血液病患者输血与庚型肝炎病毒感染的研究

目的：了解血液病患者输血后的庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染情况。方法：对６３例血液病患者采用ＲＴＰＣＲ方法检测ＨＧＶＲＮＡ、丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ，应用ＥＬＩＳＡ方法检测抗ＨＧＶ、ＨＢｓＡｇ。结果：ＨＧＶＲＮＡ阳性率为７．９％，抗ＨＧＶ阳性率６．３％；ＨＣＶＲＮＡ阳性率为４６．０％。ＨＧＶ感染通常伴有ＨＣＶ感染及丙氨酸转氨酶升高。ＨＧＶ感染与输血量有关，与血液病种类无关。结论：血液病输血可引起ＨＣＶ、ＨＧＶ的传播     

不同血清学标志血清中HBV DNA和HCV RNA的分析研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测４８１例乙肝血清学五项指标至少一项阳性血清中ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ，结果显示ＨＢＶＤＮＡ的检出率为９１．５％，ＨＣＶＲＮＡ的检出率为１５．４％，并提示（１）当乙肝患者血清中抗ＨＢｅ阳性甚至抗ＨＢｓ阳性时，仍有相当部分的ＨＢＶ存在且仍在复制；（２）ＨＢＶ和ＨＣＶ感染可相互增加其易感性；ＨＢｓＡｇ阳性与否与抗ＨＣＶ可能有一定关系；（３）ＰＣＲ检测ＨＢＶＤＮＡ、ＨＣＶＲＮＡ具有较高的敏感性。     

逆转录套式ＰＣＲ检测丙型肝炎病毒感染者ＨＣＶ ＲＮＡ

目的　探讨人血清和外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ与血清ＩｇＧ和ＩｇＭ抗体联合检测对丙型肝炎的诊断价值。方法对以ＥＬＩＳＡ方法检测所得的４６例ＨＣＶ—ＩｇＧ阳性的标本用逆转录套式聚合酶锭反应（ＲＴ—ＮｅｓｔｅｄＰＣＲ）检测血清和ＰＢＭＣ中ＨＣＶＲＮＡ，同时用ＥＬＩＳＡ方法检测血清中ＨＣＶ—ＩｇＭ。结果血清中有１７例ＨＣＶ　ＲＮＡ阳性和６例ＨＣＶ—ＩｇＭ阳性，而ＰＢＭＣ中有１９例ＨＣＶＲＮＡ阳性。结论血清中ＨＣＶ—ＩｇＭ可作为丙型肝炎的初筛诊断，ＨＣＶ—ＩｇＭ可作为ＨＣＶ近期感染的指标，但二者均不能准确反映病毒在体内的存在情况，而套式ＰＣＲ方法检测ＨＣＶＲＮＡ可直接反映ＨＣＶ在体内的活动情况，其中ＰＢＭＣ中检测ＨＣＶＲＮＡ的阳性率高于血清，提示ＨＣＶ可能在ＰＢＭＣ中潜伏乃至复制。     

干扰素治疗丙型肝炎的临床及抗病毒效应研究

１５例急性、５２例慢性丙肝在干扰素治疗２４周后，血清ＡＬＴ复常率为８０％与７５％，ＨＣＶ ＲＮＡ阴转率为８０％与６９．２％，停药后追踪２４周，持续ＡＬＴ正常并ＨＣＶ－ＲＮＡ阴转（称为完全反应、ＣＲ）者有５３．３％与４２．３％，均明显高于急、慢性对照组的疗效（治疗结束时ＡＬＴ复常率急性对照组为３６．４％，慢性对照组为０。ＨＣＶ－ＲＮＡ阴转为２／１１及３／２０，停药后全部对照组均无１例呈ＣＲ者），统计     

聚合酶链反应检测再生障碍性贫血血清中乙型和丙型肝炎病毒

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测了３７例非肝炎相关再生障碍性贫血（ＮＨＡＡ）和１８例肝炎相关再生障碍性贫血（ＨＡＡ）血清中的乙型肝炎病毒ＤＮＡ（ＨＢＶＤＮＡ）、丙型肝炎病毒ＲＮＡ（ＨＣＶＲＮＡ）。结果显示：ＮＨＡＡ的ＨＢＶＤＮＡ检出率为１３．５％（５／３７），ＨＡＡ为２２．２％（４／１８），两者比较Ｐ＞０．０５。ＮＨＡＡ的ＨＣＶＲＮＡ检出率为２．７％（１／３７），ＨＡＡ为３８．９％（７／１８），两者比较Ｐ＜０．０１。丙型肝炎相关再生障碍性贫血的预后较差。提示：ＨＣＶ感染与ＨＡＡ关系密切。     

