MG132诱导HepG_2细胞凋亡及其对p53表达的影响

目的观察蛋白酶体抑制剂MG132对人肝癌细胞系HepG2的致凋亡作用及其对凋亡相关基因p53蛋白表达的影响。方法采用多个浓度(2,5,10μmol/L)的蛋白酶体抑制剂MG132处理HepG2细胞;流式细胞术和Hoechst荧光染色检测细胞凋亡;免疫细胞化学检测HepG2细胞p53蛋白含量。结果对照组HepG2细胞凋亡率低于5%,在2,5,10μmol/LMG132作用下,细胞凋亡率分别为42.9%,66.1%和72.8%,MG132诱导HepG2细胞凋亡具有剂量—效应关系。经Hoechst荧光染色可见细胞染色质浓缩等凋亡改变。免疫组织化学检测HepG2细胞p53蛋白表达水平增高。结论蛋白酶体抑制剂MG132能够诱导HepG2细胞凋亡,其作用呈剂量—效应关系;p53蛋白表达增加与MG132抑制泛素—蛋白酶体系统降解细胞内p53蛋白有关。     

美洛昔康对人肝癌HepG_2细胞增殖的抑制作用

目的:研究环氧合酶(COX)-2抑制剂美洛昔康对肝癌细胞HepG2的生长抑制作用及其作用机制。方法:MTT法观察美洛昔康在不同浓度和作用时间下对细胞增殖的抑制作用;免疫细胞化学染色检测细胞增殖核抗原(PCNA)的表达;DNA原位末端标记(TUNEL)法和流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡。结果:美洛昔康可抑制人肝癌细胞HepG2增殖;TUNEL及FCM检测结果均显示美洛昔康可诱导HepG2细胞凋亡。结论:美洛昔康可通过抑制细胞增殖和诱导凋亡2种途径抑制人肝癌细胞HepG2的生长。     

古抑菌素对人肝癌细胞作用的研究

目的:通过组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDACS)抑制剂古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)对人肝癌细胞HepG2(以下简称HepG2)和正常肝细胞LO2(以下简称LO2)增殖与凋亡作用的比较,探讨TSA对肝癌的作用机制.方法:应用光学显微镜、透射电镜、四氮唑蓝(MTT)法、免疫细胞化学法观察经不同浓度TSA处理后的HepG2和LO2的增殖、凋亡与凋亡相关蛋白的改变.结果:HepG2细胞经TSA处理后,电镜下超微结构发生了凋亡早期改变;小剂量TSA对HepG2细胞具有较强的抑制作用,对LO2细胞影响不明显,当TSA浓度达到1000 nmol/L以上时,对LO2表现出明显的细胞毒性作用;TSA可诱导HeptG2细胞凋亡,并增加凋亡相关蛋白Bax的表达.结论:TSA可明显抑制肝癌细胞HepG2的增殖,其机制可能与上调Bax的表达,诱导细胞凋亡有关.     

野苋菜提取物抗肿瘤作用及诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的分子机制

目的研究野苋菜提取物的抗肿瘤作用及诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的可能机制。方法采用Alamar blue法检测野苋菜提取物对肿瘤细胞的抑制作用;光学显微镜和Hoechst 33258荧光染色观察HepG2细胞的形态变化;流式细胞术检测该提取物对HepG2细胞凋亡的影响;Western blot和caspase-3活性检测试剂盒分析野苋菜提取物诱导HepG2细胞凋亡的作用机制;caspase-9、caspase-3抑制剂(Z-LEHDFMK和Ac-DEVD-CHO)验证相关的调控信号转导通路。结果野苋菜提取物对多种肿瘤细胞均有抑制作用,其中HepG2细胞最敏感;经提取物处理过的HepG2细胞出现明显的凋亡特征,流式细胞术进一步证实野苋菜提取物能够诱导HepG2细胞的凋亡;野苋菜提取物处理48h后的HepG2细胞中Bcl-2、survivin表达下调,Bax、PARP、Apaf-1、caspase-9表达量增加,并且caspase-3、caspase-9酶活性明显提高;caspase-9和caspase-3的抑制剂能够逆转野苋菜提取物对HepG2细胞的抑制活性。结论野苋菜提取物具有抗肿瘤作用,并且能够激活caspase-9内源性凋亡信号通路,发挥其促进HepG2细胞凋亡的作用。     

