胃癌多药耐药蛋白的相互作用蛋白鉴定及分子机制

目的:研究多药耐药蛋白(multidrug resistance protein,MRP)的相互作用蛋白及其对肿瘤耐药性的影响.方法:采用免疫沉淀结合质谱方法分离鉴定MRP的相互作用蛋白,并对其中的耐药相关蛋白之一Annexin A5进行功能研究,Western blot及siRNA干扰技术分析MRP、Annexin A5蛋白表达的变化、相关性及胃癌SGC-7901细胞的耐药性变化.结果:经免疫沉淀结合质谱方法分离鉴定发现了14个MRP的相互作用蛋白,其中AnnexinA5为其中得分最高的蛋白;Westernblot检测显示耐药细胞株SGC-7901/DDP中MRP、AnnexinA5蛋白表达均高于SGC-7901和siRNA-SGC-7901/DDP,siRNA干扰AnnexinA5表达后,siRNA-SGC-7901/DDP中MRP蛋白表达下调,MRP、AnnexinA5蛋白在SGC-7901和siRNA-SGC-7901/DDP之间表达无明显差异;MTT法结果显示经siRNA干扰SGC-7901/DDP后,顺铂、5-Fu和紫杉醇作用后的IC50值明显减少,对其的敏感性分别增加了36倍、17倍和4倍.结论...     

胃癌细胞多药耐药相关基因的表达与其侵袭转移能力的相关性研究

目的探讨胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901的多药耐药相关基因的表达与其侵袭转移能力的关系。方法采用实时荧光定量PCR技术检测胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901的多药耐药相关基因(包括ABCB1、MMP2、CDH1、CD44)的mRNA表达水平。采用细胞划痕实验、Transwell迁徙实验评价两株胃癌细胞的侵袭转移能力,进而探讨胃癌细胞多药耐药相关基因的表达与侵袭转移能力的关系。结果荧光定量PCR实验发现胃癌细胞株BGC-823的ABCB1、CDH1、CD44基因表达较SGC-7901高,而MMP2基因的表达在SGC-7901中较高。细胞划痕实验及Transwell迁徙实验显示胃癌细胞株BGC-823的迁徙能力比SGC-7901强。结论胃癌细胞的多药耐药与侵袭转移有一定的关系,CD44的高表达在胃癌细胞的侵袭转移中可能起主要作用。     

下调miRNA-214表达抑制胃癌SGC-7901/DDP细胞顺铂耐药、迁移和上皮间质转化

背景胃癌(gastric cancer, GC)是常见的消化系统肿瘤之一,而肿瘤化疗耐药是制约GC癌治疗效果的瓶颈,探索逆转GC化疗耐药机制对于GC的治疗具有重大意义.目的探讨敲低miR-214表达对GC细胞SGC-7901/DDP顺铂耐药性、迁移以及上皮间质转化(epithelial mesenchymal transformation, EMT)的影响,并讨论初步作用机制.方法采用Lipofectamine~(TM) 2000法转染miR-214inhibitor至SGC-7901/DDP细胞后,CCK-8法评估细胞对顺铂耐药性的改变;划痕试验检测细胞迁移能力;免疫印迹法检测细胞中E-钙黏蛋白(E-cad)、波形蛋白(Vimentin)和N-钙黏蛋白(N-cad),以及NF-κB与Bcl-2蛋白表达水平.结果转染mi R-214 inhibitor后, SGC-7901/DDP细胞对顺铂耐药性明显降低(P0.05);且细胞迁移能力明显降低(P 0.05),E-cad蛋白表达显著升高(P 0.05), Vimentin与N-cad蛋白表达均显著降低(均P 0.05).另外,SGC-7901/DDP细胞中NF-κB与Bcl-2的表达明显降低(均P 0.05).结论下调mi R-214表达具有降低GCSGC-7901/DDP细胞对顺铂耐药性,抑制细胞迁移与EMT的作用.而这种作用可能与下调NF-κB与Bcl-2的表达有关.     

