1,25-二羟维生素D3对OS-732人成骨样细胞增殖与分化的影响

目的观察1,25-二羟维生素D3对体外培养的人成骨样细胞增殖与分化的影响,以进一步探讨其治疗骨质疏松的机制.方法采用MTT比色分析法检测1,25-二羟维生素D3对体外培养OS-732人成骨样细胞增殖的作用与效价.采用培养细胞匀浆上清测单位蛋白下的碱性磷酸酶活性,培养基中骨钙素(BGP)含量分析方法检测1,25-二羟维生素D3对OS-732人成骨样细胞分化的影响.结果培养第4天,10-7mol/L1,25-二羟维生素D3显著抑制成骨样细胞增殖(P＜0.05),10-8mol/L、10-9mol/L1,25-二羟维生素D3对成骨样细胞的作用不明显.培养4天后培养基中BGP水平在10-7mol/L组变化不大,在10-8mol、10-9mol/L1,25-二羟维生素D3组BGP水平显著增高(P＜0.05,P＜0.01).结论1,25-二羟维生素D3抑制成骨样细胞增殖在高剂量时作用显著,促进成骨样细胞分化作用在较低剂量显著.     

1,25-二羟维生素D3对子宫内膜癌HEC-1-A细胞增殖与S期激酶相关蛋白及抑癌基因p27表达的影响

目的 观察1,25-二羟维生素D3对人子宫内膜癌HEC-1-A细胞增殖及S期激酶相关蛋白（Skp2）基因、抑癌基因p27表达的影响,探讨其抗癌机制.方法 应用免疫组织化学方法检测人子宫内膜癌HEC-1-A细胞表达维生素D受体（VDR） 选用人子宫内膜癌HEC-1-A细胞进行体外培养,用CCK-8法测定不同浓度1,25-二羟维生素D3作用细胞后不同时间后细胞生长抑制率,流式细胞仪进行细胞周期分析,采用荧光实时定量聚合酶链反应（PCR）及蛋白质印迹法检测Skp2/p27基因表达的变化.结果 人子宫内膜癌HEC-1-A细胞表达VDR,且定位于细胞核内 1×（10-8～10-6）mol/L浓度的1,25-二羟维生素D3作用于HEC-1-A细胞1～5 d范围内各不同浓度处理组细胞生长增殖均受到明显抑制,并且随着作用浓度增加,细胞增殖能力逐渐下降 1,25-二羟维生素D3能增加G0/G1期细胞比例,降低S、G2/M期细胞比例,从而降低细胞增殖指数（P＜0.01） 在mRNA、蛋白质水平上,能降低Skp2表达,而p27mRNA减少,p27蛋白表达明显增加.结论 1,25-二羟维生素D3对人子宫内膜癌HEC-1-A细胞有抑制作用,可能是通过转录水平下调Skp2基因表达,同时由于Skp2的减少增加p27蛋白稳定性,减少其降解,从而产生抑癌作用.     

1，25二羟维生素 D3诱导喉癌细胞 Hep-2细胞凋亡及其对Bax／Bcl-2蛋白表达水平的影响

目的：研究1,25二羟维生素 D3抑制人喉癌 Hep-2细胞增殖作用,诱导细胞凋亡及其凋亡相关机制。方法用不同剂量（10－8、10－7、10－6 mol／L）1,25二羟维生素 D3处理 Hep-2细胞24 h、48 h、72 h,四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测 Hep-2细胞的增殖情况,计算抑制率。流式细胞术检测 Hep-2细胞的凋亡率。Western blot 检测用药前后细胞中 Bax 和 Bcl-2蛋白的表达水平。结果1,25二羟维生素 D3可以抑制 Hep-2细胞增殖（P ＜0．05）,最高抑制率可达30．71％,在上述浓度内随着浓度增加、时间延长抑制作用逐渐增强,呈时间－剂量依赖性。10－7、10－6 mol／L 1,25二羟维生素 D3作用48 h 后,Hep-2凋亡细胞比例显著增加,凋亡率高于空白对照组（P ＜0．05）。1,25二羟维生素 D3处理48 h 后,Hep-2细胞 Bax 蛋白表达上升,Bcl-2蛋白表达水平下降。结论在一定浓度范围内1,25二羟维生素 D3能够抑制人喉癌 Hep-2细胞的增殖,呈时间－剂量依赖性,其抑制作用与诱导细胞凋亡有关;1,25二羟维生素 D3可通过上调 Bax 蛋白表达、下调 Bcl-2蛋白表达诱导 Hep-2细胞凋亡。     

