反义IGF—I基因转染的黑色素瘤苗抗黑色素肿瘤转移作…

反应反义技术修饰的瘤苗进行肿瘤治疗是一条值得探讨的新途径。本研究将反义ＩＧＦ－Ｉ基因转染的黑色素瘤细胞作为瘤苗联合ＩＬ－２治疗实验性肺转移荷瘤小鼠及观察其生存期，结果发现反义ＩＧＦ－Ｉ基因转染的瘤苗可使实验性荷鼠肺部肿瘤转移结节数减少和荷瘤鼠生存期延长，并显著高于亲本瘤苗治疗的效果，而辅以ＩＬ－２治疗，效果更加显著。本表明反义ＩＧＦ－Ｉ基因转染的黑色素瘤苗具有一定的抗黑色素肿瘤能力，ＩＬ－２对其抗     

IL－2和环磷酰胺体内增强TNF基因转染瘤苗的抗肿瘤作用

应用细胞因子基因转染的瘤苗进行肿瘤治疗是一条值得探讨的新途径。本研究将放射线灭活的ＴＮＦ－α基因转染的肿瘤细胞作为瘤苗联合低剂量ＩＬ－２和／或低剂量环磷酰胺治疗实验性肺转移荷瘤小鼠，结果发现单独应用ＴＮＦ基因转染的瘤苗无明显疗效，但联合低剂量ＩＬ－２或低剂量ＩＬ－２加低剂量环磷酰胺后具有显著的抗肿瘤转移作用。本研究表明，低剂量ＩＬ－２和低剂量环磷酰胺对ＴＮＦ基因转染瘤苗的抗肿瘤转移作用有增强效应。     

IL—2和环磷酰胺体内增强TNF基因转染瘤苗的抗肿瘤作用

应用细胞因子基因转染的瘤苗进行肿瘤治疗是一条值得探讨的新途径。本研究将放射线灭活的ＴＮＦ－ａ基因转染的肿瘤细胞作为瘤苗联合低剂量ＩＬ－２和／或低剂量环磷酰胺治疗实验性肺转移荷瘤小鼠，结果发现单独应用ＴＮＦ基因转染的瘤苗无明显疗效，但联合低剂量ＩＬ－２或低剂量ＩＬ－２加低剂量环磷酰胺后具有显著的抗肿瘤转移作用。本研究表明，低剂量ＩＬ－２和低剂量环磷酰胺对ＴＮＦ基因转染瘤苗的抗肿瘤转移作用有增强效应。     

联合应用IL—2及IL—4基因转染瘤苗对实验性肺转移…

将ＩＬ－２基因转染的高分泌ＩＬ－２的Ｂ１６黑色素瘤细胞株（Ｂ２）及ＩＬ－４基因转染的高分泌ＩＬ－４的Ｂ１６黑色素瘤细胞株（Ｂ４）制备成新型瘤苗，用以治疗实验性肺转移荷瘤小鼠，并辅以低剂量环磷酰胺，结果表明，荷瘤小鼠存活期明显延长；肺部转移结节数明显减少；两种瘤苗联合治疗后的疗效较单独使用明显，当辅以低剂量环磷酰胺时治疗效果更加明显。体内免疫功能检测表明，经两种瘤苗联合治疗的荷瘤小鼠脾细胞ＮＫ及ＣＴ     

