低强度脉冲超声波对兔膝骨性关节炎软骨整合素-FAK-MAPKs信号通路蛋白表达的影响

目的:观察低强度脉冲超声波(low-intensity pulsed ultrasound,LIPUS)对兔膝骨性关节炎(osteoarthritis,OA)软骨中整合素-FAK-MAPKs力化学细胞信号转导通路相关蛋白表达的影响。方法:18只成年新西兰大白兔随机平均分成3组,分为正常对照组(normal control,NC),OA模型组(OA group,OA),OA模型照射组(O+L)。OA组接受右侧后肢前交叉韧带切断(ACLT)处理术后4周接受LIPUS假辐射,O+L组同样手术处理,术后4周接受LIPUS辐射,NC组仅切开关节囊。LIPUS作用6周后,处死实验动物,取右后肢,采用HE染色行改良Mankin评分比较各组胫骨平台关节表面病理学改变。同时,采用Western blot技术检测Ⅱ型胶原,MMP-13,整合素β1的蛋白表达水平以及FAK、MAPKs家族蛋白(p38、ERK1/2、JNK)磷酸化水平。结果:1组织学观察及Mankin评分:LIPUS干预后,OA软骨表层轻微不平整,染色轻度缺失,可见软骨细胞增殖;Mankin评分,NC组:4.67±0.57;OA组:10.57±2.55;O+L组:7.66±1.74。与NC组相比,OA组、O+L组Mankin评分明显增高,但OA组增高更为明显(P0.05);与OA组相比,O+L组Mankin评分明显降低(P0.05)。2Ⅱ型胶原、MMP-13含量:LIPUS干预后,II型胶原含量较NC组升高,MMP-13含量有明显下降。3整合素β1-FAK-MAPKs信号通路相关蛋白表达:LIPUS干预使整合素β1、磷酸化FAK表达增高;同时MAPKs信号通路相关蛋白ERK1/2、p38磷酸化水平明显下降,而JNK磷酸化水平无明显变化。结论:LIPUS可以减轻骨性关节炎软骨ECM损伤程度,与LIPUS产生机械应力使关节软骨中细胞表面应力受体之一整合素β1及其下游分子黏着斑激酶FAK磷酸化表达增高,进一步下游的磷酸化p38,ERK1/2表达下调有关。LIPUS的机械效应可经力化学转导途径作用于OA关节软骨,为治疗骨性关节炎提供一种新的思路。     

静磁场与游泳运动对鼠膝骨关节炎软骨的作用

目的：观察静磁场、游泳运动对SD大鼠膝骨关节炎软骨的防治效果。方法：选用健康雄性SD大鼠40只,建立左后肢膝关节OA模型,并随机分为对照组（A组）、OA模型组（B组）、静磁场疗法组（C组）、游泳运动疗法组（D组）与综合治疗组（E组）。治疗4周后,取股骨内侧髁软骨与软骨下骨作为标本。比较各组软骨的阿尔新蓝染色结果、软骨大体变化、Mankin′s分级及IL-1β、磷酸化p38MAPK的免疫组化染色积分光密度(IOD)值。结果： 软骨阿尔新蓝着色状况,A组蓝染鲜明;B组呈不均匀淡蓝色;C组不均匀但较明显蓝染;D组略不均匀较鲜亮蓝染;E组着色接近正常。软骨大体评分平均秩值A、B、C、D、E组分别是7.56、30.19、25.63、21.38、17.75（P<0.05）;Mankin评分平均秩值A、B、C、D、E组依次是14.94、103.25、82.44、60.17、41.71（P<0.05）。软骨IL-1β IOD值A、B、C、D、E组分别是5.43±1.63、65.32±36.42、49.77±16.90、28.54±7.44、16.26±3.98（P<0.05）;磷酸化p38 IOD值A、B、C、D、E组依次是0.39±0.31、26.44±5.52、17.60±2.52、9.54±1.57、5.71±1.41（P<0.05）。各组间软骨组织阿尔新蓝着色的程度与均匀性及软骨大体评分秩值、Mankin评分值及软骨IL-1β、磷酸化p38MAPK IOD值均存在着明显差别（P<0.05）。结论：静磁场疗法、游泳运动疗法及综合治疗可不同程度减轻和/或延缓骨关节炎软骨的损害。     