1,25-二羟维生素D_3对人胃腺癌细胞诱导分化的实验研究

目的观察1,25-二羟维生素D3对胃腺癌MGC-803细胞的诱导分化作用。方法1,25-二羟维生素D3(10-6、10-5、10-4mmol.L-1)作用于MGC-803细胞后,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖能力、平板克隆试验测定细胞集落形成率、流式细胞仪测定细胞周期、TRAP-银染法测定端粒酶活性。结果1,25-二羟维生素D3作用24、48、72和96h后胃腺癌细胞生长均明显受抑制,48h后细胞周期出现向G0/G1期移行的特征性动力学改变,端粒酶活性明显受到抑制。细胞集落形成率明显下降(P<0.05)。结论1,25-二羟维生素D3对人胃腺癌细胞有诱导分化作用。     

1，25二羟维生素D3对子宫内膜癌HEC-1-A细胞Skp2mRNA的影响

目的检测1,25二羟维生素D3[1,25（OH）2D3）对人子宫内膜癌HEC-1-A细胞作用后S期激酶相关蛋白（skp2）表达情况．以探讨其抗癌机制;方法选用人子宫内膜癌细胞株HEC-1-A进行体外培养,采用RToPCR在mRNA水平检测Skp2基因表达的变化;结果（10^-8-10^-6）mol·L^-1浓度的1,25（OH）2D3作用于HEC-1-A细胞随着作用浓度增加、作用时间延长。细胞增殖能力逐渐下降。Skp2mRNA逐渐减少;结论1,25（OH）2Db对人子宫内膜癌细胞株HEC-1-A有抑制作用．可能通过转录水平下调Skp2基因表达．从而产生抑癌作用。     

不同浓度破骨细胞分化因子和1,25-(OH)_2D_3体外诱导大鼠破骨样细胞形成的研究

目的研究破骨细胞分化因子和1,25-(OH)2D3共同作用对大鼠破骨样细胞体外形成的影响。方法采用大鼠脾细胞和骨细胞联合培养,实验组分别加入不同浓度的破骨细胞分化因子和1,25-(OH)2D3进行诱导,并利用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、骨吸收陷窝检测等方法对破骨样细胞进行鉴定,对TRAP(+)的细胞进行计数和统计学分析。统计学方法采用单因素方差分析,组间比较用SNK检验。结果各实验组细胞均有TRAP(+)多核破骨细胞出现,并在牙本质磨片上形成吸收陷窝,破骨细胞分化因子和1,25-(OH)2D3共同作用的双因子诱导TRAP(+)多核破骨细胞形成的数量要大于使用单因子诱导,且因子浓度越大,诱导效果越好。结论破骨细胞分化因子和1,25-(OH)2D3共同作用及高浓度的因子诱导可有效诱导体外破骨样细胞的形成。     

1,25(OH)2D3对人肾小球系膜细胞增殖及 mTOR/p70s6K表达的影响

摘要：目的 探讨 1,25-二羟基维生素 D3[1,25(OH)2D3]对人肾小球系膜细胞增殖的影响及其在肾小球系膜细胞调控中对 mTOR/p70s6K 信号通路的作用。方法 体外培养人肾小球系膜细胞, 取传代培养至 3~7 代细胞分为 4组： 正常对照组（加含 5%胎牛血清 DMEM 培养基）, VD 组[加 1,25(OH)2D3 10-8 mol/L], R 组（加雷帕霉素 5 mg/L）, R+VD 组[加雷帕霉素 5 mg/L 及 1,25(OH)2D3 10-8 mol/L], 干预 48 h。采用细胞增殖与活性检测试剂盒 CCK-8 检测细胞增殖情况, 流式细胞术检测细胞周期时相分布, 免疫荧光法检测细胞中 mTOR、 p70s6K 的表达情况。结果 正常对照组、 VD 组、 R 组、 R+VD 组：（1） 吸光度值 （A450） 依次降低, 组间多重比较差异均有统计学意义 （均 P < 0.05）; 抑制率（IR） 依次升高。（2） G1期细胞比例依次增加, S 期、 G2/M 期依次减少, 增殖指数 （PI） 依次降低, 除 R 组与 VD 组比较差异无统计学意义外, 其余组间多重比较差异均有统计学意义。（3） 系膜细胞中 mTOR、p70s6K 蛋白表达强度均依次降低, 除 R 组与 VD 组比较差异无统计学意义外, 其余组间多重比较差异均有统计学意义。结论 1,25(OH)2D3可显著抑制人系膜细胞增殖, 且其可能通过抑制 mTOR/p70s6K 信号通路调控肾小球系膜细胞增殖。     