IL-4基因转染瘤苗体内抗肿瘤转移作用及其免疫机理的初步研究

将白细胞介素４（ＩＬ－４）基因转染Ｂ１６黑色素瘤细胞，筛选出高分泌克隆，体外扩增后经丝裂霉素Ｃ灭活制备成瘤苗，用以治疗实验性肺转移荷瘤小鼠，同时用低剂量白细胞介素２（ＩＬ－２）及低剂量环磷酰胺（Ｃｙ）辅助治疗。结果发现，经ＩＬ－４基因转染瘤苗治疗后荷瘤小鼠肺部转移结节明显减少，存活期明显延长，辅以ＩＬ－２治疗后效果更佳；同时辅以ＩＬ－２及Ｃｙ则治疗效果最佳。体内免疫功能研究发现，经ＩＬ－４基因转染瘤苗治疗后小鼠脾淋巴细胞诱导的ＣＴＬ及腹腔巨噬细胞杀伤活性明显升高，但脾脏ＮＫ及经诱导的ＬＡＫ活性变化不明显。脾淋巴细胞经诱导后分泌的细胞因子（包括ＩＬ－２、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ、ＧＭ－ＣＳＦ）中，ＴＮＦ和ＧＭ－ＣＳＦ在治疗各组有所升高。本实验结果表明，ＩＬ－４基因转染瘤苗能有效地激活体内抗肿瘤免疫功能并具有显著的抗肿瘤转移效果，将其与低剂量ＩＬ－２和低剂量Ｃｙ联合应用时抗肿瘤转移效果更佳。     

反义IGF—I基因转染抗小鼠B16黑色素瘤的研究

利用基因治疗方法中反义ＲＮＡ技术，通过脂质体包裹反义胰岛素生长因子－Ｉ（ＩＧＦ－Ｉ）基因导入小鼠Ｂ１６黑色素瘤，与对照组相比致瘤性降低，生长缓慢，荷瘤鼠的胸腺重量增大，脾脏的生发中心细胞增殖，白髓和红髓的淋巴细胞扩增的程度很明显，体内反义ＩＧＦ－Ｉ基因治疗与ＬＡＫ细胞治疗联合应用延长荷瘤小鼠的生存期的效果胜过两者单独应用的效果，结果表明：反义ＩＧＦ－Ｉ基因具有一定的抑制小鼠Ｂ１６黑色素生长的作用和     

IL－2基因转移的瘤苗与IL－1、低剂量环磷酰胺合用后的肿瘤治疗作用及其免疫学机理

经ＩＬ－２基因转移瘤苗治疗后荷瘤小鼠肺转移结节明显减少、存活期明显延长，与ＩＬ－１或低剂量Ｃｙ合用后，可使荷瘤小鼠的肺转移结节更少，存活期更长，特别是当ＩＬ－２基因转移的瘤苗、ＩＬ－１、低剂量Ｃｙ三者合用时抗肿瘤转移效果最强。对瘤苗治疗后荷瘤小鼠体内免疫功能的研究表明，小鼠脾脏ＣＴＬ活性、ＮＫ活性、ＩＬ－２导的ＬＡＫ活性均显著增强，脾脏细胞分泌ＩＬ－２和ＴＮＦ水平也显著升高，当与ＩＬ－１、低剂量Ｃｙ合用时，上述抗肿瘤免疫功能升高得更加明显，可见ＩＬ－２基因转移的瘤苗能通过有效地激活体内抗肿瘤免疫功能而具有显著的抗肿瘤转移效果，将其与ＩＬ－１或低剂量Ｃｙ联合应用时抗肿瘤效果更佳，当三者同时合用时抗肿瘤效果最佳。     

TNF-α基因和IL-2基因共转染的肿瘤细胞体内致瘤性和瘤苗效果的观察

为了探讨两种具有协同作用的细胞因子共转染的瘤苗是否具有更好的抗肿瘤作用，我们将ＴＮＦ－α基因和ＩＬ－２基因转染Ｂ１６黑色素瘤细胞，获得同时分泌ＩＬ－２和ＴＮＦ的Ｂ１６细胞克隆株（命名为Ｂ１６－ＩＬ－２＋－ＴＮＦ－α＋细胞），并观察了其体内致瘤性和瘤苗效果。结果发现，Ｂ１６－ＩＬ－２＋－ＴＮＦ－α＋细胞的体内致瘤性显著低于ＴＮＦ－α基因或ＩＬ－２基因单独转染的Ｂ１６细胞；而且，事先接种Ｂ１６－ＩＬ－２＋－ＴＮＦ－α＋细胞的小鼠能抵抗再接种的野生型肿瘤细胞的生长，表明其具有更佳的瘤苗效果。     

