川芎嗪下调Colon26肿瘤细胞免疫抑制的体外研究

目的:体外研究川芎嗪对Colon26肿瘤细胞产生免疫抑制的影响.方法:获取经川芎嗪作用后再培养的Colon26及上清,以不经川芎嗪作用的同步培养细胞及上清作对照;分析川芎嗪作用后是否可下调Colon26肿瘤免疫抑制(MTT法检测NK活性和诱导转化,直接免疫荧光FACS法检测IL-2Rα、CD3ε+ζ+和CD3ε-ζ+表达),定量ELISA法测定上清中TGF-β1、VEGF、IL-4、IL-6和IL-10五种免疫抑制分子含量的变化,多元相关分析川芎嗪下调肿瘤免疫抑制与免疫抑制分子分泌变化之间的关系.结果:单纯Colon26培养上清中5种免疫抑制分子均可被测到,以TGF-β1含量最高,可显著抑制所测5项免疫功能.川芎嗪作用后,第一次传代再培养上清中TGF-β1、IL-6和IL-10含量,及5项免疫功能抑制均明显降低;第二次传代再培养上清中TGF-β1和IL-6含量,及转化抑制、CD3+ζ+和CD3-ζ+表达抑制均显著回升.相关分析显示,TGF-β1与除转化抑制以外的其他4项免疫功能抑制呈正相关,IL-6与转化抑制及CD3-ζ+表达抑制正相关;IL-10与NK杀伤抑制、IL-2Rα及CD3+ζ+表达抑制正相关.结论:川芎嗪作用Colon26肿瘤细胞后可明显下调其免疫抑制分子的分泌,影响其免疫抑制效应的发挥.通过下调肿瘤细胞分泌免疫抑制分子而阻碍肿瘤细胞产生免疫抑制,可能是川芎嗪的抗瘤效应机制之一.     

黄芪制剂逆转结直肠癌免疫抑制及其作用靶分子的体外研究

目的:体外研究黄芪制剂对结直肠癌免疫抑制的逆转,初步分析其作用靶分子。方法:获取体外经黄芪作用后再传代的结直肠癌细胞(Colon26)培养上清,以不经黄芪作用的同步培养上清作对照,定量ELISA法测定上清中TGFβ-1、VEGF、IL-4、IL-6、IL-10、PGE2等六种免疫抑制分子的含量,分析其对MTT法测定的小鼠脾细胞NK杀伤和诱导转化以及流式细胞计数分析的IL-2Rα、CD3ε+ζ+和CD3ε-ζ+表达5项免疫功能的影响,多元相关分析黄芪下调Colon26分泌免疫抑制分子与免疫抑制逆转作用之间的关系。结果:结直肠癌细胞培养上清中可检测到免疫抑制分子,以TGFβ-1含量最高;对5项免疫功能指标均有显著抑制作用。黄芪作用后,其第一次再培养上清中TGFβ-1和IL-10含量及对除IL-2Rα以外的4项免疫功能指标的抑制均明显降低,IL-6、PGE2含量显著升高;与第一次再培养上清相比,第二次再培养上清中TGFβ-1含量及对CD3ε+ζ+表达的抑制继续降低,IL-6含量降低至无中药处理的对照水平,对IL-2Rα表达的抑制开始降低,IL-10含量显著回升。相关分析显示,诱导转化、CD3ε+ζ+、CD3ε-ζ+表达及NK杀伤功能抑制率与TGFβ-1含量呈正相关,与PGE2含量呈负相关;VEGF、IL-4、IL-6和IL-10与5项免疫功能抑制不相关。结论:黄芪可通过下调结直肠癌细胞分泌TGFβ-1等免疫抑制分子,影响其免疫抑制效应的发挥,这可能是黄芪的抗瘤新机制之一。     

