定量PCR技术

聚合酶链反应（ＰＣＲ）是模拟ＤＮＡ体内复制过程,在体外将ＤＮＡ片段加人工扩增的技术,有许多因素都可以影响ＰＣＲ的扩增效率,导致常规ＰＣＲ的特异性不强,准确性不高,为此,大量学者设计了定量ＰＣＲ技术,从克服各种因素对ＰＣＲ扩增的干扰,从而提高ＰＣＲ的特异性及准确性,本文对定量ＰＣＲ技术进行了简要的综述。     

PCR方法在血液病研究中的应用

ＰＣＲ方法在血液病研究中的应用朱平聚合酶链反应（ＰＣＲ）是一种利用酶在体外大量合成ＤＮＡ特异性片段的方法。１９８３年Ｍｕｌｌｉｓ首先利用ＤＮＡ多聚酶，建立了体外大量扩增ＤＮＡ片段的方法，１９８５年Ｓａｉｋｉ用以检验血液系统有名的分子病──镰状细胞贫血...     

PCR扩增IS6110用于检测痰液中结核分枝杆菌的评价

为评价ＰＣＲ扩增ＩＳ６１１０检测结核分枝杆菌的特异性，用Ｂａｃｔｅｃ培养法对４５例可疑肺结核病人痰样品进行分枝杆菌检测；用４对分别针对ＩＳ６１１０不同区域引物和一对分枝杆菌属特异的１６ＳｒＲＮＡ基因引物对这４５例痰样品及其培养物和２７株已知分枝杆菌属菌株进行ＰＣＲ扩增检测。结果所有分枝杆菌ＤＮＡ均扩增出了１６ＳｒＲＮＡ基因片段，结核分枝杆菌ＤＮＡ均扩增出了ＩＳ６１１０的４个不同区域片段，非典型分枝杆菌ＤＮＡ均未扩增出ＩＳ６１１０片段，但存在假阳性和假阴性     

从石蜡包埋组织中提取DNA进行PCR扩增的影…

常规福尔马林固定、石蜡包埋的病理标本，由于出现ＤＮＡ降解，不适于做大片段靶序列的ＰＣＲ扩增。本文就不同的固定液、固定不同时间对ＤＮＡ模板的降解影响、ＤＮＡ提取各步应注意的事项及选用长短适宜的靶序列进行ＰＣＲ扩增等情况进行综述。     

聚合酶链反应在布氏菌病诊断研究中的进展

近年来，国外学者运用ＰＣＲ技术成功地对布氏菌进行了特异性扩增。结果显示：ＰＣＲ对６种１９型布氏菌均扩增出特异性片段，而对十几种与布氏菌同源性高的革兰氏阴性菌没有特异性扩增片段，灵敏度为６０－１００ｆｇ，充分说明ＰＣＲ技术用于布氏菌病诊断具有重要的价值和应用前景。     

复合聚合酶链反应检测恶性疟原虫及混合感染

目的 应用一种简易、快速的复事ＰＣＲ扩增系统检测恶性疟的虫及混合感染。方法 以间日疟原虫（Ｐ．ｖ）和恶性疟原虫（Ｐ．ｆ）小亚单位核糖体核糖核酸基因（ＳＳＵｒＤＮＡ）特定片段为靶基因，设计并合成引物，建立复合ＰＣＲ护增系统。采用煮沸法快速制备ＤＮＡ模板研究本系统的敏感性和特异性，并用于临床血样的检测。结果 从Ｐ．ｖ和Ｐ．ｆ感染血样中分别扩增出分子量大小为７０５ｂｐ和５７５ｂｐ的特定扩增带。而食蟹猴疟     

重复片段引物聚合酶链反应用于医院感染流行病学研究

目的 建立一种简便易行的细菌ＤＮＡ指纹图谱分析的方法用于医院感染流行病学研究。方法 选用肠道菌广泛存在的基因间重复片段作为引物，比较不同的聚合酶链反应的扩增条件，对临床分离的大肠埃希菌的ＰＣＲ扩增产物电泳图谱作了初步分析。结果 建立了重复片段引物ＰＣＲ的扩增方法，对大肠埃希菌扩增出了较为丰富的区带图谱，其中１例病人的两个分离株其ＰＣＲ产物图谱变化与其抗生素耐药变化极为相关。     

