异丙酚对大鼠前脑缺血-再灌注后海马Caspase-3表达的影响

目的 探讨异丙酚对大鼠前脑缺血-再灌注(I/R)后海马Caspase-3表达的影响及在脑保护作用中的机制.方法 42只雄性Wistar大鼠随机分为3组,每组14只.双侧颈总动脉夹闭加放血降压再回输法建立前脑I/R模型,侧脑室内注射进行异丙酚干预.对照组(C组):仅暴露双侧颈总动脉,未放血降压及夹闭双侧颈总动脉;缺血损伤组(Ⅰ组):放血法使平均动脉压降到(40±5)mm Hg时,夹闭双侧颈总动脉10 min,侧脑室内注射生理盐水(1.0 mg/kg);异丙酚干预组(P组):放血降压、夹闭双侧颈总动脉与I组相同,不同的是侧脑室内注射异丙酚(1.0 mg/kg).于再灌注24 h后断头取脑组织,半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测海马Caspase-3 mRNA表达(n=6),免疫组织化学(IH)法检测海马Caspase-3蛋白表达(n=8).结果 Ⅰ组和P组Caspase-3 mRNA表达明显高于C组(P＜0.05),但P组Caspase-3 mRNA表达明显低于Ⅰ组(P＜0.05);Ⅰ组和P组Caspase-3蛋白表达明显高于C组(P＜0.05),但P组Caspase-3蛋白表达明显低于Ⅰ组(P＜0.05).结论 异丙酚抑制大鼠前脑I/R后海马Caspase-3 mRNA和蛋白的表达,可能是其对脑缺血再灌注损伤保护作用的机制之一.     

电针预处理对脑缺血/再灌注小鼠海马mTOR表达的影响

目的探讨电针预处理对短暂性脑缺血/再灌注小鼠海马区神经元哺乳动物西罗莫司靶蛋白(m TOR)表达的影响。方法 C57/BL6健康雄性小鼠36只,2~3月龄,22~25 g,采用随机数字表法,分为三组:假手术组(S组)、脑缺血/再灌注组(I/R组)、电针百会穴预处理组(EA组)。S组:只分离双侧颈总动脉;I/R组:夹闭双侧颈总动脉(BCCAO)15 min后再灌注72 h;EA组:接受电针预处理百会穴30 min/d,连续5 d,2/15 Hz疏密波,强度1 m A,其他处理方式同I/R组。脑缺血/再灌注72 h后,对所有小鼠进行神经行为学评分,每组随机取6只行甲醛固定后制作石蜡切片,HE染色观察海马CA1区神经元形态,TUNEL法检测海马CA1区凋亡的神经元,其余取新鲜海马脑组织,Western blot法测m TOR、p-m TOR蛋白的表达。结果与S组比较,I/R组神经行为学评分(7.7±0.5)显著升高(P<0.05),凋亡细胞数[(44.7±3.1)个/高倍镜视野]增多(P<0.05),m TOR、p-m TOR蛋白水平明显升高(均P<0.05);与I/R组相比:EA组神经行为学评分(5.2±0.75)降低(P<0.05),EA组凋亡细胞数[(32.3±2.5)个/高倍镜视野]降低(P<0.05),m TOR、p-m TOR蛋白水平升高(均P<0.05)。结论电针预处理对小鼠脑缺血再灌注具有保护作用,其机制可能与激活海马区m TOR蛋白有关。     

神经生长因子预处理对沙土鼠全脑缺血/再灌注损伤脑神经细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的探讨神经生长因子(NGF)预处理对沙土鼠全脑缺血/再灌注(I/R)损伤的脑保护作用的可能机制及最佳给药时间窗。方法采用夹闭沙土鼠双侧颈总动脉造成全脑I/R损伤模型。采用NGF侧脑室注射法进行预处理。沙土鼠30只随机分为5组,每组6只:假手术组(A组)、I/R损伤组(B组)、NGF预处理12、24和48h组(C、D、E组),除A组外各组分别于脑缺血20min、再灌注72h后处死取标本。用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测沙土鼠全脑I/R损伤后脑皮质及海马CA1区凋亡神经细胞,用免疫组化法检测凋亡相关调控基因Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果与B组比较,NGF预处理各组可显著减少沙土鼠全脑I/R损伤后脑皮质及海马CA1区神经细胞凋亡数目(P均<0.05),诱导Bcl-2蛋白及抑制Bax蛋白的表达(P均<0.05),其中以NGF预处理48h时脑皮质及海马CA1区细胞凋亡指数和Bax蛋白表达的阳性细胞指数最低,Bcl-2蛋白表达的阳性细胞指数最高。结论NGF预处理能明显减轻沙土鼠全脑I/R损伤引起的神经细胞凋亡,而以NGF预处理48h对脑保护效果最好;其抑制神经细胞凋亡的机制可能是通过调节凋亡相关调控基因Bcl-2及Bax的不同表达来发挥作用。     

