首页 | 本学科首页   官方微博 | 高级检索  
相似文献
 共查询到20条相似文献,搜索用时 328 毫秒
1.
目的 构建甲型副伤寒杆菌ompA基因原核表达系统,确定其重组表达产物rOmpA免疫原性和保护作用,检测甲型副伤寒杆菌临床菌株ompA基因携带率.方法 采用PCR从甲型副伤寒杆菌临床株JH01中扩增ompA基因,T-A克隆后测序并构建ompA基因原核表达系统.采用SDS-PAGE和Bio-Rad凝胶图像分析系统检测rOmpA表达情况及其产量,采用免疫扩散法、微量肥达试验和Western blot鉴定其抗原性和免疫反应性.采用PCR检测98株甲型副伤寒杆菌临床菌株ompA基因携带率.采用小鼠感染模型,了解rOmpA对甲型副伤寒杆菌50001株感染的免疫保护作用.结果 与报道的相关序列比较,所克隆的ompA基因核苷酸和氨基酸序列相似性均为100%.rOmpA表达量约为细菌总蛋白的65%.rOmpA能与其兔抗血清和甲型副伤寒杆菌全菌抗血清产生免疫反应(Western blot),并可在家兔中诱导产生抗体.94.9%(93/98)甲型副伤寒杆菌临床菌株含有ompA基因.100 μg和200 μg rOmpA对感染小鼠的免疫保护率分别为41.7%(5/12)和58.3%(7/12).rOmpA免疫小鼠或保护试验存活小鼠血清对各副伤寒杆菌H抗原的凝集效价为1:5~1:40.结论 ompA基因在甲型副伤寒杆菌临床菌株中分布广泛.rOmpA有良好的免疫原性和一定的免疫保护作用,可考虑为甲型副伤寒杆菌基因工程疫苗候选抗原.  相似文献   

2.
目的 构建甲型副伤寒杆菌外膜蛋白基因nmpC的原核表达系统,确定其重组表达产物rNmpC免疫原性和保护作用,了解甲型副伤寒杆菌临床菌株nmpC基因携带及表达率.方法 采用PCR和T-A克隆法从甲型副伤寒杆菌临床株JH01中获得nmpC基因克隆并构建其原核表达系统.采用SDS-PAGE和Bio-Rad凝胶图像分析系统检测rNmpC表达情况及其产量,采用免疫扩散法、Western blot和微量肥达试验鉴定其抗原性和免疫应答性.采用PCR和ELISA分别检测98株甲型副伤寒杆菌临床菌株nmpC基因携带及表达率.采用小鼠感染模型了解rNmpC对甲型副伤寒杆菌致死性感染的免疫保护作用.结果 与报道的相关序列比较,所克隆的nmpC基因核苷酸和氨基酸序列相似性均为100%.rNmpC表达量约为细菌总蛋白的30%.rNmpC免疫家兔可产生抗体并能与甲型副伤寒杆菌全菌抗血清产生阳性Western杂交信号.所有甲型副伤寒杆菌菌株均携带nmpC基因并表达NmpC蛋白,但伤寒杆菌、乙型及丙型副伤寒杆菌未检出nmpC基因.100μg和200μgrNmpC对感染小鼠的免疫保护率分别为41.7%(5/12)和66.7%(8/12).rNmpC免疫小鼠或保护试验存活小鼠血清仅对甲型副伤寒杆菌H抗原产生1∶5~1∶40的凝集效价.结论 NmpC是甲型副伤寒杆菌独有的序列保守、分布广泛且自然表达的外膜蛋白抗原,该外膜蛋白具有良好的免疫原性和一定的免疫保护作用,可作为多价甲型副伤寒杆菌基因工程疫苗候选抗原.  相似文献   

