囊,污染环境,更要注意的是隐孢子虫卵囊在自来水中存活率很高,在1993年正是隐孢子虫卵囊在自来水中存活率很高,在1993年正是隐孢子虫污染了饮用水,造成美国的Milnoukee暴发400000人的大流行^[2],1995年报道小剂量(50%感染剂量ID50为132个卵囊)的卵囊虫以引起血清呈阴性的健康自愿受试者感染^[3]。由于隐孢子虫形体小,对恶劣环境有较强的抵抗力,无特异性染色,光镜下缺乏明显特征,少量卵囊足以使人感染,因而建立一种敏感性高,特异性强的检测方法是当前隐孢子虫病防治和流行病学调查研究工作迫切需要解决的问题之一,近年来发展起来的聚合酶链式反应(PCR)技术,有快速,简便,准确,高度敏感与高度特异等优点。Laxer等^[4]和Webster等^[5]先后将该 技术成功地应用于隐孢子虫检测,为建立敏感性高,特异性强的隐孢子虫检测方法开辟新叙。本文就当前在检测隐孢子虫中所使用的PCR方法综述如下。  相似文献   

4.
目的 建立FTA-PCR方法,并应用于水源中隐孢子虫污染的基因检测.方法 用免疫磁珠(IMS)分离纯化隐孢子卵囊,采用FTA卡提取隐孢子卵囊DNA,根据隐孢子虫18 S rRNA的基因序列设计引物,对模板DNA进行PCR扩增,同时以刚地弓形虫、猪人肉孢子虫、细粒棘球蚴和华支睾吸虫等DNA样本作对照.用琼脂糖电泳和溴乙腚...  相似文献   

5.
隐孢子虫是一种重要的肠道寄生虫,主要经粪-口途径传播,人摄入被隐孢子虫卵囊污染的水源和食物均有感染风险。儿童及免疫力低下者为隐孢子虫感染高危人群,感染后可以引起腹泻、呕吐、营养不良等,严重者甚至导致死亡。分子检测技术因反应快速、灵敏度高,已广泛应用于隐孢子虫检测。本文对近年来人群隐孢子虫感染流行情况,以及隐孢子虫分子检测相关研究进展进行综述。  相似文献   

6.
目的建立一种同时检测隐孢子虫、贾第鞭毛虫、微孢子虫和环孢子虫4种原虫的多重PCR体系。方法基于隐孢子虫18S rRNA基因、贾第鞭毛虫TPI基因、微孢子虫SSU rRNA基因、环孢子虫18S rRNA基因保守序列设计特异引物,建立和优化一种同时检测隐孢子虫、贾第鞭毛虫、微孢子虫和环孢子虫的多重PCR方法,测序验证阳性结果,并进行该方法的敏感性和特异性试验。结果成功建立一种同时检测隐孢子虫、贾第鞭毛虫、微孢子虫和环孢子虫的多重PCR方法,在同一个PCR反应体系中稳定扩增获得大小分别为314、113、179和242 bp的产物,检出限为≥10拷贝的原虫DNA克隆质粒。该方法与单病原PCR检测的结果一致性较好。结论本研究建立的4种原虫的多重PCR检测技术操作简单、快速、成本效益高,可用于人体、动物和环境中隐孢子虫、贾第鞭毛虫、微孢子虫和环孢子虫感染和污染的筛查。  相似文献   

7.
目的 探讨隐孢子虫感染的基因检测方法。方法 用分离自人和牛的微小隐孢子虫各1株分别感染2组昆明小鼠,于接种后第6d、10d和14d分别收集每只动物粪便,用显微镜检查,再用Sheather's蔗糖梯度密度离心法纯化卵囊,提取总DNA,对每份DNA样本做10~0~10~(-3)稀释,然后用PCR对微小隐孢子虫18SrRNA基因进行特异性扩增。结果 接受具有活力的1×10~4个卵囊/只的36只小鼠,均获得感染;阳性样本被扩增出1条500hp的片段。隐孢子虫感染小鼠粪便样本各稀释度的PCR检测实验结果表明,PCR检测阳性率随模板DNA样本稀释倍数的增加而增高;小鼠感染后第6d、10d和14d的10~0和10~(-1)两个稀释度的PCR检测阳性率低于镜检结果,而10~(-2)和10~(-3)两个稀释度均高于镜检结果。结论 受染昆明鼠粪便内的微小隐孢子虫可通过扩增其18SrRNA基因检出。  相似文献   

