不同中医证型乳腺增生组织蛋白质组的研究

目的:应用凝胶内差异显示电泳技术和质谱技术研究不同中医证型乳腺增生组织蛋白质组。方法:提取不同证型乳腺增生组织总蛋白,分别用Cy3或Cy5标记,每对Cy3和Cy5标记样品都与1个Cy2标记的内标等量混合,上样于同一胶中进行电泳分离,经不同光激发下扫描得到不同样品的蛋白质组图谱。所获得的图谱经DeCyder 6.5软件进行分析,筛选表达量有显著差异的蛋白质进行质谱鉴定。结果:12个蛋白质在不同乳腺增生组织中有显著差异。其中,α-B crystallin,Cyclophilin A,Cypa在冲任失调型中表达量最高,肝郁气滞型次之,在痰瘀互结型中表达量最低。转甲状腺素蛋白变体,Pkci底物类似物、血红蛋白、脱氧血红蛋白和血红蛋白α链在肝郁气滞型中表达量最高,冲任失调型次之,在痰瘀互结型中表达量最低。而Cu,Zn-超氧(化)物歧化酶和转甲状腺素蛋白在肝郁气滞型、痰瘀互结型和冲任失调3型乳腺增生组织中表达依次降低。结论:这12个蛋白质可能与乳腺增生病不同证型相关,可以作为乳腺增生病临床中医辨证论治的候选客观指标。     

肝郁气滞型乳腺增生组织蛋白质组的研究

目的：应用凝胶内差异显示电泳技术和质谱技术进行肝郁气滞型乳腺增生组织的蛋白质组研究。方法：提取正常乳腺组织及肝郁气滞型乳腺增生组织总蛋白,分别用cy3或Cy5标记。每一对Cy3和Cy5标记样品都与一个Cy2标记的内标等量混合,上样于同一胶中进行电泳分离,经不同光激发下扫描得到不同样品的蛋白质组图谱。所获得的图谱经DeCydcr6．5软件进行分析,筛选表述量有差异的蛋白质进行质谱鉴定。结果：在肝郁气滞型乳腺增生组织中,有8个蛋白质表达水平具显著变化。其中S-腺苷谷胱甘肽水解酶、蛋白体5、超氧化物岐化酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、过氧化物酶5、肽酰脯氨酰顺反式异构酶表达量增加,而三联组氨酸核酸结合蛋白1表达量显著下降。结论：8种差异蛋白质可能与肝郁气滞型乳腺增生疾病的发生与发展有关。     

中医不同证型乳腺增生患者血清蛋白质组的研究

目的：应用凝胶内差异显示电泳和质谱技术研究不同证型乳腺增生病患者血清蛋白质组。方法：收集正常人及不同证型乳腺增生病患者血清,去除高丰度蛋白质后分别用Cy3或Cy5标记,每一对Cy3和Cy5标记样品都与一个Cy2标记的内标等量混合,上样于同一胶中进行电泳分离,经不同光激发下扫描得到不同样品的蛋白质组图谱。所获得的图谱经DeCyder6.5软件进行分析,筛选表达量有显著差异的蛋白质进行质谱鉴定。结果：与正常人相比,在乳腺增生患者血清中抗凝血酶lii、富含亮氨酸的α-2糖蛋白、HCCR结合蛋白2、结合珠蛋白2和转甲状腺蛋白及其变异体表达量增加。而SP40,40、Ras association and pleckstrin homology domains 1 iso-form3表达量下降。在不同证型乳腺增生患者血清中,抗凝血酶lii和SP40,40在肝郁气滞型表达量最高,痰瘀互结型次之,而冲任失调型表达量少;HCCRBP2在痰瘀互结型中表达量最高,在肝郁气滞型中表达量最低;转甲状腺素蛋白变异体在肝郁气滞型、冲任失调型和痰瘀互结型中表达依次降低。结论：这些蛋白质可能与乳腺增生病不同证型相关,可以作为乳腺增生病临床中医辨证论治的候选客观指标。     

甲状腺切除的肾阳虚大鼠肝线粒体蛋白质组的研究

目的:应用差异蛋白质组学技术研究肾阳虚大鼠肝线粒体蛋白质组.方法:正常大鼠和甲状腺切除的肾阳虚模型大鼠的肝线粒体蛋白质经荧光染料Cy3、Cy5标记,与等量Cv2标记的内标混合后在同一胶中进行电泳分离,经不同光激发后扫描得到不同样品的蛋白质组图谱.经DeCvder6.5软件进行差异蛋白质组分析,并对差异蛋白质进行质谱鉴定.结果:在肾阳虚大鼠肝线粒体中,氨甲酰磷酸合成酶Ⅰ、乳铁传递蛋白、热休克蛋白60、过氧化氢酶、甲基丙二酸半醛脱氢酶、类钙激活中性蛋白酶、电子传递黄素蛋白、酯酶同工酶ESl、谷胱甘肽过氧化物、ATP合成酶和ATP酶质子通道蛋白表达量均增加,而二氢硫辛酰胺支链酰基转移酶、脂酰辅酶A脱氢酶、鸟氨酸转氨酶和鸟苷酸结合调节蛋白表达量降低.结论:肾阳虚大鼠可能因糖类和脂类物质分解代谢受抑以及细胞内信号转导异常而出现虚寒症状.     