3.
目的 构建甲型副伤寒沙门菌spaO-ompA融合基因及其原核表达系统,确定重组表达产物rSpaO-OmpA免疫保护作用.方法 采用柔性肽序列连接spaO与ompA基因,构建spaO-ompA人工融合基因及其原核表达系统.采用SDS-PAGE和Bio-Rad凝胶图像分析系统检测目的重组表达产物rSpaO-OmpA表达情况及其产量.采用免疫扩散法、微量肥达和Western blot法鉴定rSpaO-OmpA 抗原性和免疫反应性.采用小鼠感染模型了解rSpaO-OmpA对甲型副伤寒沙门菌致死性感染的免疫保护作用,实验中采用重组表达的SpaO( rSpaO)及OmpA(rOmpA)作为对照.结果 所构建的spaO-ompA融合基因与spaO或ompA单基因核苷酸和氨基酸序列相似性均为100%.所构建的原核表达系统E.coli BL21 DE3pET42a-spaO-ompA能高效表达重组融合蛋白rSpaO-OmpA.rSpaO-OmpA能与甲型副伤寒沙门菌全菌抗血清结合并产生阳性杂交信号,免疫家兔后可产生特异性抗体.100 μg或200 μgrSpaO-OmpA对甲型副伤寒沙门菌感染小鼠的免疫保护率分别为66.7% (8/12)和83.3% (10/12),明显高于等量rSpaO及rOmpA( P<0.05).rSpaO-OmpA免疫小鼠血清与不同副伤寒沙门菌H抗原的凝集效价为1∶5 ~ 1∶40、与rSpaO和rOmpA及rSpaO-OmpA免疫双扩散效价为1∶1 ~1∶16.结论 人工融合重组抗原rSpaO-OmpA免疫原性和免疫保护作用较等量rSpaO或rOmpA更强.  相似文献   

4.
目的了解牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)归以基因变异性,构建归以基因原核表达系统,鉴定其表达产物(rFimA)的致炎作用,检测FimA在咯临床菌株中表达频率,了解FimA与慢性牙周炎的关系。方法采用高保真PCR从6株咯临床菌株中扩增fimA基因并测定其核苷酸序列。构建fimA基因原核表达系统,制备rFimA兔抗血清。采用Western blot鉴定rFimA抗原性和免疫反应性。建立ELISA检测38株段临床菌株FimA表达情况和97例慢性牙周炎患者212份龈下菌斑标本中的FimA。检测rFimA诱导人脐静脉内皮EVC-304细胞分泌n1、IL-8、TNF-α和细胞问黏附分子-1(ICAM-1)的作用。结果6株Pg临床菌株fimA基因核苷酸序列完全相同。所构建的原核表达系统rFimA产量高达细菌总蛋白的50%左右。rFimA可与Pg全菌抗血清发生结合反应,免疫家兔可获得高效价抗体。94.7%(36/3S)菌株和91.5%(194/212)龈下菌斑标本ELISA结果阳性。1和10μg的rFimA作用EVC-304细胞48h,其分泌的IL-1α水平升高(P〈0.05);但作用12h即可出现高水平的ICAM-1(P〈0.05),未发现有诱导IL-8和TNF-α的作用(P〉0.05)。结论 fimA基因序列保守,在Pg临床菌株中有很高的表达频率。rFimA有良好的抗原性和免疫反应性,可作为Pg血清学检测试剂盒和段疫苗的候选抗原。rFimA有较强的诱导细胞分泌ICAM-1的作用。  相似文献   