8.
PCR技术不仅可检测极微量的隐孢子虫,而且具有高度特异性,在隐孢子虫检测中发挥重要作用。PCR检测中,隐孢子虫卵囊模板DNA的制备尤为重要,需对卵囊进行分离纯化和裂解后才能提取纯化DNA。本文综述目前常用的卵囊分离纯化、裂解和DNA提取纯化的方法。  相似文献   

9.
目的建立一种同时检测隐孢子虫、贾第鞭毛虫、微孢子虫和环孢子虫4种原虫的多重PCR体系。方法基于隐孢子虫18S rRNA基因、贾第鞭毛虫TPI基因、微孢子虫SSU rRNA基因、环孢子虫18S rRNA基因保守序列设计特异引物,建立和优化一种同时检测隐孢子虫、贾第鞭毛虫、微孢子虫和环孢子虫的多重PCR方法,测序验证阳性结果,并进行该方法的敏感性和特异性试验。结果成功建立一种同时检测隐孢子虫、贾第鞭毛虫、微孢子虫和环孢子虫的多重PCR方法,在同一个PCR反应体系中稳定扩增获得大小分别为314、113、179和242 bp的产物,检出限为≥10拷贝的原虫DNA克隆质粒。该方法与单病原PCR检测的结果一致性较好。结论本研究建立的4种原虫的多重PCR检测技术操作简单、快速、成本效益高,可用于人体、动物和环境中隐孢子虫、贾第鞭毛虫、微孢子虫和环孢子虫感染和污染的筛查。  相似文献   

10.
目的了解广西壮族自治区宾阳县和灵山县水源中隐孢子虫和蓝氏贾第鞭毛虫(简称贾第虫)的污染情况。方法利用质控标样检验碳酸钙絮凝和膜过滤富集隐孢子虫卵囊、贾第虫包囊的回收率,并与我国的国标方法比较。2016、 2017年6-9月,采集广西壮族自治区宾阳县(自来水厂A、 B、 C、 D和E)和灵山县(自来水厂F、 G、 H、 I和J) 10个自来水厂的进水和出厂水水样,应用碳酸钙絮凝法富集进水中隐孢子虫卵囊和贾第虫包囊,膜过滤法富集出厂水中隐孢子虫卵囊和贾第虫包囊;富集后用磁珠分选和荧光染色检测隐孢子虫卵囊和贾第虫包囊,计算水样中隐孢子虫卵囊和贾第虫包囊的密度。结果碳酸钙絮凝法富集质控标样隐孢子虫卵囊和贾第虫包囊的回收率分别为48.5%和52.0%,膜过滤法为35.0%和36.5%,国标方法为15.0%和16.0%,碳酸钙絮凝法、膜过滤法的回收率均高于我国国标方法,差异具有统计学意义(碳酸钙絮凝法:χ~2=26.007、28.877,均P 0.01;膜过滤法:χ~2=8.167、 11.019,均P 0.01)。10个自来水厂中,每个自来水厂采集进水和出厂水水样各2份。检测结果显示:自来水厂A的进水、 B的进水和出厂水、 C和F的出厂水中检出隐孢子虫卵囊,密度分别为4.0、 10.0、 0.6、 2.9、 5.1个/10 L;自来水厂F的出厂水中检出贾第虫包囊,密度为9.3个/10 L。其余自来水厂的进水和出厂水均未检出隐孢子虫和贾第虫。结论广西壮族自治区宾阳县和灵山县部分自来水厂的进水或出厂水中存在隐孢子虫或贾第虫污染,需加强农村地区饮用水隐孢子虫和贾第虫的监测。  相似文献   

11.
目的建立一种方便快捷的检测微小隐孢子虫的实时荧光定量PCR(Real-time PCR)方法。方法根据GenBank公布的微小隐孢子虫18s rRNA基因序列设计1对引物,通过质粒DNA和卵囊检测标准曲线的绘制及特异性和重复性的研究,建立检测微小隐孢子虫的基于SYBR Green的Real-time PCR方法,进而对奶牛粪便进行检测。结果建立的Real-time PCR法对检测微小隐孢子虫具有很高的特异性,质粒DNA和卵囊的检测阈值分别达到1个拷贝和10个卵囊,奶牛粪便阳性率为25.93%(21/81),高于普通PCR检测率20.99%(17/80)。结论建立的Real-timePCR方法简便、快速,特异性强,敏感度高,可用于微小隐孢子虫的快速定量检测。  相似文献   