肿瘤抗原触发M-CSF和IFN-γ联合基因转染的巨噬细胞抗肿瘤转移作用的研究

目的本研究探讨了肿瘤抗原触发的Ｍ－ＣＳＦ和ＩＦＮ－γ基因联合转染的巨噬细胞对黑色素瘤实验性肺转移的治疗作用及其免疫机理。方法将联合基因转染的巨噬细胞经尾静脉回输治疗黑色素瘤实验性肺转移小鼠，经治疗后于荷瘤后第１７天处死小鼠，计数荷瘤小鼠的肺部转移结节数并观察其长期存活期，用５１Ｃｒ４小时释放法检测体外诱导的ＣＴＬ活性，采用未配对计量资料的ｔ检验处理数据。结果联合基因转染后治疗组的小鼠长期存活率为１６％，加用肿瘤抗原触发后的治疗组有３３％的小鼠长期存活。小鼠脾细胞经体外诱导的ＣＴＬ对野生型Ｂ１６．Ｆ１０细胞的杀伤活性，在经肿瘤抗原触发的Ｍ－ＣＳＦ和ＩＦＮ－γ联合基因转染巨噬细胞治疗的荷瘤小鼠最高，与用未经抗原触发的联合基因转染巨噬细胞治疗组差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。结论体外经肿瘤抗原触发的Ｍ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ联合基因转染的巨噬细胞过继回输疗法是肿瘤特别是转移性肿瘤的一种有效免疫治疗手段，机体的ＣＴＬ在该疗法的抗肿瘤作用中可能发挥了重要的作用。     

IFN—γ对IL—2基因转染B16细胞治疗肿瘤的增强作用

本实验在完成ＩＬ－２基因转染瘤苗的基础上，探索了重组ＩＦＮ－γ对其效果的增强作用。结果表明，ＩＬ－２基因转染使Ｂ１６细胞成瘤性显著降低；小鼠经ＩＬ－２基因修饰的Ｂ１６细胞免疫后，对接种的亲代Ｂ１６细胞有保护作用；ＩＬ－２基因转染的Ｂ１６细胞对接种亲代Ｂ１６细胞的小鼠有一定的治疗作用，与重组ＩＦＮ－γ联合应用后，治疗作用加强。上述结果表明，佐以合适的重组细胞因子，有可能提高单基因转染瘤苗的作用，是一条值得探索的途径     

白细胞介素2基因转移的肿瘤细胞克隆的建立及其体内外生长特性的研究

为了开展ＩＬ－２基因转移后免疫原性增强的新型瘤苗抗肿瘤作用的研究，须首先获得ＩＬ－２基因转移后、能够高分泌ＩＬ－２的肿瘤细胞并确定其生长特性。本室构建了含５６３ｂｐ的小鼠ＩＬ－２全长ｃＤＮＡ的真核表达载体ＢＭＧＮｅｏ－ＩＬ－２，采用磷酸钙ＤＮＡ共沉淀法将ＢＭＧＮｅｏ－ＩＬ－２转移入Ｂ１６黑色素瘤细胞中，通过Ｇ４１８抗性筛选、有限稀释法及活性检测，获得一株高分泌ＩＬ－２（５０６Ｕ／ｍｌ）克隆，并经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法证实ＩＬ－２基因已转入该克隆中。结果表明ＩＬ－２基因转移的肿瘤细胞体外生长能力没有明显变化，但体内致瘤原性显著下降，从而为制备新型瘤苗打下了基础。     