青蒿琥酯、苦参素对Colon26肿瘤细胞免疫抑制的影响

为了研究青蒿琥酯(ART)、苦参素(MOX)是否可逆转Colon26肿瘤细胞对免疫细胞功能的抑制,分别制备经这两种中药作用后的Colon26再培养上清,同时以不经中药作用的Colon26相应上清作对照,研究对小鼠脾细胞功能的影响,包括以MTT法测定NK杀伤和ConA诱导转化,以及流式细胞术分析的CD4+及CD8+表达的影响,定量ELISA测定TGF-β1、VEGF、IL-4、IL-6和IL-10五种免疫抑制物质的含量,并分析这两种中药下调Colon26分泌免疫抑制物质与上清免疫抑制之间的关系。结果显示,不经中药作用的Colon26培养上清中五种免疫抑制物质均可被测到,以TGF-β1含量最高;该上清对所测的小鼠脾细胞免疫功能均有显著抑制。ART作用后的Colon26,其第一次再培养上清的TGF-β1、VEGF、IL-10含量,及对小鼠脾细胞ConA诱导转化、CD4+CD8-表达及NK细胞杀伤的抑制均明显降低;其第二次再培养上清的TGF-β1和IL-10含量,及对ConA诱导转化和CD4+CD8-表达的抑制继续保持较低,VEGF含量及NK细胞杀伤的抑制恢复至对照水平。MOX作用后的Colon26,其第一次再培养上清的TGF-β1和IL-10含量,及对小鼠脾细胞ConA诱导转化的抑制均明显降低;其第二次再培养上清TGF-β1和IL-10含量继续降低,对ConA诱导转化的抑制恢复至对照水平。相关分析显示,ART及MOX作用后,Colon26培养上清对小鼠脾细胞转化的抑制均与TGF-β1含量正相关;ART作用后,Co-lon26培养上清对NK细胞杀伤的抑制与IL-10含量正相关。以上结果表明,ART和MOX可通过抑制免疫抑制物质的分泌而逆转Colon26肿瘤细胞的免疫抑制作用,这可能是ART和MOX的抗瘤机制之一。     

As2O3下调Colon26肿瘤细胞免疫抑制分子分泌的体外研究

目的 体外研究As2O3下调Colon26肿瘤细胞免疫抑制分子分泌的作用。方法 获取体外经As2O3作用后再培养的Colon26培养上清，以不经As2O3作用的Colon26同步培养上清作对照，定量ELISA法测定这些上清中TGF-β1、VEGF、IL-4、IL-6和IL-10 5种免疫抑制分子的含量，实验研究这些上清对小鼠脾细胞MTT法测定的NK杀伤和Con A诱导转化以及流式细胞计数分析的IL-2Rα、CD3ε^＋ζ^＋和CD3ε^-ζ^＋4表达5项免疫功能指标的影响。结果 不经As2O3作用同步培养的Colon26上清，5种免疫抑制分子均可被测到，以TGF-β1含量最高；该上清对小鼠脾细胞5项免疫功能指标，均有显著抑制作用。As2O3作用后的Colon26，其第一次再培养上清，5种免疫抑制分子含量及对除CD3ε^-ζ^＋表达外的其余4项免疫功能指标的抑制，均明显降低；与第一次再培养上清相比，其第二次再培养上清，TGF-β1、VEGF和IL-4含量及对NK杀伤、ConA诱导转化和CD3ε^＋ζ^＋表达的抑制，均明显提高，其余无明显变化。相关分析显示，TGF-β1和IL-10与抑制ConA诱导转化及IL-2Rα表达正相关；IL-4与抑制ConA诱导转化、NK杀伤及CD3ε^＋ζ^＋表达正相关；VEGF和IL-6与5项免疫功能指标的抑制不相关。结论 As2O3可明显下调Colon26肿瘤细胞免疫抑制分子的分泌，下调TGF-β1、VEGF和IL-4分泌的作用可持续48h，下调IL-6和IL-10分泌的作用可持续96h，可能是As2O3抗瘤效应机制之一。     