12.
目的了解江苏省生活饮用水中贾第鞭毛虫和隐孢子虫的污染状况,为饮用水水质卫生、安全供水提供科学依据。方法选取江苏省13个设区市的28家水厂,分别采集水源水、自来水厂出厂水、管网末梢水样本(其中水源水采集10 L,出厂水和末梢水各100 L),并进行抽滤、淘洗、离心浓缩、免疫磁分离、荧光染色镜检的处理,检测贾第鞭毛虫包囊及隐孢子虫卵囊的含量。结果累计采集江苏省13个设区市的水样84份,包括水源水、水厂出厂水、管网末梢水各28份。其中,水厂出厂水和管网末梢水中均未检出贾第鞭毛虫包囊和隐孢子虫卵囊,但在盐城(盐龙湖)、连云港(蔷薇河)、常州(钱资湖)水源水中检出贾第鞭毛虫包囊,阳性率为10.71%(3/28),密度均为1个/10 L;在南京(长江)、镇江(长江)、扬州(京杭大运河)的水源水中检出隐孢子虫卵囊,阳性率为10.71%(3/28),密度均为1个/10 L。结论江苏省部分地区水源水中可检出贾地鞭毛虫和隐孢子虫,存在一定的安全用水隐患,须进一步加强水源卫生监管,加强饮用水的监测,保证居民的饮水安全。  相似文献   

13.
目的 评价江苏省县级血防机构开展血吸虫病病原学检测水平,提高专业技术人员血吸虫病病原学检测能力,为构建血吸虫病现场查病质控体系提供技术支撑。方法 人工获取家兔血吸虫肝卵,制备成4个不同浓度的虫卵悬液,采用单盲法开展虫卵孵化检测,比较县级工作员检测结果与标准结果的符合率、误检率和漏检率。结果 江苏省28个县(市、区)共检测虫卵悬液560份,检出阳性283份,阴性203份,总符合率为86.79%,总误检率为9.38%,总漏检率为15.77%,检测结果与标准结果差异有统计学意义([χ2] = 12.99,P < 0.01)。28个县(市、区)中有20个县(市、区)出现了漏检,占71.43%;13个县(市、区)出现了误检,占46.43%。江滩、山丘、水网和湖滩4类地区病原学检测误检率为4.55%~43.75%,差异有统计学意义([χ2] =30.34, P < 0.01);漏检率为4.17%~20.45%,差异无统计学意义([χ2] = 5.09,P = 0.17)。传播控制和传播阻断2类流行区病原学检测误检与漏检率分别为7.50%、13.33%与10.42%、17.13%,差异无统计学意义([χ2] = 0.229、0.575,P 均> 0.05)。达到血吸虫病传播控制10年及以上和不足10年地区误检与漏检率分别为11.81%、5.00%与16.67%、14.17%,差异无统计学意义([χ2] = 2.804、2.848,P均 > 0.05)。达到血吸虫病传播阻断10年及以上与不足10年地区误检率分别为11.54%与10.00%,差异无统计学意义([χ2] = 0.069,P = 0.792);漏检率分别为10.90%与35.00%,差异有统计学意义([χ2] = 17.364,P < 0.01)。结论 江苏省县级水平血吸虫病查病工作存在漏检、误检现象,现场病原学检测能力有待进一步提高。  相似文献   

14.
目的观察补骨脂、双氢青蒿素及二者配伍对隐孢子虫的杀灭效果。方法地塞米松磷酸钠注射液腹股沟皮下注射诱导建立隐孢子虫感染模型,随机分成正常组A、阳性对照组B、补骨脂治疗组C、双氢青蒿素治疗组D以及二者配伍治疗组E,并按治疗1~2w时间分成A1、A2;B1、B2;C1、C2;D1、D2;E1、E2共计10组。观察各组小鼠肠壁黏膜组织病理变化及超微结构改变。结果经过1、2w的治疗,所有药物治疗组小鼠的粪便卵囊量与阳性对照组相比,均明显减少(P<0.05),小肠黏膜组织病理及超微结构显示小肠上皮处于修复中,并且合剂治疗组疗效明显优于单剂治疗组(P<0.05)。结论中药补骨脂和双氢青蒿素对隐孢子虫均有抑杀作用,但以后者杀虫效果明显。二者协同作用,共同参与宿主的免疫调节和炎症修复过程。  相似文献   