分泌粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的重组痘苗病毒转染的瘤苗裂解物抗肿瘤作用

将小鼠粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）基因经过同源重组得到表达ＧＭ－ＣＳＦ的重组痘苗病毒，用此痘苗病毒转染小鼠黑色素瘤细胞，制备黑色素瘤瘤苗裂解物（ＧＭ－ＣＳＦＶＭＯ），Ｃ５７ＢＬ／６小鼠皮下接种Ｂ１６－Ｆ１０细胞３天后在注射部位注射瘤苗裂解物，一周后再注射一次。结果发现ＧＭ－ＣＳＦＶＭＯ能够显著地抑制荷瘤小鼠肿瘤结节的生长并明显延长荷瘤小鼠的存活期。用此瘤苗裂解物免疫小鼠两次，间隔一周，免疫一周后给Ｃ５７ＢＬ／６小鼠皮下接种Ｂ１６－Ｆ１０细胞，结果肿瘤结节出现时间明显延长，部分小鼠肿瘤不再生长。经ＧＭ－ＣＳＦＶＭＯ治疗或免疫后小鼠的外周血和脾淋巴细胞对肿瘤细胞杀伤活性明显升高，ＮＫ活性变化不明显。本结果提示，诱导机体特异性细胞免疫可能是瘤苗裂解物的抗肿瘤作用机理之一。     

腺病毒介导IFN—γ基因转染的瘤苗体内抗肿瘤转移作用

通过缺陷型腺病毒载体的介导将小鼠ＩＦＮ－γ基因转染入肿瘤细胞，经５０００ｒａｄ＾６０Ｃｏ照射后射备成瘤苗，观察其对实验性肺转移荷瘤小鼠的治疗效果，并对其治疗作用的免疫要现进行了研究。结果显示：经ＩＦＮ－γ基因转染瘤苗治疗后小鼠脾淋巴细胞诱导的ＣＴＬ，ＬＡＫ及腹腔巨噬细胞杀伤活性均明显升高。     

脂质体介导IFNγ基因治疗小鼠肝癌的研究

以大肠杆菌β－ｇａｌ基因为报告基因，优化了３种阳离子脂质本的转染条件，评估了其转染效率。用构建的含腺相关病毒反向末端重复序列的质粒表达载体，经Ｄｏｓｐｅｒ介导将小鼠ＩＦＮγ基因导入ＭＭ４５Ｔ．Ｌｉ细胞，体外有效地表达ＩＦＮγ。瘤体内注射Ｄｏｓｐｅｒ－ｐＡＩ－ｍＩＦＮγ复合物可明显报制肿瘤生长，荷瘤小鼠生存期延长。     

ENHANCED ANTITUMOR EFFECTS OF INTERLEUKIN-2 LIPOSOMES IN C57BL/6N MICE WITH B-16 MELANOMA PULMONARY METASTASES

为研究白细胞介素－２（ＩＬ－２）脂质体对小鼠Ｂ－１６黑色素瘤肺转移瘤的抑制效应和对荷瘤鼠脾淋巴细胞增殖的影响，应用改良超声－薄膜法制备ＩＬ－２脂质体；正常及免疫受抑Ｃ５７ＢＬ／６Ｎ小鼠建立Ｂ－１６黑色素瘤肺转移瘤模型，腹腔注射游离ＩＬ－２（０．２×１０４～５×１０４ｕｋｇ－１ｄ－１×１０ｄ）或脂质体包封的ＩＬ－２（０．０４×１０４～１．０×１０４ｕｋｇ－１ｄ－１×１０ｄ）。结果表明：改良超声－薄膜法制备的ＩＬ－２脂质体为直径２００～２５００ｎｍ的大单层脂质体，包封率４８．２％，具有良好的稳定性。ＩＬ－２脂质体可使荷瘤鼠肺湿重下降０．４％～１３．１％，肺转移瘤结节降低２．７％～４３．５％，脾细胞３Ｈ－ＴｄＲ掺入量增加１．０５～１．９０倍，其作用效应相当于５倍量的游离ＩＬ－２，且对免疫受抑荷瘤鼠的作用更强。提示ＩＬ－２经脂质体包封后，其抑瘤活性和促进淋巴细胞增殖的活性提高约５倍，是一种有希望应用于肿瘤生物治疗的新型制剂。     