脑源性神经营养因子预处理对沙土鼠脑缺血-再灌注损伤的影响

目的 探讨脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)预处理对沙土鼠脑缺血-再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)后神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响.方法 蒙古种沙土鼠48只,随机分为6组,每组各8只:正常对照组(C);缺血-再灌注组(I/R),全脑缺血20 min后再灌注24 h;BDNF预处理6,12,24,48 h组(PR6,PR12,PR24,PR48),PR6,PR12,PR24,PR48各组分别于脑缺血前6,12,24,48 h经侧脑室注射BDNF(0.5 μg/只)进行预处理,缺血20 min后分别再灌注24 h.实验地点在贵阳医学院动物实验中心.采用夹闭沙土鼠双侧颈总动脉20 min后去除动脉夹使血流再通的方法制作全脑I/R损伤模型,夹闭过程中出现瞳孔散大、对光反射消失及翻正反射消失等则说明产生全脑缺血.除C组外的所有动物分别于脑缺血20 min再灌注24 h结束时断头取脑,取视交叉后1～4 mm处的额叶皮层组织制备石蜡切片,TUNEL法检测脑皮层凋亡神经细胞,免疫组化法检测Bcl-2,Bax蛋白的表达.统计分析采用方差分析法.结果 C组未检测到凋亡细胞及Bcl-2,Bax蛋白阳性表达细胞;I/R组及BDNF预处理各组沙土鼠脑皮层均可检测到凋亡细胞,且BDNF预处理各组细胞凋亡指数均明显低于I/R组,P值均为0.000;与I/R组比较,BDNF预处理各组脑皮层Bcl-2蛋白阳性细胞指数均显著增高,而Bax蛋白的阳性细胞指数均显著降低,P值均为0.000;BDNF预处理各组中以6,12 h预处理组的细胞凋亡指数及Bax蛋白阳性细胞指数较低,P值分别为0.056和0.001,而Bcl-2蛋白阳性细胞指数较高,P值为0.005.结论 不同时间窗的BDNF预处理均能不同程度的减轻脑I/R后神经细胞凋亡,有明显脑保护作用,以脑I/R损伤前6,12 h时间窗内给予BDNF预处理的脑保护效果较明显;其机制可能是通过上调Bcl-2蛋白的表达及抑制Bax蛋白的表达而实现.     

丙酮酸乙酯对大鼠全脑缺血再灌注损伤细胞凋亡及Bax、Bcl-2表达的影响

目的观察丙酮酸乙酯对大鼠全脑缺血再灌注损伤海马CA1区细胞凋亡及凋亡调控基因Bcl-2、Bax表达的影响,为进一步的研究提供依据。方法本实验采用二血管阻断加低血压法制备大鼠全脑缺血再灌注模型。SD大鼠24只,随机被分成3组,每组8只：①假手术组（F组）：只分离股动脉和双侧颈总动脉,不降压,不夹闭双侧颈总动脉;②缺血再灌注组（IR组）：股动脉放血使血压降至基础血压的50％～60％,夹闭双侧颈总动脉10min再放开;⑧丙酮酸乙酯处理组（EP组）：与IR组处理相同。EP组于恢复血流即刻腹腔注射丙酮酸乙酯40mg／kg,其余两组给予等量生理盐水,每隔6h注射一次;再灌注24h后断头取脑,用原位末端转移酶标记（TUNEL）法检测细胞凋亡指数（AI）,免疫组化法检测海马CA1区Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果IR组和EP组AI和Bel—2、Bax蛋白表达水平均明显高于F组,差异有统计学意义（P〈0．05）;与IR组比较,EP组AI显著降低、Bax蛋白表达水平显著下降以及Bcl-2蛋白表达水平显著升高,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论丙酮酸乙酯可抑制大鼠全脑缺血再灌注损伤细胞凋亡,此作用可能与其减轻氧化应激、上调Bcl-2和下调Bax表达水平有关。     