低强度脉冲超声经PI3K/Akt通路调控兔膝骨性关节炎软骨细胞凋亡的作用机制研究

目的:探讨低强度脉冲超声(LIPUS)对兔膝骨性关节炎(OA)软骨细胞凋亡的影响及有关作用机制。方法:共选取30只新西兰大白兔,随机分为正常对照组(A组)、OA模型组(B组)、OA+LIPUS组(C组)、OA+LY294002(PI3K/Akt抑制剂)组(D组)、OA+LY294002+LIPUS组(E组),每组各6只。采用右后膝前交叉韧带切断术(ACLT)造模。于造模后第6周时采用空气栓塞法处死实验兔,切取软骨组织进行组织学观察,并进行Mankin评分;提取软骨细胞进行体外培养并采用免疫组化染色法鉴定;应用western blot检测各组软骨细胞中Ⅱ型胶原(COL2)、MMP-13、Akt、pAkt、P53、Bcl-2蛋白表达情况。结果:B组COL2、pAkt、Bcl-2蛋白含量较A组降低,MMP-13、P53蛋白含量较A组增高(P<0.05)。与B组相比,C组COL2、pAkt、Bcl-2蛋白含量增高,MMP-13、P53蛋白含量下降(P<0.05);D组COL2、Bcl-2、pAkt蛋白含量下降,MMP-13、P53蛋白含量升高(P<0.05),E组COL2、MMP-13、P53、Bcl-2、pAkt蛋白含量无明显变化,但与C组、D组相比差异显著(P<0.05)。各组Akt蛋白表达无明显差异。结论:LIPUS能通过PI3K/Akt通路降低兔膝骨性关节炎软骨细胞凋亡率,促进抗凋亡基因Bcl-2表达,下调促凋亡基因P53水平,促进关节软骨损伤修复。     

兔膝关节骨性关节炎的模型制作及组织病理学

目的探讨骨性关节炎(OA)的发病机制及组织病理学基础。方法20只健康雄性白兔随机分为正常组和模型组各10只。模型组采用管型石膏伸直位制动方法复制出膝关节OA模型。6周后处死白兔并观察软骨的大体改变及Mankin评分;并取血清及关节灌洗液标本检测超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)的含量。结果模型组白兔膝关节滑膜均存在不同程度增生、肥厚、水肿;光镜及电镜下关节软骨呈明显退行性变;Mankin评分模型组显著高于正常组(P<0.05);关节灌注液中SOD和血清中MDA含量模型组显著升高(P<0.01)。结论滑膜组织的炎症、关节软骨的退变以及自由基的改变是导致OA发生的病理学基础,如何阻断这些病理环节是防治OA的关键。     

低强度脉冲超声对兔膝骨性关节炎软骨细胞整合素-局部粘着斑激酶-促分裂原活化蛋白激酶力化学转导通路相关蛋白表达的影响

目的观察低强度脉冲超声（LIPUS）对兔膝骨性关节炎（OA）软骨细胞中整合素-局部粘着斑激酶（FAK）-促分裂原活化蛋白激酶（MAPK）力化学信号转导通路相关蛋白表达的影响。 方法共选取18只新西兰大白兔,其中12只进行膝OA造模,其余6只作为正常对照。于制模后第4周处死实验兔,提取软骨细胞进行体外培养并鉴定。将所培养细胞分为正常对照组、OA模型组及OA超声组。待细胞传至第2代时,正常对照组及OA模型组细胞不给予任何处理,OA超声组细胞则给予LIPUS辐射。于LIPUS持续作用1周后收集各组细胞,应用Western blot技术检测各组细胞中Ⅱ型胶原、蛋白多糖、基质金属蛋白酶(MMPs)-13、整合素β1、FAK、MAPK（如p38、ERK1/2、JNK）蛋白表达以及磷酸化蛋白表达情况。 结果①OA模型组及OA超声组Ⅱ型胶原、蛋白多糖含量均较正常对照组明显降低（P<0.05）,并以OA模型组下降幅度较显著,与OA超声组间差异具有统计学意义（P<0.05）。②OA模型组及OA超声组MMP-13含量均较正常对照组明显增高（P<0.05）,并以OA模型组增高幅度较显著,与OA超声组间差异具有统计学意义（P<0.05）。③OA模型组及OA超声组整合素β1、磷酸化FAK含量均较正常对照组明显增高,且以OA超声组增高幅度较显著,与OA模型组间差异具有统计学意义（P<0.05）。④OA模型组磷酸化p38、ERK1/2及JNK含量均较正常对照组明显增加（P<0.05）,OA超声组上述指标则较OA模型组显著降低（P<0.05）。 结论LIPUS体外辐射可抑制OA软骨细胞Ⅱ型胶原、蛋白多糖降解及MMP-13表达,同时还能促进整合素β1表达以及FAK磷酸化,抑制p38、ERK1/2、JNK磷酸化,提示LIPUS辐射可能通过启动整合素-FAK-MAPK力学信号转导通路诱导软骨细胞外基质发生改变。     

