荧光定量PCR对儿童肺炎支原体感染早期诊断和临床意义

目的探讨荧光定量PCR法对儿童肺炎支原体（MP）感染的早期诊断价值。方法采用荧光定量PCR法检测MP感染儿童咽拭子及血中MP—DNA拷贝量,并与血清MP特异性抗体（MP—IgM）检测结果比较。结果荧光定量PCR法与微量颗粒凝集法在检测MP上无显著性差异;咽拭子和血清MP—DNA阳性率及拷贝量在不同种类标本差异有显著性（t=3．43,P〈0．01）;重症MP感染患儿其血MP—DNA的拷贝量较轻症者明显升高（P〈0．01）;MP感染患儿急性期MP—DNA的拷贝量明显高于恢复期（P〈0．01）。结论MP感染急性期采取咽拭子荧光定量PCR法MP—DNA和血MP—IgM相结合检测,诊断决速、准确,值得临床借鉴。     

荧光定量聚合酶链反应检测肺炎支原体方法的建立

目的建立检测肺炎支原体的荧光定量PCR法,并与市售试剂盒和传统巢式PCR法的检测性能进行比较。方法设计针对肺炎支原体社区获得性肺炎呼吸窘迫综合征毒素基因的特异性引物,构建含相应目的片段的质粒作为标准品,采用SYBR Green染料法进行实时定量PCR,并绘制标准曲线。通过检测其他细菌和170例儿童临床咽拭子样本,比较新建荧光定量PCR法、市售试剂盒和传统巢式PCR法在临床应用中的差异。结果新建荧光定量PCR法和巢式PCR法能够检出的肺炎支原体标准株DNA最低模板量为10拷贝,市售试剂盒检出最低模板量为102拷贝。在特异性实验中3种方法均可区分肺炎支原体和其他菌种。在检测的170例儿童临床咽试子样本中,新建荧光定量PCR法、市售试剂盒和传统巢式PCR法的阳性率分别为60.00%、50.00%和53.53%。新建荧光定量PCR法与市售试剂盒的结果具有高度相关性(r=0.953),2种方法的总符合率为86%,Kappa值为0.729。新建荧光定量PCR法与传统巢式PCR法的结果总符合率为90%,Kappa值为0.797。结论新建荧光定量PCR法与市售试剂盒相比灵敏性更高,特异性相同,成本低;与传统巢式PCR法相比操作简单,耗时短且污染少,具有良好的科研和临床应用前景。     

新冠疫情期间徐州市急性下呼吸道感染儿童的病原学变化

目的 本研究通过分析MP、RSV、ADV、COX检出率,了解新冠疫情期间徐州市下呼吸道感染性疾病的病原学变化.方法 回顾性分析2019-2020年在徐州医科大学附属医院儿科因下呼吸道感染住院的患儿3149例.采集外周静脉血2mL,被动凝集法检测肺炎支原体(MP)抗体,酶联免疫法检测呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒(AD...     

AECOPD肺炎支原体抗体检测

目的探讨慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)患者肺炎支原体(MP)抗体检测的意义。方法应用血清被动凝集法对AECOPD患者进行MP抗体检测。结果MP抗体在128例AECOPD患者中总的检出率为25.8%,显著高于对照组(P0.01),在轻、中、重、极重AECOPD患者的检出率分别为23.1%、30.4%、28.9%、22.6%,差异无统计学意义(P值均0.05)。结论AECOPD常见肺炎支原体感染,血清被动凝集法检测(MP)抗体,简便,敏感,有助于临床诊断。     

