在固体培养基中培养阴道毛滴虫的研究

目的研究阴道毛滴虫在固态培养基中的生长条件.方法厌养箱培养.结果阴道毛滴虫在固态培养基中生长繁殖的最佳条件为0.45%琼脂浓度,37 C,厌氧箱培养.在直径6 cm的培养皿中接种100个虫数为宜.随着培养时间增加,虫落直径增大,至培养第5 d直径最大,其后死亡率明显上升.阴道毛滴虫在固态培养基中最多可活8 d.结论阴道毛滴虫可在固态培养基中生存繁殖,此项技术为深入研究阴道毛滴虫提供了新的培养方法.     

阴道毛滴虫固态培养基建立及两种培养方法的比较

目前阴道毛滴虫的培养多用液态培养基，获得单克隆虫株难度较大。本研究就固态培养基培养阴道毛滴虫的实验条件进行探讨，为深入研究阴道毛滴虫提供新的培养方法。     

焦性没食子酸培养阴道毛滴虫方法的建立及其应用

目的 建立阴道毛滴虫焦性没食子酸培养法，并研究其在药物敏感实验中的应用。方法 用焦性没食子酸法，在固体培养基中培养阴道毛滴虫，用打孔法和滤纸片法研究药物敏感性。结果 焦性没食子酸厌氧培养1－2d，在显微镜下仅可见少数虫体聚集的虫落，从培养第3天开始肉眼可见虫落，随培养基琼脂浓度增加，虫落数和直径均有所下降，加入培养基中的虫数越多，虫落直径越小，随培养时间的延长，虫体死亡率逐渐增多。用打孔法和滤纸片法观察药物杀虫效果，随药物浓度的增加，抑虫环直径增大。结论 焦性没食子酸厌氧培养中，培养基的最佳琼脂浓度为0．45％。在直径6cm的培养皿中接种200个虫数时，至培养第6天虫落直径最大，滴虫可存活9d。用打孔法观察药物杀虫效果较好。常山杀虫效果强于仙鹤草。     

不同pH肝浸汤培养基培养阴道毛滴虫的观察

目的 观察不同pH值对阴道毛滴虫生长发育的影响，为实验室培养或临床诊断培养阴道毛滴虫提供参考。方法 配制pH值分别为2、2．5、3、3．5、4、4．5、5、5．5、6、6．5、7、7．5、8、8．5的肝浸汤培养基，分别接种相同数量的阴道毛滴虫，37℃恒温培养48h，用血球计数板计数滴虫数量。以pH值为横坐标，滴虫密度为纵坐标作曲线图，找出培养滴虫的最适pH值范围。同时，连续观察各pH值管滴虫生长情况，直至滴虫死亡，记录各pH值培养基中滴虫的最长存活时间。结果 阴道毛滴虫能在pH3～8的肝浸汤培养基中生长繁殖，最适pH范围为5～7．5，最适pH值是6。在pH4和pH8的培养基中连续不转代培养时，滴虫存活时间最长，分别达180h和189h。结论 肝浸汤培养基pH值为6时，滴虫生长良好，运动活泼，繁殖速度快，适用于快速繁殖滴虫，提高滴虫收获量；在pH4和pH8时，滴虫生长缓慢，但存活时间显著延长，适合保种培养。     

阴道毛滴虫在两种培养基中的生长与形态观察

目的通过对改良肝浸汤培养液及RPM11640培养基内阴道毛滴虫生长情况的观察，选择适合教学和科研的培养基。方法用临床分离的阴道毛滴虫标本，分别接种至改良肝浸液及RPM11640两种培养基内进行培养，pH值为5．6～5．8，通过计数了解生长情况并观察阴道毛滴虫的形态。结果肝浸汤培养液中培养48h，阴道毛滴虫达到生长高峰，虫体呈现出多分裂相，虫体变大、呈圆形，内含4～12个细胞核，细胞膜外缘可见数丛鞭毛。RPM11640培养基中阴道毛滴虫72h达到生长高峰，虫体密度约为肝浸液高峰期的2／3，未见多分裂现象，虫体与生理盐水涂片中阴道毛滴虫形态、大小相近。结论改良的肝浸液培养基适于阴道毛滴虫的药物试验及其他实验项目的研究，RPM11640培养基更适用于教学、标本的制作及实验室保种工作。     