分泌粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子的重组痘苗病…

将小鼠粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子基因经过同源重组得到表达ＣＭ－ＣＳＦ的重组痘苗病毒，用此痘苗病毒转染小鼠黑色素瘤细胞，制备黑色素瘤瘤苗裂解物，Ｃ５７ＢＬ／６小鼠皮下接种Ｂ１６－Ｆ１０细胞３天后在注射位注射瘤苗裂解物抗肿瘤一周后再注射一次。结果发现，ＧＭ－ＣＳＦＶＭＯ能够显著地抑制荷瘤小鼠肿结节的生长并明显延长荷瘤小鼠的存活期。用此瘤勒裂解物免疫小鼠两次，间隔一周，免疫一周后给Ｃ５７ＢＬ／６小鼠皮     

瘤体内注射IL－2基因后肿瘤细胞和肿瘤浸润性淋巴细胞的功能分析

将脂质体包裹的ＩＬ－２基因直接注射至Ｂ１６Ｆ１０黑色素瘤瘤体内，研究肿瘤细胞和肿瘤浸润性淋巴细胞（ＴＩＬ）的功能变化。１０ｄ后，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ鉴定显示瘤体内注射ＩＬ－２基因后肿瘤细胞及ＴＩＬ中ＩＬ－２ｍＲＮＡ表达阳性；经Ｇ４１８筛选后的肿瘤细胞培养上清中可检测出ＩＬ－２；肿瘤细胞表面表达了较高水平的ＭＨＣⅠ类抗原（Ｈ－２Ｋ￣ｂＤ￣ｂ）；ＴＩＬ表面粘附分子ＬＡＦ－１表达也明显高于对照组，其杀伤Ｂ１６细胞的活性明显增强。结果表明瘤体内注射脂质体包裹的ＩＬ－２基因后，可在肿瘤原位将基因转移至肿瘤细胞及ＴＩＬ中，提高肿瘤细胞的ＭＨＣⅠ类抗原的表达，增强肿瘤细胞的免疫原性，并通过提高ＴＩＬ粘附分子的表达，共同促进ＴＩＬ的肿瘤特异性杀伤功能。     

用IL－2为基础的疫苗激发全身保护性抗黑色素瘤免疫应答

用ＩＬ－２为基础的疫苗激发全身保护性抗黑色素瘤免疫应答〔英〕／Ｉａｔｌｏｕｋａｌｋｕｒｔ…ＪＩｍｍｕｎｏｌ。－１９９５，１５４．－３４０６～３４１９用ＩＬ－２基因转染小鼠ＭＨＣＩ＋／Ⅱ－黑色素瘤细胞Ｍ－３建立了一种小鼠肿瘤疫苗（Ｍ－３－ＩＬ－２疫苗）...     

瘤体内注射IL—2基因后肿瘤细胞和肿瘤浸润性淋巴细胞的功能分析

将脂质体包裹的ＩＬ－２基因直接注射至Ｂ１６Ｆ１０黑色素瘤瘤体内，研究肿瘤细胞和肿瘤浸润性淋巴细胞（ＴＩＬ）的功能变化。１０ｄ后，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ鉴定显示瘤体内注射ＩＬ－２基因后肿瘤细胞及ＴＩＬ中ＩＬ－２ｍＲＮＡ表达阳性；经Ｇ４１８筛选后的肿瘤细胞培养上清中可检测出ＩＬ－２；肿瘤细胞表面表达了较高水平的ＭＨＣＩ类抗原（Ｈ２Ｋ＾ｂＤ＾ｂ）；ＴＩＬ表面粘附分子ＬＡＦ－１表达也明显高于对照组，其     

重组痘苗病毒载体介导的IL-2基因局部转染对小鼠黑色素瘤的治疗作用

采用编码人ＩＬ－２基因的重组痘苗病毒载体（ｒＶＶ－ＩＬ－２），以ｉｎｖｉｖｏ模式体内局部转染小鼠黑色素瘤，结果肿瘤生长速度明显减慢，荷瘤小鼠存活期显著延长。体内免疫功能的检测表明，荷瘤小鼠脾细胞的ＮＫ活性及诱导后的ＬＡＫ、ＣＴＬ活性明显高于对照组，表明采用ｒＶＶ－ＩＬ－２载体介导ｉｎｖｉｖｏ的肿瘤基因治疗具有一定的前景。