细菌DNA的聚合酶链反应扩增及反相杂交初步分型

目的探讨聚合酶链反应（ＰＣＲ）加反相杂交技术在细菌ＤＮＡ检测中的应用。方法以１６ＳｒＲＮＡ基因为靶序列，设计引物及寡核苷酸探针，采用ＰＣＲ法加反相杂交检测标准菌株及临床标本的细菌ＤＮＡ。结果对２４株不同标准菌株进行ＰＣＲ扩增，均出现３７１ｂｐ长度的ＤＮＡ片段，敏感性试验可检测出１０－１２ｇ的细菌ＤＮＡ，与人类基因组ＤＮＡ、真菌及病毒无交叉反应；２２例血培养阳性标本及４例脑脊液培养阳性标本均扩增出３７１ｂｐ长度ＤＮＡ条带，反相杂交法区分革兰阳性／阴性细菌与培养结果相符。结论１６ＳｒＲＮＡ基因ＰＣＲ加反相杂交技术检测细菌ＤＮＡ，具有特异、敏感、快速、准确的特点，为细菌感染的临床诊断提供了科学的依据     

混合样品中微量SRY基因的毛细管电泳检测

目的建立一种灵敏度高、重现性好的检测混合样品中微量目的基因的方法。方法采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增混合样品中微量男性ＤＮＡ的ＳＲＹ序列，分别通过琼脂糖凝胶电泳和毛细管电泳检测ＰＣＲ扩增产物，比较二者的检测灵敏度。结果毛细管电泳可检测到２０ｐｇ男性模板ＤＮＡ（相当于３～４个细胞中的ＤＮＡ含量）ＰＣＲ扩增产物总量的１／６００，琼脂糖凝胶电泳可检测到７４ｐｇ男性模板ＤＮＡ（相当于１３个细胞中的ＤＮＡ含量）ＰＣＲ扩增产物总量的１／３。毛细管电泳检测微量目的基因扩增产物的综合灵敏度是琼脂糖凝胶电泳的７５０倍。结论毛细管电泳灵敏度高、重现性好，与ＰＣＲ技术结合可广泛用于各种混合样品中微量核酸分子的检测。     

聚合酶链反应检测伤寒少门菌

用ＰＣＲ技术通过两对引物扩增伤寒沙门菌鞭毛抗原基因ＶＩ区一段特异性ＤＮＡ片段，并用非伤寒沙门菌作对照，结果仅伤寒沙门菌为阳性。实验表明，经二次扩增，当反应体系中达１０＾１／ｍｌ个伤寒沙门菌时，即可检出。     

套式PCR快速诊断新生儿巨细胞病毒感染

套式ＰＣＲ用于检测新生儿及随访ＣＩＤ患儿白细胞及尿中ＨＣＭＶＤＮＡ。两对引物序列取自ＨＣＭＶＩＥＡ基因区，第一对引物扩增７２１ｂｐ片段，第二对引物扩增１６７ｂｐ片段，后者穴居于前者之中，结果３３例可疑新生患儿检出ＣＭＶ感染２１例，７例随访患儿中４例尿或血中仍有ＣＭＶＤＮＡ存在。ＰＣＲ与病毒分离相比，既快速又敏感，尿标本用于ＰＣＲ检测ＣＭＶＤＮＡ较之血本具有检出率高，标本采取及处理均简便的优点。     

聚合酶链反应检测伤寒沙门菌

用ＰＣＲ技术通过两对引物扩增伤寒沙门菌鞭毛抗原基因ＶＩ区一段特异性ＤＮＡ片段，并用非伤寒沙门菌作对照，结果仅伤寒沙门菌为阳性。实验表明，经二次扩增，当反应体系中达１０１１／ｍｌ个伤寒沙门菌时，即可检出。检查伤寒患者血液标本７份，粪便标本６份，ＰＣＲ阳性分别为６份和５份，而血培养阳性仅为３份和４份，肥达反应均为阴性的发热患者血液标本１２份，健康成人粪便标本６０份，ＰＣＲ均为阴性。     

热启动PCR

热启动ＰＣＲ技术是近几年发展起来的，是对传统ＰＣＲ技术的革新。它的问世较圆满地解决了传统ＰＣＲ中的非特异性扩增问题。其应用范围越来越广，使传统ＰＣＲ技术较难扩增的单拷贝基因和超长片段等变得更简便。本文较系统地介绍了热启动ＰＣＲ的原理及方法学进展。     

应用反转录PCR检测临诊可疑丙型肝炎感染的结果分析

应用反转录ＰＣＲ检测临诊可疑丙型肝炎感染的结果分析广东省老年医学研究所蔡雪珍，董婷，魏惠永，李质怀聚合酶链反应（ＰＣＲ）是一种体外快速扩增特异ＤＮＡ片段的分子生物学技术，通过体外引物定向酶促放大作用，使微量的靶ＤＮＡ放大至百万倍而被检出，因此非常适合...     

