细小病毒H-1抗肝癌的实验研究

细小病毒中的某些自主性细小病毒,不但具有干扰肿瘤的“自发”形成特点,而且能有效抑制或杀伤转化细胞和肿瘤细胞.仓鼠溶骨性细小病毒的H-1(Parvovirus H-1,PVH-1)是自主性细小病毒的一种.体内外研究均证实PVH-1对体外培养和体内接种的转化细胞和肿瘤细胞有抑制杀伤作用.用MIT法测定PVH-1对10株细胞包括9株肿瘤细胞和1株人成纤维细胞的作用,并建立荷人肝癌细胞L_C-412裸小鼠模型,分三组,一组为对照组,二组为给药组,其中一组为一次治疗组,一组为二次治疗组,于治疗后不同时间分别测量肝叶上瘤径大小,并做病理检查.同时,应用PVH-l治疗六例人体晚期肝癌,动态观察血清甲胎蛋白和B超变化.     

细小病毒抗癌研究新进展

某些病毒(包括DNA病毒和反转录的RNA病毒)的致癌作用已为实验和临床研究所证实。但最近人们却发现,一类称之为细小病毒(Parvoviruses;PV)中的某些病毒(如细小病毒H—1以及腺相关病毒等)都具有显著的抗肿瘤效应。细小病毒抗癌的“专一性”和有效性,可能改变人类肿瘤预防和治疗的现状,从而引起了世界医学界的广泛兴趣和重视。目前,美国、比利时、中国等国家的有关医学专业人员正全力观察细小病毒抗癌的特性,努力探索其临床应用的可能性。本文简要介绍这一研究的若干现状及进展。     

HBV及HBV感染与人原发性肝癌

HBV是一种引起人体肝炎的DNA病毒,流行病学资料表明,它与人原发性肝癌的发生密切相关。近年来,又发现了几种能引起动物肝炎的DNA病毒,如土拨鼠肝炎病毒(WHV),地松鼠肝炎病毒(GSHV)及鸭肝炎病毒(DHBV)。它们已被分类为嗜肝病毒(Hepadna Viruses)。本文对HBV的结构、HBV的复制过程以及它在人原发性肝癌发生过程中可能的作用进行讨论。     

腺相关病毒载体基础研究及其在造血系统的应用进展

基因转移方式分为病毒载体和非病毒载体两类。前者常用的病毒有反转录病毒(RV)、腺病毒(AV)、腺相关病毒(AAV)、单纯疱疹病毒(HSV)及人免疫缺陷病毒(HIV)等；后者有物理和化学方法等。病毒载体各有优点及局限性。近年来腺相关病毒载体基础研究以及在造……     

哺乳动物细小病毒的抗肿瘤作用

病毒和肿瘤的相关性一直引起人们的密切关注。肿瘤病毒,包括 DNA 病毒和反转录 RNA病毒,与动物致癌的直接因果关系已得到证实。人类肿瘤发生的病毒病因仍在探索之中。然而,某些哺乳动物病毒却具有抑制肿瘤的功能。这方面报道不多。60年代以来,在哺乳动物中陆续发现和分离了许多具有相似理化性质与生物学特性的病毒,国际病毒命名学会(ICNV)称之为细小病毒(Parvoviruses)。它们是一类直径为     