多药耐药基因1和谷胱苷肽-S-转移酶-π在骨软组织肉瘤患者表达及其与化疗耐药关系

目的探讨骨软组织肉瘤组织中多药耐药基因(MDR)1和谷胱甘肽-S-转移酶(GST)-π与化疗耐药的关系。方法使用免疫荧光法和流式细胞术分别检测MDR1、GST-π的表达;采用甲基偶氮唑盐法检测肿瘤组织对阿奇霉素(ADM)、顺铂(DDP)、5-氟尿嘧啶(FU)、丝裂霉素(MCC)、长春新碱(VCR)及甲氨蝶呤(MTX)的敏感性。结果软骨肉瘤组织对于ADM,DDP,5-FU,MMC,VCR,MTX的敏感率分别为53.2%,77.2%,51.4%,51%,34.6%,48.1%。瘤体的P-gp与GST-π的相对荧光强度分别为1.55和2.48。P-gp的表达同ADM耐药性,GST-π的表达同ADM,DDP,MMC耐药性均呈显著正相关性(P<0.05)。MDR1同GST-π的表达同患者基本资料无显著相关性。术前,化疗患者GST-π于升高,术前升高的患者术后复发显著高于术前表达较低的患者。结论骨软组织肉瘤患者MDR1、GST-π表达对化疗的敏感性有个体差异,化疗可导致GST-π升高,GST-π高表达与骨软组织肉瘤耐药有直接关系,且影响预后。     

洛贝林逆转胃癌细胞SGC7901/VCR多药耐药的作用

目的:探讨哌啶类生物碱洛贝林(Lobeline)能否逆转人胃癌多药耐药细胞株SGC7901/VCR的多药耐药,并进一步探讨洛贝林逆转其多药耐药的机制,评估其有效性.方法:以人胃癌多药耐药细胞株SGC7901/VCR为研究对象,用四氮唑蓝(MTT)法分别测定在无和有洛贝林(细胞无毒浓度10 mol/L)作用下多药耐药细胞株SGC7901/VCR对VCR及5-Fu的半数生长抑制率,并由此求其耐药逆转的倍数;RT-PCR分别检测在无和不同终浓度洛贝林(5、10、20、50、100 mol/L)作用下多药耐药细胞株SGC7901/VCR的多药耐药基因MDR1 mRNA表达情况;Western blot分别检测在无和不同终浓度洛贝林(5、10、20、50、100 mol/L)作用下多药耐药细胞株SGC7901/VCR的P-gp蛋白表达.结果:在洛贝林无毒作用浓度(10 mol/L)作用下,多药耐药细胞株SGC7901/VCR对化疗药的敏感性增加,VCR对耐药细胞株的IC50由原来的16.55 g/L±0.13 g/L变成7.27g/L±0.65 g/L,逆转指数约为2.28;5-Fu对耐药细胞株的IC50由原来的11.01 g/L±0.43 g/L变成9.53 g/L±0.79 g/L,逆转指数约为1.16;RT-PCR检测示多药耐药细胞株SGC7901/VCR呈现MDR1 mRNA高度表达,随洛贝林终作用浓度的增大,MDR1 mRNA表达逐渐下降,各组间差距有统计学意义(P<0.05);Western blot检测表明多药耐药细胞株SGC7901/VCR高度表达P-gp蛋白,随洛贝林作用终浓度依次增加P-gp蛋白表达依次减弱,组间呈浓度依赖性,差别有统计学意义(P<0.05).结论:无细胞毒作用浓度的洛贝林可以逆转胃癌多药耐药细胞株SGC7901/VCR的多药耐药,增强VCR和5-Fu的化疗敏感性.洛贝林对SGC7901/VCR细胞多药耐药的逆转可能机制为抑制P-gp蛋白的表达.     