针刺预处理全脑缺血大鼠海马CA1区B细胞淋巴瘤2 mRNA的表达

目的:探讨针刺预处理对全脑缺血大鼠海马CA1区B细胞淋巴瘤2mRNA表达的影响,并与缺血预处理的效果进行比较。方法:实验于2003-10在黑龙江中医药大学神经解剖实验室进行。取120只Wistar大鼠随机分为5组,每组24只:①正常对照组:不干预。②假手术组:暴露4条血管,不造模。③脑缺血组:四动脉阻断法全脑缺血10min制作大鼠全脑缺血模型。④脑缺血预处理组:预全脑缺血3min,再灌注24h后再次全脑缺血10min。⑤针刺预处理组:术前7d给予针刺,双侧足三里、曲池穴,双侧连接全能脉冲电疗仪,频率为1Hz,电压为2V,30min/次,针刺百会30min/次,1次/d,7d后全脑缺血10min。每组分别于再灌注12,24,48和72h麻醉状态下取材,免疫组织化学法检测海马CA1区B细胞淋巴瘤2蛋白阳性细胞数,原位分子杂交技术检测大鼠海马CA1区B细胞淋巴瘤2mRNA表达。结果:经补充后120只大鼠进入结果分析。①脑海马B细胞淋巴瘤2蛋白阳性细胞数:正常对照组和假手术组无;脑缺血组少量表达,再灌注48h为高峰,脑缺血预处理组和针刺预处理组24h、48h、72h均显著高于脑缺血组[(33.65±9.57),(34.56±12.64),(17.89±5.96)个/mm2;(39.14±9.11),(38.69±10.54),(23.35±7.68)个/mm2;(40.65±10.53),(38.99±9.34),(15.87±4.67)个/mm2;P<0.05],但两组间无差异(P>0.05)。②脑海马B细胞淋巴瘤2mRNA阳性细胞数:正常对照组和假手术组无;脑缺血组少量表达,再灌注72h为高峰,而脑缺血预处理组和针刺预处理组24h、48h、72h均显著高于脑缺血组[(42.64±9.57),(44.66±11.61),(20.8±5.97);(45.14±8.12),(46.68±11.54),(27.39±6.55);(50.65±10.53),(52.19±9.33),(20.87±6.67);P<0.05],但两组间无差异(P>0.05)。结论:针刺预处理可能通过上调B细胞淋巴瘤2mRNA和蛋白表达而减轻严重缺血后细胞凋亡并促成脑缺血耐受的产生。     

阿魏酸钠对缺血预处理后大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

背景:缺血性脑损伤后,如何减少神经细胞的死亡促进神经功能的恢复?脑缺血预处理在一定程度上可减轻再次缺血导致的缺血性脑损伤。阿魏酸钠亦被证实能减少脑缺血后的神经元凋亡的发生。而阿魏酸钠是否能增强脑缺血预处理的神经保护作用?目的:探讨阿魏酸钠联合缺血预处理对脑缺血再灌注损伤的保护作用。设计:随机对照动物实验。单位:江西医学院第二附属医院神经外科,江西医学院生理教研室,江西医学院泌尿外科研究所。材料:实验于2001-05/2002-04在江西医学院第二附属医院神经外科实验室完成。雄性Wistar大鼠85只,体质量250～300g。方法:大鼠随机分为四组:①非缺血对照组(10只):仅结扎双侧椎动脉而不夹闭双侧颈总动脉。②缺血对照组(25只):结扎双侧椎动脉48h,夹闭颈总动脉10min。③缺血预处理组(25只):结扎双侧椎动脉48h,夹闭颈总动脉2min后24h再次夹闭颈总动脉10min。④阿魏酸钠联合缺血预处理组(25只):缺血预处理后,再次夹闭颈总动脉前30min,尾静脉注射阿魏酸钠(200mg/kg)。非缺血对照组分为再灌注后2,7d二个亚组(各5只);缺血对照组、缺血预处理组及阿魏酸钠联合缺血预处理组又分为再灌注后6,12,24h,2,7d五个亚组(各5只)。各组在相应时点将大鼠断头取脑,于视交叉后2.2mm切取冠状脑片,观察阿魏酸钠联合缺血预处理在脑缺血再灌注时对皮层和海马CA1区神经元数及凋亡细胞数的影响。主要观察指标:皮层和海马CA1区神经元数及凋亡细胞数。结果:实验大鼠85只均进入结果分析。①大脑皮层及海马CA1神经元计数:缺血7d时,缺血预处理组和阿魏酸钠 缺血预处理组高于缺血对照组(268±8.5,244±12.5,135±5.6,P<0.01)。②大脑皮层及海马CA1区TUNEL阳性细胞计数:阿魏酸钠 缺血预处理组低于缺血预处理组和缺血对照组(12h:1.2±0.8,15.5±2.1,39.8±3.9;24h:1.8±1.6,39.3±11.8,191.3±19.1;2d:2.8±1.2,68.3±13.6,328.4±24.0,P<0.01);缺血预处理组低于缺血对照组(P<0.01)。结论:缺血预处理可减少缺血区神经元凋亡细胞数,阿魏酸钠联合缺血预处理可以进一步加强此效应,对脑缺血再灌注损伤起保护作用。     