一个革命性的抗癌研究策略：癌症的靶向基因-病毒治疗

2001年,笔者提出了癌症的靶向基因-病毒治疗(cancer targeting gene-viro-therapy,CTGVT)的概念,即将一个抗癌基因插入到溶瘤病毒(oncolytic virus,OV)中,从而将基因治疗与溶瘤病毒各自的优势结合起来,由于溶瘤病毒能大量复制,插入其中的基因也能大量复制,故其抗肿瘤效果大增,较单用基因治疗或OV治疗强数十至上百倍。随后又引入双基因策略(CTGVT-DG),即向OV载体插入两个抗癌基因,由于两个抗癌基因之间可能存在互补或协同效应,在一些动物癌症模型中几乎能杀灭全部移植性肿瘤。近年来又采用纳米粒子把CTGVT-DG病毒颗粒包被,或者采用溶瘤痘病毒(OncoPox)作为载体与CTGVT-DG策略相结合,后者将可构建一系列抗癌作用极好的双基因OncoPox-gene1-gene2产物。国外多数使用OV-GM-CSF策略,仅局限于GM-CSF的免疫功能,忽视了基因复制的剂量效应及其重要性,这就是中国的CTGVT-DG胜过西方的优势之处。     

根治切除术联合抗病毒治疗肝癌合并乙肝病毒感染的临床研究

目的:探讨根治切除术联合抗病毒治疗肝癌合并乙肝病毒（HBV）感染的临床效果。方法:选取2010年4月-2013年4月100例肝癌合并乙肝病毒感染患者为研究对象,按照HBV-DNA水平不同分成高病毒复制组和低病毒复制组（以HBV-DNA载量为105拷贝/ml为标准）,比较四组在肝功能、HBV-DNA水平、生存时间、肿瘤复发率和住院时间、住院费用方面的差异性。结果:抗病毒治疗后无论在高病毒复制组和低病毒复制组中,肝功能明显好转,HBV-DNA水平明显低于未抗病毒治疗,且在住院时间、费用、生存时间和肿瘤复发率上抗病毒治疗均好于未抗病毒者,但低病毒复制者在住院时间、住院费用上优于高病毒复制者。在生存时间上高病毒复制者1~2年生存率更好,在肿瘤复发率上低病毒复制者更低。结论:抗病毒结合根治切除术能改善肝癌合并HBV感染者的肝功能和病毒指标,缩短住院时间,延长生存时间。     

病毒可通过刺激免疫系统治疗脑肿瘤

<正>近日,一项发表在《Science Translational Medicine》的研究报告指出,直接注射入血流的病毒能用于治疗侵袭性脑肿瘤。科学家发现,一种名为呼肠孤病毒(reovirus)的一类病毒能穿过血脑屏障到达肿瘤,复制并杀死癌症细胞。该病毒能"启动"人体自身的防御系统,从而对抗癌症。来自利兹大学和伦敦癌症研究所的研究作者认为,呼肠孤病毒治疗能与其他癌症治疗相结合,使它们更有效。     

重组腺相关病毒介导人内皮抑素抑瘤作用的实验研究

背景与目的：研究表明,内皮抑素能抑制肿瘤血管的生成,进而抑制肿瘤的生长和转移,然而有关内皮抑素治疗的研究报道却很少。本研究初步探讨了重组腺相关病毒介导内皮抑素对肿瘤生长和转移的作用。方法：用RT-PCR方法获得人内皮抑素基因,构建内皮抑素可分泌表达的通用型重组腺相关病毒（rAAV）载体,包装获得重组腺相关病毒rAAV-SS-Endostain。以动物实验分析其抗肿瘤作用。结果：C57BL/6小鼠肌肉注射10^11TUrAAC-SS-Endostatin一次,该重组病毒对小鼠黑色瘤B16F10移植瘤生长的抑制率为57.1％,在实验肺转移模型中,对转移灶的抑制率为70.7％。结论：重组腺相关病毒介导的内皮抑素能有效抑制肿瘤的生长和转移。     