醉香含笑树皮提取物诱导HepG2细胞凋亡的作用机制

目的 探讨醉香含笑树皮提取物（extrat of barks of Michelia macclurei Dandy.,EBMMD）诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的作用及相关机理。方法 采用倒置生物显微镜、流式细胞仪、Western-blotting等技术,考察EBMMD对HepG2细胞凋亡及COX-2蛋白表达的影响。结果 流式细胞术分析可见,EBMMD能明显诱导HepG2细胞凋亡,且呈浓度依赖关系;倒置生物显微镜观察可见细胞凋亡的形态学改变;随EBMMD浓度增高,细胞内COX-2蛋白的表达逐渐减少,且当EBMMD浓度达25.00μg.mL 1时,能明显抑制COX-2蛋白表达。结论 EBMMD可以明显诱导HepG2细胞凋亡,其作用机理可能与下调细胞内COX-2蛋白表达进而诱导其凋亡有关。     

麦冬皂苷B诱导人肝癌HepG2细胞自噬的分子机制研究

目的:研究麦冬皂苷B诱导人肝癌HepG2细胞自噬的分子机制.为临床抗肿瘤治疗提供理论依据.方法:MTT比色法检测人肝癌HepG2细胞增殖;流式细胞仪检测HepG2细胞的凋亡及细胞周期变化;吖啶橙、Lyso-Tracker Red(溶酶体红色荧光探针)染色、HepG2-GFP-LC3转染细胞等检测细胞自噬;Western blotting(蛋白质印迹法)检测人肝癌HepG2细胞自噬信号通路中关键蛋白的变化.结果:人肝癌HepG2细胞的增殖被麦冬皂苷B抑制,而且麦冬皂苷B可诱导人肝癌HepG2细胞发生自噬,但不诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞,可导致LC3I转变为LC3II和Beclin-1(自噬标志性蛋白)表达增加,自噬抑制剂3-MA几乎完全逆转其抗增殖作用.Western blotting检测结果表明,AKT、mTOR和p70S6K的磷酸化及PTEN上调是被麦冬皂苷B抑制的结果.结论:麦冬皂苷B通过抑制Akt/mTOR信号通路诱导人肝癌HepG2细胞发生自噬.     

三氧化二砷对人肝癌细胞凋亡及Bcl-2、caspase-3蛋白表达的影响

目的研究三氧化二砷（arsenic trioxide,As2O3）诱导HepG2细胞凋亡及其机制。方法采用MTT法、形态学观察及流式细胞术方法检测As2O3对HepG2细胞的生长抑制、凋亡作用的影响,用Western blot检测As2O3处理后HepG2细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2和caspase-3的表达。结果As2O3对HepG2细胞有明显的抑制增殖作用,且呈浓度和时间依赖性,细胞呈典型的凋亡形态学改变,As2O3呈时间依赖性诱导HepG2细胞凋亡。As2O3处理不同时间后,Bcl-2蛋白表达水平下调,caspase-3蛋白表达水平升高。结论As2O3具有诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的作用,其机制可能与其下调Bcl-2蛋白的表达,促进caspase-3活化有关。     

苦荞内生真菌产物EE-2抑制HepG2生长及诱导其细胞凋亡

目的研究苦荞内生真菌KQH-2代谢醇提物EE-2对人肝癌细胞的抑制作用及其作用机制。方法采用MTT法考察EE-2对人肝癌细胞HepG2体外增殖的抑制作用,显微镜观察EE-2对HepG2细胞形态的影响,琼脂糖凝胶电泳检测细胞DNA完整性,并利用流式细胞仪检测HepG2细胞凋亡及细胞周期变化情况。结果用EE-2处理过的HepG2细胞,显微镜观察可见细胞脱壁圆缩,出现凋亡小体;细胞核降解。流式细胞仪检测发现,处理组的DNA直方图上有比对照组加强的SubG1峰,且可将HepG2细胞阻滞于G0/G1期。结论苦荞内生真菌KQH-2代谢醇提物EE-2可诱导人肝癌HepG2细胞的凋亡,且具有细胞周期阻滞作用。     