RAW264.7细胞中姜黄素抗动脉粥样硬化作用 机制的蛋白质组学研究

目的:应用凝胶内差异显示电泳技术和质谱技术研究姜黄素抗动脉粥样硬化的作用机制.方法:RAW264.7细胞和经过25 μmol.L-1姜黄素处理的RAW264.7细胞蛋白质经荧光染料Cy3,Cy5标记,与等量Cy2标记的内标混合后在同一胶中进行电泳分离,经不同光激发后扫描得到不同样品的蛋白质组图谱.经DeCyder6.5软件进行差异蛋白质组分析,并对差异蛋白质进行质谱鉴定.结果:ATP合成酶,MHC class Ⅱ,肌球蛋白轻链,细胞色素b5表达量增加,而磷酸二酯酶4D,eIF-3,Hnrpf蛋白,波形蛋白,核仁磷蛋白1,Ran结合蛋白1表达量降低.结论:姜黄素抗动脉粥样硬化作用的机制十分复杂,是其增强细胞抗炎、抗氧化能力以及抑制胆固醇转运,降低细胞内胆固醇积累等因素共同作用的结果.另外,姜黄素可能通过调节细胞的分化及凋亡起到抗肿瘤的作用.     

温补肾阳药对肾上腺切除的肾阳虚大鼠肝线粒体蛋白质组的影响

目的 应用凝胶内差异显示电泳技术和质谱技术研究温补肾阳药对肾上腺切除的肾阳虚大鼠肝线粒体蛋白质组的影响。方法：通过切除两侧肾上腺造成肾阳虚模型大鼠和温补肾阳药治疗大鼠肝线粒体蛋白质经荧光染料Cy3、Cy5标记，与等量Cy2标记的内标混合后在同一胶中进行电泳分离，经不同光激发后扫描得到不同样品的蛋白质组图谱。利用DeCyder软件进行差异蛋白质组分析，筛选出18个差异蛋白质进行质谱鉴定，其中15个蛋白质得到鉴定。结果：经温补肾阳药治疗后，肾阳虚动物氨甲酰磷酸合成酶、过氧化氢酶、二氢硫辛酸脱氢酶、热休克蛋白60、亚硫酸氧化酶、ATP合成酶、醛脱氢酶、丙酮酸脱氢酶、3-巯基丙酮酸转硫酶、腺苷酸激酶同工酶5、谷胱甘肽过氧化物酶表达均增高。结论：温补肾阳药可能通过加快糖、脂类、蛋白质和核酸分解代谢，加快ATP合成以及清除自由基和过氧化物，维持线粒体膜稳定性，从而起到治疗肾阳虚的作用。     

温补肾阳药对甲状腺切除的肾阳虚大鼠肝线粒体蛋白质组的影响

目的:研究温补肾阳药对肾阳虚动物肝线粒体蛋白质组的影响.方法:12只SD大鼠,随机分为3组,每组4只.模型组和治疗组切除两侧甲状腺,正常组做相应的假手术,但不切除甲状腺.喂养7 d后模型组和治疗组大鼠出现拱背耸毛、大便稀溏等肾阳虚的症状.从第8天开始,治疗组每天喂饲温补肾阳药1次,给药剂量6.7 g·kg~(-1),其他2组喂饲等体积的生理盐水,连续6 d后,断头处死3组大鼠,分离提取其肝线粒体蛋白质,分别用荧光染料Cy3,Cy5标记,每个Cy3及Cy5标记的样品与等量Cy2标记的内标混合后在同一块凝胶中进行电泳分离,经不同光激发后扫描得到不同样品的蛋白质组图谱.经DeCyder 6.5软件进行差异蛋白质组分析,并对差异蛋白质进行质谱鉴定.结果:双向电泳后,平均每块胶检测到997个蛋白质点,其中所有图谱共有的点有687个,并从中筛选到22个差异蛋白,其中热休克蛋白60、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物、氨甲酰磷酸合成酶I,ATP合成酶、乳铁传递蛋白、ATP酶质子通道蛋白、电子传递黄素蛋白和类钙离子激活中性蛋白酶12在肾阳虚状态下表达量均增加,而二氢硫辛酰胺支链酰基转移酶、脂酰辅酶A脱氢酶、鸟氨酸转氨酶和GTP结合调节蛋白在肾阳虚状态下表达量均降低.经温补肾阳药治疗后,热休克蛋白60、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物、ATP合成酶、乳铁传递蛋白、ATP酶质子通道蛋白、电子传递黄素蛋白二氢硫辛酰胺支链酰基转移酶、脂酰辅酶A脱氢酶和GTP结合调节蛋白表达量均增加,而氨甲酰磷酸合成酶I和类钙离子激活中性蛋白酶12表达量减少.结论:温补肾阳药可能通过调节物质代谢、保护线粒体膜稳定性和维护细胞内信号传导而起到治疗肾阳虚的作用.     