溶瘤腺病毒Ad-MK联合外照射对膀胱癌细胞增殖的影响

目的探讨以Midkine(MK)基因为启动子的溶瘤腺病毒Ad-MK单独及联合外照射对人膀胱移行细胞癌EJ细胞增殖的影响。方法应用RT-PCR技术检测EJ细胞中MK mRNA的表达及感染Ad-MK后细胞中腺病毒E1a mRNA的表达。细胞存活率检测Ad-MK对EJ细胞放射敏感度的影响。测定病毒复制量观察外照射对Ad-MK复制的影响。结果EJ细胞中可见MK mRNA的表达。Ad-MK感染细胞后可检测到细胞中E1a mRNA的表达。联合组细胞的存活率与Ad-MK或外照射组的差异有统计学意义(P<0.01)。低剂量外照射联合病毒治疗后并未减少病毒在细胞中的复制。结论膀胱移行细胞癌EJ细胞中可见MK mRNA的表达;Ad-MK可在细胞中复制,其对细胞的增殖抑制作用呈量效和时效关系。小剂量外照射能增强Ad-MK的细胞毒作用,并能增加病毒在细胞中的复制。     

腺相关病毒及其在肿瘤基因治疗中的研究进展

重组腺相关病毒是一种用于基因治疗的安全而有效的病毒载体,近年来在其基础及应用方面的研究均取得了较大的进展,已成为肿瘤治疗领域中很有希望的方法,目前已用于抗肿瘤免疫基因治疗、抗肿瘤血管新生治疗、分子化疗等方面.腺相关病毒自身具有抗肿瘤活性,重组AAV作为基因治疗载体联合放疗、化疗可起到协同的抑制肿瘤作用相比,重组腺病毒载体在肿瘤基因治疗中有着很大的优势.     

表达HPV16 E6和E7蛋白的非复制型重组痘苗病毒诱发的抗肿瘤免疫反应

目的　观察表达人乳头瘤病毒 (HPV) 16E6和E7蛋白的非复制型重组痘苗病毒的抗肿瘤免疫效果。方法　以重组痘苗病毒NTVJmE6E7免疫C5 7BL/ 6小鼠 ,检测特异性的细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)活性 ;经免疫后的小鼠以TC 1肿瘤细胞攻击 ,观察免疫保护效果 ;荷瘤小鼠切除肿瘤后接种重组痘苗病毒 ,观察肿瘤复发情况。结果　以重组痘苗病毒NTVJmE6E7免疫小鼠 ,可诱导产生针对TC 1细胞的特异性的CTL反应 ;加强免疫后的小鼠能耐受 1× 10 4TC 1细胞的攻击 ;以重组痘苗病毒NTVJmE6E7免疫肿瘤术后小鼠 ,能有效地预防肿瘤复发。结论　非复制型重组痘苗病毒NTVJmE6E7可作为HPV16的相关肿瘤及其癌前病变免疫治疗的候选疫苗。     

腺相关病毒携带hTERT启动子调控的TRAIL基因特异性杀伤肿瘤细胞

背景与目的:腺相关病毒(adeno-associated virus)作为载体已被广泛用于肿瘤的基因治疗研究.肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factorrelated apoptosis.inducing ligand,TRAIL)基因可迅速诱导多种肿瘤细胞的凋亡.是一个安全有效的肿瘤杀伤基因.本研究旨在构建能在肿瘤细胞内特异性表达TRAIL基因的靶向腺相关病毒,并探讨其体外抗肿瘤效应的可能机制.方法:利用肿瘤特异性启动子端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcfiptase,hTERT)构建特异性杀伤肿瘤细胞的腺相关病毒载体pAAV-hTERT-TRAIL.通过与pAAV-Rc、pHelper共转染HEK293细胞包装出病毒AAV-hTERT-TRAIL.将该病毒体外转染人结肠癌SW620细胞、人肝癌HepG2细胞、人肺癌A549细胞和正常细胞NHLF、MRC5后,检测TRAIL基因的肿瘤特异性表达.MTT法检测其对细胞增殖的影响,ELISA、Western blot法以及流式细胞仪检测细胞的凋亡,并分析其体外抗肿瘤效应的可能机制.结果:成功包装出病毒AAVhTERT-TRAIL.RT-PCR、Western blot和免疫组化法均证实AAV-hTERT-TRAIL能介导TRAIL基因在肿瘤细胞内特异性表达,但在正常细胞内不表达.以100 MOI AAV-IlTERTTRAIL感染细胞96 h后,SW620、A549和HepG2细胞的增殖率分别是41.55%、44.29%、49.95%,NHLF和MRC5细胞的增殖率分别是84.59%和87.22%.Western blot检测发现AAV-hTERT-TRAIL可激活Caspase通路.流式细胞仪和ELISA方法检测证实AAV-hTERT-TRAIL可诱导细胞凋亡.结论:hTERT的存在增强了腺相关病毒所携带TRAIL基因表达的肿瘤靶向性和对正常细胞的安全性.由它调控的杀伤基因可介导肿瘤细胞特异性的细胞毒效应.     