氧化苦参碱对L929肿瘤细胞免疫抑制作用的影响

目的:体外研究氧化苦参碱(MOX)对L929肿瘤细胞(L929)免疫抑制作用的影响.方法:获取经MOX作用后再培养的L929培养上清,以不经MOX作用同步培养的1929培养上清作对照,检测上清对小鼠脾细胞5项免疫功能的影响(包括NK杀伤和ConA诱导转化,MTT法;细胞表面IL-2Rα、cD3ε+ζ+和CD3ε-ζ+表达水平,流式细胞术法)和上清中4种免疫抑制分子的浓度(包括TC,F-βl、PGE2、VEGF和IL-1O,定量ELISA法).分析MOX影响L929免疫抑制作用与影响L929免疫抑制分子分泌之问的关系.结果:不经MOX作用同步对照培养的1929培养上清(C-S1、C-S2),可稳定地测到所测4种免疫抑制分子(以TGF-βl和PGF2浓度最高),和稳定地抑制所测小鼠脾细胞5项免疫功能(C-SI比C-S2,P>0.05).经MOX作用后的L929,其第一次再培养上清(MOX-S1),4种免疫抑制分子的浓度及对5项免疫功能的抑制均明显低于对照上清(c-SI);其第二次再培养上清(MOX-s2)与MOX-S1相比,4种抑制分子浓度无明显变化(P>0.05),除对CD3ε+ζ+的抑制作用明显降低外(P<0.01),对其余4项免疫功能的抑制作用亦无明显变化(P>0.05).相关分析显示,MOX下调L929对小鼠脾细胞ConA诱导转化及IL广2Ra和CD3ε-ζ+表达的抑制与下调TGF-βl和PGF2分泌显著正相关,下调对MK杀伤的抑制与下调TGF-βl分泌显著正相关.结论:氧化苦参碱可显著下调L929免疫抑制分子分泌而显著下调L929肿瘤细胞的免疫抑制作用,下调肿瘤细胞免疫抑制作用可能是其抗瘤新机制之一.     

青蒿琥酯逆转L929肿瘤细胞的免疫抑制作用

目的：体外研究青蒿琥酯（ART）逆转L929肿瘤细胞（L929）的免疫抑制作用。方法：获取经ART作用后再培养的L929培养上清和不经ART作用同步对照培养的L929培养上清,检测上清对小鼠脾细胞4项免疫功能的影响（包括NK杀伤和ConA诱导转化：MTT法;细胞表面CD4^＋和CD8^＋表达水平：流式细胞术法）和上清中4种免疫抑制分子的浓度（包括TGF-β1、PGE2、VEGF和IL-10：定量ELISA法）。分析青蒿琥酯逆转L929的免疫抑制作用与其下调L929免疫抑制分子分泌之间的关系。结果：同步对照培养的L929的上清,可稳定地检测到所测4种免疫抑制分子（TGF-β1和PGE2浓度最高）和对所测小鼠脾细胞4项免疫功能的显著抑制作用（C-S1与C-S2相比,P〉0.05）。对ART作用后的L929：其第一次再培养上清（ART-S1）与相应对照上清（C-S1）相比,4种免疫抑制分子的浓度及对小鼠脾细胞NK杀伤、ConA诱导转化和CD4^＋ CD8^-表达的抑制作用显著降低（P〈0.01）;其第二次再培养上清（ART-S2）与ART-S1相比,除IL-10浓度轻度上升（P〈0.05）和对小鼠脾细胞CD4-CD8^＋表达的抑制作用轻度降低（P〈0.05）外,余无显著变化（P〉0.05）。相关分析显示,ART逆转L929对小鼠脾细胞NK杀伤、ConA诱导转化及CD4^＋ CD8^-表达的抑制,与其下调L929分泌TGF-β1（r=0.971、r=0.984、r=0.990,P〈0.05）、PGE2（r=0.960、r=0.981、r=0.982,P〈0.05）及VEGF（r=0.970、r=0.992、r=0.982,P〈0.05）显著正相关。ART逆转L929对小鼠脾细胞CD4^- CD8^＋表达的抑制,可能与其下调L929其它免疫抑制分子分泌有关。结论：ART可通过下调L929免疫抑制分子分泌而逆转其免疫抑制作用,逆转肿瘤免疫抑制应是ART抗瘤新机制之一。     