p38MAPK信号通路在肢体缺血预处理脑保护中的作用

目的应用大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型研究无创性远端肢体缺血预处理(RLIP)对大鼠脑缺血再灌注损伤的作用,探讨RLIP是否通过降低p38MAPK信号通路的活性抑制神经细胞凋亡发挥脑保护的作用。方法 36只健康雄性SD大鼠,体重200~250 g,随机分成3组(n=12):假手术组(sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、无创远端肢体缺血预处理组(RLIP组)。(1)Sham组:分离右侧的颈总动脉、颈内动脉、颈外动脉,但不阻断血流。(2)I/R组:参照Longa的线栓法制作大脑中动脉缺血再灌注(MCAO)模型,阻断大鼠右侧大脑中动脉2 h后再灌注24 h。(3)RLIP组:在大鼠右后肢根部用改良的自制血压袖带施行远端缺血预处理,缺血5 min,再灌注5 min,共3个循环,RLIP后即刻行大鼠右侧大脑中动脉阻塞再灌注,步骤同前。三组大鼠均再灌注24 h后行神经功能缺陷评分(NDS);用TTC法测定脑梗死容积;HE染色观察海马CA1区椎体细胞的形态;免疫组织化学法测定海马CA1区P-p38MAPK蛋白、Caspase8蛋白及Caspase3蛋白的表达。结果 (1)神经功能缺陷评分:sham组无神经功能缺陷;RLIP组比I/R组评分降低,但两组24 h NDS评分中位数相同。(2)TTC染色:sham组无梗死体积,与I/R组相比,RLIP组脑梗死体积显著减小,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)HE染色:sham组海马CA1区椎体细胞形态正常,排列整齐、致密,为2~3层,细胞核圆而大,染色呈浅蓝色。I/R组椎体细胞数明显减少,细胞体积缩小,细胞核碎裂、溶解、染色加深,间质水肿明显。与I/R组比较,RLIP组海马CA1区椎体细胞层次较清楚,数目多且细胞形态较完整,间质水肿较轻。(4)免疫组织化学结果:与I/R组比较,RLIP组P-p38MAPK蛋白、Caspase8蛋白和Caspase3蛋白表达显著减少(P<0.05),但两组蛋白的表达均明显高于sham组(P<0.05)。结论无创性RLIP对大鼠脑缺血再灌注损伤有保护作用,其机制可能与降低p38MAPK信号通路活性,减少Caspase8蛋白和Caspase3蛋白表达抑制神经细胞凋亡有关。     

左旋精氨酸对急性心肌缺血/再灌注损伤大鼠内皮素-1的影响

目的 探讨内皮素-1(ET-1)在大鼠心肌缺血/再灌注(I/R)损伤过程中的变化规律及左旋精氨酸(L-Arg)的影响.方法 采用结扎冠状动脉前降支0.5h复制Wistar大鼠心肌I/R损伤模型.110只大鼠按随机数字表法分为假手术组(C)、缺血0.5h组(I)、缺血0.5h+再灌注0.5h组(R0.5)、缺血0.5h+再灌注1h组(R1)、缺血0.5h+再灌注2h组(R2)、L-Arg+假手术组(L+C)、L-Arg+缺血0.5h组(L+I)、L-Arg+缺血0.5h+再灌注0.5h组(L+R0.5)、L-Arg+缺血0.5h+再灌注1h组(L+R1)、L-Arg+缺血0.5h+再灌注2h组(L+R2).用酶联免疫吸附法测定各组大鼠血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)活性;用放射免疫法测量血清ET-1水平;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测各组心肌组织中ET-1 mRNA和蛋白表达.结果 Ⅰ组和R组血清CK、LDH、ET-1均较C组明显升高,且R组较Ⅰ组升高明显.R组ET-1 mRNA和蛋白表达均较C组明显升高,以R2组最为显著(ET-1mRNA:0.775±0.029比0.310±0.076;ET-1蛋白:0.773±0.055比0.340±0.099,均P＜0.05);而静脉给予L-Arg预处理可明显降低ET-1 mRNA和蛋白表达(ET-1 mRNA:0.340±0.049比0.775±0.029;ET-1蛋白:0.390±0.094比0.773±0.055,均P＜0.05).结论 在心肌I/R损伤的某些阶段可试用L-Arg进行干预,降低ET-1的表达.     