GRP78在胃癌中表达水平及沉默表达后对人胃癌SGC-7901/DDP细胞增殖和凋亡的影响

目的研究内质网分子伴侣葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)在人不同胃组织(正常胃组织和胃癌组织)和细胞(正常胃上皮GES1细胞、胃癌SGC-7901细胞、多耐药性胃癌SGC-7901/DDP细胞)中的表达水平;揭示GRP78沉默表达对SGC-7901/DDP细胞增殖和凋亡的影响。方法利用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和免疫印迹(Western blotting)方法分别检测人正常胃组织、胃癌组织、人正常胃上皮GES1细胞、胃癌SGC-7901细胞、多耐药性胃癌SGC-7901/DDP细胞中GRP78 mRNA和蛋白表达水平。利用LipfectamineTM2000将GRP78 siRNA转染至SGC-7901/DDP细胞中,同时设置未转染Control组和无义转染Control siRNA组。Real-time PCR和Western blotting方法检测各组SGC-7901/DDP细胞转染效率;MTT方法检测各组SGC-7901细胞的生长活力变化和不同浓度顺铂DDP作用下细胞增殖抑制率;流式细胞术检测各组SGC-7901细胞凋亡情况。结果胃癌组织中GRP78 mRNA和蛋白表达水平显著高于正常胃组织(P0.05);多耐药性胃癌SGC-7901/DDP细胞中GRP78 mRNA和蛋白表达水平显著高于胃癌SGC-7901细胞和正常胃上皮GES1细胞(P0.05);GRP78 siRNA转染SGC-7901/DDP细胞后GRP78 mRNA和蛋白表达水平显著下降(P0.05);与Control组和Control siRNA组相比,GRP78 siRNA转染组SGC-7901/DDP细胞生长活力显著下降,DDP作用下细胞增殖抑制率和细胞凋亡率显著增加(P0.05)。结论 GRP78 mRNA和蛋白在胃癌组织中高表达,在多耐药性胃癌SGC-7901/DDP细胞中也高表达,证实GRP78在胃癌中发挥促癌基因的作用。而GRP78 siRNA转染能够沉默SGC-7901/DDP细胞中GRP78基因表达,抑制SGC-7901/DDP细胞增殖并促进细胞凋亡。     

Hedgehog通路抑制剂逆转人胰腺癌SW1990细胞获得性耐药的实验研究

目的 探讨人胰腺癌SW1990耐药细胞株中Hedgehog通路成员(Shh、SMO、Gli1、ABCB1、ABCG2)表达的变化及应用Hedgehog信号通路抑制剂对其耐药性的影响.方法 建立人胰腺癌SW1990耐吉西他滨细胞株(SW1990/GZ).采用Hedgehog信号通路抑制剂环巴明作用耐药细胞,应用实时PCR、蛋白质印迹法检测用药前后细胞Shh、SMO、Gli1、ABCB1、ABCG2 mRNA和蛋白的表达及CD44+ CD24+、CD133+细胞亚群比例.以100 μmol/L吉西他滨作用环巴明处理后的SW1990/GZ细胞,应用Annexin V加PI双染法检测细胞凋亡率.结果 SW1990/GZ细胞中CD44+ CD24+细胞比例从亲代的(29.45±1.99)％增加到(93.16±2.46)％、CD133+细胞比例从(59.37±1.69)％增加到(95.88±1.47)％(P＜0.01);ABCB1、ABCG2、Shh、Gli1 mRNA的表达分别增加(274.90±31.44)、(3.48±0.33)、(12.07±1.71)、(4.15±0.42)倍(P＜0.01),并检测出SMO mRNA表达.蛋白表达结果与mRNA表达一致.2μmol/L环巴明作用SW1990/GZ细胞1周后,CD44+CD24+比例下降到(36.68±2.44)％、CD133+细胞比例下降到(62.76±1.28)％(P＜0.05).2、5μmol/L环巴明处理SW1990/GZ细胞后再用100 μmol/L吉西他滨处理细胞,细胞的凋亡加死亡率分别为(53.68±5.24)％和(69.99±3.16)％,显著高于对照组的(4.55±0.87)％(P＜0.01).结论 人胰腺癌SW1990耐药细胞株中高富集肿瘤干细胞,高表达Hedgehog信号通路成员SMO及Gli1.抑制耐药株的Hedgehog通路,可以降低其肿瘤干细胞比例,下调SMO及Gli1表达,部分恢复对吉西他滨的敏感性.     