miR-126敲减增强小鼠CD4~+T细胞体内活性并促进其向Th1细胞分化

目的观察miR-126基因敲减(KD)小鼠体内CD4+T细胞活性的变化并探讨其意义。方法利用磁珠活化细胞分选技术(MACS)分选miR-126KD小鼠脾脏CD4+CD62L+T细胞,实时定量PCR检测细胞内miR-126成熟体的表达水平;荧光激活细胞分选术(FACS)检测CD4+T细胞表面活化标志CD69、CD62L和CD44分子以及Ki-67的表达变化;膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ/PI)双染色法结合流式细胞术检测CD4+T细胞的凋亡情况;实时定量PCR检测CD4+T细胞功能相关细胞因子白细胞介素4(IL-4)、IL-10、IL-12、转化生长因子β(TGF-β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)的mRNA水平变化。结果与野生型(WT)小鼠组相比,miR-126KD小鼠组CD4+T细胞内miR-126成熟体的表达显著下调;FACS结果显示miR-126KD小鼠CD4+T细胞表达CD62L的比例明显减少,而表达CD69、CD44以及Ki-67细胞的比例显著增加,CD4+T细胞的体内凋亡比例显著减少;CD4+T细胞中IL-4、IL-10的mRNA水平明显降低,而IL-12、TGF-β、TNF-α以及IFN-γ的mRNA水平显著增加。结论 miR-126KD小鼠体内CD4+T细胞的活性显著增强并促进其向Th1细胞分化。     

CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞与LSCC发病的相关研究

为研究调节性T细胞在喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)、发展中的变化及其参与疾病进展的作用机制,收集2010～2011年上海市五官科医院收治的50例LSCC患者的肿瘤组织和外周血,应用流式细胞术检测CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞及趋化因子受体CCR6的表达变化,Real-time PCR法检测转录因子Foxp3以及细胞因子mRNA的表达量。结果发现:LSCC患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg的百分比较正常人显著增加,并与临床分期相关;CD4+CD25+CCR6+Treg Foxp3的表达,以及肿瘤组织Foxp3mRNA的表达皆明显高于对照组,且与临床分期、淋巴结转移相关。同时发现,LSCC患者外周血中TGF-β和IL-10mRNA的检出水平分别高于对照组,但IFN-γ、IL-2、IL-12mRNA的水平低于对照组。提示此类Foxp3+Treg属于一类诱导性T抑制细胞(Foxp3+iTreg),可通过产生IL-10和TGF-β抑制LSCC患者的细胞免疫功能。Foxp3的检测可能对判断LSCC的预后有一定价值。     

慢病毒介导RNA抑制黑素瘤细胞Foxp3蛋白表达

目的:利用RNA干扰(RNAi)技术在体外干扰小鼠B16黑素瘤细胞Foxp3基因表达,探讨RNA干扰用于黑素瘤治疗的可行性。方法:针对Foxp3基因设计小干扰RNA(siR-NA),构建起短发夹状RNA(shRNA)慢病毒表达载体,并转染小鼠B16细胞,在体外诱导RNA干扰。分别采用Westernblot和RT-PCR检测Foxp3基因的表达情况;ELISA检测TGF-β1、TGF-β2和IL-10等细胞因子的变化;将干扰后的小鼠B16细胞与CD4+CD25-T淋巴细胞共培养,CCK8法检测CD4+CD25-T淋巴细胞增殖能力。结果:通过Foxp3 shRNA的转染,可实现对B16细胞Foxp3表达的沉默,可下调肿瘤细胞对CD4+CD25-T淋巴细胞增殖抑制的能力,并且下调TGF-β1、TGF-β2和IL-10等细胞因子的表达,尤其是TGF-β2的表达。结论:RNA干扰可抑制小鼠黑素瘤细胞靶基因Foxp3的表达及细胞增殖,并对CD4+CD25-T淋巴细胞增殖抑制的能力减弱,同时减弱抑制性细胞因子的分泌,为黑素瘤的基因治疗提供了新思路。     