肝组织HCV—NS3抗原与HCV感染血清不同模式的关系及临床意义

采用逆转录套式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎｅｓｔｅｄ ＰＣＲ）和ＥＬＩＳＡ方法检测血清ＨＣＶ ＲＮＡ、抗－ＨＣＶ，采用鼠单克隆抗体ＰＡＰ方法检测肝组织内ＨＣＶ－ＮＳ３抗原。结果发现被检测的４５例丙型肝炎患者随着病情加重和病程延长，血清抗－ＨＣＶ和ＨＣＶ ＲＮＡ及肝组织ＨＣＶ－ＮＳ３抗原阳性率逐步增高；某些患者抗－ＨＣＶ和ＨＣＶ ＲＮＡ阳性结果不一致；血清ＨＣＶ ＲＮＡ阳性肝组织ＨＣＶ－ＮＳ３阳性率明显同     

血透患者检测抗HCV IgM的临床意义

为探讨丙型肝炎ＩｇＭ抗体测定在血液透析患者中的临床意义,采秀间接ＥＬＩＳＡ法检测抗ＨＣＶ ＩｇＭ。同时采用ＥＬＩＳＡ测抗ＨＣＶ ＩｇＧ,ＲＴ－ＰＣＲ法测ＨＣＶ ＲＮＡ,并进行比较。结果示６２例血液透析病人中,抗ＨＣＶ ＩｇＭ阳性２７例（４３．６％）,抗ＨＣＶ ＩｇＧ阳性２９例（４６．８％）,ＨＣＶ ＲＮＡ阳性３４例（５４．８％）,任一项阳性３７例（５９．７％）;抗ＨＣＶ ＩｇＭ与ＨＣＶ ＲＮＡ检测     

逆转录－套式PCR检测血清中丙肝病毒RNA

利用与丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因组５＇非编码区保守序列同源的套式引物，建立了检测血清中ＨＣＶＲＮＡ的聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，由于在引物设计中选择了最保守的区域且避开了与黄病毒属的同源序列，保证了ＰＣＲ检测的灵敏度和特异性。经逆转录和两轮ＰＣＲ扩增，可检出１×１０－３ｕｌ血清中的ＨＣＶＲＮＡ。研究了影响ＨＣＶＲＮＡＰＣＲ检测的各种因素，并对ＲＮＡ分离及ＲＴ－ＰＣＲ反应体系进行了优化，在此基础上研制了ＨＣＶ的ＰＣＲ检测试剂盒。     

磁捕获RNA技术在丙型肝炎诊断中的应用

采用磁捕获ＲＮＡ技术，结合逆转录－多聚酶链反应检测１００例非甲非乙型肝炎患者血清中ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性５４例。同样病例用第二代ＥＬＩＳＡ试剂检测抗－ＨＣＶ阳性４０例。在６０例抗－ＨＣＶ阴性者，ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性率３８％。ＨＣＶ－ＲＮＡ和抗ＨＣＶ阳性共６３例，其中有血及血制品应用史者３９例。     

聚合酶链反应检测再生障碍性贫血清中乙型和丙型肝炎病毒

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测了３７例非肝炎相关再生障碍性贫血（ＮＨＡＡ）和１８例肝炎相关再生障碍性贫血（ＡＨＨ）血清中的乙型肝炎病毒ＤＮＡ（ＨＢＶ ＤＮＡ）、丙型肝炎病毒ＲＮＡ（ＨＣＶ ＲＮＡ）。结果显示：ＮＨＡＡ的ＨＢＶ ＤＮＡ检出率为１３．５％（５／３７），ＨＡＡ为２２．２％（４／１８），两比较Ｐ＞０．０５。ＮＨＡＡ的ＨＣＶ ＲＮＡ检出率为２．７％（１／３７），ＨＡＡ为３８．９％（７／１８     

亚甲蓝光敏法对人血浆中病毒的灭活研究

向人血浆中加入１μｍｏｌ／Ｌ亚甲蓝,以１００００ｌｘ强度的溴钨灯光照射５ｍｉｎ,可灭活１０６５ＴＣＩＤ５０的水泡性口炎病毒与１０７４１ＴＣＩＤ５０的辛德毕斯病毒;作用２ｍｉｎ可灭活１０５０９ＴＣＩＤ５０的人免疫缺陷１型病毒。但作用６０ｍｉｎ仍不能破坏ＨＢｓＡｇ抗原性。     

Two pathogen reduction technologies—methylene blue plus light and shortwave ultraviolet light—effectively inactivate hepatitis C virus in blood products

