基因重组人骨形成蛋白-2

为了给临床骨缺损提供理想的修复材料，人们积极研究利用基因工程技术在原核细胞或真核细胞中表达基因重组人骨形成蛋白－２（ｒｈＢＭＰ－２）。ｒｈＢＭＰ－２与牛骨中提取的骨形成蛋白（ＢＭＰ）具有相似的生物学活性，均能在异位诱导骨、软骨形成，但两者在诱导形成的骨组织结构上有一定差异。ｒｈＢＭＰ－２可以与胶原、珊瑚／胶原、无活性脱矿骨基质或聚乳酸／聚乙醇酸共聚物等载体材料合成ｒｈＢＭＰ－２复合人工骨，共同用于骨缺损的修复。但在其广泛应用于临床之前，尚有一些问题有待于进一步研究解决。     

真核表达骨形成蛋白的条件优化

重组人骨形成蛋白 7(ｒｈＢＭＰ 7)在体内和体外都显示了高效的骨诱导活性[1] 。可刺激成骨细胞、类成骨细胞及已分化的人骨细胞 ,促进其增殖和胶原合成以及细胞中碱性磷酸酶增加。在长期培养基中可使胶外基质钙化性的诱导原始成骨祖细胞的定向分化。本组实验主要探索体外培养条件下骨形成蛋白 7(ＢＭＰ 7)在真核细胞 (ＣＨＯ)中的表达 ,通过逐渐增加氨甲蝶呤 (ＭＴＸ)的浓度筛选克隆 ,得到高表达的单克隆细胞株。1　材料和方法1.1　材料　ＣＨＯ细胞株 ,由美国得克萨斯大学西北医学中心赠送 ,ＢＭＰ 7重组表达质粒由美国得克萨斯大学西北…     

骨形成蛋白与神经生长发育的研究进展

骨形成蛋白（ｂｏｎｅｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎｓ,ＢＭＰｓ）是一种高效骨诱导物质,能够诱导血管周围的未分化间充质细胞向骨软骨细胞发生不可逆地分化。随着胚胎学、分子生物学、细胞生物学等学科的发展,对ＢＭＰｓ的研究也不断扩展和深化。ＢＭＰｓ家族至少包括２０个以上的成员,依据结构特点与氨基酸同源性,可将ＢＭＰｓ家族分为以下五组：（１）Ｄｐｐ、ＢＭＰ２和ＢＭＰ４;（２）６０Ａ、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６（Ｖｇｒ１）、ＢＭＰ７（ＯＰ１）、ＢＭＰ８ａ（ＯＰ２）和ＢＭＰ８ｂ（ＯＰ３）;（３）ＢＭ…     

rhGM—CSF／IL—3融合蛋白对人骨髓造血祖细胞体外培养的研究

研究了ｒｈＧＭ－ＣＳＦ／ＩＬ－３融合蛋白对人骨髓造血祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－ＧＥＭＭ、ＢＦＵ－Ｅ）集落形成的影响，结果表明ｒｈＧＭ－ＣＳＦ／ＩＬ－３能显著促进ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－ＧＥＭＭ、ＢＦＵ－Ｅ集落的形成，分别与ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－３单独或联合用药比较，差异有显著性（Ｐ〈０．００１），ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ＝ＧＥＭＭ、ＢＦＵ－Ｅ集落的形成对融合蛋白均有剂量依赖性，培养体系浓度在５￣１０ｎ     

人骨形态发生蛋白-2完整成熟肽基因的克隆

目的：克隆人骨形态发生蛋白－２（ｈＢＭＰ－２）完整肽基因。方法：依据Ｇｅｎｂａｎｋ中ｈＢＭＰ－２的序 化学合成两条引物,从人胎儿骨组织中提取得到的总ＲＮＡ中,通过反转录聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）得到ｈＢＭＰ－２完整成熟肽基因。将所得的基因片段插入克隆载体ｐＵＣ－１９并转化大肠杆菌ＪＭ１０９,提取重组质粒,酶切并测序。结果：ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳显示：ＰＣＲ产物为一长约４００ｂｐ的带,阳性克隆质粒     