3种不同培养基体外培养阴道毛滴虫效果的比较

目的　探索阴道毛滴虫体外培养的适宜条件。　方法　用临床分离的阴道毛滴虫 ,按 9.0× 10 4 / ml的接种量转种至 3种不同培养基进行培养 ,p H值为 5 .6。　结果　经 3种培养基培养 ,96 h后阴道毛滴虫数量存在差异 ,其中以半胱氨酸 -肝 -胨 -麦芽糖培养基 培养基 )虫数较多 ,肝 -胨 -麦芽糖培养基 培养基 )次之 ,大豆 -肝 -胨 -麦芽糖培养基 培养基 )较少。培养基 与培养基 及培养基 相比较 ,滴虫存活率差异具有显著性意义 P<0 .0 1,P<0 .0 5 ) ,滴虫生长密度差异也具有显著性意义 P<0 .0 1,P<0 .0 5 ) ,生长密度高峰持续时间分别为 192 h、14 4 h和 96h,最长存活时间分别为 2 88h、2 16 h和 192 h。　结论　半胱氨酸 -肝 -胨 -麦芽糖培养基较适于阴道毛滴虫体外增殖     

中性粒细胞杀灭阴道毛滴虫作用的研究

目的 研究中性粒细胞对阴道毛滴虫的杀灭作用。 方法 将滴虫性阴道炎患者的阴道分泌物接种于肝浸汤培养基，获阴道毛滴虫。取患者静脉血分离血清，取其1 ml 于56 ℃ 30 min获补体失活血清。另取1 ml患者血清于0 ℃以阴道毛滴虫吸附3次，获去除抗体血清。用密度梯度离心法及聚合物加速沉降法分离、纯化患者静脉血中性粒细胞。用氮蓝四唑（NBT）和沙黄O（safranin O）染色，显微镜观察中性粒细胞与阴道毛滴虫相互作用及甲臢（NBT还原产物)颗粒（formazan）沉积。取300个阴道毛滴虫和3×104个中性粒细胞，分别在有氧或厌氧、有或无超氧化物岐化酶（SOD）及过氧化氢酶（CAT）、有或无补体等不同条件下，培养10、20、30、40、50及60 min，再接种于固态琼脂培养基，在37 ℃厌氧条件下继续培养5 d。观察计数阴道毛滴虫存活率。 结果 显微镜下可见几个中性粒细胞同时围攻杀灭1个阴道毛滴虫。含有中性粒细胞时培养的虫体存活率，厌氧条件下为85%，有氧条件为3%（P﹤0.01）。SOD及CAT可明显降低其杀虫作用，培养60 min虫体存活率分别为98%及94%，而无SOD及CAT时虫体存活率为2%（P值均<0.05）。加入去除抗体血清，可将虫体全部杀灭。加入补体失活血清则无杀虫作用。 结论 中性粒细胞杀灭阴道毛滴虫作用依赖于氧及患者血清中补体的存在。     

阴道毛滴虫在两种培养基中的生长与形态观察

目的 通过对改良肝浸汤培养液及RPMI1640培养基内阴道毛滴虫生长情况的观察,选择适合教学和科研的培养基。 方法 用临床分离的阴道毛滴虫标本,分别接种至改良肝浸液及RPMI1640两种培养基内进行培养,pH值为5.6~5.8,通过计数了解生长情况并观察阴道毛滴虫的形态。 结果 肝浸汤培养液中培养48 h,阴道毛滴虫达到生长高峰,虫体呈现出多分裂相,虫体变大、呈圆形,内含4~12个细胞核,细胞膜外缘可见数丛鞭毛。RPMI1640培养基中阴道毛滴虫72 h达到生长高峰,虫体密度约为肝浸液高峰期的2／3,未见多分裂现象,虫体与生理盐水涂片中阴道毛滴虫形态、大小相近。 结论 改良的肝浸液培养基适于阴道毛滴虫的药物试验及其他实验项目的研究,RPMI1640培养基更适用于教学、标本的制作及实验室保种工作。     

阴道毛滴虫在无菌培养基中的分布情况

阴道毛滴虫无菌培养,可排除细菌对滴虫的各种影响,使其大量生长繁殖,为开展有关滴虫的试验,特别是为生化、免疫、药理等学科中的科学研究,提供大量生长活泼、形态正常的无菌活虫。在正常情况下,(月示)蛋白胨-酵母浸液-麦芽糖(TYM)培养基液体透明,呈桔红色,琼脂呈微小颗粒状悬浮于液体中。加入滴虫培养24或48h后,于培养基中部出现一混浊的絮状层,并在此后的上下面形成明显可见的两条带,将培养基分成若干部分。     