三氧化二砷逆转肝癌细胞株HepG2/ADM多药耐药的作用

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)体外逆转人肝癌细胞多药耐药性的作用及机制．方法:MTT法检测As2O3的细胞毒作用和处理前后耐药细胞对化疗药物的敏感性,用流式细胞仪检测细胞内阿霉素浓度,通过RT-RCR检测MDR1基因的表达．结果:As2O3在0．25 mg／L剂量以下时对HepG2和HepG2／ADM耐药细胞株的抑制率均小于15％,半数抑制率(IC50)分别为1．02和1．34 mg／L,无细胞毒剂量0．2 mg/L的As2O3能部分逆转HepG2／ADM细胞对阿霉素、顺铂(CDDP)、丝裂霉素(MMC)、5-氟尿嘧啶(5-FU)的耐药性,逆转倍数分别为2．92,3．09,2．13,2．60倍．同时无细胞毒剂量0．2 mg／L的As2O3能使HepG2／ADM细胞内阿霉素浓度明显增加,MDR1表达下降．结论:As2O3具有体外逆转人肝癌细胞多药耐药性的作用,可能与下调MDR1表达、增加细胞内药物积累有关．     

5-氟尿嘧啶对肝癌细胞株PLC/RAF/5生物学特性及耐药机制的影响

目的研究化疗药物5-氟尿嘧啶(5-Fu)反复作用肝癌细胞株PLC/RAF/5后生物学特性的变化,探讨耐药肝癌细胞与肝癌干细胞之间的相关性。方法用低浓度的5-Fu(1μg/ml)反复多次作用于人肝癌细胞株PLC/RAF/5后建立PLC/RAF/5/5-Fu细胞株,观察两种细胞的形态学差异。用CCK-8法检测不同浓度的5-Fu(0、0.25、0.5、1、1.5、2μg/ml)对两种细胞增殖的抑制作用;在不同浓度的5-Fu(0.5、1、2μg/ml)作用48 h后,流式细胞仪分析不同浓度下两种细胞的凋亡情况;检测两种细胞中侧群细胞的比例;平板克隆集落实验比较两种细胞的克隆形成能力;Western Blot检测两种细胞中Bax、Bcl-2、ABCG2和Fox M1蛋白的表达情况。计量资料组间比较采用t检验。结果用化疗药物5-Fu成功建立PLC/RAF/5/5-Fu细胞株。PLC/RAF/5/5-Fu细胞比PLC/RAF/5细胞体积大,突起减少,呈长梭形改变,折光性增强。与亲本细胞相比,PLC/RAF/5/5-Fu细胞对5-Fu增殖抑制作用的敏感性降低,细胞周期G0/G1期比例降低,而S期和G2/M期比例上升;抗凋亡能力增加;侧群细胞比例增加;增殖能力增强,上述差异均具有统计学意义(P值均0.05)。Western Blot检测表明PLC/RAF/5/5-Fu细胞Bcl-2、Fox M1、ABCG2蛋白表达增强,而PLC/RAF/5细胞的Bax蛋白表达增强,差异具有统计学意义(P值均0.01)。结论细胞株PLC/RAF/5/5-Fu中肝癌干细胞可能是其耐药的根源;低浓度的5-Fu(1μg/ml)可以富集肝癌干细胞样细胞。     

