细胞胞浆Ca2+浓度的时-频分析及ELF脉冲电磁波产生的生物学窗效应

本研究以实验为基础，对细胞胞浆Ca^2＋浓度进行时-频分析，进而研究ELF脉冲电磁波在细胞胞浆Ca^2＋浓度时-频域内产生的生物学效应和生物学窗效应。结果表明：细胞胞浆Ca^2＋浓度在时-频域内有其固有的频谱特征，其中包括连续谱和离散谱。有的参数的电磁波可在细胞胞浆Ca^2＋浓度的时-频域内产生生物学效应而有的参数的电磁波却不能。若能够产生生物学效应，则有两个特征：一是使胞浆Ca^2＋浓度在时-频域内的连续谱变窄，具体表现为连续谱中的高能谱分量被抑制；二是使离散谱的分布和离散谱的频率发生了变化。同时，能够在细胞胞浆Ca^2＋浓度的时-频域内产生生物学效应的电磁波脉冲频率和脉冲强度是离散的和间隔的，这意味着，ELF脉冲电磁波能够在细胞胞浆Ca^2＋浓度的时-频域内产生生物学窗效应。本研究使用的脉冲频率范围内有两个频率窗，它们是16Hz和45Hz；使用的脉冲强度范围内有一个强度窗，是53V／m。     

BJAB细胞在转导6A8 α-甘露糖苷酶的反义DNA后发生oncosis样死亡

目的：采用形态学和分子生物学方法,分析转导6A8α-甘露糖苷酶的反义DNA导致的B细胞株BJAB死亡的性质。方法：用Giemsa染色、annexin-V荧光染色、梯形DNA电泳以及透射电子显微镜等方法,分析细胞死亡的性质;应用ConA结合试验,检测转基因细胞6A8α－甘露糖苷酶活性的改变;应用Fluo-3探针测定细胞胞浆[Ca^2 ]i。结果：用重组腺相关病毒（rAAV)颗粒成功地将反义6A8DNA转导入了EB病毒转化的B细胞株BJAB。在克隆中,转导反义6A8 DNA的BJAB细胞在生长到3－10个细胞时死亡,而野生型、转导空载或转导正义6A8 DNA的BJAB细胞生长良好。转导反义6A8 DNA的BJAB细胞呈聚集状生长,且有大量细胞肿胀,最终死亡。Giemsa染色光镜观察、annexin-V荧光染色、梯形DNA电泳及透射电镜观察结果表明,这种死亡是一种oncosis(肿胀死）样死亡。ConA结合试验表明,BJAB细胞在转导反义6A8 DNA后的结合率升高,而转导正义6A8 DNA后的结合率则下降。另外,转导反义6A8 DNA的细胞胞浆[Ca^2 ]i升高。结论：转导反义6A8 DNA引起BJAB细胞发生oncosis样死亡,这种死亡可能与6A8α-甘露糖苷酶表达被抑制有关。     

电磁脉冲辐照对大鼠脑线粒体功能的影响

为研究电磁脉冲（EMP）对大鼠脑线粒体功能的损伤，大鼠经过连续不同场强EMP辐照后测定了脑线粒体膜功能随辐照时间的变化，并分离脑线粒体，测定线粒体肿胀度、膜流动性、膜磷脂含量、呼吸功能、线粒体呼吸酶、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、Ca^2＋等指标以显示线粒体功能、抗氧化能力的变化。结果表明，EMP辐照后大鼠脑线粒体明显肿胀，膜磷脂降解、膜流动性下降，呼吸功能衰减，呼吸酶、SOD活性降低，Ca^2＋、MDA含量升高。由此认为，EMP可造成大鼠脑线粒体功能受损，其机制可能与脑线粒体膜损伤后继发的自由基生成增加、脑线粒体能量代谢障碍有关。     

低温存活猫肾亚细胞Ca2+浓度变化的X-射线微区分析

随着肾离体低温保存时间的延长，细胞内钙离子沉积而导致细胞损伤，影响肾脏整体功能的保存情况以及移植后肾脏的存活率，本地家猫肾脏离体后冲洗至灰白，然后置于改良Collins II保存液中低温存活，保存0，24，48，72h以后，应用Ca^2 细胞化学探针（Calcium cytochemical probe)及X－射线微区分析技术（X－ray microanalysis of microsections)检测肾小管上皮细胞亚细胞水平的钙离子浓度变化，肾脏经过不同时间体外存活以后，细胞核和内质网中钙离子浓度没有明显的变化，而线粒体和细胞溶质中钙离子浓度显著地呈现出线性升高，结果表明，随着肾脏保存时间延长，细胞溶质钙离子浓度升高源于细胞内储存的钙离子释放，正常生理条件下在细胞信息传递中充当“钙库”的线粒体和内质网在低温导致的细胞溶质内钙离子浓度上升中不表现出钙源特性。     