一株阴道毛滴虫释放的一种RNA病毒及其细胞病理学

近年有些作者对不同原虫中存在的小RNA病毒曾作描述。本文作者研究了一株1964年分离并传代的阴道毛滴虫(123414)及另两株不同来源的阴道毛滴虫(虫株87464和30001)。细胞按常规置无血清的C13培养基(pH 7)34℃培养。对照虫株也置于C13和Diamond′s培养基,pH6,34℃或37℃下培养。在培养3—7天后,显微镜下观察各株细胞贴壁情况。离心收集阴道毛滴虫,     

珊瑚姜总挥发油体外抗阴道毛滴虫效果观察

观察珊瑚姜总挥发油对体外培养的阴道毛滴虫的作用。方法：用含有不同浓度珊瑚姜的培养基培养阴道毛滴虫，观察对其阴道毛滴虫的作用。结果：培养４８ｈ后最佳致死２为１、．０μｌ／ｍｌ，结论：珊瑚姜总挥发油有抗阴道毛滴虫的作用。     

珊瑚姜总挥发油体外抗阴道毛滴虫效果观察

观察珊瑚姜总挥发油对体外培养的阴道毛滴虫的作用。方法：用含不同浓度珊瑚姜的培养基培养阴道毛滴虫，观察其对阴道毛滴虫的作用。结果：培养48h后最佳致死浓度为1.0μl／ml。结论：珊瑚姜总挥发油有抗阴道毛滴虫的作用。     

铁离子对体外培养的阴道毛滴虫生长的影响

目的研究铁离子对体外培养的阴道毛滴虫生长的影响。方法在TYM(trypticase-yeast extract-maltose)培养基(pH6.0)中,分别加入100、200、300和400μmol/L铁离子,并设不加铁离子组为对照组,阴道毛滴虫初始浓度为1×105/ml,于37℃定量纯培养。采用台盼蓝染色法镜下观察并计数活滴虫数和死滴虫数,绘制生长曲线和存活率曲线,并计算对数生长期内世代时间。通过连续稀释的方法测定在加入200μmol/L铁离子培养基和对照组培养基中甲硝唑对阴道毛滴虫的最小致死浓度(minimal lethal concentration,MLC)。结果在加入100、200、300和400μmol/L铁离子的培养基中,阴道毛滴虫均于40h达最高密度,分别为2.9×106、3.2×106、3.1×106和2.8×106/ml,对照组阴道毛滴虫于54h达最高密度,为2.5×106/ml。400μmol/L铁离子组阴道毛滴虫的世代时间为(6.8±0.7)h,较100～300μmol/L铁离子组的世代时间[(4.8±0.3)、(4.8±0.2)和(5.0±0.4)h]延长(均P﹤0.05),而100～400μmol/L铁离子组的世代时间均短于对照组[(10.2±3.1)h](均P﹤0.05)。在加入200μmol/L铁离子的培养基中阴道毛滴虫的甲硝唑最小致死浓度为(23.44±11.56)μg/ml,显著低于对照组[(31.25±15.44)μg/ml](均P﹤0.05)。结论阴道毛滴虫在加入100～400μmol/L铁离子的TYM培养基中生长较快,且甲硝唑对阴道毛滴虫的最小致死浓度较小。     

阴道毛滴虫双链RNA病毒感染及其对甲硝唑耐药性的影响

目的调查河南地区阴道毛滴虫临床分离株阴道毛滴虫病毒感染情况,探索病毒感染对阴道毛滴虫甲硝唑耐药性的影响。方法 TYM(trypticase-yeast extract-maltose)无菌培养基培养阴道毛滴虫临床分离株,达到纯培养后提取虫体总核酸(DNA和RNA),进行1%琼脂糖凝胶电泳分析;连续稀释法测量每株虫体的甲硝唑最小致死浓度。结果对30株阴道毛滴虫总核酸进行电泳,其中6株有5.5 kb双链RNA病毒带,病毒感染率为20.0%。阴道毛滴虫病毒阴性组甲硝唑最小致死浓度为(24.27±20.899)μg/ml,病毒阳性组为(5.68±3.588)μg/ml,差异有统计学意义(t=2.143,P<0.05)。结论河南地区阴道毛滴虫临床分离株中检测到阴道毛滴虫病毒,无阴道毛滴虫病毒寄生的虫体易发生甲硝唑抵抗。     