马钱子碱经JNK-Fas途径诱导人肝癌HepG2细胞的凋亡

目的探讨马钱子碱诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的机制。方法通过CCK-8法检测马钱子碱对HepG2细胞的生长抑制作用,应用流式细胞术检测马钱子碱对HepG2细胞凋亡的影响以及Ca^(2+)的含量、激光共聚焦法观察Ca^(2+)的形态学分布情况、实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测基因的表达情况。结果马钱子碱可以有效抑制人肝癌HepG2细胞的生长,在一定范围内,随着时间的推移和浓度的增加,抑制率和凋亡率明显增加。马钱子碱作用于HepG2细胞后引起MKK7、JNK、Fas、FADD基因的变化,并最终引起Ca^(2+)的释放导致细胞溶解。结论马钱子碱对HepG2细胞有抑制生长的作用,并能诱导HepG2细胞发生凋亡。此过程通过JNKFas通路作用,最终引起细胞内Ca^(2+)的变化,诱导细胞发生凋亡。     

拓扑异构酶Ⅱ抑制剂GL331对HepG2细胞体外生长的抑制作用

目的:研究拓扑异构酶Ⅱ抑制剂GL331体外对人肝癌HepG2细胞的生长抑制作用及其机制。方法:采用MTT法测定GL331对人肝癌HepG2细胞存活率的影响;克隆原形成法检测对细胞集落形成的影响;DAPI染色观察细胞形态学变化;流式细胞术检测细胞凋亡百分率的变化;蛋白免疫印迹技术观察Bax,Bcl-2,Fas,FasL,Akt/p-Akt,caspase-3,clea-caspase等相关蛋白水平变化;caspase-3酶活性检测试剂盒检测对蛋白酶caspase-3活性的影响。结果:GL331可以浓度和时间依赖性地抑制HepG2细胞的增殖,同时促进HepG2细胞凋亡,提高Bax/Bcl-2比率,增加FasL的表达,降低p-Akt的表达。结论:GL331对HepG2细胞的增殖有明显的抑制作用,其作用机制与诱导HepG2细胞发生凋亡,调节凋亡相关蛋白的表达,并抑制存活通路相关蛋白的活化有关。     

选择性COX-2抑制剂NS-398对人胃腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究环氧化酶2(COX-2)抑制剂NS-398对胃癌培养细胞系BGC-823增殖及凋亡的影响.方法 应用MTT法检测NS-398对胃癌细胞BGC-823细胞增殖的影响;应用流式细胞术、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测NS-398对胃癌细胞BGC-823细胞凋亡的影响.结果 NS-398随剂量的增加及作用时间延长对胃癌细胞呈抑制作用;体外NS-398能减少BGC-823细胞株COX-2的表达,对BGC-823有细胞毒作用,可增加细胞凋亡率.结论 NS-398可抑制胃癌BGC-823细胞的增殖,促进胃癌BGC-823细胞的凋亡.其可能机制是与抑制COX-2表达有关.     

环氧合酶-2抑制剂的对接(Dock)研究

环氧合酶－２具有多种结构类型的抑制剂，比较分子力场分析难以建立它们的定量构效关系。根据自由能原理，抑制剂结合酶的自由能变与活性呈线性关系，本文选择了１２个典型结构的环氧合酶－２抑制剂进行对接，通过分析结合能与活性的相关性，得到了较好的构效模型，相关系数ｒ＝０．８５７，在建立构效模型的同时，通过图形学分析，揭示了这些抑制具有较高活性的原因。     

半胱氨酸酶3和Bcl-2在三氧化二砷诱导Namalwa细胞凋亡过程中的表达及意义

目的:了解半胱氨酸酶3(Caspase 3)和Bcl-2在三氧化二砷(As2O3)诱导Burkitt’s淋巴瘤细胞系Namalwa凋亡效应中的作用。方法:琼脂糖凝胶电泳法和Annexin V/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡。应用Caspase 3抑制剂DEVD-CHO和As2O3共同处理细胞,检测Caspase 3和Bcl-2蛋白表达水平的变化。结果:As2O3使Namalwa细胞Caspase 3表达增加,Bcl-2蛋白表达降低。DEVD-CHO能抑制细胞凋亡,但不影响As2O3诱导Bcl-2蛋白表达水平降低的效应。结论:Caspase 3激活可能是As2O3诱导Namalwa细胞凋亡的机制之一。     

Dexmedetomidine‐induced contraction involves c‐Jun NH2‐terminal kinase phosphorylation through activation of the 5‐lipoxygenase pathway in the isolated endothelium‐denuded rat aorta