卵巢癌耐药细胞对活化CD4~+T细胞免疫活性的抑制及其机制

目的探讨卵巢癌顺铂耐药肿瘤细胞对活化CD4~+T细胞的抑制作用及其机制,为卵巢癌耐药患者的免疫治疗提供理论依据。方法用中等浓度间歇作用法建立耐顺铂卵巢癌细胞SKOV3/CDDP,MTT法测定细胞耐药指数及交叉耐药性,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率。ELISA检测肿瘤细胞培养上清液中TGF-β1、IL-10的含量。抽取正常人外周血用免疫磁珠分离CD4~+T细胞,用CD3和CD28抗体刺激活化CD4~+T细胞。用含20%肿瘤培养上清液培养,ELISA检测CD4~+T细胞IL-2表达量的变化,Western blot检测CD4~+T细胞内NF-κB、Snail的表达变化及肿瘤细胞中TGF-β1、P-smad2/3的表达变化;将肿瘤细胞与活化的CD4~+T淋巴细胞共培养,计数CD4~+T细胞增殖情况,HE染色观察肿瘤细胞对活化CD4~+T细胞黏附的抑制作用。结果SKOV3/CDDP的耐药指数为32.4,对阿霉素、紫杉醇产生交叉耐药性,在CDDP作用下,SKOV3/CDDP凋亡率明显降低。与SKOV3细胞相比,SKOV3/CDDP细胞培养上清TGF-β1表达量升高,SKOV3/CDDP培养上清能抑制活化的CD4~+T淋巴细胞IL-2的表达,抑制CD4~+T淋巴细胞的增殖及黏附作用;Western blot检测显示CD4~+T细胞内NF-κB、Snail的表达降低;SKOV3/CDDP细胞中TGF-β1和P-smad2/3的表达升高(P0.01)。结论 SKOV3/CDDP耐药细胞TGF-β1/P-smad信号通路激活,细胞分泌TGF-β1增多,对活化CD4~+T淋巴细胞的增殖及黏附起抑制作用,可能是通过抑制CD4~+T细胞内的NF-κB/Snail信号通路实现的。     

Cancer stem cell subsets and their relationships

Emerging evidence suggests that cancer stem cells account for the initiation and progression of cancer. While many types of cancer stem cells with specific markers have been isolated and identified, a variety of differences among them began to be appreciated. Cancer stem cells are hierarchical populations that consist of precancerous stem cells, primary cancer stem cells, migrating cancer stem cells and chemoradioresistant cancer stem cells, playing different roles in cancer initiation and progression. Here we propose a new concept "horizontal hierarchy of cancer stem cells" to distinguish them from vertical hierarchy cancer stem cells, cancer transient-amplifying cells and cancer differentiated cells, and summarize our current understanding of these subsets of cancer stem cells with the aim to open up novel therapeutic strategies for cancer based on this understanding.     

ACSL3在前列腺癌细胞系中的表达及其对前列腺癌转移的影响

 目的:观察比较长链脂酰辅酶A合成酶3（long-chain acyl-CoA synthetase 3, ACSL3）在前列腺正常上皮细胞和不同类型前列腺癌细胞系中的表达差异,通过构建ACSL3基因稳定表达的前列腺癌细胞株研究ACSL3对前列腺癌细胞侵袭能力的影响。方法:利用RT-PCR方法检测ACSL3 mRNA在前列腺正常上皮细胞、局限性及转移性前列腺癌细胞中的表达情况,分析其表达与前列腺癌发生、进展及转移的关系;以前列腺癌细胞基因组cDNA为模板,通过PCR扩增ACSL3基因,重组构建含有Flag标签的pCDNA3.1(+)-Flag-ACSL3质粒,包装慢病毒,转染前列腺癌细胞,通过荧光显微镜、RT-PCR和Western blotting等方法鉴定ACSL3在细胞内的表达情况;利用Transwell侵袭实验研究ACSL3对前列腺癌细胞侵袭能力的改变。结果:较前列腺正常上皮细胞,各种前列腺癌细胞中ACSL3 mRNA表达均明显下降。同时,局限性前列腺癌细胞中ACLS3 mRNA表达较转移性前列腺癌细胞明显升高;此外,雄激素非依赖性前列腺癌细胞比雄激素依赖性前列腺癌细胞中ACLS3 mRNA表达显著降低。进而,我们成功构建和包装了表达ACSL3基因的pCDNA3.1(+)-Flag-ACSL3重组质粒及慢病毒,并转染前列腺癌细胞,筛选出稳定表达株;并且,通过Transwell实验证实ACSL3表达与前列腺癌细胞的侵袭能力呈负相关。结论:前列腺正常上皮细胞及不同前列腺癌细胞系中ACSL3的表达存在明显差异,提示ACSL3可能在前列腺癌的发生发展中起重要作用;成功构建了ACSL3基因稳定表达的前列腺癌细胞株,并初步证实ACSL3过表达可以抑制前列腺癌细胞的侵袭力。     