BACKGROUND: Contamination of blood products with hepatitis C virus (HCV) can cause infections resulting in acute and chronic liver diseases. Pathogen reduction methods such as photodynamic treatment with methylene blue (MB) plus visible light as well as irradiation with shortwave ultraviolet (UVC) light were developed to inactivate viruses and other pathogens in plasma and platelet concentrates (PCs), respectively. So far, their inactivation capacities for HCV have only been tested in inactivation studies using model viruses for HCV. Recently, a HCV infection system for the propagation of infectious HCV in cell culture was developed. STUDY DESIGN AND METHODS: Inactivation studies were performed with cell culture–derived HCV and bovine viral diarrhea virus (BVDV), a model for HCV. Plasma units or PCs were spiked with high titers of cell culture–grown viruses. After treatment of the blood units with MB plus light (Theraflex MB‐Plasma system, MacoPharma) or UVC (Theraflex UV‐Platelets system, MacoPharma), residual viral infectivity was assessed using sensitive cell culture systems. RESULTS: HCV was sensitive to inactivation by both pathogen reduction procedures. HCV in plasma was efficiently inactivated by MB plus light below the detection limit already by 1/12 of the full light dose. HCV in PCs was inactivated by UVC irradiation with a reduction factor of more than 5 log. BVDV was less sensitive to the two pathogen reduction methods. CONCLUSIONS: Functional assays with human HCV offer an efficient tool to directly assess the inactivation capacity of pathogen reduction procedures. Pathogen reduction technologies such as MB plus light treatment and UVC irradiation have the potential to significantly reduce transfusion‐transmitted HCV infections.     

荧光与亚甲蓝联用对血浆中病毒灭活的研究

以细胞感染试验、凝血法、交叉免疫电泳等技术 ,观察荧光与亚甲蓝联用对血浆中水泡性口炎病毒 (VSV)和辛德比斯病毒 (SV)的灭活效果及血浆蛋白的变化。结果 ,向盛装在聚氯乙烯袋内的血浆中加 1μmol/L亚甲蓝并经荧光 (30 0 0 0Lux)照射 30min ,可将血浆中滴度 >7TCID50 (lg)的VSV和SV灭活。消毒后 ,血浆中的Ⅷ :C、Ⅸ :C、纤维蛋白原的回收率 >75% ,白蛋白、球蛋白的回收率 >85% ,蛋白免疫原性无变化     

亚甲蓝光敏消毒法对人血浆部分成分影响的试验观察

向人血浆中加入亚甲蓝染料浓度为１ μｍｏｌ／Ｌ,再以１０ ０００ ｌｕｘ 强度的溴钨灯光照射１０ ｍｉｎ,血浆中主要成分的生化指标只有胆红素与尿酸两种代谢产物有明显降低,其余均无明显变化,各种酶活性未发生明显改变。血浆蛋白分子量ＳＤＳ－ ＰＡＧＥ与盘状ＰＡＧＥ电泳未见明显异常。微量免疫电泳与免疫交叉电泳也未见血浆成分免疫原性改变。     

亚甲蓝光敏消毒法对血浆中凝血因子与酶活性的影响

采用凝固法与生化分析法 ,对亚甲蓝光敏消毒法处理后人血浆中凝血因子与酶活性所受影响进行了观察。向人血浆中加入 1μmol/L亚甲蓝 ,以 2 0 0 0 0lx强度的红色光 (波长为 6 4 0～ 70 0 μm)照射 30min ,血浆中凝血因子Ⅷ促凝活性的破坏低于 2 0 %可接受水平 ,活化部分凝血酶时间 (APTT)、凝血酶原时间(PT)的延长略超过正常允许值 (在照射 2 0min时仍未超过 ) ,血浆中谷丙转氨酶、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶和天冬氨酸转氨酶的活性均无明显变化     

亚甲蓝/光化学法灭活病毒对血浆成分的影响

背景：对血液进行病毒灭活是保障安全输血的措施之一,亚甲蓝/光化学法灭活人血浆中病毒的效果已被证实,但其对血浆成分影响的报道很少。目的：观察亚甲蓝光化学法病毒灭活血浆对血液成分结构和功能的影响。方法：随机选择40份采血后6h内400mL全血制备的新鲜血浆称质量留样,然后与亚甲蓝病毒灭活过滤器无菌连接,亚甲蓝的终浓度在0.9～1.3μmol/L。将加入亚甲蓝的血浆置入4℃病毒灭活箱的搁架上,摆动频率60次/min,利用32000～38000Lx光照强度的可见光4℃照射35min,将光照后的血浆通过病毒灭活过滤器滤除亚甲蓝和残余白细胞,混匀后留样10mL,立即置于-80℃冰箱冻存。检测照射前后样品的血浆量、亚甲蓝浓度、FⅧ∶C、FⅤ∶C、VWF、Fib含量的变化。结果与结论：血浆病毒灭活后血浆容量、FⅧ∶C、FⅤ∶C、VWF、Fib的回收率分别为（96.39±1.73）%、（82.55±9.25）%、（81.03±15.27）%、（93.25±6.17）%、（81.61±14.25）%。亚甲蓝光化学法灭活血浆病毒对血浆中大多数成分的影响不明显,可以满足临床安全输血的需求。     