磷酸肌酸钠对大鼠脑缺血-再灌注损伤的保护效应及机制

目的 观察外源性磷酸肌酸钠(Phosphocreatine,PCr)对大鼠脑缺血-再灌注损伤的保护作用及其作用机制.方法 Wistar雄性大鼠36只,随机(随机数字法)分为三组(n=12):假手术组(Sham组)、缺血-再灌注组(I/R组)、PCr预处理组(PCr组).采用Pulsinelli四血管法建立大鼠脑缺血-再灌注损伤模型,I/R组电凝双侧椎动脉,暴露并夹闭双侧颈总动脉,10 min后开放;PCr组在双侧颈总动脉夹闭前60 min尾静脉缓慢注射PCr 150 mg·kg-1,I/R组夹闭前60 min输注等容量生理盐水;Sham组仅穿线不夹闭.再灌注48 h后处死大鼠,TUNEL法检测大脑皮质区细胞凋亡,计算凋亡指数;测定大脑皮质区钙调蛋白(calmodulin,CaM)的活性和丙二醛(malondiadehyde,MDA)含量变化;光镜下观察大脑皮质区病理形态学变化.结果 与Sham组比较,PCr组和I/R组皮质区病理损伤明显,凋亡细胞增多,CaM活性显著增强,MDA含量明显升高(P＜0.01);与I/R组比较,PCr组皮质区病理损伤明显减轻,凋亡细胞数减少,CaM活性及MDA含量显著降低(P＜0.01).结论 PCr预处理能显著减轻脑缺血-再灌注损伤,减少皮质区神经元凋亡,其机制可能与它减轻钙平衡紊乱和氧自由基代谢异常有关.     

甲状腺激素减少对大鼠肾脏解耦联蛋白-2表达的影响

目的 观察甲状腺激素减少时肾脏线粒体解耦联蛋白-2(UCP2)表达的改变,探讨甲状腺激素减少时肾脏损伤的发生机制. 方法 按随机数字表法将Wistar大鼠分为对照组和甲状腺激素减少组(甲减组),每组10只.采用低碘饮食复制甲状腺功能减退大鼠模型,对照组摄碘量10.00 μg/d,甲减组1.24 μg/d,两组均适应喂养1周,条件饲养3个月后取血测定甲状腺功能指标,取肾脏组织,用免疫组化法及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定UCP2的蛋白及mRNA表达. 结果 与对照组比较,甲减组促甲状腺激素(TSH,mU/L)明显上升(4.88±1.37比1.65±0.33,P<0.05),三碘甲状腺原氨酸总量(TT3)、甲状腺素总量(TT4)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)均明显下降[TT3(nmol/L):0.54±0.07比0.98±0.17;TT4(nmol/L):7.82±2.18比48.78±3.65;FT3(pmol/L):2.28±0.22比2.99±0.10;FT4(pmol/L):11.38±1.74比29.27±0.95,均P<0.01].免疫组化显示,甲减组UCP2蛋白在肾小球和肾小管中的表达均低于对照组(肾小球:0.17±0.02比0.24±0.04,肾小管:0.19±0.02比0.25±0.02,均P<0.01).RT-PCR显示,甲减组UCP2 mRNA表达明显低于对照组(0.70±0.19比1.30±0.09,P<0.01). 结论 甲状腺激素减少时肾脏中UCP2表达下调,提示可能会有损伤肾脏,其机制与肾脏线粒体UCP2表达下调有关.     

雌二醇对骨形态发生蛋白受体表达的影响

目的研究骨髓基质细胞向成骨细胞分化过程中,雌二醇对其骨形态发生蛋白受体 (BMPR)Ⅰ A,Ⅰ B mRNA表达的影响,探讨雌二醇对成骨细胞生成的作用,试阐明绝经后高转换骨代谢始动环节的可能机制. 方法SD大鼠骨髓基质细胞在生长培养基中传代培养后,用 1,25(OH)2D3和地塞米松( DEX)诱导骨髓基质细胞向成骨细胞分化, 17β-雌二醇( E2)处理培养细胞,观察 E2对骨髓基质细胞分化过程中骨形态发生蛋白受体Ⅰ A、Ⅰ B mRNA、碱性磷酸酶 (ALP)活性和Ⅰ型胶原合成的影响,β- actin作内对照半定量 RT- PCR分析骨形态发生蛋白受体Ⅰ A,Ⅰ B mRNA的表达,以α-磷酸奈酚为底物,测定细胞碱性磷酸酶的活性, Van Gieson染色法显示Ⅰ型胶原的含量. 结果E2能明显抑制骨髓基质细胞分化过程中 BMPR-Ⅰ A mRNA的表达,且呈剂量依赖性,随 E2浓度增加( 0～ 1× 103 nmol/L) BMPR-Ⅰ A mRNA从 (27.0± 3.4)%降至 (17.0± 1.8)% ( t=5.2,P< 0.01)和 (9.3± 1.6)% (t=9.2,P< 0.01); BMPR-Ⅰ B mRNA随 E2浓度增加而增加,从 (2.0± 0.8)%增至 (4.8± 1.5)% ( t=3.3,P< 0.05)和 (17.2± 2.2)% (t=13,P< 0.01). Northern blot 结果显示在上述 E2浓度时 BMPR-Ⅰ A mRNA的表达从 4.21± 0.36降至 1.24± 0.10( t=18.2,P< 0.01); BMPR-Ⅰ B mRNA的表达从 1.72± 0.11增至 3.73± 0.31( t=12.2,P< 0.01). ALP活性随 E2浓度增加而降低,从 (42.6± 2.5)U/g蛋白降至 (17.9± 2.0)U/g蛋白 ( t=15,P< 0.01) ,(10.8± 1.5)U/g蛋白( t=22,P< 0.01)和 (3.6± 0.7)U/g蛋白( t=30,P< 0.01);细胞Ⅰ型胶原的含量随 E2浓度增加而减少, Van Gieson染色由鲜红、淡红到黄色,红色越深,表明胶原越多. 结论E2能明显抑制骨髓基质细胞分化过程中 BMPR-Ⅰ A mRNA的表达,降低 ALP的活性和Ⅰ型胶原含量,增加 BMPR-Ⅰ B mRNA的表达).     