miR-10b通过抑制KLF4表达诱导胃癌细胞对顺铂耐药

背景胃癌(gastric cancer, GC)化疗容易产生获得性化疗耐药.miR-10b能参与调节食管癌和鼻咽癌细胞顺铂(cisplatin,DDP)耐药,而在GC中其与DDP化疗敏感性的关系并不清楚.目的探讨miR-10b是否参与GC细胞对DDP耐药,以及其中的分子机制.方法采用DDP反复刺激SGC-7901和MGC-803细胞并浓度递增法构建SGC-7901/DDP和MGC-803/DDP细胞.检测SGC-7901/DDP和MGC-803/DDP细胞中mi R-10b和KLF4的表达.对SGC-7901和MGC-803细胞转染慢病毒携带的miR-10b过表达载体, MTT法检测miR-10b过表达对DDP敏感性的影响; Annexin V-FITC/PI染色法检测miR-10b过表达对DDP诱导的细胞凋亡的影响; RT-qP CR和Western blot检测miR-10b过表达对KLF4mR NA和蛋白表达的影响.进一步构建异体移植瘤模型,并给予DDP化疗后,宏观观察瘤体形态并称量瘤体质量.对SGC-7901和MGC-803细胞共转染miR-10b和KLF4后,MTT法检测细胞对DDP敏感性变化.结果与SGC-7901和MGC-803细胞比较, SGC-7901/DDP和MGC-803/DDP细胞中miR-10b表达水平显著增加(P 0.01),KLF4mRNA和蛋白水平显著降低(P 0.01).体外实验显示,过表达miR-10b促进GC细胞对DDP耐药,抑制KLF4表达(P0.01);在体实验显示, DDP治疗后, miR-10b组瘤体质量显著高于NC组(P0.01).过表达KLF4能部分逆转过表达miR-10b诱导的GC细胞对DDP耐药.结论miR-10b通过抑制KLF4表达促进GC细胞DDP化疗耐药,而miR-10b高表达产生的DDP耐药性可以被上调KLF4解除.     

敲低CTCF对5-氟尿嘧啶、顺铂耐药结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响及其机制

目的 探讨敲低CCCTC结合因子(CTCF)对5-氟尿嘧啶(5-Fu)、顺铂(DDP)耐药结直肠癌(CRC)细胞恶性生物学行为的影响及其机制。方法 体外传代培养CRC耐药细胞株HT29/5-Fu、HT29/DDP，筛选HT29/5-Fu、HT29/DDP细胞半数抑制活性(IC₅₀)时5-Fu或DDP浓度进行后续实验。选择HT29/5-Fu、HT29/DDP细胞，随机分为HT29/5-Fu shCTCF组与HT29/5-Fu shControl组、HT29/DDP shCTCF组与HT29/DDP shControl组，分别转染shCTCF或shControl，采用Western blotting法检测CTCF蛋白表达。取各组转染后细胞，采用MTT法检测细胞存活率，采用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力，采用流式细胞术检测细胞凋亡率，采用Western blotting法检测Hedgehog信号通路补缀同源物1(PTCH1)、补缀同源物2(PTCH2)、胶质瘤相关癌基因同源蛋白1(GLI1)、音猬因子(SHH)蛋白表达。结果 5-Fu对HT29/5-Fu细胞...     