1,25二羟维生素D_3对卵巢癌细胞株HO8910增殖及Skp_2/p27蛋白表达的影响

目的:观察1,25二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]对人卵巢癌细胞株HO8910增殖的影响,并且检测其作用下S期激酶相关蛋白(Skp2)、抑癌基因p27的蛋白表达情况,以探讨其作用机制。方法:选用人卵巢癌细胞株HO8910进行体外培养,用MTT比色法测定不同浓度D3[1,25(OH)2D3]对细胞株作用不同时间后细胞生长抑制率,流式细胞仪进行细胞周期分析,免疫细胞化学染色检测Skp2及p27蛋白表达情况。结果:1,25(OH)2D3在160×10-9mol/L以上时,对细胞有抑制作用(P<0.05),且呈浓度时间依赖性;1,25(OH)2D3能增加G0/G1期细胞比例,降低S、G2/M期细胞比例,从而降低细胞增殖指数(P<0.01);能降低Skp2表达,增加p27蛋白表达(P<0.01)。结论:1,25(OH)2D3对人卵巢癌细胞株HO8910有抑制作用,可能通过下调Skp2表达、上调p27蛋白表达,从而抑制癌细胞增殖。     

1,25-(OH)2D3在临床的应用

维生素D3是一些抗佝偻病物质的总称,其活性代谢物主要包括25-羟维生素D3(25-(OH)D3)、24,25-二羟维生素D3(24,25-(OH)2D3)和1,25-二羟维生素D3(1,25-(OH)2D3),其中生物活性最强的代谢物是1,25-(OH)2D3.1,25-(OH)2D3是维生素D经肝、肾代谢后的活性形式,它不仅参与内分泌系统对骨和无机盐的代谢调节,还参与调节许多细胞的代谢过程.     

1,25-二羟维生素D_3联合缬沙坦减少IgA肾病尿蛋白的疗效观察

目的观察1,25-二羟维生素D3(VD3)联合缬沙坦减少IgA肾病尿蛋白的疗效。方法将60例肾活检明确诊断为IgA肾病的患者采用随机数字表法分为ARB组和ARB+VD3组,ARB+VD组根据所应用的1,25-二羟维生素D3的剂量分为联合治疗组1和组2,观察6个月,治疗过程中监测血压,检测治疗前后尿蛋白、肾功能、血钙、血钾水平。结果治疗后3组尿蛋白均较基线下降,差异有统计学意义(P<0.05),且3组之间尿蛋白的下降程度两两比较,各组差异有统计学意义(P<0.05),联合治疗组2下降最为显著,无明显不良反应。结论 1,25-二羟维生素D3联合缬沙坦对减少IgA肾病尿蛋白有较好的疗效,联合较大剂量1,25-二羟维生素D3效果更为显著,为IgA肾病的初始治疗提供更优先的方案。     

血清1,25-二羟维生素D3表达水平对糖尿病患者的临床意义

目的 观察糖尿病患者血清中1,25-二羟维生素D3的表达水平,探讨其表达水平对糖尿病患者的临床意义.方法 收集本院单纯糖尿病患者48例作为单纯糖尿病组,糖尿病肾病患者37例作为糖尿病肾病组,对照组选取50例健康体检者,采用ELISA法检测患者血清中1,25-二羟维生素D3的表达水平,分析1,25-二羟维生素D3的表达水平与糖尿病患者病情严重程度的关系.结果 单纯糖尿病及糖尿病肾病患者血清中1,25-二羟维生素D3及25-二羟维生素D3表达水平明显低于健康体检者（t=4.87,P＜0.05;t=5.12,P＜0.05）;糖尿病肾病组患者血清中1,25-二羟维生素D3及25-二羟维生素D3的表达水平明显低于单纯糖尿病组,差异有统计学意义（t=3.56,P＜0.05）.结论 糖尿病患者血清中1,25-二羟维生素D3的表达水平低于健康人,其表达水平与糖尿病患者病情严重程度呈负相关,这可能有助于临床上对糖尿病患者早期病情的判断。     