人骨形态发生蛋白- 4cDNA的克隆和序列测定

骨形态发生蛋白（ｂｏｎｅ　ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ　ｐｒｏｔｅｉｎ，ＢＭＰ）是由Ｕｒｉｓｔ［１］在１９６５年对脱钙骨基质的成骨研究中发现的。他们将脱钙骨基质移植于动物的皮下和肌肉内，可诱导软骨化骨，随后从骨中分离出了一种小分子的糖蛋白，这种糖蛋白可诱导异位宿主区间充质细胞向成骨和成软骨细胞的方向分化。ＢＭＰ在组织中含量甚微，每１　０００　ｇ皮质骨仅含１～２　μｇ［２］，因而利用基因工程生产重组ＢＭＰ成为必须。赵明［４］、崔有宏［５］和刘礼初［６］均在大肠杆菌中表达有活性的ＢＭＰ，但多为人ＢＭＰ…     

骨形态发生蛋白及其活性影响因素探讨

骨形态发生蛋白（ＢＭＰｓ）是骨和软骨诱导形成的分子调节器，它调节着骨母细胞的 移、增殖、公化，对它的研究会加速骨组织工程的进展。研究表明，ＢＭＰｓ是一组复合体，它家族中的第一个成员以及复合体均有诱民成骨的活性，但其分子形态、浓度、所处的微环境等都影响着它的骨效应。本文简述了它的结构，并重点搪塞了在骨组织工程研究中影响ＢＭＰｓ活性的因素。     

大鼠神经肽Y前体融合蛋白在大肠杆菌中的超表达

应用逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）从大鼠腋组织钓得神经肽Ｙ（ＮＰＹ）ｃＤＮＡ编码区序列。经ＤＮＡ序列测定证实其准确性后，将该ｃＤＮＡ定向亚克隆入一大肠杆菌的表达载体ｐＭＡＬ－Ｃ＿２的果糖结合蛋白（ＭＢＰ）基因中。ＤＮＡ测序表明ＮＰＹｃＤＮＡ与表达载体中ＭＢＰ开放阅读框架一致。将重组质粒转入大肠杆茵ＤＨ５α菌系中，该重组大肠杆菌在液体ＬＢ培养基中经１ｍｍｏｌ／Ｌ终浓度的ＩＰＴＧ诱导４ｈ，所表达的ＮＰＹ－ＭＢＰ融合蛋白产量高达大肠杆菌总蛋白量的６０％～７０％。超表达的ＮＰＹ经纯化后将为进一步进行结构与功能研究提供材料来源。     

骨形态发生蛋白及其活性影响因素探讨

骨形态发生蛋白（ＢＭＰｓ）是骨和软骨诱导形成的分子调节器,它调节着骨母细胞的迁移、增殖、分化,对它的研究会加速骨组织工程的进展。研究表明,ＢＭＰｓ是一组复合体,它家族中的每一个成员以及复合体均有诱导成骨的活性,但其分子形态、浓度、所处的微环境等都影响着它的骨效应。本文简述了它的结构,并重点探讨了在骨组织工程研究中影响ＢＭＰｓ活性的因素     

rhBMP-2及其载体在脊柱融合中的应用研究进展

脊柱融合常采用自体骨移植 ,但其来源有限、假关节发生率高且常有供骨区痛等并发症。骨形态发生蛋白 2是诱导成骨活性最强的细胞因子之一 ,其基因重组产品———重组人骨形态发生蛋白 - 2 (ｒｈＢＭＰ 2 )是唯一获ＦＤＡ批准临床应用的成骨因子 ,本文就其在脊柱融合中的研究应用进展作一综述。1 ｒｈＢＭＰ 2的来源及成骨作用ＢＭＰ 2无明显种属特异性 ,可从动物骨中提取用于人体 ,但ＢＭＰ 2在骨组织中含量极微 (每千克骨约含 1μｇ) ,纯度和活性不一致 ,难以满足科研及临床应用。 1988年 ,Ｗｏｚｎｅｙ[1] 用ｃＤＮＡ探针杂交技术确定编码…     

白细胞介素—8对大鼠失血性休克血浆6—keto—PGF1α和TXB2含量的影响

目的和方法：本文观察重组人内皮细胞衍生的白细胞介素－８（ｒｈＥＤＩＬ－８）对大鼠晚期失血性休克血浆６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α和ＴＸＢ２含量的影响，并与平均动脉血压（ＭＡＢＰ）的变化作相关性分析。结果：晚期失血性休克血浆６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α含量明显降低（１０６７４±１２２６ｖｓ１５６８２±１１４２）ｎｇ／Ｌ，Ｐ＜００１，ＴＸＢ２含量明显升高（３１８３６±２６．５４ｖｓ１７４９１±２１５８）ｎｇ／Ｌ，Ｐ＜００１；给予ｒｈＥＤＩＬ－８（２５０μｇ／ｋｇ）后，血浆６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α含量明显升高（３６８４７±１５６８ｖｓ１０３７６±１３１８）ｎｇ／Ｌ，Ｐ＜００１，其血浆水平与ＭＡＢＰ变化呈明显正相关（ｒ＝０．７４６，Ｐ＜００１）；ｒｈＥＤＩＬ－８对血浆ＴＸＢ２含量却无明显影响。结论：ｒｈＥＤＩＬ－８抗晚期失血性休克作用与其促进血管内皮细胞产生和释放ＰＧＩ２有关     