氟桂嗪对沙鼠脑缺血后脑内转化生长因子βⅠ型和Ⅱ型受体基因表达的影响

背景氟桂嗪和转化生长因子β(TGF-β)都具有抗脑缺血损伤作用,但两者之间是否存在某种联系,目前还不明确.目的通过研究氟桂嗪对沙鼠脑缺血再灌注后脑内转化生长因子Ⅰ型,Ⅱ型受体(TβRⅠ,Ⅱ)基因表达的影响,探讨氟桂嗪与TGFβ信号转导途径在抗脑缺血损伤方面的联系.设计随机对照的实验研究.地点和对象实验在中南大学湘雅二医院中心实验室完成.健康雄性蒙古沙鼠60只,9月龄,体质量(90±5)g,随机分为脑缺血组、氟桂嗪治疗组、假手术组、正常对照组,其中脑缺血组、氟桂嗪治疗组各有缺血再灌6 h,1,3,7 d组,共计10组,每组6只.干预夹闭双侧颈总动脉法制作沙鼠脑缺血再灌注模型,氟桂嗪治疗组实验前1 d给沙鼠喂食氟桂嗪[按20 mg/(kg·d)].采用原位杂交检测TβRⅠ,Ⅱ基因表达情况,用苏木精-伊红染色方法观察脑组织病理变化.主要观察指标脑组织病理变化,及脑内TβRⅠ,Ⅱ mRNAs的表达.结果氟桂嗪治疗组在再灌注各个时间点脑组织损伤程度均明显轻于脑缺血组.各组沙鼠脑组织的神经元和胶质细胞胞浆均有TβRⅠ,ⅡmRNAs阳性表达.棕褐色颗粒主要位于神经元和胶质细胞胞浆中,但表达程度有所不同.假手术组的TβRⅠ,Ⅱ mRNAs的表达较正常对照组稍高但无明显差异(P＞0.05).氟桂嗪治疗组中缺血再灌注6 h,1 d,3 dTβRⅠ,ⅡmRNAs表达较脑缺血组稍高,但无明显差异(P＞0.05),7 d时同脑缺血组相比TβRⅠ mRNAs的表达下降[每1 000个细胞中可见阳性细胞数为(78.87±1.48)个比(85.23±1.71)个](P＜0.01),而TβRⅡ mRNAs表达增高[每1 000个细胞中可见阳性细胞数为(75.40±2.19)个比(49.28±2.32)个](P＜0.01).结论氟桂嗪能抑制缺血再灌注后TβRⅠmRNAs的过度表达,避免TβRⅠ和Ⅱ mRNAs表达比例失调,可能有利于TGF-β的信号传递,有利于抵御脑缺血再灌注造成的脑细胞延迟性损伤.     

降钙素基因相关肽神经保护作用的机制研究

目的观察全脑缺血再灌注时脑组织抗凋亡基因bcl－2蛋白表达及降钙素基因相关肽(CGRP)对bcl－2蛋白表达的影响。方法应用颈动脉负压分流法制备大鼠全脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学法检测全脑缺血30min再灌注3h、6h以及经颈动脉注射(CGRP)后再灌注3h、6h大脑皮层和海马区bcl－2蛋白的表达。结果大鼠全脑缺血30min再灌注3h、6h大脑皮质及海马bcl－2蛋白表达明显增加,应用CGRP再灌注3h、6h大脑皮质及海马区bcl－2蛋白表达进一步增加。结论bcl－2基因在缺血性脑损伤中起保护作用,CGRP的神经保护作用可能与其上调bcl－2蛋白表达有关。     