人大肠癌HCT-8/5-FU耐药细胞株的建立及P-gp测定

目的：建立人大肠癌多药耐药细胞株HCT-8/5- FU及并对其耐药机制进行探讨．方法：先采用较大剂量间歇诱导法进行筛选,再采用浓度梯度递增法作用,历时7mo,至HCT8细胞可长期在5-FU浓度为2．0mg/L的细胞培养液中稳定生长．电镜、HE染色观察2种细胞形态结构差异．体外细胞毒性实验观察他对5-FU ADM,DDP的耐药性．绘制亲本细胞和耐药细胞的体外生长曲线．罗丹明染色法检测其两种细胞P-gp功能表达．结果：HCT-8细胞株经7mo诱导,可在5-FU 2．0 g/L的培养液中稳定增殖,具有多药耐药性,命名为HCT-8/5-FU,该细胞株对5-FU的耐药指数为16．6,并对ADM,DDP有交叉耐药性．该细胞株体外群体倍增时间与亲本细胞差别不显著．HE染色观察耐药细胞胞体较亲本细胞大,细胞核不规则,可见双核、多形核,细胞形态不规则,呈多角形、细长形改变,可见巨核细胞．透射电镜下耐药细胞胞质内线粒体、内质网、溶酶体增多．流式细胞仪罗丹明染色法观察荧光强度曲线左移,提示耐药细胞有过度P-gp表达．结论：成功建立HCT-8/5-FU多药耐药细胞株．先采用较大剂量间歇诱导进行筛选,再采用浓度梯度递增法作用是诱导大肠癌耐药细胞株的较好方式．HCT-8/5-FU细胞株的耐药机制与P-糖蛋白表达有关．     

阿霉素干预与肾上腺皮质癌干细胞标志物的表达

目的 探讨阿霉素(ADM)干预下人肾上腺皮质癌裸鼠模型干细胞标志CD133、ABCG2的表达及意义.方法 SW-13细胞系建立裸鼠皮下移植瘤模型,ADM体内干预后原代培养获得ADM组细胞株,未予干预直接原代培养获得对照组细胞株.用单细胞成克隆技术检测细胞的增殖能力,免疫组化法和流式细胞法检测肿瘤干细胞标志物CD133、ABCG2的表达.结果 ADM组细胞株的克隆形成率高于对照组(P＜0.05);流式细胞法和免疫组化法提示ABCG2在两组细胞中均有阳性表达,ADM组细胞株的流式细胞表达率高于对照组细胞株(P＜0.05);以上两种方法均表明CD133在两组中阴性表达.结论 ADM组细胞具有一定的肿瘤干细胞特征,ABCG2参与肾上腺皮质癌细胞耐药机制,可能为分子靶向治疗的潜在靶点.     

顺铂联合热疗对人胃癌耐药细胞增殖及耐药相关基因Survivin表达的影响

目的通过体外实验观察顺铂联合热疗对人胃癌耐药细胞增殖及多药耐药基因Survivin表达的影响。方法选取人胃癌SGC7901/DDP细胞系进行体外培养。应用流式细胞术(FCM)检测对照组、化疗组、热疗组及热化疗组SGC7901/DDP细胞增殖的情况,并用FCM法半定量检测各组细胞中Survivin蛋白表达的变化;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法半定量检测4组SGC7901/DDP细胞中Survivin mRNA表达的变化。结果热疗及顺铂联合热疗都可以降低人胃癌耐药细胞SGC7901/DDP的增殖水平,并且顺铂联合热疗作用效果最明显。单纯热疗及顺铂联合热疗作用后,SGC7901/DDP细胞中Survivin蛋白及mRNA的表达明显下降,并且并顺铂联合热疗作用后下降最明显。结论热疗、顺铂联合热疗能够抑制人胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP的增殖,并可诱导该细胞凋亡,抑制细胞周期诱导细胞凋亡是其抗肿瘤作用机制之一;下调Survivin蛋白及mR-NA的表达可能是热疗逆转人胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP多药耐药性的机制之一。     