两种方法检测肺炎支原体的对比研究

目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应与快速培养法检验肺炎支原体的临床效果。方法选取我院收治的肺炎支原体肺炎患儿186例,以及同期非肺炎支原体肺炎患儿131例,同时行两法检测肺炎支原体,对比临床诊断。结果实时荧光定量聚合酶链反应与快速培养法检测肺炎支原体相比,在灵敏度、阳性预测值、假阴性率以及诊断符合率方面略高(P>0.05);但前者在特异度、假阳性率方面则明显优于后者(P<0.05)。两法联合应用,灵敏度、阴性预测值、诊断符合率高于单用(P<0.05),但特异度低于前者(P<0.05)。两种检测方法检测结果也并不完全一致,一致率为72.56%。结论两种检测方法对肺炎支原体检测各有优点,应考虑联合应用。     

支原体肺炎实验室诊断及临床分析

目的探讨支原体（Mp）肺炎实验室诊断及临床特点。方法采用明胶颗粒凝集法（PA）检测呼吸道感染患儿血清Mp-Ig M,采用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测咽拭子肺炎支原体DNA,同时对53例肺炎患儿进行血清sVCAM-1、IL-6测定。结果Mp感染早期FQ-PCR检测Mp DNA的敏感性优于PA法检测Mp-Ig M,Mp肺炎组与非Mp肺炎组血清sVCAM-1浓度比较差异无统计学意义（t=2.66,P〉0.05）;Mp肺炎组血清IL-6浓度高于非Mp肺炎组（t=2.12,P〈0.05）。结论Mp DNA FQ-PCR检测可用于Mp感染早期诊断,其含量不受抗生素治疗的影响。IL-6可能参与Mp肺炎的炎症过程,其水平变化可以作为病情的判断指标。     

血清IgG联合IL-5、维生素D检测在肺炎支原体感染合并支气管哮喘患儿中的应用研究

目的观察血清Ig G联合IL-5、维生素D检测在肺炎支原体感染合并支气管哮喘患儿中的应用效果。方法选取2014年3月-2016年5月医院诊治的肺炎支原体感染患儿90例,根据是否合并支气管哮喘分为肺炎支原体感染组(n=54)及合并支气管哮喘组(n=36)。选取同期入院健康体检的健康儿30例,设为对照组。采用酶联免疫法(ELISA)法检测血清Ig G、Ig M及Ig E水平;采用酶联免疫检测试剂盒检测人白介素-5(IL-5)水平;采用液相色谱串联质谱检测技术测定维生素D水平。结果合并支气管哮喘组患者血清Ig G、Ig M及Ig E水平,显著高于肺炎支原体感染组和对照组(P0.05);合并支气管哮喘组IL-5水平,显著高于肺炎支原体感染组和对照组(P0.05);合并支气管哮喘组维生素D水平,显著低于肺炎支原体感染组和对照组(P0.05);非条件Logistic多因素分析显示:肺炎支原体感染合并支气管哮喘发生率与血清Ig G联合IL-5、维生素D水平关系密切(P0.05)。结论肺炎支原体感染合并支气管哮喘患儿治疗过程中检测血清Ig G联合IL-5、维生素D效果理想,值得推广应用。     

荧光定量PCR和双抗原夹心胶体金免疫层析法检测结核分枝杆菌的对比观察

目的 比较荧光定量PCR和双抗原夹心胶体金免疫层析法检测结核分枝杆菌的诊断价值.方法 选取经过结核分枝杆菌培养阳性的70例肺结核患者,分别采取荧光定量PCR和双抗原夹心胶体金免疫层析法进行结核分枝杆菌的检测,观察比较两种检测法的敏感度、特异度及准确率.采用SPSS 12.0软件处理数据,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 以细菌培养结果作为金标准,双抗原夹心胶体金免疫层析法与荧光定量PCR法检测结果进行比较,前者检测假阳性率明显低于后者[前者:1.7％(1/59),后者:8.8％ (6/68);x2=5.46,P＜0.05],即前者特异度较高;前者检测假阴性率明显高于后者[前者:15.7％(11/70),后者:2.9％(2/70);x2=9.71,P＜0.05],即后者敏感度较高;两种检测方法的结果准确率比较差异无统计学意义[前者:82.9％(58/70),后者:88.6％(62/70);x2=1.33,P＞0.05].结论 两种检测方法皆是临床上迅速检测结核分枝杆菌的有效方法,其中荧光定量PCR敏感度高,应用在初筛中效果更为显著,而双抗原夹心胶体金免疫层析法特异度高,可进一步作为鉴别诊断的参考依据,各有利弊,可结合临床实际需要合理选用.     