丙酮酸乙酯对肾缺血/再灌注损伤小鼠炎症因子及丝裂素活化蛋白激酶表达的影响

目的 观察丙酮酸乙酯(EP)对小鼠缺血/再灌注(I/R)损伤肾脏的保护作用,研究其对肾组织中炎症因子及丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)信号通路相关蛋白表达的影响. 方法 将50只雄性BABL/c小鼠按随机数字表法分为假手术组(n=8)、模型组(n=10)和EP治疗组(n=32);EP治疗组再分为EP预处理组和EP 4、6、12 h处理组,每组8只,分别于制模前30 min及制模后4、6、12 h腹腔注射EP 40 mg/kg.采用夹闭双肾动脉30 min制备肾I/R损伤模型.于I/R 24 h取肾组织,采用实时聚合酶链反应(PCR)检测白细胞介素(IL-1β、IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的mRNA表达;采用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测MAPK信号转导通路中细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、c-Jun氨基末端蛋白激酶(JNK)、p38MAPK等的蛋白表达. 结果 实时PCR结果显示,与假手术组比较,模型组小鼠肾组织IL-1β、IL-6、TNF-α、ICAM-1及HMGB1的mRNA表达均显著增高(IL-1β:12.05±8.08比3.18±1.13;IL-6:10.26±6.85比0.81±0.34;TNF-α:5.83±3.85比0.67±0.34;ICAM-1:3.87±2.02比0.29±0.13;HMGB1:652.82±78.50比112.31±32.50,均P＜0.05);而EP各处理组能显著抑制上述炎症因子的表达,尤其以12 h处理组最为显著,分别为0.45±0.26、 0.66±0.13、 0.21±0.11、 0.05±0.02、 212.26±3.20(均P＜0.05).Western blotting结果显示,与假手术组比较,模型组小鼠肾组织磷酸化的ERK1/2、JNK、p38MAPK蛋白表达均显著升高(p-ERK1/2:1.13±0.38比0.48±0.34;p-JNK:1.40±0.15比0.36±0.15;p-p38MAPK:0.47±0.15比0.21±0.17,均P＜0.05);与模型组比较,EP各处理组在不同时间点均能显著抑制ERK1/2、JNK、p38MAPK的活化(均P＜0.05). 结论 EP能有效防治小鼠I/R肾脏损伤,可能与其调控炎症相关因子及MAPK信号转导的表达有关.     

电针对脑缺血再灌注大鼠海马 Fos蛋白的影响

目的:探讨脑缺血再灌注后电针对大鼠海马Fos蛋白表达的影响。方法:SD大鼠18只,体质量250～280g,雌雄不限。动物随机分为3组,对照组、模型组和治疗组。采用夹闭大鼠双侧颈总动脉造成的脑缺血再灌注损伤模型,电针百会、风池、大钟及足三里穴,频率2～20Hz,强度2.0A,持续30min,4h后观察海马Fos蛋白的表达。结果:电针能明显加强脑缺血再灌注后海马各区Fos蛋白的表达。治疗组与模型组相比海马各区阳性细胞数显著增加,CA1区(236±26,126±19,P<0.05);CA3(328±80,212±55,P<0.05);CA4(594±104,381±92,P<0.01);DG(621±111,341±89,P<0.01)。结论:缺血再灌注可诱导海马Fos蛋白的显著表达,电针可增强Fos蛋白的表达。     

急性脑梗死患者血清CCR5 和miR-211-5p 表达水平及其临床意义

目的 探究急性脑梗死（acute cerebral infarction）患者血清CC 趋化因子细胞受体5（chemokine C-C motifreceptor type 5,CCR5）和微小核糖核酸（microRNA,miR）-211-5p 表达水平及其临床意义。方法 选取2019 年2 月~2021 年2 月石家庄平安医院收治的130 例急性脑梗死患者（观察组）,另选同期130 例健康体检者作为对照（对照组）。实时荧光定量PCR 检测血清中CCR5 信使RNA（messengerRNA,mRNA）和miR-211-5p 相对表达水平;酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）法检测血清中CCR5 水平;Pearson 法分析CCR5 mRNA和miR-211-5p 表达水平与美国国立卫生研究院卒中量表（the National Institutes of Health Stroke Scale,NIHSS）评分相关性;分析CCR5 mRNA 和miR-211-5p 表达水平与急性脑梗死患者临床病理特征关系;受试者工作特征（receiveroperating characteristic,ROC）曲线分析CCR5 mRNA 和miR-211-5p 表达水平对急性脑梗死的诊断价值;Kaplan-Meier生存曲线分析CCR5 mRNA 和miR-211-5p 表达水平与急性脑梗死预后生存的关系。结果 与对照组相比,观察组患者血清中CCR5 mRNA 表达（1.49±0.29 vs 1.03±0.24）和蛋白含量水平（290.96±10.35ng/ml vs 152.37±8.97ng/ml）显著增高,miR-211-5p 相对表达水平（0.59±0.18 vs 0.96±0.22）显著降低,差异均有统计学意义（t=13.933,115.374,14.841,均P ＜ 0.001） ;轻度组、中度组、重度组CCR5 mRNA（1.26±0.21,1.58±0.22,1.77±0.24）和蛋白含量水平（257.34±7.26ng/ml,289.31±9.36ng/ml,357.31±8.12ng/ml）依次增加,miR-211-5p 相对表达水平（0.74±0.17,0.61±0.1,0.28±0.18）依次降低,差异均有统计学意义（F=57.145,1 396.953,73.759,均P ＜ 0.001）。急性脑梗死患者CCR5 mRNA 表达水平与miR-211-5p 表达水平呈负相关性（r=-0.341,P<0.001）,与NIHSS 评分呈正相关性（r=0.315,P<0.001）;miR-211-5p 表达水平与NIHSS 评分具有显著的负相关性（r=-0.475,P<0.001）。CCR5 mRNA和miR-211-5p 表达水平与急性脑梗死患者脑梗死体积、OCSP 分型及血脂异常有关（P ＜ 0.05）,与性别、梗死部位无关（P>0.05）。CCR5 mRNA 和miR-211-5p 诊断急性脑梗死的曲线下面积为0.834,0.868,二者联合诊断的曲线下面积为0.921。CCR5 mRNA 高表达患者的90 天生存率显著低于低表达患者（61.97% vs 81.36%）,miR-211-5p 高表达患者的90 天生存率显著高于低表达患者（80.65% vs 61.76%）,差异均有统计学意义（χ2=5.853,5.589,均P ＜ 0.05）。结论 急性脑梗死患者血清CCR5 mRNA 和蛋白表达水平增高,miR-211-5p 表达水平降低,均与患者的病情程度有关,对急性脑梗死有一定诊断价值。     