中药体外抗阴道毛滴虫的试验研究

为开辟新的抗阴道毛滴虫药物 ,本实验选择了 3种具有杀虫、消炎作用的中药进行了体外抗阴道毛滴虫的效果观察。1　材料和方法1.1　培养基　选用肝浸汤培养基 ,p H5 .5～ 6 .0。1.2　试验虫种　取初次确诊为滴虫性阴道炎患者阴道后穹窿处分泌物 ,接种于培养管内 ,每 3d转种传代 ,稳定培养三代开始试验。1.3　药物制备　取仙鹤草、苦参和雷丸各 10 g,置 2 0 0 ml蒸馏水中浸泡 6 h,煮沸 30 min取出药液 ,再加水 10 0 ml,微火煎沸2 0 min取出液体并与前者药液混合 ,8层纱布滤过 ,加热浓缩成2 0 ml,即为 5 0 %的药液。设对照组为培养液。1.4　药…     

滴虫性阴道炎阴道镜检变化的持续时间

作者研究了毛滴虫根治后粘膜炎症变化的持续时间。并在临床条件下,探索减少误诊的可能性。共观察了12例。病人主诉阴道有恶臭分泌物,外阴部痒。分泌物经悬滴标本发现毛滴虫而确诊为毛滴虫性阴道炎。进一步的检查包括测阴道 pH,用特殊培养基观察毛滴虫的生长,并作阴道镜检。     

3种培养基中芽囊原虫生长状况观察

目的观察芽囊原虫在不同培养基中的生长状况,筛选合适的芽囊原虫培养方法。方法将10份芽囊原虫阳性粪便分别接种至Jone’s液、vitro液、1640 3种培养基中培养,选取生长情况良好、虫密度高的一份粪便传代培养后等量接种至3种不同的培养基中,每24 h计数虫体数量一次,连续观察10 d,并观察芽囊原虫的形态学变化和生长情况。结果10份粪便分别接种至3种培养基中培养,48 h后发现1640和Jone’s液中的虫密度高于vitro液。同一份粪便接种至3种不同培养基中连续观察10 d,结果表明3种培养基中虫体生长呈规律变化,均在接种后3、6、9 d出现生长高峰;Jone’s液中芽囊原虫密度最高。vitro液中观察到的虫体形态最清晰,且富有活力;Jone’s液中能观察到虫体多种繁殖状态。结论Jone’s液适于芽囊原虫的生长繁殖,可作为首选培养基;vitro液可作为观察芽囊原虫生长情况的首选培养基。     

几种药物体外抗阴道毛滴虫效果观察

甲硝唑是临床常用的抗阴道毛滴虫药物,但副反应多,开辟和发现新的抗阴道毛滴虫药物很有必要。本实验选择了4种药物5种制剂进行了体外抗阴道毛滴虫效果观察一、材料与方法 (一)虫种取自滴虫性阴道炎患者阴道分泌物。 (二)药物甲硝唑片系武汉制药厂生产;乙酰螺旋霉素系沈阳克达制药厂生产,吡喹酮系南京制药厂生产;甲硝唑注射剂系黑龙江省庆安制药厂生产;5氟尿嘧啶系齐齐哈尔市第二制药厂生产。 (三)实验方法用捷克斯洛伐克产阴道毛滴虫培养基培养阴道毛滴虫,37℃48h传代一次。待生产旺盛     

阴道毛滴虫整虫抗原和单克隆抗体进行斑点酶联免疫吸附试验条件的探讨

以阴道毛滴虫整虫抗原和单克隆抗体进行ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ试验，分别观察了不同的虫体数量、孵育时间、封闭剂型、抗原类型、ＮＣ膜及抗原保存时间与温度等条件对试验效果的影响。结果显示以２．５×１０７细胞／ｍｌ的虫数制备抗原膜，用０．５％脱脂奶粉１次性封闭１ｈ（３７℃），单克隆抗体和酶分别孵育１ｈ（３７℃）为最佳条件。在４℃和－２０℃温度下，抗原可保存４个月。     

激素替代疗法对绝经后期妇女阴道生理状态的影响

目的 观察激素替代疗法对绝经后妇女阴道生理状态的影响。方法 用霉菌培养基及CPLM培养基分别培养对照组及观察组阴道分泌物中白色念珠菌及阴道毛滴虫,用阴道涂片法观察阴道分泌物中的线索细胞。结果 观察组分泌物中的白色念珠菌的检出率高于对照组（P＜0．05)。外阴瘙痒症状与对照组无明显差异（P＜0．05）。观察组阴道毛滴虫及线索细胞的检出率明显低于对照组（P＜0．05,P＜0．05）。结论 激素替代疗法可改善阴道环境,减少阴道毛滴虫和致病菌的入侵,同时,使白色念珠菌增多,但并不引起外阴瘙痒症状。