细小病毒抗肿瘤活性研究进展

众所周知,人类某些肿瘤的发生与病毒感染密切相关,整合到宿主细胞中的病毒基因能触发宿主细胞的原癌基因表达异常,而最终导致细胞恶性转化。但是自60年代以来,人们从哺乳类动物、胚胎组织和肿瘤组织中陆续发现和分离了许多具有相似理化性质和生物学特性的一类DNA病毒,国际病毒命名学会称之为细小病毒(Parvoviruses)。起初人     

慢病毒载体在肿瘤基因治疗中的应用

载体是供插入目的基因并将其导入宿主细胞内表达或复制的运载工具。目前常用的有病毒载体和非病毒载体两类,病毒载体由于转导效率较高且可以用于体内和体外的基因转导,是目前基因治疗研究和临床应用的主要工具,包括逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺伴随病毒载体等。慢病毒载体是近来受到广泛注意的一种逆转录病毒载体,由于具有可感染非分裂细胞、目的基因整合至靶细胞基因组长期表达、免疫反应小等优点,适于体内基因治疗,因此有望成为理想的基因转移载体。本文以HIV-1为代表对慢病毒载体构建,结构优化及其在肿瘤基因治疗中的应用作一综述。     

人脐静脉内皮细胞的分离培养及条件复制性腺病毒Adv5/dE1A-Aschk1对该细胞的杀伤作用

背景与目的:复制性腺病毒因其高效转导、大量复制等优点而成为目前基因治疗领域最为重要的载体之一,腺病毒体内应用时对血管内皮的作用是评估其安全性和副作用的重要指标.本研究探讨条件复制性腺病毒对增生期和静止期的血管内皮细胞的生长影响.方法:脐静脉内灌注消化液分离内皮细胞,所获内皮细胞体外培养,经免疫荧光染色及扫描电镜检查,鉴定所获内皮细胞及其纯度;细胞病变实验比较条件复制性腺病毒Adv5/dE1A-Aschk1对人宫颈癌细胞株HeLa细胞和血管内皮细胞的裂解效应;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同滴度腺病毒对血管内皮细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪分析腺病毒单用或联合放射线作用对细胞凋亡的影响.结果:血管内灌注消化液法可获取高纯度的内皮细胞;与HeLa细胞相比,血管内皮细胞对条件复制性腺病毒Adv5/dE1A-Aschk1较耐受,500 MOI的病毒滴度感染静止态内皮细胞未出现明显的裂解效应;Adv5/dE1A-Aschk1对内皮细胞的增殖抑制效应随病毒滴度的增加而增强,100 MOI的病毒作用96 h,增殖态内皮细胞增殖抑制率为(22.0±2.5)%,而静止态内皮细胞为(13.0±2.3)%;Adv5/dE1A-Aschk1感染联合放射线处理时,增殖态内皮细胞较静止态更为敏感,两者凋亡细胞比例分别为(35.7±3.0)%、(23.1±2.5%)%(P＜0.05).结论:体外分离的人脐静脉内皮细胞可作为探讨条件复制性腺病毒效应的模型细胞;条件复制性腺病毒Adv5/dE1A-Aschk1损伤血管内皮细胞的病毒剂量高于杀伤肿瘤细胞的有效剂量,有良好的治疗窗;增殖态血管内皮与静止态相比,更易被复制性腺病毒杀伤.     