成骨生长肽对MC3T3-E1成骨细胞增殖的影响及其可能机制

目的探讨成骨生长肽(osteogenic growth peptide,OGP)对MC3T3-E1成骨细胞的增殖的影响及其机制。方法常规培养小鼠成骨细胞MC3T3-E1,分为OGP高、中、低剂量组(1×10-8、1×10-10、1×10-12mol/L)以及对照组,利用MTT法检测OGP作用24 h、48 h以及72 h对MC3T3-E1成骨细胞增殖作用,利用免疫化学染色法检测成骨细胞I型胶原蛋白水平,ELISA法检测骨桥蛋白(osteopontin,OPN)含量。结果在24 h时,各剂量OGP对MC3T3-E1的增殖无影响;作用48、72 h,OGP 10-10mol/L以及OGP 1×10-8mol/L显著促进MC3T3-E1细胞增殖(P<0.05),其中OGP 1×10-8mol/L 48 h促进MC3T3-E1细胞增殖作用最强。作用24 h,各组成骨细胞I型胶原蛋白IOD值差异均无统计学意义;作用48 h,OGP 1×10-8mol/L组细胞I型胶原蛋白IOD值显著高于对照组(P<0.05);作用72 h,OGP 1×10-10mol/L组以及OGP 1×10-8mol/L组细胞I型胶原蛋白IOD值均显著高于对照组(P<0.05)。作用24 h,各组成骨细胞OPN OD值差异均无统计学意义;作用48 h、72 h,OGP 1×10-10mol/L组以及OGP1×10-8mol/L组细胞OPN OD值显著高于对照组(P<0.05)。结论 OGP能够明显促进MC3T3-E1成骨细胞的增殖,其可能的作用机制是增加成骨细胞I型胶原蛋白的表达以及OPN的表达,且其作用与浓度密切相关,在1×10-8mol/L时,其促成骨细胞增殖作用最强。     

碱性成纤维细胞生长因子对人牙龈成纤维细胞成骨分化与增殖的影响

目的 观察碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)对体外培养的人牙龈成纤维细胞(HGFs)成骨分化能力与细胞增殖的影响,探索b FGF在HGFs体外诱导成骨分化过程中的作用。方法 采用组织块贴壁法体外培养HGFs,取第3代细胞进行如下分组培养。1组为普通培养基组,2组为普通培养基+10μg/L b FGF组,3组为成骨诱导组,4组为成骨诱导+10μg/L b FGF组。应用四甲基偶氮唑蓝比色法检测HGFs增殖状况;用碱性磷酸酶染色法及茜素红染色法检测HGFs的成骨分化能力。结果 在普通培养基和成骨诱导培养基中,10μg/L的b FGF均能促进HGFs的增殖(P<0.01);在成骨诱导培养基中HGFs具有骨向分化能力,形成钙结节;而10μg/L的b FGF对HGFs的碱性磷酸酶活性与矿化结节形成能力均无明显影响。结论 10μg/L的b FGF能促进HGFs的增殖能力,而对其骨向分化无明显影响。     

丙戊酸对癫痫患儿骨代谢的影响

目的：研究丙戊酸对癫痫患者骨代谢的影响。方法：癫痫患者组34例于丙戊酸治疗前、治疗后3个月及6个月分别测定血钙（Ca）、血磷（P）、骨性碱性磷酸酶（BAP）、骨钙素（BGP）、甲状旁腺素（PTH）、1,25-二羟维生素D,[1,25-（OH）2VitD3]、降钙素（CT）及尿脱氧吡啶啉（DPD）、肌酐（Cr）;并设正常对照组30例。结果：两组治疗前骨代谢无显著差异;治疗组治疗后3个月、6个月CT、BAP、BGP、DPD、Cr均较治疗前明显升高（P〈0．05）,1,25-（OH）2VitD3较治疗前明显下降（P〈0．05）。结论：丙戊酸治疗癫痫惠儿可致骨代谢异常,骨形成及骨吸收均明显活跃。     