接骨冲剂对骨形成蛋白和骨痂细胞DNA含量变化的影响

目的：了解骨折愈合过程中骨形成蛋白（ＢＭＰ）和骨痂细胞ＤＮＡ含量的变化及接骨冲剂对其的影响。方法：接骨冲剂为十二种中药的提取物。用ＨＥ、Ｓ－Ｐ免疫组化、Ｆｅｕｌｇｅｎ染色和图像分析仪测量，观察大白兔桡骨骨折愈合过程中各种骨痂成分、ＢＭＰ和细胞ＤＮＡ含量的动态变化，以及接骨冲剂治疗组与对照组之间的差别。结果：骨痂细胞ＤＮＡ含量高峰在骨痂形成第１周；用药组细胞ＤＮＡ含量高于对照组。骨痂组织ＢＭＰ含量高峰在第２～４周，用药组ＢＭＰ含量高峰比对照组提前１周。用药组软骨骨痂少，骨性骨痂形成及成熟比对照组提前１周。结论：ＤＮＡ含量与骨痂组织增生状态有关，ＢＭＰ含量与骨性骨痂形成相关。接骨冲剂能促进骨痂组织增生，使纤维骨痂直接向骨性骨痂转化     

干扰素对人胃癌细胞IAP—2表达的调节

应用基因重组干扰素－α和－γ体外诱导三侏人胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１，ＭＧＣ８０３和ＭＫＮ４５，ＡＢＣ－ＣＥＬＩＳＡ法测定诱导组和对照细胞表面免疫抑制酸性蛋白Ⅱ型的表达量。在基础培养条件下，三株细胞表达ＩＡＰ－２均呈低水平。低浓度（＜１０００ｕ／ｍｌ）ＩＦＮ－α或－γ反使其ＩＡＰ－２表达量显著减少。这些结果提示：（１）ＩＦＮ－α和－γ可能对胃癌细胞ＩＡＰ－２表达呈双向调节作用；（２）癌细胞ＩＡＰ－２     

骨形态发生蛋白-2在骨形成过程中的作用机制

骨和软骨组织中含有多种参与调节骨骼发育及生长的多肽类生长因子。此类因子通过自分泌、旁分泌或者内分泌的方式,在细胞与细胞之间,细胞与细胞外基质之间传递信息,参与复杂的骨形成调节过程。在诸多因子中,骨形态发生蛋白（ｂｏｎｅｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎｓ,ＢＭＰｓ）是唯一能够单独诱导骨组织形成的局部生长因子。由于ＢＭＰｓ与转化因子在Ｃ端都含有７个保留的半胱氨酸残基,所以属于转化生长因子－Ｂ超家族（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ－ｂａｔｅｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ,ＴＧＦ－β…     

转移因子和免疫核糖核酸对LAK细胞抗肿瘤活性的影响

本研究用重组白细胞介素２（ｒＩＬ－２）联合转移因子（ＴＦ）或抗肿瘤免疫核糖核酸（ｉＲＮＡ）作用于外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ），测定其对Ｋ５６２，Ｒａｊｉ及Ｈ７４０４细胞的杀伤活性。结果发现，高浓度ＴＦ（０．２５ｕ／ｍｌ）可抑制ＬＡＫ活性，ＴＦ进一步稀释（０．１２５ｕ／ｍｌ）可使其抑制作用消失。ＴＦ和抗肿瘤ｉＲＮＡ不能进一步提高最适剂量ｒＩＬ－２（５００ｕ／ｍｌ）诱导的ＬＡＫ活性，但能显著增强亚适剂量ｒＩＬ－２（２００ｕ／ｍｌ）诱导的ＬＡＫ活性，诱导ＬＡＫ活性增高的ＴＦ最适剂量为０．０３１ｕ／ｍｌ。ＴＦ或抗肿瘤ｉＲＮＡ单独不能诱导出ＬＡＫ活性，而当两者联合应用可诱导ＰＢＭＣ产生ＬＡＫ活性。本文为ＴＦ及抗肿瘤ｉＲＮＡ协同ＬＡＫ细胞疗法在临床应用提供实验基础。     