ATP敏感性钾通道开放剂对脑缺血/再灌注损伤的保护作用及信号转导机制研究

目的 观察ATP敏感性钾通道（KATP）开放剂对大鼠脑缺血／再灌注（I／R）损伤后神经元凋亡的保护作用及其信号转导机制。方法 将200只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组（A组）、缺血组（B组）、KATP开放剂治疗组（C组）及KATP开放剂和阻断剂联合治疗组（D组）。应用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）模型，各组于缺血后2h进行再灌注。各组于再灌注6、12、24、48和72h分别取5只大鼠脑组织标本，用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）检测神经元凋亡，用免疫组化法检测天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）和caspase-9的蛋白表达；各组其余5只大鼠用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）观察caspase-3和caspase-9的mRNA表达。结果 B、C、D组再灌注后各时间点凋亡神经元数以及caspase-3、caspase-9的蛋白和mRNA表达均显著高于A组（P〈0．05或P〈0．01），C组各指标均显著低于B组和D组（P〈0．05或P〈0．01），而B组与D组各指标间比较差异均无显著性（P均〉0．05）。结论 KATP开放剂能显著减少脑I／R损伤后神经元凋亡以及caspase-3、caspase-9的mRNA和蛋白表达，提示KATP开放剂可能通过抑制线粒体通路减少脑I／R损伤后的神经元凋亡。     

异丙酚对全脑缺血再灌注损伤大鼠的脑保护作用及其机制

背景静脉麻醉药异丙酚可能通过抗凋亡作用保护脑缺血神经元 ,但是,异丙酚抗凋亡作用的研究还很少,机制尚不明确. 目的观察异丙酚对大鼠全脑缺血再灌注损伤神经元凋亡率、坏死率和凋亡相关基因蛋白表达的影响,探讨异丙酚的脑保护作用及其机制. 设计随机对照的实验研究. 地点和对象在首都医科大学附属北京神经外科研究所进行研究.成年雄性 Wistar 大鼠 19只,随机分为缺血组( n=7)、异丙酚组( n=7)和假手术对照组( n=5). 干预制备大鼠全脑缺血再灌注模型.异丙酚组再灌注开始后立即静脉输注异丙酚 1.5 mL/h,持续 30 min.于再灌注 24 h取脑,用流式细胞仪检测凋亡率,坏死率, bcl-2, Bax和 p53蛋白在大鼠海马神经元中的表达情况. 主要观察指标凋亡率,坏死率, bcl-2, Bax和 p53蛋白在大鼠海马神经元中的表达情况. 结果异丙酚组海马神经元的凋亡率和坏死率 [(7.01± 0.79)%和 (12.80± 0.92)% ]较缺血组 [(10.89± 0.80)%和 (16.67± 1.04)% ]明显降低 (P< 0.01).异丙酚组 Bax和 p53蛋白表达 [(49.93± 5.41)%和 (10.34± 1.65)% ]较缺血组 [(57.05± 1.91)%和 (13.84± 0.97)% ]明显降低 (P分别 < 0.05和 0.01),而异丙酚组 bcl 2蛋白表达( 9.45± 1.16)%较缺血组( 9.69± 0.94)%未见显著性差异 (P >0.05). 结论异丙酚能够降低大鼠全脑缺血再灌注神经元的凋亡率和坏死率,起到脑保护作用,其机制可能与降低促凋亡基因 Bax和 p53蛋白的表达有关.