碱性成纤维细胞生长因子、纤维连接蛋白在肺炎支原体感染中的临床意义

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、纤维连接蛋白(FN)在肺炎支原体感染患者中的临床意义。方法对我院2007年1月～2009年6月108例慢性咳嗽患者行支气管肺泡灌洗液(BALF)肺炎支原体-聚合酶链反应(PCR)检测。根据检测结果,分为实验组72例(肺炎支原体阳性)与对照组36例(肺炎支原体阴性)。对两组患者进行支气管镜肺活检,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测bFGF水平,Western blot方法检测FN水平。结果肺炎支原体感染组bFGF及FN水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论肺炎支原体肺部感染可使肺组织bFGF水平增加,而bFGF可进一步诱导FN表达增加。bFGF、FN检测对肺炎支原体所致肺间质纤维化患者早期诊断、病情动态变化、治疗有一定的参考价值。     

荧光定量PCR对痰涂片阴性肺结核的临床诊断价值

目的探讨荧光定量PCR检测对痰涂片阴性的肺结核的诊断价值。方法采集180例痰涂片阴性的肺结核病患者及100例非结核性肺部疾病患者(肺炎、肺癌及矽肺患者)的支气管灌洗液(BALF),应用荧光定量PCR检测BALF中的TB-DNA,同时进行BALF结核杆菌培养及抗酸染色法检查结核杆菌,比较不同方法对肺结核的临床诊断效率。结果肺结核组中BALF中TB-DNA阳性检出率为62.77%,显著高于BALF抗酸染色法的阳性检出率33.89%(P0.05),与BALF结核杆菌培养法无明显统计学差异(P0.05),治疗1个月后TB-DNA的阳性检出率也高于抗酸染色法(P0.05)。结论荧光PCR定量检测TB-DNA能提高结核杆菌的检出率,可作为诊断及判断疗效的方法。     

定量PCR检测HCMV-DNA结合细胞培养分离病毒法诊断小儿HCMV感染

目的探讨实时荧光定量PCR检测HCMV-DNA结合细胞培养分离病毒,对诊断小儿HCMV感染的价值。方法使用实时荧光定量PCR法检测尿液HCMV-DNA与细胞培养分离尿液HCMV二种方法检测。结果（1）该实时荧光定量PCR检测HCMV-DNA体系,与相关的三种病毒（I型单纯疱疹病毒、腺病毒和呼吸道合胞病毒）无交叉反应,20例正常幼儿皆为阴性。（2）40例临床患儿实时荧光定量PCR检测尿液HCMV-DNA,阳性10例。其中,唇腭裂组阳性6例（6/11）,肺炎组阳性4例（4/29）,两组检出结果比较,差异有显著性（χ2=5.06,P〈0.05）,唇腭裂组阳性检出高于肺炎组。（3）40例临床患儿细胞培养法HCMV分离检测,阳性8例,其中,唇腭裂组阳性4例（4/11）,肺炎组阳性为4例（4/29）,两组检出结果比较,差异无显著性（χ2=1.21,P〉0.05）。（4）40例临床患儿,实时荧光定量PCR检测尿液HCMV-DNA与细胞培养分离病毒结果符合度比较,差异无显著性（χ2=3.33,P〉0.05）。二种方法阳性检出比较,差异无显著性（χ2=0.38,P〉0.05）。结论实时荧光定量PCR检测尿液HCMV-DNA,与细胞培养法分离病毒联合应用可提高HCMV感染诊断阳性率。     