第三丁基过氧化氢损伤皮层神经元线粒体并诱导凋亡

目的：探讨第三丁基过氧化氢（t-BHP）诱导大鼠皮层神经元凋亡的可能机制。 方法： 体外培养大鼠皮层神经元，MTT法测定细胞存活率，DNA断裂评价细胞凋亡，流式细胞术测定线粒体跨膜电位（ΔΨm），分光光度计法测定细胞内谷胱甘肽（GSH）浓度，Western blot法测定Bcl-2和Bax蛋白和胞浆细胞色素c以及活化型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase-3）和多聚（ADP-核糖）聚合酶（PARP）水平。 结果： tBHP（25－400 μmol/L）可明显抑制皮层神经元的生长，引起ΔΨm下降和线粒体内细胞色素c向胞浆释放，同时细胞内GSH浓度以及Bcl-2蛋白水平下降，Bax蛋白水平增加，caspase-3和PARP得以激活并最终导致神经细胞凋亡。 结论： tBHP引起的氧化应激可通过损伤线粒体诱导皮层神经元凋亡。     

抗CD28＋B7．1单抗共刺激T细胞诱导肝癌细胞凋亡的第二信使系统研究

目的：探讨T淋巴细胞活化、增殖、诱导肝癌细胞凋亡过程中第二信使系统的调控机制。方法：用CD28＋B7．1（CD80）单克隆抗体共刺激T淋巴细胞诱导肝癌细胞（BLE－7402）凋亡,测定不同诱导时间T细胞内cAMP,cGMP和Ca^2 的浓度改变及肝癌细胞凋亡情况。结果：活化的T淋巴细胞中,cAMP浓度在初期短暂升高,继而快速下降,作用于肝癌细胞后逐步回升至1－2倍,而细胞内cGMP的浓度急剧升高6－7倍,Ca^2 浓度也显著增加2－3倍,且均在第4天达最高值,与癌细胞的凋亡呈正相关,结论：T淋巴细胞内第二信使系统cAMP、cGMP和Ca^2 的水平与细胞的活化增殖、杀伤效应密切相关。     

毒胡萝卜素诱导成年小鼠心肌细胞凋亡的实验研究

众所周知，心肌细胞的凋亡参与各种心血管疾病发生及发展的过程，而且，机体内有多种参与细胞凋亡的信号传导途径，其中由肌浆网（sarcoplasmic reticulum，SR）应激引起的信号传导径路的激活越来越引起重视。肌浆网是细胞内参与钙转运的细胞器，肌浆网膜上存在的钙泵（Ca^2＋-ATP酶）可促进细胞质钙进入肌浆网；而肌浆网钙泵抑制剂毒胡萝卜素（thapsigargin，TG）可减少钙内流，降低肌浆网的钙容量，升高胞质内Ca^2＋浓度，从而引起肌浆网应激反应，诱导细胞凋亡。     

淫羊藿,虫草菌比,黄芪防治庆大霉素所致急性肾损害的实验研究

采用腹腔内注射庆大霉素造成大鼠急性小管损伤模型，发现中药淫羊藿，虫草菌丝和黄芪均可以减轻庆大霉素所致的大鼠肾小管及肾间质的损伤，并可拮抗庆大霉素对大鼠肾皮质Ｎａ＾＋－Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶的抑制作用。     

灌流过程中胞内Ca^2＋动态变化研究

离体肾脏在低温条件下的中长期存活是一个复杂的问题。一方面，低温能降低细胞内酶的破坏作用，有利于保持线粒体的功能，是延长离体细胞功能的有效途径。另一方面，低温所导致的能量物质ATP的逐步丢失、钠钾泵活性降低引发细胞水肿和细胞内酸中毒等诸多后果同时也是造成细胞死亡的原因。因此，肾脏结构与功能随着体外维持时间的延长而产生的动态变化是多种因素综合作用的结果。本文采用无Ca^2 成分灌流液、多种钙通道拮抗剂、冰冻切片、钙荧光染色剂、激光共聚焦显微镜(LSCU)X—射线微区分析等多种实验技术相结合，对灌流维持过程中肾小管上皮细胞内Ca^2 浓度的动态变化及其内在的调控机制进行了深入研究。揭示了灌流肾功能动态变化阶段引发细胞损伤的因素，在近曲小管上皮细胞超微结构变化过程中，也观察到了胞内线粒体结构的显著改变。     