秦皇岛地区婴幼儿血清25羟维生素D水平

维生素D分为膳食维生素D和阳光维生素D。无论是阳光维生素D还是膳食维生素D,都在肝脏由25α-羟化酶催化,完成第一次羟化成为25羟维生素D;在肾脏或其他靶组织、细胞由1-α羟化酶催化,完成第二次羟化,生成1,25-二羟维生素D。1,25-二羟维生素D是活性维生素D。血清25羟维生素D     

1,25-二羟基维生素D_3抑制K562细胞增殖及其机制

目的观察1,25二-羟基维生素D3〔1,25(OH)2D3〕对白血病细胞株K562增殖的影响并初步探讨其作用机制。方法间接免疫荧光法鉴定维生素D受体(VDR)在K562细胞的表达;四噻唑蓝法(MTT)、AO/EB、流式细胞PI单染分析细胞生长抑制率、细胞凋亡率及细胞周期;比色法检测凋亡信号蛋白———天冬酰胺特异酶切的半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性。结果①K562细胞核阳性表达VDR;②10-8mol.L-11,25(OH)2D3可明显抑制K562细胞增殖,促进凋亡,凋亡率从4.1%(对照组)增至26.5%,P<0.01;③1,25(OH)2D3作用后K562细胞的Caspase-3活性增加,P<0.05,提示细胞凋亡伴随着Caspaes-3活性升高。结论1,25(OH)2D3可明显抑制K562细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用机制与Caspase-3活性增加相关。     

1,25-二羟维生素D_3对IgA肾病大鼠调节性T细胞作用研究

目的探讨1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]对Ig A肾病大鼠调节性T细胞的作用。方法 26只Wistar大鼠分为正常对照组、Ig A肾病组、1,25(OH)2D3治疗组。检测大鼠尿蛋白定量(24 h)的变化,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测人叉头框蛋白P3(Foxp3)m RNA的表达水平。结果 1Ig A肾病组与正常对照组相比,尿蛋白定量(24 h)水平显著升高,Foxp3 m RNA的水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。2治疗组与Ig A肾病组相比,尿蛋白定量(24 h)水平显著降低,Foxp3 m RNA的水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论11,25(OH)2D3可能降低或缓解Ig A肾病尿蛋白的水平。21,25(OH)2D3可能通过调节调节性T细胞分化发挥免疫作用。     

维生素D和风湿病

维生素D( vitamin D,VitD)是骨代谢及钙稳态的关键性调节因子,除参与钙、磷代谢外,近年研究发现,VitD生物活性产物1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]与VitD受体(VDR)结合,通过直接激活或抑制核内含有VitD反应元件的基因,或影响核转录因子NF-κB和NF-AT表达,调控相应DNA转录而发挥生物学作用.     

1,25-(OH)2D3对胰腺癌细胞诱导分化的研究

目的研究1,25-(OH)2D3对胰腺癌细胞的诱导分化作用。方法经1,25-(OH)2D3处理人胰腺癌细胞株Bxpc-3,采用电镜观察形态学;流式细胞仪测定细胞周期动力学;免疫组化法检测p21、DPC-4/Smad4蛋白的表达。结果10-7mol/L1,25-(OH)2D3能使Bxpc-3细胞形态发生变化,细胞周期时相分布出现G0/G1期阻滞,细胞周期有关蛋白p21及DPC-4/Smad4蛋白表达上调。结论10-7mol/L1,25-(OH)2D3具有明显诱导胰腺癌细胞良性分化的作用。     

1，25—二羟基维生素D3对环磷酰胺处理的NOD小鼠糖尿病的影响

目的探讨1,25-二羟基维生素D3对环磷酰胺促发的NOD鼠1型糖尿病的预防作用.方法NOD鼠从离乳后隔日接受1,25-二羟基维生素D3治疗,第10周龄给予环磷酰胺300mg/kg,观察1,25-二羟基维生素D3对环磷酰胺处理的NOD鼠糖尿病发病率和胰岛炎的影响,及对Th1、Th2细胞因子mRNA表达的影响.结果1,25-二羟基维生素D3处理组糖尿病发病率为17%,明显低于对照组67%(P＜0.05),且胰岛炎严重程度也明显减轻.处理组胰腺TNT-α、IFN-γmRNA的表达较对照组明显降低,而IL-10mRNA的表达无明显改变.结论1,25-二羟基维生素D3可以预防NOD鼠环磷酰胺诱发的糖尿病的发生,其机制可能与纠正Th1型细胞因子与Th2型细胞因子比例失衡有关.