15.
目的 探讨Toll样受体在微小隐孢子虫感染致小鼠肠黏膜损伤中的作用机制。 方法 30只雄性BALB/c小鼠随机分为正常对照组、感染1周组和感染2周组。用免疫抑制及卵囊灌胃的方法建立微小隐孢子虫肠道感染小鼠模型,感染1周组和2周组分别于感染后7 d和14 d剖杀,正常对照组于感染后14 d剖杀。光镜观察小鼠肠黏膜病理变化,并测量肠绒毛高度、隐窝深度及绒毛高度/隐窝深度比值;透射电镜观察小鼠肠黏膜超微结构;实时荧光定量PCR(qPCR)、Western blotting技术检测肠黏膜TLR2和TLR4表达情况。结果 光镜下,感染组小鼠肠绒毛水肿,明显萎缩变短,黏膜下层结构水肿,与肌层间形成间隙。与正常对照组比较,感染1周组和感染2周组小鼠空肠绒毛高度及绒毛高度/隐窝深度比值均明显降低(P均[<0.05]),隐窝深度明显升高(P均 < 0.01);且感染2周组小鼠空肠的绒毛高度及绒毛高度/隐窝深度比值均明显低于感染1周组(P均 < 0.05),隐窝深度明显高于感染1周组(P < 0.01)。透射电镜显示,感染组小鼠的空肠可见微小隐孢子虫卵囊,结构完整,卵囊周围的肠绒毛严重脱落,呈火山口状,卵囊壁与上皮细胞膜融合。 qPCR结果显示,与正常对照组相比,感染1周组和感染2周组小鼠肠黏膜TLR2和TLR4 mRNA表达水平明显增高(P均[<0.05]);且感染2周组小鼠较感染1周组小鼠TLR2和TLR4 mRNA表达水平明显增高(P均[<0.05])。Western blotting检测结果表明,感染组小鼠肠黏膜TLR2和TLR4蛋白表达量较正常对照组显著增高(P均[<0.05]),且感染2周组小鼠TLR2和TLR4蛋白较感染1周组小鼠的表达量明显增高 (P均[<0.05])。结论 TLR2和TLR4参与了肠黏膜对微小隐孢子虫的识别,感染导致的肠黏膜损伤可能与其上调TLR2和TLR4表达相关。  相似文献   

16.
目的 了解江苏省邳州市和新沂市华支睾吸虫在淡水鱼中的流行状况,为下一步的防治提供科学依据。 方法 在邳州市和新沂市自然水域中抓取野生麦穗鱼和棒花鱼,用压片镜检法检测鱼体内的华支睾吸虫囊蚴,分析感染数据。 结果 共解剖麦穗鱼和棒花鱼1 117条,其中麦穗鱼792条(占70.90%),棒花鱼325条(占29.10%)。麦穗鱼和棒花鱼华支睾吸虫囊蚴总感染率分别为29.80%(236/792)和4.62%(15/325),差异有统计学意义([χ2]= 83.88, P<0.01)。 结论 新沂市和邳州市淡水鱼华支睾吸虫囊蚴感染率较高,当地居民面临着较高的感染华支睾吸虫的风险。  相似文献   