结肠癌耐药细胞株LoVo/5-FU的建立及其差异表达基因的筛选

目的:建立结肠癌细胞耐药模型LoVo/5-FU并初步筛选可能的耐药相关基因.方法:采用5-FU浓度递增法建立人结肠癌细胞耐药模型LoVo/5-FU,观察其生长规律并绘制细胞生长曲线:用MTT法鉴定耐药细胞株耐药性并计算耐药指数(RI);用基因芯片技术检测耐药细胞株LoVo/5-FU与其亲本细胞株LoVo中的差异表达基因,从中筛选出可能的耐药相关基因;用半定量RT-PCR方法对筛选出的部分耐药相关基因在耐药细胞及其亲本细胞中的表达情况进行验证.结果:LoVo/5-FU细胞与LoVo细胞相比,生长缓慢,细胞体积增大.LoVo/5-FU对5-FU、ADM、MMC耐药,而对CDDP无耐药性(RI:7.69,2.78,1.43和0.96).通过基因芯片筛选出差异表达基因425个,可能的耐药相关基因包括CYP1B1,NAT2,RNF20,SNAI2,MAP3K2,其中CYP1B1在LoVo/5-FU与LoVo中的表达有明显差异(Cy5/Cv3=5.877).结论:LoVo/5-FU细胞株耐药性稳定,耐药机制可能与CYP1B1,NAT2等耐药相关基因有关.     

黄芪多糖抑制肝癌Bel-7402/5-FU耐药细胞株增殖及对耐药基因的影响

目的:研究黄芪多糖抑制肝癌Bel-7402/5-FU耐药细胞株增殖及对耐药基因的影响。方法:CCK-8法检测不同浓度黄芪多糖对肝癌Bel-7402/5-FU耐药细胞的增殖抑制率并计算IC_(50);根据药物处理方法将肝癌Bel-7402/5-FU耐药细胞分为CON组(不加药物)、APS组(IC_(50)浓度黄芪多糖处理)、5-FU组(10μg/ml 5-FU处理)、A+F组(黄芪多糖与5-FU联用),比较不同药物处理对细胞增殖、细胞周期及凋亡情况的影响。采用RT-PCR和Western blot分析不同药物处理对谷胱甘肽S-转移酶π(GST-π)和多药耐药基因1(MDR1)mRNA和蛋白质表达的影响。结果:药物处理2～7 d时,APS组和A+F组肝癌Bel-7402/5-FU耐药细胞增殖率均显著低于CON组和5-FU组(均P0.05),A+F组细胞增殖率显著低于APS组(P0.05),黄芪多糖与5-FU联用时细胞增殖抑制效果最佳。A+F组S期、G_2/M期细胞、增殖指数、GST-π和MDR1基因mRNA和蛋白质均显著低于APS组,G_0/G_1期和凋亡率均显著高于APS组(均P0.05)。结论:黄芪多糖可显著抑制肝癌Bel-7402/5-FU耐药细胞增殖,降低耐药基因GST-π和MDR1的表达,降低肝癌Bel-7402/5-FU耐药细胞对5-FU的耐药性。     

卵巢癌紫杉醇耐药细胞株的建立及其耐药机制探讨

目的 为探讨卵巢癌细胞多药耐药的发生机制,寻找克服卵巢癌耐药的方法而建立人卵巢癌紫杉醇(TAX)耐药细胞株SKOV3/TAX.方法 选用卵巢癌细胞株SKOV3,以浓度为300ug/ml的TAX反复大剂量冲击用药,培养8个月后建立TAX耐药细胞株,命名为SKOV3/TAX.该细胞已反复传代3个月以上.结果 SKOV3/TAX细胞耐药性稳定,耐药指数(RI)为10.57.除对紫杉醇耐药外,对环磷酰胺(CTX)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、足叶乙甙(VP-16)有明显的交叉耐药,与亲本细胞相比,细胞倍增时间明显缓慢(P<0.01),G2/M期明显高于亲本细胞,S期比例明显降低(P<0.05),细胞内P糖蛋白(P-gp)表达增加.产生耐药的机制可能与细胞周期改变、细胞凋亡及P-gp的表达增加,导致细胞内TAX聚集量减少有关.结论 SKOV3/TAX细胞耐药性稳定,具有典型的多药耐药表型.     