SLE病人外周血Bcl—2／JH基因重排检测的意义

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法检测３１例ＳＬＥ病人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）Ｂｃｌ－２／ＪＨ基因重排现象和流式细胞仪间接双标记法分析其Ｔ（ＣＤ３）、Ｂ（ＣＤ１９）细胞Ｂｃｌ－２蛋白的表达。结果显示，ＳＬＥ病人Ｔ细胞Ｂｃｌ－２蛋白表达明显高于正常人（４２．９５％±２８．４７％对比９．９４％±４．９６％，Ｐ＝０．０００４），尤其以活动期ＳＬＥ病人为明显，而Ｂ细胞Ｂｃｌ－２蛋白表达与正常人之间并无统计学差异（７９．２１％±１０．６９％对比８１．９６％±６．９７％；Ｐ＝０．４６０２）。７例ＳＬＥ病人具有典型的Ｂｃｌ－２／ＪＨ基因重排（占２２．５８％），且均为ＳＬＥ活动期病人，其Ｔ细胞Ｂｃｌ－２蛋白表达明显高于无基因重排的ＳＬＥ病人，其Ｂ细胞Ｂｃｌ－２表达并无差异（Ｐ＞０．３９０５）。说明Ｂｃｌ－２／ＪＨ基因重排现象可见于ＳＬＥ，并与Ｔ细胞Ｂｃｌ－２蛋白高表达有关，表明细胞凋亡抑制基因Ｂｃｌ－２在ＳＬＥ发病机制中具有重要作用。     

表皮生长因子和双调蛋白上调入乳腹癌细胞基质金属蛋白酶

表皮生长因子和双调蛋白上调入乳腹癌细胞基质金属蛋白酶（ＭＭＰ）－９的表达［英］／Ｋｏｎ－ｄａｐａｋａＳＢ…／／ＩｎｔＪＧａｎｃｅｒ，－１９９７，７０．７２２～７２６乳腺癌基质细胞和癌细胞能高水平表达ＭＭＰ－２和ＭＭＰ－９，它们能降解基底膜Ⅳ型胶原，因...     

干扰素对人胃癌细胞IAP－2表达的调节

应用基因重组干扰素－ａ和－γ（ＩＦＮ－ａ和－γ）体外诱导三株人胃癌细胞系ＳＧＣ＿（７９０１）、ＭＧＣ＿（８０３）和ＭＫＮ＿（４５），ＡＢＣ－ＣＥＬＩＳＡ法测定诱导组和对照组细胞表面免疫抑制酸性蛋白Ⅱ型（ＩＡＰ－２）的表达量。在基础培养条件下，三株细胞表达ＩＡＰ－２均呈低水平。低浓度（＜１０００ｕ／ｍｌ）ＩＦＮ－ａ或－γ能增加这三株细胞ＩＡＰ－２表达量；而高浓度（＞１０００ｕ／ｍｌ）ＩＦＮ－ａ或－γ反使其ＩＡＰ－２表达量显著减少。这些结果提示：（１）ＩＦＮ－ａ和－γ可能对胃癌细胞ＩＡＰ－２表达呈双向调节作用；（２）癌细胞ＩＭＰ－２表达水平检测作为临床应用ＩＦＮｓ治疗癌症患者的疗效判别指标可能具有一定价值。     

恶性疟原虫疫苗研究VⅡ.PfCMR基因与人白细胞介素—2基因…

用限制性内切酶ＥｃｏＲＩ和Ｓａｌｌ将恶性疟原虫复合抗原基因ＰｆＣＭＲ从质粒ＰＷＲ４５０－１／ＰｆＣＭＲ中切下，插入质粒ＰＢＶ２２０／ＩＬ－２中人白细胞介素－２（ＩＬ－２）基因的ＥｃｏＲＩ位点，重组质粒转化大肠杆菌ＤＨ５ａ，通过ＰＣＲ扩增和酶切鉴定，筛选出自向插入的重组载体ＰＢＶ２２０／ＰｆＣＭＲ－ＩＬ－２。为表达ＰｆＣＭＲ－ＩＬ－２融合蛋白打下基础。     

人骨形成蛋白2单克隆抗体的制备及鉴定

人骨形成蛋白２单克隆抗体的制备及鉴定卢兹凡胡传闽＊陈苏民路凡高磊刘新平（第四军医大学生化及分子生物学教研室＊病理学教研室，西安７１００３２）人骨形成蛋白２（ｈＢＭＰ２）是具有诱骨活性的蛋白质，在骨肉瘤中有高表达。为了进一步研究它在人体内生理及病理作用...