骨关节炎软骨细胞中血管内皮生长因子和缺氧诱导因子1α的表达及外源性透明质酸钠作用的实验研究

目的研究家兔Hulth模型骨关节炎(OA)软骨中血管内皮生长因子(VEGF)和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达,和透明质酸(HA)的干预作用。方法采用Hulth法建立家兔骨关节炎模型,分为正常组(A组)、造模组(B组)和造模给药组(C组),进行软骨Mankin评分和免疫组织化学染色法检测软骨细胞中VEGF、HIF-1α表达。结果A组软骨细胞中VEGF和HIF-1α存在低度表达,B组和C组出现不同程度的OA软骨病变,软骨细胞中VEGF和HIF-1α表达增加;4周和8周时VEGF免疫组化阳性细胞百分数(细胞分数)差别有显著性(P<0.05);4周和8周造模组和造模给药组比较Mankin评分、VEGF细胞分数差别有显著性(P<0.05);各实验组中VEGF细胞分数和Mankin评分呈正相关(相关系数分别为r=0.891,0.917;P<0.01)。结论Hulth模型中软骨细胞VEGF和HIF-1α表达上调,关节内注射透明质酸钠延缓OA进程,同时VEGF表达水平降低。     

大鼠机械通气所致肺损伤时p38丝裂原活化蛋白激酶通路的激活

目的探讨大鼠机械通气所致呼吸机相关性肺损伤(VILI)时p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的激活以及致炎因子的表达。方法30只健康SD大鼠随机均分成A、B、C3组,A组:潮气量(VT)8ml/kg,呼吸频率(RR)80次/min;B组:VT20ml/kg,RR80次/min;C组:VT40ml/kg,RR80次/min。各组机械通气时间均为2h。实验结束处死大鼠,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织标本,光镜下观察肺组织病理学改变。采用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测各组肺组织中p38、磷酸化p38(p-p38)水平,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达水平,考马斯亮蓝染色法检测肺组织中总蛋白浓度和髓过氧化物酶(MPO)活性,双抗体夹心酶联免疫吸附法检测BALF中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、巨噬细胞炎症蛋白-2(MIP-2)和白细胞计数(WBC)。结果肺组织病理观察显示,A、B、C3组的改变依次加重;与A组相比,B、C两组p-p38和ICAM-1的表达以及总蛋白、WBC、MIP-2、TNF-α及MPO的水平均显著增高(P均<0.01);与B组相比,C组p-p38和ICAM-1的表达以及总蛋白、WBC、MIP-2、TNF-α及MPO的水平均显著增高(P<0.05或P<0.01)。结论大VT机械通气能显著激活p38通路以及致炎因子的表达,这可能是大鼠机械通气所致肺损伤的重要致病机制之一。     