Cancer stem cell hypothesis in thyroid cancer

There is increasing evidence that many types of cancer contain their own stem cells: cancer stem cells, which are characterized by their self-renewing capacity and differentiation ability. Cancer could be regarded as an abnormal organ initiated by cancer stem cells, and cancer stem cells might play a decisive role in tumor initiation and progression. Dysregulation of stem cell self-renewal is a likely requirement for the development of cancer, and stem cells seem more likely to be the transformed target cells in carcinogenesis. This cancer stem cell model has great implications for understanding of oncogenesis and treatment for cancer. Abundant evidence suggests that, parallel to other solid tumors, cancer stem cells also exist in thyroid cancer, although their characteristics are largely unknown to date. The present review will discuss the potential traits of cancer stem cells in thyroid cancer and their transformation targets: stem cells in the thyroid gland.     

胃癌干细胞抗原负载树突细胞与细胞因子诱导的杀伤细胞

BACKGROUND:As the existence of tumor stem cells, it is difficult to completely eliminate tumors in clinic. OBJECTIVE:To explore the tumor-killing effect of gastric cancer stem cells as antigen to stimulate dendritic cells combined with cytokine-induced killer cells. METHODS:Side population cells from human gastric cancer cell lines were isolated, and tumor antigen was prepared by freeze thawing method. After coculture with dendritic cells, dendritic cells combined with cytokine-induced killer cells, gastric cancer cell antigen, and gastric cancer stem cell antigen, killing rates of gastric cancer cells were detected using MTT assay. Expression rate of CD83, a mature dendritic cell surface marker, was also detected. RESULTS AND CONCLUSION:The CD83 expression level and killing rate of gastric cancer cells were both significantly lower in the gastric cancer stem cell antigen group than the other groups (both P < 0.05). These results indicate that gastric cancer stem cells as antigen to stimulate dendritic cells combined with cytokine-induced killer cells can promote the proliferation of gastric cancer cells and elevate the ability to killing gastric cancer cells.     

Novel frontiers in detecting cancer metastasis

Cancer microenvironment is the critical battle ground between the cancer cells and host response. Thus, more emphasis is directed to study the relationship between cancer cells and the stromal cells. Multiplex microscopy is an emerging technique in which multiple cell populations within the cancer microenvironment may be stained so that spatial relationship between cancer cells and, in particular, the immune cells may be studied during different stages of cancer development. Recent discovery of mutational burden and neoantigens in cancer has opened new landscapes in the interaction of host immune cells and cancer neoantigens. The emerging role of miRNAs may become an added dimension to study cancer beyond traditional pathway of DNA directed RNA being associated with the malignant behavior of cancer. Circulating tumor cells, cancer markers and ctDNA can be used as markers for circulating cancer cells in the blood. Further studies are needed to validate if liquid biopsy of cancer may become a routine clinical tool to screen cancer or follow patients for recurrence or responses to treatment.     

肺癌干细胞的研究进展

肿瘤起源于干细胞，肿瘤干细胞是肿瘤转移、复发的根源。肺癌肿瘤干细胞研究相对滞后，目前为止尚未能获得公认的肺癌肿瘤干细胞数据，但动物实验模型提示肺癌肿瘤干细胞的存在。应用流式细胞仪可分选支气管肺泡干细胞，针对肺癌干细胞的治疗可能是肺癌治疗的新策略。     