5.
目的 探讨15群15型问号钩端螺旋体(简称钩体)中国参考标准株及2群2型双曲钩体国际参考标准株是否均存在外膜蛋白OmpL1基因,克隆并构建该基因的原核表达系统,鉴定表达产物的免疫性。方法 常规酚.氯仿法提取上述钩体的基因组DNA,高保真PCR扩增全长OmpL1基因片段,T-A克隆后测定核苷酸序列并构建原核表达系统,不同浓度lPTG诱导后用SDS-PAGE检测重组蛋白rOMPLI表达情况。分别用兔抗钩体TR/PatocⅠ抗原、rOMPL1血清的Westernblot鉴定其免疫反应性和免疫原性。分别用显微镜凝集试验(MAT)和钩体细胞黏附模型检测兔抗rOMPLI血清的交叉凝集效价和细胞黏附阻断作用。结果 上述17株钩体均具有OmpL1基因,但至少可分3种基因型:OmpL1/1、OmpL1/2和OmpL1/3。与文献报道比较,所克隆的OmpL1/1、OmpL1/2和OmpL1/3基因核苷酸序列同源性分别为93.87%~94.08%、89.82%~100%和80.89%~81.72%,其氨基酸序列同源性分别为93.13%~98.75%、91.87%~100%和85.63%~88.44%。IPTG诱导后pET32a-OmpL1/1.E.coli/BL21DE3和pET32a-OmpL1/2-E.coliBL21DE3的rOMPL1/1和rOMPL1/2表达量分别占细菌总蛋白的30%和20%。rOMPL1,1和rOMPLl,2均能与兔抗钩体TR/PatocⅠ抗原血清发生免疫结合反应,免疫家兔可获得抗体。兔抗rOMPL1/1和rOMPL1/2血清对上述17株钩体的MAT效价为1:2.1:32,1:2.1:16稀释时均能有效地阻断钩体黏附J744A.1细胞。结论 所检测的钩体均有OmpLl基因,但至少可分为3种不同的基因型。所构建的原核表达系统表达的rOMPL1/1和rOMPL1/2具有良好的免疫原性和免疫反应性。rOMPL1/1和rOMPL1/2具有属特异性、钩体表面的膜蛋白抗原,能诱生交叉凝集抗体,并具有钩体黏附阻断的作用。  相似文献   

6.
目的 确定我国15群15株问号钩端螺旋体(简称钩体)参考标准株和2群2株双曲钩体国际标准株携带LipL41基因情况,构建该基因的原核表达系统,鉴定表达产物的免疫原性。方法 常规酚—氯仿法提取上述17株钩体基因组DNA,高保真PCR扩增全长LipL41基因片段,T—A克隆后测序分型。构建LipL41基因原核表达系统,SDS-PAGE检测重组目的蛋白(rLipL41)表达情况。分别用钩体属特异性TP/patoe Ⅰ抗原、rLipL41兔抗血清的Western blot鉴定其免疫反应性和抗原性。分别用显微镜凝集试验(MAT)、钩体黏附J774A.1细胞模型检测兔抗rLipL41血清的交叉凝集效价和黏附阻断作用。结果 15株问号钩体均有LipL41基因,并可分为LipL41/1和LipL41/2两种基因型,2株双曲钩体则否。11个LipL41/1基因和4个LipL41/2基因克隆之间的核苷酸和氨基酸序列相似性分别为88.61%—88.67%和93.24%—97.18%。所构建的原核表达系统rLipL41/1和rLipL41/2的表达量分别占钩体总蛋白的30%和40%。rLipL41/1和rLipL41/2均能与TP/patoe Ⅰ抗血清发生结合反应,免疫家兔能产生抗体。rLipL41/1和rLipL41/2兔抗血清对上述15株问号钩体MAT效价为1:8,1:128、1:16~1:2.S6稀释时均能有效地阻断钩体对细胞的黏附。结论 我国主要的15群问号钩体代表株均有LipL41/1或LipL41/2基因。所构建原核表达系统能高效表达rLipL41/1和rLipL41/2。rLipL41/1和rLipL41/2是具有良好抗原性和免疫反应性、广泛存在于不同血清群问号钩体表面的蛋白抗原。  相似文献   

7.
目的 分析我国15群15型问号钩端螺旋体(简称钩体)参考标准株外膜脂蛋白lipL21基因序列,构建该基因原核表达系统并鉴定表达产物的免疫原性,了解lipL21基因自然表达状况。方法 高保真PCR扩增上述问号钩体株及双曲钩体Paloc型PalocⅠ株基因组DNA中全长lipL21基因片段,T-A克隆后测序并构建其原核表达系统。分别用钩体TR/PatocⅠ和rLipL21兔抗血清为一抗的Western blot鉴定目的重组蛋白rLipL21的免疫原性,显微镜凝集试验(MAT)检测rLipL21兔抗血清的交叉凝集效价。以盐变-去垢剂处理法提取钩体外膜蛋白,用SDS-PAGE和免疫印迹法检测上述钩体株lipL21基因自然表达情况。结果 上述钩体株均存在序列高度保守的lipL21基因,其核苷酸和氨基酸序列相似性分别为98.75%~99.82%和99.46%~100%。rLipL21能与TR/PatocⅠ及rLipL21兔抗血清发生结合反应。rLipL21免疫家兔能产生抗体,该抗体对上述15株问号钩体MAT效价为1:16~1:128。问号钩体外膜标本中均可检出LipL21,双曲钩体则否。结论 我国钩体群参考标准株均含有序列保守的lipL21基因并自然表达于外膜,双曲钩体PatocⅠ株虽含有lipL21基因但未表达。rLipL21具有良好的抗原性和免疫反应性,有可能作为新型钩体疫苗或检测试剂盒的候选属特异性表面抗原之一。  相似文献   