抗APO-1单抗促进SEB活化的淋巴细胞凋亡及其与胞内游离Ca2+浓度相关性研究

为探讨抗ＡＰＯ－１单抗处理的金黄色葡萄球菌肠毒素Ｂ（ＳＥＢ）活化的淋巴细胞胞浆中游离Ｃａ２＋浓度的变化，用形态学观察、流式细胞光度术观测了鼠抗人ＡＰＯ－１单克隆抗体对ＳＥＢ活化不同天数的人外周血淋巴细胞凋亡的诱导作用，同时采用Ｆｕｒａ－２／ＡＭ荧光探针检测了ＡＰＯ－１单抗处理的淋巴细胞胞浆内游离Ｃａ２＋浓度。结果表明，抗ＡＰＯ－１单抗对ＳＥＢ活化１ｄ和对照组淋巴细胞无明显的促凋亡作用，但对ＳＥＢ活化５ｄ的淋巴细胞不仅可明显促进其凋亡，而且可使其胞浆游离Ｃａ２＋浓度升高，而Ｚｎ２＋则抑制了抗ＡＰＯ－１单抗的凋亡诱导作用。由此可见，抗ＡＰＯ－１单抗与其特异性抗体结合后可能是通过使胞浆中游离Ｃａ２＋浓度升高，激活了Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋依赖的内源性核酸内切酶而导致ＳＥＢ活化的淋巴细胞凋亡。     

线粒体在老化中作用的研究进展

近年来线粒体在老化发生发展中所起的作用越来越受重视。当线粒体功能异常时，其内的氧化活性物质（ROS）增多，这可引起线粒体自身与细胞肿胀、膜电位下降、细胞内发生钙超载、大分子活性物质受到破坏、生成异常活性物质等等；同时，mtDNA的突变加剧，也可引起线粒体的功能障碍进一步加重。它们影响着细胞代谢，使生物体在细胞水平、组织水平、器官水平受到损伤，最终导致老化。本综述就近年这一方面的进展及其现实意义作以下简述。     

PTSD样大鼠大脑前额皮质神经元COX光电镜变化的研究

目的研究创伤后应激障碍(PTSD)大鼠大脑前额皮质神经元细胞色素氧化酶(COX)的表达变化。方法采用国际认定的SPS方法刺激大鼠,建立PTSD大鼠模型,于SPS刺激后1d、4d、7d取大脑前额皮质组织,不予刺激作为正常对照,应用COX光电镜酶细胞化学技术,进行大鼠大脑前额皮质神经元COX表达的观察。结果PTSD模型建立后1d、4d、7d光镜下神经元细胞质内COX阳性反应产物颗粒弥散分布逐渐增加,电镜下神经元细胞质内线粒体膜结构上COX反应颗粒分布逐渐减少、线粒体嵴肿胀及膜完整性遭到破坏的程度逐渐增加。结论PTSD的发病机制可能与COX活性表达变化相关,线粒体中的COX释放至胞质中,其酶活性发生了改变,使大脑前额皮质有氧代谢功能降低,进而导致大脑前额皮质神经元的细胞能量代谢障碍。     

铅暴露对成骨细胞MC3T3-E1细胞线粒体的影响

目的评价铅暴露对成骨细胞MC3T3-E1线粒体的影响。方法在MC3T3-E1细胞培养瓶中加入不同浓度醋酸铅[Pb(Ac)2]溶液(0、1、10、100μmol/L)培养24 h后,分别测定其线粒体膜电位去极化程度与ATP合成量、胞浆与线粒体内细胞色素c含量以及Caspase-3活性,并利用透射电镜观察细胞线粒体形态变化。结果铅暴露可致成骨细胞MC3T3-E1线粒体膜电位降低,ATP合成减少,细胞内细胞色素c从线粒体到胞浆的释放增加,Caspase-3活性增强,并且呈明显剂量依赖关系。此外,电镜观察可见100μmol/L醋酸铅暴露组细胞线粒体明显肿胀。结论铅暴露可引起成骨细胞MC3T3-E1线粒体功能与结构损伤,从而导致细胞凋亡。     

丹那唑对体外培养的原位与异位子宫内膜细胞生长的影响

应用胶原凝胶细胞培养和传代培养的方法培养原位与异位子宫内膜细胞，并经丹那唑处理在无丹那唑对照培养中，细胞生长良好，形态呈星形，以胞浆突起相互连接。而经两种浓度丹那唑处理后，细胞生长受抑，传代后２４ｈ细胞贴壁力受损，部分细胞呈致死性病理改变，丹那唑作用的超微结构变化包括胞浆内大量空泡与脂滴，溶酶体增多，线粒体肿胀与细胞核不规则，核膜内陷，提示胶凝胶培养系统为较佳的培养子宫内膜细胞的方法，丹那唑可直接     