缺氧微环境下ADAM17与ERp5的高表达对肺癌细胞逃避NK细胞免疫杀伤的机制研究

目的探讨缺氧条件下ADAM17与ERp5的高表达对肺癌细胞逃避NK细胞免疫杀伤的影响。方法免疫组织化学法检测肺癌组织和癌旁组织中ADAM17与ERp5的表达;qRT-PCR与Western blot检测缺氧条件下的肺癌细胞中ADAM17、ERp5、MICA与MICB的表达;小干扰RNA内源性敲低ADAM17与ERp5;酶联免疫吸附测定法检测缺氧条件下的肺癌细胞上清中sMICA与sMICB的含量;流式细胞术检测CD3^-CD56⁺NK细胞的纯度;乳酸脱氢酶释放法检测NK细胞对肺癌细胞的杀伤敏感性。结果ADAM17与ERp5在肺癌组织中高表达;缺氧条件下,肺癌细胞中ADAM17与ERp5的表达量升高(P<0.05);CD3^-CD56⁺NK细胞的纯度高于90%;缺氧条件下,与si-NC组相比,si-ADAM17与si-ERp5组肺癌细胞上清中sMICA与sMICB的含量降低(P<0.05),肺癌细胞中MICA与MICB的表达升高(P<0.05),NK细胞对肺癌细胞的杀伤活性增强(P<0.05);与siADAM17与si-ERp5组相比,si-ADAM17+si-ERp5组肺癌细胞上清中sMICA与sMICB的含量降低(P<0.05),肺癌细胞MICA与MICB的表达升高(P<0.05),NK细胞对肺癌细胞的杀伤活性增强(P<0.05)。结论缺氧条件下,沉默ADAM17与ERp5通过抑制肺癌细胞中sMICA与s MICB的分泌,促进MICA与MICB的表达,增强了NK细胞对肺癌细胞的免疫杀伤。     

The correlation of hematopoietic stem cells with cancer stem cells through the regulation of stromal cells in tumor microenvironment

Cancer stem cells are a small population of tumor cells that have many malignant features such as chemotherapy resistance, radiotherapy resistance, tumorigenicity and are responsible for tumor progression, disease recurrence and metastasis. Therefore, insight into the regulation of the biology of cancer stem cells is important to eradicate cancer. Recently, studies suggested that hematopoietic stem cells could incorporate into tumor stroma and differentiated into stromal cells and the cells derived from hematopoietic stem cells play an important role on tumor progress. Moreover, cancer cells competed with hematopoietic stem cells for occupancy of the hematopoietic stem cell niches to regulate bone metastasis and most cancer cells in bone marrow metastasis were cancer stem cells. Therefore, we hypothesize that cancer stem cells could promote hematopoietic stem cells incorporating into tumor microenvironment and resulting into transformation of hematopoietic stem cells to stromal cells, which could impact the biological behavior of cancer stem cells.     

胃癌干细胞的分离、鉴定及其特性

背景：近年来随着肿瘤干细胞的深入研究,越来越多的证据表明肿瘤干细胞是恶性肿瘤转移复发的原因,因此分离鉴定出肿瘤干细胞对阐明肿瘤发病机制和研发抗肿瘤药物具有重要意义。 目的：分离培养胃癌干细胞,并检测胃癌干细胞的生物学特性。 方法：收集16例胃癌患者术中切除肿瘤组织,采用组织块贴壁培养法和酶消化培养法从肿瘤组织中分离胃癌干细胞,倒置显微镜下观察细胞形态,绘制生长曲线,并观察成骨成脂诱导分化能力。 结果与结论：两种方法均能够分离出胃癌干细胞,在显微镜下可以发现细胞形态为长梭形或多角样,细胞增殖生长达到融合时,呈漩涡状、放射状排列。从细胞生长曲线可以看出,1-3 d为潜伏期,4-9 d为对数增殖期,10 d后进入生长平台期。流式细胞仪检测结果显示：第3代胃癌干细胞高表达细胞表面标志物CD90、CD29、CD44,而低表达CD34、CD45、HLA-DR。第3代胃癌干细胞经成骨诱导后可见钙化结节,成脂诱导后细胞胞浆开始出现微小明亮的脂肪滴。结果表明胃肿瘤组织内存在肿瘤干细胞,且与正常细胞有相似的形态、生物特性以及多向分化能力,可能参与胃癌的发生、发展。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程