低强度脉冲超声与吡格列酮对骨关节炎软骨细胞的影响

目的 观察低强度脉冲超声(LIPUS)和吡格列酮(pioglitazone)经过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)/核转录因子-κB（NF-κB）/诱导型一氧化氮合酶(iNOS)途径对骨关节炎(OA)软骨细胞的保护作用。 方法 选取健康成年新西兰大白兔24只,按随机数字表法分为正常组、脂多糖（LPS）组、LIPUS组(LPS+LIPUS)、吡格列酮组(LPS+吡格列酮),每组6只大白兔。分别提取4组大白兔膝正常软骨细胞,采用ELISA法检测4组软骨细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、瘦素（LEP）、一氧化氮(NO)的水平;采用免疫细胞化学和免疫荧光染色法检测4组软骨细胞Ⅱ型胶原(COL2)的表达情况;另采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫蛋白印迹法检测(Western blot)技术分别检测4组软骨细胞的PPARγ,NF-κB,iNOS mRNA和蛋白表达水平。 结果 LIPUS组和吡格列酮组OA软骨细胞的TNF-α、LEP、NO水平与LPS组比较,均显著下降,差异均有统计学意义（P<0.05）,且吡格列酮组下调幅度大于LIPUS组,差异有统计学意义（P<0.05）;LIPUS组OA软骨细胞COL2的表达水平显著上调,与LPS组比较,差异有统计学意义（P<0.05）;LIPUS组和吡格列酮组OA软骨细胞PPARγ的mRNA和蛋白表达水平均高于LPS组,差异均有统计学意义（P<0.05）;吡格列酮组和LIPUS组OA软骨细胞NF-κB、iNOS mRNA和蛋白表达下降,与LPS组比较,差异均有统计学意义（P<0.05）,且吡格列酮组下降程度大于LIPUS组,差异有统计学意义（P<0.05）。 结论 LIPUS和吡格列酮均可能通过PPARγ/NF-κB/iNOS途径参与OA软骨细胞的抗炎症、COL2合成过程,起到OA软骨细胞的保护作用。     

有氧运动在预防兔膝骨关节炎发生中的作用及其机制研究

目的通过观察有氧运动对兔膝骨关节炎(OA)软骨中Ⅱ型胶原和糖胺聚糖（GAG）含量及软骨细胞凋亡率的影响,探讨有氧运动对OA的预防作用及其可能的作用机制。 方法将新西兰大白兔20只按随机数字表法分为A、B、C、D四组,每组5只大白兔。入组后,A组笼内自由活动9周;B组笼内自由活动4周;C组接受有氧运动,训练速度为0.5km/h,每周3次,每次20min,训练4周;D组亦接受有氧运动,训练速度为1.5km/h,每周5次,每次20min,共4周。B、C、D3组均于活动或训练4周后,采用木瓜蛋白酶法建立OA模型,1周后经磁共振成像（MRI）检查,均确认造模成功,然后笼内自由活动4周。入组9周后,将4组大白兔处死,采用Mankin评分比较各组间关节软骨损伤程度,并对软骨Ⅱ型胶原的表达、软骨GAG的含量以及软骨细胞凋亡率进行检测。 结果入组9周后,B、C、D 3组大白兔的Mankin评分、Ⅱ型胶原和GAG含量均显著低于A组,差异均有统计学意义（P<0.05）,B组的Mankin评分、Ⅱ型胶原和GAG含量亦显著低于D组,差异均有统计学意义（P<0.05）。入组9周后,A组的软骨细胞凋亡率为（3.45±18）%,显著低于B、C、D 3组,差异均有统计学意义（P<0.05）,且C、D 2组的软骨细胞凋亡率亦显著低于与B组,差异均有统计学意义（P<0.05）。 结论有氧运动可能通过抑制骨性关节炎关节软骨基质中Ⅱ型胶原和GAG总量的减少预防兔膝关节软骨的退变,其作用机制可能与软骨细胞凋亡的减少有关。     

黄芪关节腔内注射后兔骨关节炎模型软骨退行性变及滑膜组织中超氧化物歧化酶活性的变化

目的:观察关节腔内注射黄芪后,对兔前交叉韧带切断骨关节炎模型中软骨退行性变以及滑膜组织中超氧化物歧化酶活性与丙二醛含量的影响。方法:实验于2005-08/2006-02在华中科技大学同济医学院附属协和医院动物实验中心完成。①选用成年日本大白兔16只,随机数字表法分为模型对照组、黄芪治疗组,8只/组。②两组兔均行单侧前交叉韧带切断术建立骨关节炎模型。黄芪治疗组于术后1周开始,关节内注射黄芪0.3mL/次,1次/周,连续6周。模型对照组于同一时间点关节内注射0.3mL生理盐水。③术后第7周处死两组动物,采用关节软骨病理改变评分(0～4分,分数越高病理变化越严重)对比观察两组兔股骨髁关节软骨的大体变化;采用关节软骨退行性变Mankin’s评分(包括软骨结构、软骨细胞、臧红O染色、潮线的完整性4个指标)对比观察光镜下两组兔关节软骨的退行性变情况;并检测滑膜组织中超氧化物歧化酶活性与丙二醛含量。结果:16只兔均进入结果分析。①术后第7周关节软骨病理改变评分结果:黄芪治疗组软骨退行性变评分明显低于模型对照组(z=-2.595,P<0.05)。②术后第7周关节软骨退行性变Mankin’s评分结果:黄芪治疗组明显低于模型对照组[(5.9±1.46),(8.8±1.39)分,t=-4.039,P<0.05]。③术后两组滑膜组织超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量的比较:与模型对照组比较,黄芪治疗组超氧化物歧化酶活性明显升高(t=8.206,P<0.05),而丙二醛含量明显降低(t=-4.039,P<0.05)。结论:黄芪能明显降低软骨退行性变的程度,并增加骨关节炎滑膜组织中超氧化物歧化酶的活性,减少丙二醛的含量,有可能成为防治骨关节炎的良好药物。     