8.
目的构建LTB—LipL32/1和CTB—LipL32/1融合基因原核表达系统并鉴定其表达产物的免疫和佐剂活性及保护作用,了解问号钩端螺旋体(简称钩体)野生株LipL32基因携带、表达及钩体病人血清LipL32基因产物抗体产生频率。方法采用常规分子生物学技术构建LTB—LipL32/1和CTB—LipL32/1融合基因及其原核表达系统。采用SDS-PAGE检测目的重组蛋白rLTB-LipL32/1及rCTB-LipL32/1表达情况。分别采用Western blot和GM1-ELISA检测rLTB-LipL32/1及rCTB—LipL32/1的免疫反应性和佐剂活性。采用PCR和MAT分别检测97株问号钩体野生株LipL32基因及其表达情况。采用ELISA检测228例钩体病人血清LipL32基因产物的抗体。采用豚鼠保护试验检测重组蛋白的免疫保护作用。结果与报道的相关序列比较,LTB—LipL32/1和CTB-LipL32/1融合基因核苷酸序列相似性分别为99.12%~99.71%和98.54%~99.42%,氨基酸序列相似性分别为97.58%-99.63%和96.77%~99.63%。rLTB-LipL32/1和rCTB—LipL32/1表达产量均约为细菌总蛋白的10%,并主要以包涵体形式存在。rLTB—LipL32/1和rCTB-LipL32/1均分别能与LipL32/1兔抗血清和牛GMI结合。97.9%(95/97)问号钩体野生株含有LipL32基因,95.9%(93/97)问号钩体野生株与rLipL32/1和rLipL32/2兔抗血清的MAT结果阳性。97.4%(222/228)和94.7%(216/228)的病人血清rLipL32/1和rLipL32/2抗体阳性。rLTB-LipL32/1、rCTB-LipL32/1和rLipL32/1豚鼠保护率分别为75.0%、75.0%~87.5%、50.O%~62.5%。结论成功构建了LTB—LipL32/1和CTB—LipL32/1融合基因及其原核表达系统。rLTB-LipL32/1和rCTB-LipL32/1融合蛋白有良好的抗原性和佐剂活性及一定的免疫保护作用,具有成为问号钩体属特异性疫苗的良好前景。LipL32/1是不同问号钩体血清群中广泛存在、序列保守、高频率表达的基因。  相似文献   

9.
目的 检测幽门螺杆菌临床菌株groEL基因序列差异,确定重组表达的GroEL蛋白(r-GroEL)抗原性、免疫反应性以及对幽门螺杆菌感染小鼠的免疫保护性.方法 采用PCR及测序法了解幽门螺杆菌临床菌株groEL基因序列.构建幽门螺杆菌groEL基因pET42a-E.coli BL21DE3原核表达系统,采用SDS-PAGE及凝胶图像分析系统确定rGroEL表达量,Ni-NTA亲和层析法提纯rGroEL.采用ELISA和Western blot检测rGroEL的抗原性和免疫反应性,采用幽门螺杆菌全菌为包被抗原的ELISA确定GroEL膜定位.采用幽门螺杆菌小鼠感染模型了解rGroEL免疫保护作用.结果 35株幽门螺杆菌临床菌株groEL基因序列相似性高达99.4%~ 100%.rGroEL表达量可达细菌总蛋白的56%,SDS-PAGE后提纯的rGroEL在凝胶中显示为单一的条带.rGroEL可诱导家兔和小鼠产生高效价IgG抗体,同时也能被幽门螺杆菌全菌抗体(Hp-IgG)或rGroEL-IgG识别并与之结合.GroEL是幽门螺杆菌表面蛋白抗原.50、100或200 μg rGroEL免疫可分别使50.0% (6/12)、75.0% (9/12)和91.7% (11/12)小鼠免于幽门 螺杆菌SS1株的感染,200 μg rGroEL免疫保护率(91.7%)显著高于50μg rGroEL(50.0%)( P<0.05).结论 幽门螺杆菌GroEL蛋白是序列保守、具有良好免疫原性和免疫保护性的表面抗原,可作为基因工程疫苗候选抗原.  相似文献   