RNA肿瘤病毒诱发的细胞表面抗原

致瘤性RNA病毒广泛分布于自然界,这些病毒按其形态或天然宿主可分为若干组。按一般规律,来自进化上相关种属的病毒的单股RNA基因组是同源的,因此它们的结构蛋白在生化上和抗元上是相关的,但不相同。因此水平式传播的鸡RNA肿瘤病毒与小鼠和猫的相应株不同,但是相关。 RNA肿瘤病毒感染并不导致细胞溶解,这是它的一种固有的优点,从而可以研究不同的和稳定的病毒-宿主细胞间的相互作用。根据所用的白血病病毒或肉瘤病毒,同种的细胞(天然宿主)或异种的细胞(其他宿主),病毒将复制或不将复制,引起或不引起恶性细胞转化。缺乏复制并不意味着感染病毒的消失,当     

溶瘤病毒——新城疫病毒研究进展

新城疫病毒(NDV)能选择性杀伤人及动物肿瘤细胞,体内外实验证实新城疫病毒(NDV)对多种人类肿瘤细胞具有杀伤作用.作用机制包括选择性在肿瘤细胞内复制,直接导致肿瘤细胞溶解;通过线粒体途径等诱导肿瘤细胞凋亡,促进细胞因子产生,提高肿瘤免疫原性等,近几年临床研究取得了令人鼓舞的结果.     

腺相关病毒介导的人内皮抑素基因转染对肝细胞性肝癌生长的抑制作用

目的　研究腺相关病毒介导的人内皮抑素基因转染对肝细胞性肝癌的抑制作用。方法　用含人内皮抑素的腺相关病毒(r AAV2 /EGFP- Endo)转染肝癌细胞Hep3B,通过流式细胞仪检测其转染率。MTT法检测转染细胞的培养液上清对人脐静脉内皮细胞ECV30 4增生的抑制作用。Hep3B细胞接种裸鼠建立移植瘤模型,分别瘤内注射r AAV2 /EGFP- Endo(2×10 1 0 v.g.)、r AAV2 /EGFP或生理盐水,3周后检测裸鼠血液中内皮抑素的表达及移植瘤的体积和微血管密度(MVD)。结果　流式细胞仪结果显示重组腺相关病毒体外对Hep3B细胞的转染率为6 2 .5 % ;转染内皮抑素基因的Hep3B细胞的培养液上清能显著抑制ECV30 4细胞的生长(P<0 .0 1)。移植瘤内注射r AAV2 /EGFP- Endo后,荷瘤裸鼠血清中内皮抑素浓度为(82 .6 4±7.5 4 ) μg/L,移植瘤的体积和微血管密度均明显低于对照组(P<0 .0 1)。结论　腺相关病毒介导的人内皮抑素基因转染能够有效抑制人肝细胞性肝癌的生长。     

腺相关病毒载体与肿瘤免疫治疗的研究进展

腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)是一类单链线状DNA缺陷性病毒,属细小病毒科,是基因转移最为理想的载体之一.AAV介导肿瘤相关基因感染树突状细胞(dendritic cell,DC)诱导细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL),可以内源性持续表达肿瘤相关抗原,并由MHCⅠ类途径得到充分提呈、放大免疫激发CTL的能力,但不影响DC的成熟度.AAV介导抗肿瘤血管生成基因,有抑制肿瘤生长的作用,并且克服了单克隆抗体生产过程中提纯的困难;AAV介导免疫相关基因具有直接抑制肿瘤细胞增殖或免疫调节的作用;AAV介导抑癌相关基因可以诱导肿瘤细胞凋亡;AAV介导自杀基因可以抑制肿瘤的生长.