温补肾阳药对丙基硫氧嘧啶引起肾阳虚大鼠肝线粒体蛋白质组的影响

目的：应用凝胶内差异显示电泳技术研究温补肾阳药对药物性肾阳虚动物肝线粒体蛋白质组的影响。方法：正常大鼠、通过喂饲丙基硫氧嘧啶造成肾阳虚模型大鼠和温补肾阳药治疗大鼠的肝线粒体蛋白质经荧光染料Cy2、Cy3、Cy5标记，等量混合后在同一胶中进行电泳分离，经不同光激发后扫描得到不同样品的蛋白质组图谱。经DeCyder软件进行差异蛋白质组分析，筛选出16个差异蛋白质。经质谱测定及数据库比对，其中10个蛋白质得到鉴定。结果：肾阳虚时氨甲酰磷酸合成酶1、二氢硫辛酰胺支链酰基转移酶、泛醇-细胞色素C还原酶核心蛋白I、异戊酰辅酶A脱氢酶、热休克蛋白60、琥珀酰CoA合成酶、羟氨基辅酶A脱氢酶／酮脂酰辅酶乙酰辅酶A脱氢酶α亚基、鸟氨酸转氨甲酰酶、谷胱甘肽过氧化物酶表达量均增加，而鸟氨酸氨基转移酶表达量降低。应用温补肾阳药治疗后，上述蛋白质的表达量均有不同程度的纠正。结论：喂饲温补肾阳药的肾阳虚模型大鼠糖、脂类和蛋白质代谢均得以改善，可能与温补肾阳药维护线粒体膜稳定性有关。     

束缚所致肝郁证动物模型肝组织蛋白质组的差异表达研究

目的：通过运用组织蛋白质组学技术和方法,寻找肝郁证动物模型肝组织差异表达蛋白质.方法：以束缚制动法制备肝郁证大鼠模型,采用组织溶解方法分步抽提大鼠肝脏组织蛋白质,对获得的蛋白质进行二维凝胶电泳（2-DE）分离、胶体染色,分析模型组和对照组蛋白质分子的差异表达,并以基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）检测肽质量指纹,在数据库中检索出相应的蛋白质.结果：在大鼠肝组织胶体考染的2-DE图谱上,约能辨识出300余个清晰的蛋白质斑点,共找出3个与肝郁证辨证相关的肝组织差异表达蛋白,质谱出峰率达100%,检索结果分别为芳基硫基转移酶、烯酰辅酶A水合酶和转甲状腺素蛋白.结论：肝主疏泄功能的正常可能和实体肝组织中的特异表达蛋白质--芳基硫基转移酶、烯酰辅酶A水合酶和转甲状腺素蛋白的不同表达密切相关.     

红芪多糖对S_(180)瘤细胞化疗协同增效作用的蛋白质组学分析

目的:分析红芪多糖(Radix Hedysari polysaccharides,HPS)对S180瘤细胞化疗协同增效作用的差异蛋白质。方法:以环磷酰胺(Cyclophsphamide,Cy)和HPS联合Cy治疗荷瘤小鼠后提取瘤细胞总蛋白,用双向电泳对蛋白质进行分离,使用PDQuest 8.0软件对双向电泳图谱进行差异分析,通过质谱技术鉴定差异明显的蛋白点,并用蛋白免疫印迹方法对其中1个蛋白质进行验证。结果:HPS联合Cy组中有24个蛋白点发生明显改变,经质谱和Mascot软件分析,成功鉴定了5个蛋白质,分别为热休克蛋白84(HSP90β)、载脂蛋白A、白蛋白、热休克蛋白β1(HSP27)、未命名蛋白,其中1个高表达,4个低表达。蛋白印迹验证与蛋白质组结果一致。结论:通过蛋白质组学技术,发现了HPS对S180小鼠瘤细胞化疗增效作用的靶标蛋白,这些蛋白质涉及能量代谢、氧化应激反应和凋亡信号转导。