Vasoconstriction induced by dexmedetomidine, a highly selective alpha‐2 adrenoceptor agonist, mainly involves c‐Jun NH₂‐terminal kinase (JNK) phosphorylation in the isolated endothelium‐denuded aorta. We carried out an in vitro study to determine the main arachidonic acid metabolic pathway that is involved in dexmedetomidine‐induced JNK activation. Cumulative dexmedetomidine concentration‐contractile response curves were generated in the endothelium‐denuded rat aorta in the presence or absence of the following inhibitors: the JNK inhibitor SP600125, the phospholipase A₂ inhibitor quinacrine dihydrochloride, the non‐specific lipoxygenase (LOX) inhibitor nordihydroguaiaretic acid, the 5‐LOX inhibitor AA‐861, the dual 5‐LOX and cyclooxygenase (COX) inhibitor phenidone, the non‐specific COX inhibitor indomethacin, the cytochrome p450 epoxygenase inhibitor fluconazole, the COX‐1 inhibitor SC‐560, and the COX‐2 inhibitor NS‐398. The effect of the alpha‐2 adrenoceptor inhibitor rauwolscine and other inhibitors, such as quinacrine dihydrochloride, nordihydroguaiaretic acid, AA‐861, phenidone, indomethacin and the protein kinase C inhibitor GF 109203X, on dexmedetomidine‐induced JNK phosphorylation was investigated in rat aortic vascular smooth muscle cells with western blotting. The effect of dexmedetomidine on 5‐LOX and COX‐2 expression was investigated in vascular smooth muscle cells. SP600125, quinacrine dihydrochloride, nordihydroguaiaretic acid, AA‐861, phenidone, rauwolscine and chelerythrine attenuated dexmedetomidine‐induced contraction. Indomethacin slightly attenuated dexmedetomidine‐induced contraction. Fluconazole and SC‐560 had no effect on dexmedetomidine‐induced contraction, whereas NS‐398 attenuated contraction. SP600125, rauwolscine, quinacrine dihydrochloride, nordihydroguaiaretic acid, AA‐861, phenidone and GF 109203X attenuated dexmedetomidine‐induced JNK phosphorylation. 5‐LOX and COX‐2 were upregulated by dexmedetomidine. Thus, dexmedetomidine‐induced alpha‐2 adrenoceptor‐mediated contraction is mediated mainly by 5‐LOX and partially by COX‐2, which leads to JNK phosphorylation.     

环氧化酶-2在大鼠缺血再灌注脑损伤组织中的表达及与凋亡的关系

目的探讨环氧化酶-2（COX-2）在大鼠缺血再灌注脑（I/R）损伤组织中与凋亡的关系。方法大鼠I/R模型为研究对象,免疫组化和免疫印迹测定COX-2表达,TUNEL法测定神经元凋亡。结果 I/R后COX-2表达出现不同程度的增强,在24h达高峰,同假手术组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;I/R后神经元凋亡明显,在24h达高峰,同假手术组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;I/R前加入NS398,与I/R组比较,COX-2下降的同时（P〈0.05）,发现神经元凋亡有不同程度的降低（P〈0.05）。结论 COX-2在大鼠I/R脑损伤组织中参与神经元凋亡。     

选择性COX-2抑制剂NS-398诱导白血病细胞凋亡的作用机制

目的探讨选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398诱导白血病细胞系K562细胞凋亡的分子机制。方法采用流式细胞术检测细胞凋亡;采用蛋白印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白Bcl-2、半胱氨酸酶-3(Caspase-3)的表达;并应用流式细胞术检测Caspase-3的活性。结果①NS-398作用K562细胞24h后,对照组未出现凋亡峰,各药物处理组(100~400μmol·L-1)均出现明显的凋亡峰,其凋亡率分别为(10.51±1.04)%、(27.79±2.40)%、(45.72±3.32)%和(60.22±2.03)%(P<0.01)。②不同浓度NS-398处理后,K562细胞中Bcl-2蛋白表达下降,而Caspase-3蛋白表达增加,与对照组相比差异具有显著性(P<0.05)。③NS-398能以剂量依赖方式促进Caspase-3活性的增加,表达活化Caspase-3的细胞百分率分别为(2.67±0.22)%、(9.53±0.15)%、(21.28±0.43)%、(39.63±0.8)%和(63.40±0.69)%(P<0.01)。结论选择性COX-2抑制剂NS-398可能通过调节Bcl-2蛋白表达、活化Caspase-3,从而诱导白血病K562细胞凋亡。     