细胞程序化死亡的线粒体调控

线粒体对细胞程序化死亡有调控作用。程序化死亡细胞可观察线粒体转膜电位的下降，线粒体通透性改变很可能是细胞程序化死亡链条中的关键，由此导致程序经死亡诱导因子的释放。Ｂｃｌ－２基因也与线粒体的调控密切相关。     

TNF-α和 LPS对体外培养血脑屏障内皮细胞胞浆内钙离子浓度的影响

目的：观察脂多糖（Lipopolysaccharid，LPS）和肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor-α，TNF-α)对血脑屏障内皮细胞（Blood-brain barrier endothelial cell，BBBEC）胞浆内钙离子浓度（plasmic inner concentration of calcium，[Ca^2 ]i）的影响。方法：用Fluo-3/AM做为荧光探针对钙离子进行负载，激光扫描共聚焦显微镜观察不同浓度的LPS和TNF-α刺激下BBBEC胞浆内钙离子浓度的变化。结果：在TNF-α刺激下，单个BBBEC[Ca^2 ]i呈浓度依赖性的一过性升高。不同浓度TNF-α引起的BBBEC Ca^2 的荧光强度达高峰的时间基本一致，高峰荧光强度和荧光持续时间随TNF-α浓度的升高而增加。低浓度LPS（1μg/ml和10μg/ml）刺激细胞时，BBBEC[Ca^2 ]i无明显变化，高浓度LPS刺激细胞时，可见[Ca^2 ]i呈短暂性升高，随后下降。结论：TNF-α和LPS在极短的时间内导致BBBEC[Ca^2 ]i的升高，激活BBBEC，这一过程是缺血性脑损伤极早期的重要病理机制之一。     

弱氧化修饰低密度脂蛋白诱导ECV304组织因子基因表达及银杏内酯B的抑制作用

为研究弱氧化修饰低密度脂蛋白（mmLDL)对ECV304组织因子（TF）蛋白含量和mRNA水平的影响、对胞浆游离钙离子[Ca^2 ]i的影响，以及银杏内酯B等的干预作用。采用ELISA法检测细胞内TF蛋白含量，用RT－PCR法检测细胞内TF mRNA水平，用激光共聚焦显微镜观察[Ca^2 ]i的变化。结果显示，40mg/L mmLDL作用ECV304 4h，能使TF蛋白含量及mRNA水平显著增加，并迅速升高[Ca^2 ]i。抗氧化剂银杏内酯B及PKC抑制剂Staurosporine可拮抗mmLDL的上述诱导反应。以上结果提示，mmLDL可诱导ECV304 TF表达，Ca^2 与PKC参与mmLDL诱导ECV304 TF基因表达过程，并且银杏内酯B可抑制mmLDL的此种效应。     

糖皮质激素诱导大鼠胸腺细胞程序性死亡研究

用甲基强的松龙（ＭＰＳ）与大鼠胸腺细胞共同培养４ｈ后胸腺细胞超微结构显示胞浆及核固缩，形成大量空泡，而线粒体等细胞器结构变化不大，ＤＮＡ电泳分析有大量小分子片段，分子量主国１８０ｂｐ的整倍数，呈梯状结构。结果提示ＭＰＳ可诱导胸腺细胞程序性死亡。     

DAF与CD3协同刺激人外周血T细胞活化的实验研究

目的：探讨人促衰变加速因子（decay-accelerating factor,DAF)作为共刺激分子参与T细胞活化的作用机制。方法：观察3株针对DAF不同SCR的单抗单独使用或者与抗人CD3单抗联合使用时，对人外周血T细胞增殖、IL－2分泌以及胞浆Ca^2 水平的影响。结果：所用3株抗人DAF单抗不能活化T细胞，而抗人DAF单抗与抗人CD3单抗可以协同刺激T细胞增殖，促进IL－2分泌以及提高胞浆Ca^2 水平。结论：抗人DAF单抗与抗人CD3单抗可协同刺激人外周血T细胞活化。     

PLC—γ1对PDGF介导的细胞内钙流的影响

磷酸脂酶C－γ1（PLC－γ1）可催化PIP2生成DAG和IP3，后二者被认为是细胞内第二信使，其中IP3可使细胞内钙库的Ca^2 释放到胞浆。应用无内源性PLC－γ1小鼠成纤维细胞株，观察在血小板生长因子（PDGF）作用下细胞内钙流的产生情况，发现缺失PLC－γ1的细胞与正常细胞都出现细胞内钙动员。但前得钙流产生较后者值小且峰值出现较晚。这意味着PLC－γ1在PDGF作用下成纤维细胞内钙流的产生过程中有重要作用，当其缺乏时功能可被其它途径代偿。