17.
目的了解武汉市2岁以下婴幼儿腹泻患者的隐孢子虫感染状况,为预防隐孢子虫感染提供分子流行病学依据。方法采集2014年8月—2015年7月在湖北省人民医院和武汉大学中南医院就诊的2岁以下婴幼儿腹泻患者粪便,过滤沉淀后于2.5%重铬酸钾溶液中4℃保存;采用酚-氯仿法提取基因组DNA、18S rRNA巢式PCR(Nested-PCR)扩增技术检测隐孢子虫感染,并对阳性PCR产物测序;所获序列进行Blastn比对,应用MEGA软件采用邻接法构建系统进化树进行虫种鉴定。结果共收集到298份婴幼儿腹泻患者的粪便样本。经巢式PCR扩增技术检测,298份样品中有9份扩增出隐孢子虫阳性条带,阳性率为3.02%(9/298),其中1~2岁腹泻幼儿阳性率为5.93%(7/118),1岁患儿的阳性率为1.11%(2/180),差异有统计学意义(χ~2=4.13,P0.05)。9份阳性PCR产物经测序后与Gen Bank中的参照序列进行比对,结果显示7份样本为微小隐孢子虫感染,2份样本为微小隐孢子虫与人隐孢子虫混合感染。绘制种系发育进化树发现,9条SSU r RNA基因序列与已发表的微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)位于同一个进化支上。结论武汉地区婴幼儿腹泻患者中存在隐孢子虫感染,主要感染虫种为微小隐孢子虫。  相似文献   

18.
目的调查16~22岁新兵中毒力型幽门螺杆菌感染的情况及影响因素,为部队卫生防病工作提供参考依据。方法对某部新兵248人进行一般状况及胃肠疾病等情况的问卷调查,并测定血清中毒力菌株幽门螺杆菌抗体(CagA—HP-IgG)。结果16~22岁新兵中毒力菌株阳性检出率为46.8%,饮用地下水者(感染率43.3%)与饮用河湖/池塘/沟渠水者(感染率59.2%)之间存在差异(P〈0.05);不吸烟者(感染率37.2%)与吸烟者(感染率51.1%)之间存在差异(P〈0.05);有胃肠道症状者(感染率53.5%)与无胃肠道症状者(感染率37.7%)之间存在差异(P〈0.05);有集体生活史者(感染率55.9%)与无集体生活史者(感染率38.8%)之间存在差异(P〈0.01)。结论新兵中毒力菌株感染率较高,可能与饮用水源、吸烟、胃肠道症状及集体生活史有关。提示净化水源、控制吸烟、改善居住条件有助于降低部队毒力菌株感染与流行。  相似文献   

19.
目的探讨中药补骨脂、双氢青蒿素二者配伍对小鼠隐孢子虫病的疗效。研究该合剂对MHC Ⅱ类抗原表达的调节作用。方法将60只昆明小鼠随机分成5组:A:正常组;B:阳性对照组1;C:1w治疗组;D:阳性对照组2;E:2w治疗组。B、C、D、E四组小鼠经腹股沟皮下注射地塞米松磷酸钠注射液,建立隐孢子虫感染模型。经1w和2w药物治疗后,计数各组小鼠粪便卵囊数量并观察回肠组织中MHC Ⅱ类抗原的表达。结果所有药物治疗组,粪便卵囊量与阳性对照组相比均明显减少(P(0.05)。在经药物治疗1w组,B组MHC Ⅱ类抗原的表达显著高于A组(P(0.05),C组与B组无显著性差异。治疗2w后,E组MHC Ⅱ类抗原的表达与正常对照组A组无差别(P>0.05),D组MHC Ⅱ类抗原的表达显著低于A组(P<0.05)。结论MHC Ⅱ类抗原在隐孢子虫感染小鼠中表达升高,随着虫体感染加重,MHC Ⅱ类抗原表达受抑;补骨脂、双氢青蒿素合剂可通过调节MHC Ⅱ类抗原的表达,进而调节宿主免疫应答反应的能力,达到抑杀虫体,修复病损的目的。  相似文献   

20.
目的探索男男性行为人群(MSM)社区小组开展艾滋病病毒(HIV)快速检测与咨询(简称"快检")工作模式,并在黑龙江省主要城市推广应用。方法采取定性方法建立和完善快检试点工作模式,对比实施确定推广价值,多种交流渠道宣传和推荐,支持有能力、有兴趣的MSM社区小组开展。结果探索出成熟的快检服务和管理模式,推广到全省13个市中的10个;2012年,快检5 264人次,占全省MSM检测总数的23.9%,快检阳性240例,超过全省发现MSM中HIV感染者总数的30%。从浴池快检阳性到疾病预防控制中心(CDC)确证检测的成功转介率为59.7%(46/77),非浴池快检阳性成功转介率为92.6%(151/163)。结论 MSM社区小组开展的快检服务有效提高了MSM HIV检测的覆盖面和干预质量,值得进一步完善和推广应用。  相似文献   

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