用PCR技术检测沙眼衣原体主要外膜蛋白基因序列

本实验应用ＰＣＲ技术从宫颈分泌物中直接检测沙眼衣原体。ＰＣＲ所用的引物衣原体主要外膜蛋白（ＭＯＭＰ）基因中具有特异性的稳定区域中的两条核苷酸序列，扩增片段长度为１４４ｂｐ。将经过蛋白酶Ｋ处理的标本作了模板，经变性，退火和延伸，在毛细管ＰＣＲ仪上循环６０个周期后，扩增出的衣原体特异性片段在２．０％的琼脂糖凝胶上电泳后即可被检出。在７７个标本中，１６个为ＰＣＲ阳性。与荧光单克隆抗体免疫学方法比较证明。     

人白细胞介素—10基因探针的制备及应用

本文应用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增出人ｈＩＬ－１０ｃＤＮＡ６１０ｂｐ基因片段，将此片段插入ｐＵＣ１８质粒中，经电泳检测和序列分析证实，扩增片段和发表序列一致酶切电泳回收纯化片段，地高辛随机引物标记，制备了ｈＩＬ－１０基因探针，应用斑点杂交检测了探针的灵敏度和特异性，结果表明该基因探针具有特异性强，灵敏度高，应用方便等特点，初步用于细胞系及ＥＢ病毒阳性的淋巴瘤组织中ｈＩＬ－１０ｍＲＮＡ表达的检测，所得结果     

HpaⅡ—PCR检测急性白血病降钙素基因高度甲基化

应用聚合酶链反应结合ＨｐａⅡ限制性内切酶消化法检测７８例急性白血病患者降下素基因的甲基化状态。病例组待检细胞ＤＮＡ经ＨｐａⅡ消化后，再用两对ＣＴ基因特异性引物作ＰＣＲ扩增，分别产生长度为５６６ｂｐ和１．４ｋｂ特异片段。     

检测HPV的新策略—简并引物PCR

目前用ＰＣＲ法检测ＨＰＶ多采用型特异性引物，该法有很多弊端。最近人们采用简并引物ＰＣＲ法来检测ＨＰＶ，即借助一对ＨＰＶ简并引物用ＰＣＲ技术扩增ＨＰＶｓ ＤＮＡ，进而用分子杂交法或用酶切片段长度多形性来确定ＨＰＶ类型，该法较型特异性引物ＰＣＲ有很大优点。本文就ＨＰＶ简并引物的设计、ＨＰＶ类型确定方法等进行了详述。     

随机的多态性DNA及其在微生物分型中的应用

用于微生物分型的现代技术包括表型和基因型方法。随机扩增多态性ＤＮＡ （Ｒａｎｄｏｍ Ａｍｐｉｌｆｉｃｔｅｄ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ＤＮＡ简称ＲＡＰＤ）是在ＰＣＲ技术基础上发展起来的一种新的基因分型法。主要特点是利用随机寡核苷酸引物扩增基因组ＤＮＡ片段，进而通过凝胶电泳分析其指纹图特征供以显示不同菌株间存在细微差别。这种方法简单、快速、现已在许多微生物分型中得到运用。     

PCR—DNA指纹图识别异基因骨髓移植后重建造血的细胞起源

用多聚酶链反应（ＰＣＲ）扩增多态性小卫星ＤＮＡ的３３．１，３３．６位点，联合地高辛标记寡核苷酸探针杂交方法，以小卫星ＤＮＡ的ＰＣＲ－ＤＮＡ指纹图为特异性遗传标志，识别２例慢性粒细胞白血病患接受同供髓的骨髓移植后造血重建的细胞起源。结果显示均有供源性造血细胞植活。该方法灵敏度高，特异性强，无同位素污染，尤其适用于同性别、同血型、ＨＬＡ全相合的异基因骨髓移植植活指标的监测。