10.
目的 构建问号钩端螺旋体(简称钩体)LipL32、OmpL1和LipL21蛋白的优势T-和B-细胞联合表位融合基因及其原核表达系统,并对表达产物的免疫原性进行鉴定.方法 人工合成多表位联合基因并构建其原核表达系统.采用SDS-PAGE检测重组蛋白;采用MAT检测重组蛋白兔抗血清与我国钩体标准参考株的凝集效价;Western blot和ELISA检测重组蛋白的免疫原性.结果 获得了多表位融合基因并构建了原核表达系统.表达产物的相对分子质量约为23×103,且主要以可溶性形式存在;重组蛋白兔抗血清免疫双扩散效价为1∶8,该抗血清能与我国15群的钩体标准参考株发生凝集反应,ELISA证明该重组蛋白能检测不同群型钩体感染患者血清中的抗钩体抗体.结论 成功构建了包含钩体LipL32、OmpL1和LipL21蛋白的优势T和B细胞联合表位基因及其原核表达系统,表达产物具有良好的抗原性和交叉免疫反应性,可作为研制通用型问号钩体基因工程疫苗及血清学检测的抗原.  相似文献   

11.
12.
Summary The ACTH content of the hypophysis of rats rises from a minimum in the morning to a maximum in the evening hours. These fluctuations are associated with the diurnal rhythm of light and darkness, and are abolished under conditions of continual light or darkness for 30 days. Rhythmic fluctuations of the ascorbic acid content of the adrenals are also found, with maximum values in the evening, and these are likewise abolished by maintenance under conditions of constant illumination.Presented by Active Member AMN SSSR V. V. Parin  相似文献   

13.
Seventy pancreatoduodenal complexes of 55 patients with chronic pancreatitis and tumours of this zone and 15 patients died from other diseases are studies histotopographically . The pieces of the pancreatic head tissue in the medial wall of the duodenum were found in 12 cases of the first group and in 4 control cases. The pancreatic tissue consisted either of all elements of this organ or cystically dilated ducts and seemed to infiltrate different layers of the duodenum wall. Three variants of the pancreatic head structure are suggested on the basis of anatomo-topographical interrelationships of the pancreatic head and duodenum. In 12 out of 14 cases chronic pancreatitis and carcinoma of organs of this zone were combined with the variants of the pancreatic head structure, in 2 cases there was a true heterotopy . Pathogenetic significance of these variants for the development of chronic pancreatitis is discussed.  相似文献   

14.
目的结合我院特点,测定来我院进行产后检查妇女的骨源性碱性磷酸酶(ABAP)活性以及全血钙。方法采用金标法测定产妇3031人骨源性碱性磷酸酶(ABAP)的活性,并从中随机选择855人采用BH-5100型多通道原子吸收光谱仪检测全血钙。结果经测定,3031名产妇中679人骨源性碱性磷酸酶(ABAP)的活性异常,异常者检出率为22.4%,其中83.5%的产妇轻度缺钙,而16.5%的产妇严重缺钙;而全血钙异常检出率为17.0%。结论ABAP活性检测方法比全血钙检测方法测定体内钙营养水平更具敏感性,可作为检测评价产妇钙营养状况的一种简易可靠的方法,为产后骨质疏松提供了一种可靠、便捷、科学合理的指标。  相似文献   