应用于转基因食品的检测技术及其展望

本文主要介绍酶联免疫法（ELISA）、蛋白质印迹法（Western blot）、试纸条法（lateral flow strip）、定量竞争PCR法、实时荧光定量PCR法、PCR—ELISA在内的蛋白质检测和DNA检测方法。通过对这些方法的基本原理、优缺点以及存在的问题进行分析,为转基因食品检测研究提供依据。     

脱氢表雄酮抑制高脂诱导的血小板源生长因子表达及细胞色素P450芳香酶基因在其中的作用

目的探讨脱氢表雄酮(DHEA)对动脉粥样硬化(AS)患者血小板源生长因子(PDGF)表达的影响及细胞色素P450芳香酶基因(CYP19)在其中的作用。方法用DHEA、全反式维甲酸(ATRA)作用于氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC),用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和酶联免疫吸附试验检测PDGF mRNA及蛋白的表达。通过脂质体介导的方法将pcDNA3.1-CYP19-绿色荧光蛋白(GFP)真核表达质粒及pcDNA3.1-GFP空质粒分别转染至HUVEC,给予ox-LDL诱导及DHEA干预,用实时荧光定量PCR和酶联免疫吸附法检测各组转染细胞PDGF mRNA及蛋白的表达。用DHEA、ATRA干预高脂饮食造成的兔体内动脉粥样硬化模型,用实时荧光定量PCR和免疫组化法检测兔主动脉PDGF mRNA及蛋白的表达。结果 ox-LDL诱导体外培养的HUVEC后,PDGF表达显著升高(P0.05),而同时给予DHEA可显著降低PDGF的表达(P0.05)。高脂饮食能显著诱导兔主动脉PDGF的表达(P0.05),而同时补充DHEA可显著降低PDGF的表达(P0.05)。同时加入ATRA干预对DHEA抑制PDGF表达的作用并无明显影响(P0.05)。与空质粒+ox-LDL+DHEA组相比,CYP19+ox-LDL+DHEA组PDGF的表达显著降低(P0.05)。结论 DHEA能够抑制高脂诱导的PDGF的表达,可能是DHEA抗AS的机制之一。过表达CYP19能够增强DHEA的这一作用。     

肺炎支原体感染与社区获得性肺炎合并急性心肌梗死的关系

目的探讨肺炎支原体(MP)感染与社区获得性肺炎(CAP)合并急性心肌梗死(AMI)的关系。方法采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测CAP合并AMI病人30例、CAP未合并AMI病人30例及健康对照组30名MP-IgM抗体、白介素-6(IL-6)水平;采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测痰标本、咽拭子MP-DNA。结果 CAP合并AMI组MP-IgM阳性率高于CAP未合并AMI组,差异无统计学意义(P0.05);CAP合并AMI组痰标本、咽拭子MP-DNA阳性率明显高于CAP未合并AMI组,差异均有统计学意义(P0.05);CAP合并AMI组IL-6水平明显高于CAP未合并AMI组和健康对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论MP感染与CAP合并AMI的发生发展相关。     

老年慢性阻塞性肺病支原体感染的研究

应用聚合酶链反应（PCR）技术检测了60例老年慢性阴塞性肺病（COPD）患者的临床标本（咽部分泌物）．结果发现10例肺炎支原体（MP）阳性，同时对这10例阳性者用酶联免疫法（ELISA）检测其血清抗体予以对照，发现4例为阴性．提示MP感染是COPD急性发作的重要原因之一，而PCR技术可以快速、灵敏地检测COPD急性发作时MP感染，其检出率高于用ELISA法．     

荧光定量PCR法检测肺炎支原体60例报告

2005年～2006年,我们对60例支原体肺炎患者用全自动荧光定量PCR检测,并将其结果与冷凝集试验和支原体抗体检查结果进行比较,旨在寻找支原体肺炎的早期诊断方法.现报告如下: 临床资料:本组男33例,女27例;年龄1～12岁,平均5.5岁.全部患者均有发热、咳嗽、肺部干湿性罗音.X线胸片符合肺炎改变.     