槲皮素联合survivin反义核苷酸对肝癌SMMC7721/ADM细胞MDR的逆转作用

目的 探讨槲皮素与survivin反义核苷酸(ASODN)联合应用对肝癌SMMC7721/ADM细胞多药耐药(MDR)的逆转作用.方法 选择肝癌敏感细胞株SMMC7721和MDR细胞株SMMC7721/阿霉素(ADM),观察其对四种不同化疗药物的耐药性及槲皮素、survivin反义核苷酸(ASODN)对SMMC7721/ADM细胞MDR的逆转效果.结果 槲皮素和ASODN联合时较两者单独应用时能显著降低四种化疗药物对SMMC7721/ADM细胞的半数抑制浓度(IC50) (P<0.05).槲皮素单独应用及联合ASODN时均能明显降低SMMC7721/ADM细胞的多药耐药基因1(MDR1)mRNA及p170和多药耐药相关蛋白基因(MRP)mRNA及p190的表达(P均<0.05). 结论 槲皮素与ASODN联合能明显逆转SMMC7721/ADM细胞对四种化疗药物的耐药性.槲皮素可能通过抑制MDR1 mRNA和MRP mRNA的表达使p170和p190的合成减少而发挥耐药逆转作用,ASODN不能通过该途径发挥作用.     

多药耐药基因反义寡核苷酸逆转肝癌细胞耐药的研究

目的 观察反义硫代磷酸酯寡核昔酸(AsODN)联合逆转耐药肝癌细胞多药耐药基因1(MDR1)和多药耐药相关蛋白基因(MRP)的作用。 方法 用人工合成互补于MDR1基因及MRP基因的反义20聚硫代磷酸寡核苷酸,以脂质体作载体,转染入耐阿霉素(ADM)肝癌细胞SMMC-7721/ADM,四甲基偶氮唑蓝法测定细胞对化学疗法药物的敏感性,流式细胞仪分析细胞相对荧光强度,激光扫描共聚焦显微镜测定细胞内Rhdaming123(Rh123)及柔红霉素(DNR)潴留以反映蛋白质p170和p190功能。 结果 ASODN/MDR1 MRP联合转染SMMC-7721/ADM细胞,能更大程度增加细胞对ADM(47.8倍)和DNR(21.6倍)的敏感性。ASODN/MDR1 MRP联合转染SMMC-7721/ADM细胞,与单独任一种ASODN转染相比,对p170或p190表达的抑制并不增加(q值分别为3.23、3.24,P>0.05)。 结论 针对MDR1 MRP的ASODN联合转染SMMC-7721/ADM细胞,能更大程度逆转肝癌细胞的耐药性。     

Stat3活性降低对人胃癌5-氟尿嘧啶耐药细胞的影响

目的探讨Stat3信号在人胃癌5-氟尿嘧啶(5-Fu)耐药细胞及其亲本细胞中活化水平的差异与胃癌耐药机制的关系。方法分别采用凝胶阻滞电泳法和Western blot法检测人胃癌细胞株SGC7901及其5-Fu耐药细胞株SGC7901／R中Stat3-DNA结合活性的变化和磷酸化Stat3蛋白的表达;半定量逆转录-PCR法检测耐药细胞及其亲本细胞中Stat3和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达;免疫细胞化学染色法显示VEGF蛋白在2种细胞内的表达情况。结果耐药细胞及其亲本细胞中有不同程度的Stat3组成性激活和磷酸化Stat3蛋白的表达;与亲本细胞SGC7901相比,耐药细胞SGC7901／R中Stat3-DNA的结合活性水平较低,磷酸化Stat3蛋白的表达减少;耐药细胞中Stat3 mRNA的表达下降,核因子-κB1 mRNA的表达显著上升,而VEGF mRNA及其编码的蛋白水平却较其亲本细胞降低。结论人胃癌5-FU耐药细胞株SGC7901／R中Stat3活性水平降低与其耐药机制相关,且可能与耐药细胞中VEGF表达减少有关。