15.
目的:探讨指背腱膜滑动距离与近侧指间关节(PIP)屈曲关系,为临床修复提供解剖学基础。方法:男性成人新鲜尸体标本10侧30指(示、中、环指各10指),切除手指皮肤,不破坏腱鞘、屈肌支持带、伸肌支持带、内在肌及外在肌,使肌腱保持正常的生理状态,分别测量各指中央束(CS)、侧束(LB)在PIP屈曲45°和90°时的滑动距离。结果:当PIP屈曲45°时,CS滑动距离为(2.7±0.4)mm,LB滑动距离为(2.8±0.6)mm;当PIP屈曲90°时,CS滑动距离为(4.3±0.7)mm,LB滑动距离为(4.8±0.6)mm。结论:指背腱膜滑动距离减少,严重影响手指的屈曲功能。对于指背腱膜的新鲜性损伤应予以精确修复;对于陈旧性损伤的修复应确保指背腱膜的正常滑动范围。  相似文献   

16.
Rotation of a display in the frontal plane evokes a conjugate nystagmic rotation of the eyes (cycloversion) about the visual axes, with slow phases in the direction of stimulus motion — a response known as torsional optokinetic nystagmus (TOKN). Antiphase rotation of large dichoptic displays evokes a disconjugate rotation of the eyes about the visual axes, a response known as cyclovergence. Using the scleral-coil technique for monitoring eye movements we recorded TOKN evoked by black-and-white sectored displays rotating about the visual axis at an angular velocity of 30°/s. The display was confined to central areas with diameters ranging from 5° to full field or with the central 5° to 75° occluded. A 5° central display evoked TOKN with 40% of the gain for the full-field display and gain increased as a function of the size of the display. The gain of TOKN decreased with increasing size of a central occluder. These characteristics of TOKN are similar to those of horizontal OKN. Cyclovergence was virtually absent with a 5° display but was immune to occlusion of the central 40°. Cyclovergence therefore differs from cycloversion in showing no preference for centrally placed stimuli. These effects are free from the influence of stationary edges, since these were concentric with the stimulus motion. The effects are also free from the influence of voluntary pursuit, since humans do not normally have voluntary control over torsional eye movements.  相似文献   

17.
18.
19.
20.
The upper cervical esophagus is exerted on swallowing and peristalsis by somatic and visceral motoneurons, whereas the lower esophagus is exerted on only peristalsis by visceral motoneurons. We examined the origin of the esophageal motoneurons and whether there were any differences between the distributions of the upper and the lower esophageal motoneurons in the medulla and the spinal cord using cholera toxin subunit b (CTb) as the retrograde tracer. Following injection of CTb into the cervical esophagus resulted in heavy labeling of the neurons in the nucleus ambiguus including the compact (AmC), semicompact (AmS) and loose (AmL) formations, and the medial column of lamina IX at the C1-C5 levels of the cervical spinal cord corresponding to the spinal accessory nucleus. A few labeled neurons were found in the inferior salivatory nucleus, the rostral division of the dorsal motor nucleus of the vagus (DMX), the accessory facial nucleus and the lateral column of lamina IX at the C2 and C3 levels. All these labeled neurons showed ChAT immunoreactivity. When CTb was injected into the cut end of the unilateral recurrent laryngeal nerve, many labeled neurons were found in the ipsilateral AmC, the AmL, and the bilateral medial column at the C1 and C2 levels. Following injection of CTb into the subdiaphragmatic esophagus resulted in heavy labeling of the neurons only in the AmC and the DMX. When CTb was injected into the sternomastoid muscle, many labeled neurons were found in the medullary reticular formation, the facial nucleus, the medial column at the C1-C3, C5 and C6 levels, and the lateral column at the C2, C3, C5 and C6 levels. Injections of a Fluoro-Gold into the cervical esophagus and a CTb into the sternomastoid muscle or the subdiaphragmatic esophagus in the same animal showed many double labeled neurons in the medial column of the accessory nucleus at the C1 and C2 levels, but no double labeled neurons in the AmC. These results indicated that the upper cervical esophagus is innervated by the visceral medullary vagal motoneurons as well as the somatic spinal accessory motoneurons. The lower esophagus is innervated only by the visceral medullary vagal motoneurons.  相似文献   

设为首页 | 免责声明 | 关于勤云 | 加入收藏

Copyright©北京勤云科技发展有限公司  京ICP备09084417号