亚甲蓝/光化学灭活病毒方法对血浆成分的影响

亚甲蓝／光化学法可有效地灭活血浆中的病毒。为进一步观察该法对灭活血浆中诸成分的免疫活性及生化指标的影响，本研究用灭活病毒的条件处理单采血浆。将合有1μmol/L亚甲蓝的血浆置于照度为40000lux的可见光下，在室温条件下处理1小时。结果表明，除凝血因子调，PT和APTT有一定程度降低外，其它血浆蛋白活性未见明显变化，血浆中的白蛋白、葡萄搪、多种无机盐含量及血浆pH值未受影响。处理后的血浆经不同电泳及免疫化学技术分析，未见新的抗原产生，电泳迁移率与未处理组相同。结论：亚甲蓝／光化学法对大多数血浆成分的影响不明显。     

亚甲蓝光化学灭活对血浆丙型肝炎病毒基因组核酸降解的研究

目的研究丙型肝炎病毒(HCV)基因组核酸在亚甲蓝光化学法(methelene blue photochemistry,MB-P)灭活病毒前后的变化,在全基因组水平分析MB-P对基因组各结构区段的降解作用。方法含HCV的血浆中加入终浓度为1.0μmol/L的MB,经约30000Lux强度的荧光照射后,在不同作用时间点取样;将HCV全基因组序列分为互相重叠的8个区段,分别进行RT-PCR,分析基因组核酸的完整性;同时运用实时定量PCR(real time-PCR,RT-PCR)技术观察核酸降解的动力学变化。结果基因组各区段RT-PCR结果发现,经过不同的光照时间,HCV基因组各区段的稳定性不同,第2、4、5、6区段对MB-P作用较敏感,基因组5’端区段和3’端区段经MB-P作用后的稳定性高于基因组其它区段;RT-PCR结果显示,随着光照时间延长,可被检测到的病毒核酸拷贝数逐渐下降。结论MB-P灭活过程中HCV基因组核酸被降解,而且基因组不同区段对光化学作用的反应性不同,提示RNA降解可能是病毒灭活的重要机制;检测病毒核酸稳定性以监测病毒灭活具有一定临床实用价值。     

亚甲蓝/光化学法对血浆中IgG的影响

目的　探讨亚甲蓝 /光化学法对血浆中IgG的影响 ,评价含SARS抗体的病毒灭活血浆临床应用的可行性。方法　将不同浓度的亚甲蓝分别加入人血浆中 ,经JY I型血浆病毒灭活仪处理后 ,用Native PAGE和SDS PAGE测定IgG含量、亚基数目和分子量 ,用Western blot检测其抗原性。 结果　经亚甲蓝 /光化学法处理后血浆的IgG含量、亚基数目、分子量和抗原性均未见变化。 结论　亚甲蓝 /光化学法对血浆中IgG的影响较小 ,含SARS抗体的病毒灭活血浆应用于临床是可行的     

亚甲蓝／光照法病毒灭活血浆的制备及应用评价

目的探讨亚甲蓝／光照法病毒灭活血浆的制备及其临床应用评价。方法随机抽取200份病毒灭活血浆,检测灭活前后的血浆容量、总蛋白、凝血因子及亚甲蓝的残余量;选取15756人份HBsAg、抗-HCV、抗-HIV酶联免疫吸附法检测阴性者的血浆,在病毒灭活前后分别进行HBV、HCV、HIV的核酸检测;临床随机抽取200例输注病毒灭活血浆的患者,观察病毒灭活血浆输注后是否出现输血不良反应。结果经亚甲蓝／光照法进行灭活处理的血浆,血浆容量达到（227．34±5．21）g,回收率达到（96．67±2．34）％;血浆总蛋白、血浆凝血因子（Ⅷ因子和纤维蛋白原）回收率分别达到（88．69±3．32）％,（86．84±2．16）％和（84．62±1．86）％,与处理前相比,差异无统计学意义（P〉0．05）;血浆经病毒灭活后亚甲蓝的残余量为（1．17±0．05）μmol／L,而过滤后残余量减少至（0．16±0．03）μmol／L,去除率达到86．32％;对15756人份血浆进行HBV、HCV、HIV核酸检测,发现HBV阳性23例,HIV阳性1例,阳性率为1．52‰,进行病毒灭活后,HBV、HCV、HIV核酸检测均为阴性。病毒灭活血浆输注人体后无不良反应发生。结论采用亚甲蓝／光照法进行病毒灭活的血浆,临床使用较安全;病毒灭活血浆能够有效降低经输血传播疾病的危险性,且不良反应较小。