高牵张促进烧伤血清复合缺氧条件下心肌细胞p38磷酸化

目的:探讨高负荷对烧伤血清复合缺氧条件下心肌细胞p38表达、磷酸化的影响。方法:采用原代培养的乳鼠心肌细胞,分别给予正常血清(SN组)、烧伤血清+缺氧(SH组)、烧伤血清+缺氧+10%轴向静态牵张(SHS组)3种处理,采用Western blotting和免疫荧光检测磷酸化p38(p-p38)于心肌细胞内的表达情况。结果:SHS组较SH组p38表达、磷酸化增强,且磷酸化高峰提前,免疫荧光分析证实SH组、SHS组心肌细胞内p-p38水平明显提高。结论:高牵张上调烧伤血清复合缺氧条件下心肌细胞p38的表达和磷酸化水平,后者可能是高负荷对心肌细胞损伤的主要方式。     

Study on adenovirus mediated antisense p38α fragment gene in suppressing apoptosis of the myocardium of neonatal rat by burn serum and hypoxia

Objective To investigate the relationship between the activation of p38 mitogen-activated protein kinase (p38MAPK) in the myocardium and the apoptosis in the presence of burn serum and hypoxia. Methods Ventricular myocardium isolated from neonatal rats were employed in this study, and they were divided into three groups as the normal control group, with the myocardium grew naturally; burn serum+ hypoxia group, in which the myocardium was stimulated by the serum collected from the rat 6 hours after burn injury involving 40% of total body surface area (TBSA), and at the same time exposed to 1%O2, 5% CO2, and 94 %N2; antisense blocking group, in which rats were pretreated by AD-antisense (AS) p38α, then exposed to the same conditions as burn serum+hypoxia group.The phosphorylation of p38 in the myocardium was determined by Western blotting.The level of myocardium apoptosis was determined by DNA ladder and flow cytometry.Results Compared with normal control group, the level of phosphorylation of p38 (gray value) was markedly increased (8.68±0.14 vs.3.21±0.05, P＜0.01＝ after being exposed to burn serum and hypoxia, and at the same time myocardium apoptosis was strikingly increased[(50.367±0.451)% vs.(2.063±0.111)%, P＜0.01＝.When the myocardium was transfected by AD-ASp38α, the phosphorylation of p38 (gray level) was decreased remarkably (5.46±0.16 vs.8.68±0.14, P＜0.01＝, the rate of the apoptosis was lowered remarkably[(13.200 ± 0.121 ) % vs.(50.367 ± 0.451)%, P ＜ 0.01]. Conclusion Burn serum combined with hypoxia can induce apoptosis of the myocardium by activating p38MAPK;blockage of p38MAPK signal transduction pathway may lessen the damage of the myocardium in early period of severe burn.     