肺炎支原体感染与儿童哮喘的相关性

目的探讨肺炎支原体(MP)感染与儿童哮喘发作的关系。方法对我院收治的哮喘急性发作患儿102例同时应用:①酶联免疫分析法(EIAS)检测血清中肺炎支原体IgM,IgG;②咽拭子支原体快速培养;③深部痰PCR,MP-DNA检测,支原体感染情况,并以同期80例哮喘缓解期(入选前6个月未发病病例对照或过敏性鼻炎患儿对照)。结果哮喘急性发作患儿MP感染显著高于哮喘缓解组(P0.01),有统计学意义。结论MP感染可致哮喘发作,MP感染与哮喘的发病密切相关。     

脊髓灰质炎病毒检测方法的比较研究

目的比较不同的脊髓灰质炎病毒(Poliovirus,PV,以下简称脊灰病毒)检测方法,为选择合理的优化检测方案提供参考。方法选取广西壮族自治区柳州市1200名2～3月龄健康婴儿,分为IPV和OPV不同序贯免疫共12组,每组100人,按照0、28、56d免疫程序接种疫苗,随机抽取各组入组时前10%的受试对象在第二剂疫苗接种前和第二、三剂疫苗接种后第7、14、28d采集粪便标本,利用实时荧光定量PCR和细胞培养法对粪便中可能存在的PV进行初筛对比,对细胞培养法分离出的阳性标本,分别用中和试验、单克隆抗体间接ELISA法和逆转录-PCR鉴定其型别,并比较3种方法分型结果的一致性。结果实时荧光定量PCR检测PV阳性率为76.4%,细胞培养法为59.7%,差异有统计学意义(χ~2=32.998,P0.01)。中和试验、ELISA、RT-PCR 3种方法对细胞培养物中PV的检出率具有高度的一致性(Kappa0.8)且具有较高的鉴别诊断准确性(ROC曲线面积A接近1),分型结果差异无统计学意义(P0.05)。结论实时荧光定量PCR法对粪便中PV的检出率较细胞培养法高,但不能判断PV是否具有感染性。中和试验、ELISA、RT-PCR 3种方法对PV的分型一致性较高,可根据实验室和临床需求合理选择使用。     

HIV临床检测技术进展及应用

HIV感染的实验室检测在AIDS防治中至关重要。为提高HIV相关检测的灵敏度和特异度，陆续出现了可同时检测HIV抗原和抗体的第四代试剂、用于病毒载量检测的实时荧光定量PCR技术、新近感染检测的IgG捕获BED酶联免疫法等方法。这些方法不断接受临床评估及验证。     

3种方法对发热伴血小板减少综合征检测结果比较

目的 采用实时荧光PCR法、酶联免疫吸附法及细胞培养分离病毒株的方法,对2013年临床疑似发热伴血小板减少综合征患者急性期血进行检测比较,寻求快速、准确的鉴定新布尼亚病毒感染的方法。方法 对180例临床疑似病例的急性期血液首先采用实时荧光PCR法检测,筛选出新布尼亚病毒核酸阳性的样本,同时将阳性样本采用酶联免疫吸附的方法检测抗体及采用VERO-E6细胞培养的方法分离病毒株。结果 180份样本经实时荧光PCR法检测,阳性率为42.78%(77/180 Ct值≤35曲线形态与阳性对照一致呈S型的),ELISA方法检测抗体阳性率为44.16%(34/77),将核酸检测阳性的77份样本全部感染VERO-E6细胞获得病毒株32株,阳性率为38.55%(32/77)。结论 实时荧光PCR法更适合于新布尼亚病毒感染者早期实验室快速诊断,发病在1w左右的病例不适合用ELISA的方法做确证实验。细胞培养分离病毒虽然是金标准,但耗时、费力,对早期诊断意义不大,但适于研究或疫苗研发。