Extraendothelial and constitutive COX‐2 expression is involved in the contractile effect of angiotensin II in the rat aorta

1 The role of the extraendothelial and constitutive isoforms of cyclo‐oxygenase‐2 (COX‐2) in the contractile effect of angiotensin II (Ang II) was investigated using thoracic and abdominal aortic rings without endothelium from young Wistar rats. 2 Ang II elicited similar contractions in both aortic segments, and the effect was inhibited by pretreatment with NS398 (a selective COX‐2 inhibitor) but not SC‐560 [selective cyclo‐oxygenase‐1 (COX‐1) inhibitor]. 3 COX‐2 mRNA was expressed under basal conditions in both aortic segments. Additionally, Ang II increased COX‐2 mRNA expression in the abdominal but not the thoracic segment, while cycloheximide (a protein synthesis inhibitor) did not affect the contractile response to Ang II in either of the two segments; this suggests that the effect is not associated with de novo COX‐2 synthesis. 4 In conclusion, the basal amount of COX‐2 found in aortic smooth muscle cells is sufficient to explain the production of the prostanoids related to the contractile effect of Ang II. The production of these prostanoids, which are derived from constitutive COX‐2, occurs independently of the endothelium vascular system.     

Oxidative stress and cyclooxygenase-2 induction mediate cyanide-induced apoptosis of cortical cells

Cyanide (KCN)-induced generation of reactive oxygen species (ROS) involves cyclooxygenase-2 (COX-2)-mediated reactions in some neurons. The present study examines the extent to which COX isoforms are involved in KCN-induced apoptotic cell death processes of cultured cortical cells. After treatment with KCN (10-300 microM), COX-2 was expressed in a time- and concentration-dependent manner increasing markedly over a 4-h period. However, no significant changes were observed in COX-1 levels at any cyanide concentration. Correlated with COX-2 up-regulation, KCN induced a time-dependent apoptotic death. TUNEL staining showed that the COX-2 inhibitor NS-398 (30 microM) blocked KCN-induced apoptosis, whereas the selective COX-1 inhibitor valeryl salicylate did not affect the level of apoptotic cell death. Exposure of cells to KCN (300 microM) for 24 h resulted in DNA fragmentation, which was also reduced by NS-398. Prostaglandin E(2) (PGE(2)) accumulation in cell culture supernatants was increased by KCN and NS-398 blocked PGE(2) generation. PCR studies further confirmed that COX-2 expression was increased by KCN. Antioxidants phenyl-N-test-butylnitrone, superoxide dismutase, and catalase significantly inhibited KCN-induced COX-2 up-regulation and subsequent apoptosis. N(G)-nitro-L-arginine methylester an inhibitor of nitric oxide synthase, blocked KCN-induced PGE(2) production and apoptosis, but not COX-2 expression. Increased nitric oxide levels caused by cyanide may directly activate the COX-2 enzyme. These data show that cyanide treatment of cortical cells involves increased COX-2 expression, PGE(2) accumulation, and ROS generation, resulting in apoptotic cell death.     

表没食子儿茶素-3-没食子酸酯通过ERK1/2通路对肝癌HepG2细胞凋亡、增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨表没食子儿茶素-3-没食子酸酯（EGCG）通过ERK1/2通路对肝癌HepG2细胞凋亡、增殖、迁移和侵袭的影响。方法 将体外培养的肝癌HepG2细胞分为空白组、EGCG组、EGCG+ERK抑制剂组。收集细胞裂解液,CCK-8检测细胞增殖,相差显微镜和Hoechst 33258染色观察细胞形态变化,流式细胞术检测细胞凋亡,RT-qPCR检测ERK mRNA水平,Western blotting分析ERK、磷酸化ERK、Bax和Bcl-2表达水平,并计算Bax/Bcl-2比值。结果 EGCG可以显著抑制肝癌HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭（P<0.01）,并促进HepG2细胞的凋亡（P<0.01）;加入ERK通路抑制剂可显著逆转EGCG对HepG2的作用。结论 EGCG可通过ERK1/2信号通路发挥对肝癌HepG2细胞的抑制作用。