丝裂素活化蛋白激酶途径在缺氧复合烧伤血清致心肌细胞损伤中的作用

目的　观察缺氧复合烧伤血清对心肌细胞丝裂素活化蛋白激酶 (MAPKs)活化的影响 ,探讨MAPKs信号途径在缺氧复合烧伤血清致心肌细胞损伤中的作用。方法　乳鼠心肌细胞原代培养 ,缺氧复合烧伤血清作用心肌细胞后不同时间点用免疫印迹化学发光法检测 p38激酶、细胞外信号调节激酶 (ERK)和c Jun氨基末端蛋白激酶 (JNK)磷酸化程度 ;分别用 p38激酶特异抑制剂 SB2 0 35 80和 ERK特异抑制剂PD980 5 9抑制 p38激酶和 ERK途径 ,观察其对缺氧复合烧伤血清培养条件下心肌细胞活性和培养上清中乳酸脱氢酶 (L DH)含量的影响。结果　心肌细胞 p38激酶和 ERK在缺氧复合烧伤血清作用后迅速、持续活化 ,而 JNK活化不明显。用 SB2 0 35 80抑制 p38激酶可显著减少细胞 L DH漏出 (各时间点 P<0 .0 5或 P<0 .0 1)和改善细胞活性 (双因素作用 12 h后 ,两者间比较 ,P均 <0 .0 1) ;相反 ,抑制 ERK途径在一定程度上增加了细胞 L DH漏出和降低细胞活性 (双因素作用 6 h和 12 h,两者间比较 ,P均 <0 .0 1)。结论　心肌细胞 MAPKs的 3条信号转导途径中 ,p38激酶途径和 ERK途径介导了缺氧复合烧伤血清刺激信号的胞内转导。其中 p38激酶途径激活介导了心肌细胞的损伤效应 ,而 ERK途径激活则有一定的细胞保护作用。     

EV71感染横纹肌肉瘤细胞与MAPK信号通路分子基因差异表达的相关性

目的探讨肠道病毒71型(EV71)感染横纹肌肉瘤(RD)细胞后丝裂原活化蛋白激酶(MARK)信号通路分子的变化及作用机制。方法按感染复数(MOI)=5的病毒量感染RD细胞,用台盼蓝染色观察不同时间的细胞存活率,annexin V-FITC/PI染色法检测凋亡细胞形态学变化,ELISA法检测感染后不同时间细胞因子(IL-4、IL-10和TNF-α)水平变化,PCR芯片技术检测感染后8 h和12 h MAPK信号通路相关基因的差异表达情况。结果台盼蓝染色结果显示,RD细胞存活率随EV71感染时间延长明显下降,感染组IL-4、IL-10和TNF-α浓度随感染时间延长明显增加,与对照组差异有统计学意义(P<0.05)。EV71感染RD细胞8 h时,88种MAPK相关基因中,FOS、JUN分别上调3.34和3.19倍,而IL-1A、IL-1B、MAP2K3、IRAK1、NGF、IL-4、MAP3K1、MAP3K10、MAP3K11、MAP3K14、MAPK3下调2～5倍。EV71感染RD细胞20 h时,ELK1、FGF1、FOS、JUN、IRAK1、NGF、IL4、MAP3K1、MAP3K10、MAP3K11、MAP3K14、MAPK3、PIK3CG、STAT1和TNF明显上调。结论 EV71感染激活RD细胞MAPK信号通路,产生炎症细胞因子,与细胞凋亡有关。     

p38MAPK信号转导通路与肿瘤关系的最新研究进展

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)级联是细胞内广泛存在的一类丝/苏氨酸蛋白激酶超家族,其亚族主要包括细胞外信号调节激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶/应激激活蛋白激酶(JNK/SAPK)和p38MAPK。他们主要是将细胞外信号转入细胞核内并引起相应变化的重要信号通路,调节细胞生长、分化、对环境的应激适应、炎症反应等多种细胞生理/病理过程。迄今为止各类研究发现,p38MAPK可介导应激、炎性因子及生长因子等多种刺激引起的细胞反应,也可以通过下游效应蛋白磷酸化而改变基因的表达水平,获得不同的细胞效应应答,参与各种肿瘤细胞的发生、侵袭、转移和耐药等过程,故阐明p38MAPK信号通路参与不同肿瘤的调控机制,将为不同肿瘤的诊治过程提供新的门径。     

N-乙酰半胱氨酸对高氧肺损伤保护机制与p38丝裂素活化蛋白激酶途径的相关性研究

目的 观察p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)信号途径在高氧肺损伤中的表达,探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)在高氧肺损伤中的保护作用及机制.方法 将30只幼年Wistar大鼠按随机数字表法分为空气对照组(A组)、高氧暴露组(B组)、高氧+NAC干预组(C组)、高氧+p38MAPK特异性抑制剂(SB203580)干预组(D组)、高氧+NAC+SB203580联合干预组(E组),每组6只.实验7 d后,光镜下观察肺组织病理改变,并行肺损伤评分;测定肺湿/干重(W/D)比值、支气管肺泡灌洗液(BALF)中总蛋白(TP)含量、肺通透系数;采用免疫组化法检测磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)在肺组织中的分布;用蛋白质免疫印迹法检测p-p38MAPK蛋白含量.结果 与A组比较,高氧各组均有不同程度的肺损伤,但药物干预各组(C、D、E组)肺损伤均较B组有所减轻.免疫组化显示,高氧各组p-p38MAPK阳性表达较A组明显增强,尤高表达在炎性浸润细胞;药物干预后(C、D、E组)p-p38MAPK阳性细胞较B组明显减少.蛋白质免疫印迹法显示,B组p-p38MAPK蛋白含量明显高于A组(0.20±0.03比0.11±0.01,P<0.05);干预后C、D、E组p-p38MAPK蛋白含量低于B组(0.16±0.02、0.15±0.01、0.14±0.02比0.20±0.03,均P<0.05),但仍高于A组(均P<0.05),而C、D、E组间则无明显差异.各组肺W/D比值、BALF中TP含量、肺通透系数改变与p-p38MAPK蛋白含量变化趋势一致.结论 高氧应激可激活损伤肺组织p38MAPK活性;NAC抗氧化肺保护作用机制可能是通过下调高氧诱导p38MAPK的激活而对肺损伤起保护作用.     

Inhibition of Matrix Metalloproteinase on Hepatic Transforming Growth Factor β1 and Caspase-3 Activation in Hemorrhage

Objectives: Hemorrhage initiates an inflammatory response that induces the systemic release of cytokines and sequestration of polymorphonuclear neutrophils. Sequestered polymorphonuclear neutrophils release proteases, including matrix metalloproteinases (MMPs) that degrade elements of the extracellular matrix, contributing to the morbidity and mortality seen from hemorrhage. Activation of MMPs may be associated with changes in transforming growth factor β1 (TGF‐β1) and caspase‐3 signaling pathways. In this study, the authors examined hemorrhage‐induced changes in the expression of rat hepatic MMP‐9, tissue inhibitor of metalloproteinase‐1 (TIMP‐l), TGF‐β1, and caspase‐3 activities in the presence and absence of the MMP inhibitor hydroxamate. Methods: Hemorrhagic shock was induced in fasted, anesthetized, and cannulated rats by rapid phlebotomy to a mean arterial pressure level of 40 mm Hg, maintained for 90 minutes by withdrawal and infusion of blood, followed by a resuscitation period of lactated Ringer's infusion. Rats received either hydroxamate (25 mg/kg) or vehicle by gavage before hemorrhage. Twenty‐four hours after resuscitation, plasma and liver samples were collected. Liver MMP‐9, TGF‐β1, and caspase‐3 levels were quantified by Western immunoblotting. Plasma glutamic oxaloacetic transaminase (GOT) and plasma glutamic pyruvic transaminase (GPT) were determined enzymatically. Results: Plasma GOT, plasma GPT, and liver MMP‐9, TGF‐β1, and caspase‐3 levels were all significantly elevated at 24 hours postresuscitation when compared with the control values. Hepatic TIMP‐1, an in vivo inhibitor of MMP‐9, was unaltered at 24 hours. Hydroxamate treatment reduced GOT, GPT, MMP‐9, TGF‐β1, and caspase‐3 levels at 24 hours. The mortality of hemorrhaged untreated rats was 29% after 24 hours, and pretreatment with hydroxamate reduced mortality to 0%. Conclusions: These results indicate the beneficial effects of MMP inhibitor in preventing an increase in GOT, GPT, MMP‐9, TGF‐β1, and caspase‐3 activity with the potential for improvement of hepatic injury due to hemorrhage.     

p38信号通路对单侧输尿管结扎大鼠RANTES的影响

目的探讨p38有丝分裂素激活蛋白激酶(MAPK)在单侧输尿管结扎(UUO)大鼠肾组织的表达及活化状态。方法采用免疫组织化学法和Western印迹分析法检测UUO大鼠肾组织p38MAPK的磷酸化水平和RANTES蛋白水平,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测RANTES mRNA的表达。结果RANTES蛋白和RANTES mRNA随着梗阻时间的延长,表达明显上调,同时p38MAPK蛋白活性增高,两者呈显著正相关(P＜0．05)。结论UUO大鼠肾组织中p38MAPK的活化可上调RANTES的表达。