氨基胍对糖基化终产物干预后人肾系膜细胞MMP-2表达的影响

目的观察盐酸氨基胍（AG）对糖基化终产物（AGEs）干预后人肾系膜细胞（HRMC）基质金属蛋白酶2（MMP-2）表达的影响。方法运用糖基化终产物-牛血清白蛋白（AGE-BSA）干预HRMC,以及不同浓度AG单独或与AGE-BSA共同干预HRMC24小时;RT-PCR和Western blot分别检测HRMC MMP-2mRNA和蛋白表达。结果AGE-BSA明显降低HRMC MMP-2mRNA和蛋白表达（P〈0.05）,AG以浓度依赖的方式恢复AGE-BSA下调的HRMC MMP-2mRNA和蛋白表达（P〈0.05）。结论AG可能通过拮抗AGEs对MMP-2表达的抑制效应而发挥其肾脏保护作用。     

玉葵清对糖基化终产物诱导的人肾系膜细胞趋化因子表达的影响

目的 探讨玉葵清对糖基化终产物（AGEs）诱导的人肾系膜细胞（HRMC）趋化因子表达及其趋化效应的影响. 方法 糖基化牛血清白蛋白（AGE-BSA）和玉葵清干预HRMC. 结果 AGE-BSA组较BSA组HRMC趋化单核细胞数增加,单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、Fractalkine（FKN）中和抗体组HRMC趋化单核细胞数较AGE-BSA组减少;玉葵清组MCP-1、Fractalkine基因表达、上清中的蛋白含量和趋化单核细胞较BSA组降低（P＜0.05）. 结论 玉葵清减弱AGE-BSA诱导的HRMC趋化因子表达及其趋化效应,可能改善DN肾脏炎症反应.     

格列喹酮对糖基化终产物诱导的人肾系膜细胞RANTES表达的影响

目的探讨格列喹酮对糖基化终产物（AGEs）诱导的人肾系膜细胞（HRMC）正常T细胞表达分泌的调节活化蛋白（RANTES）表达的影响。方法运用糖基化修饰的牛血清白蛋白（AGE-BSA）和格列喹酮干预体外培养的HRMC,用半定量RT-PCR检测细胞中RANTES mRNA水平,用ELISA法测定细胞培养上清中RANTES蛋白水平。结果格列喹酮干预组HRMC RANTES的mRNA表达和蛋白分泌低于AGE-BSA组（P〈0.05）,且降低水平呈浓度和时间依赖性。结论格列喹酮能抑制糖基化终产物诱导的HRMC RANTES的表达和分泌。     

马来酸罗格列酮抑制糖基化终产物诱导的人肾系膜细胞RANTES高表达

目的探讨马来酸罗格列酮对糖基化终产物（AGEs）诱导的人肾系膜细胞（HRMC）趋化因子RANTES高表达的影响,及其对糖尿病大鼠血清糖基化终产物-肽（AGE-P）及肾脏RANTES表达的影响。方法运用糖基化修饰的牛血清白蛋白（AGE-BSA）与马来酸罗格列酮干预体外培养的HRMC,EusA法检测细胞培养上清中RANTEs蛋白水平,实时定量RT-PCR检测细胞中RANTES mRNA水平,Western blot检测RANTES蛋白表达。制备2型糖尿病大鼠模型,马来酸罗格列酮治疗10周。流动注射分析法测定血清AGEP,免疫组织化学检测肾皮质RANTES表达。结果马来酸罗格列酮干预组HRMC RANTES的mRNA和蛋白表达以及蛋白分泌明显低于AGE-BSA组;马来酸罗格列酮治疗组糖尿病大鼠血清AGE-P明显下降,肾皮质RANTES表达明显低于糖尿病非治疗组。结论马来酸罗格列酮可以抑制AGE-BSA诱导的HRMC RANTES的表达和分泌,还可降低糖尿病大鼠血清AGE-P及肾脏RANTES表达。     

糖基化终末产物对活化肝星状细胞合成前胶原及致纤维化细胞因子的影响

目的探讨不同浓度的糖基化终末产物（AGEs）对肝星状细胞（HSC）活性的影响。方法体外合成糖基化牛血清白蛋白（AGE-BSA）,以不同浓度的AGE-BSA刺激HSC,观察AGE受体（RAGE）、转化生长因子（TGFβ1）,结缔组织生长因子（CTGF）、Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA;ELISA法检测细胞上清液TGFβ1及Ⅰ、Ⅲ型前胶原蛋白的水平。结果高浓度的AGE-BSA（100μg/ml）培养24 h便能促进RAGE、TGFβ1、CTGF和Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达,并随着时间延长而升高,细胞上清液蛋白水平有同样改变。结论一定浓度的AGEs能促进HSC前胶原及致纤维化细胞因子的表达,并呈时效性改变。AGEs对肝纤维化可能起到促进作用。     

1-脱氧野尻霉素对高糖刺激大鼠系膜细胞增殖的影响

观察1-脱氧野尻霉素(1-deoxynojirimycin,DNJ)对大鼠系膜细胞增殖的影响及进行机制探讨.结果 显示,DNJ抑制高糖刺激的系膜细胞增殖呈剂量和时间依赖性.DNJ可降低高糖刺激的系膜细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、整合素β1 mRNA、蛋白及黏着斑激酶(FAK)的蛋白表达(P＜0.05或P＜0.01),抗整合素β1抗体、FAK抑制剂genistein也可抑制高糖刺激系膜细胞α-SMA的蛋白表达(均P＜0.01).     

辛伐他汀减轻糖基化终末产物对内皮细胞环氧化酶2表达的影响

目的 探讨辛伐他汀对糖基化终末产物（AGEs）诱导内皮细胞环氧化酶2（COX-2）表达的影响。 方法 体外以不同浓度的糖基化白蛋白（AGE-BSA）、辛伐他汀单独或联合作用于人脐静脉内皮细胞,检测细胞COX-2 mRNA的表达及培养上清液中前列腺素E2（PGE2）的含量。 结果 AGE-BSA诱导内皮细胞COX-2 mRNA的表达,作用呈剂量和时间依赖方式。辛伐他汀可降低AGE-BSA诱导的COX-2 mRNA表达及PGE2产物浓度。 结论 AGEs促进内皮细胞COX-2表达,辛伐他汀可减轻此作用。     

色素上皮衍生因子抑制糖基化终产物介导人肾小球系膜细胞糖基化终产物受体表达的研究

目的 观察色素上皮衍生因子（PEDF）、晚期糖基化终产物受体（RAGE）的表达及重组PEDF对RAGE表达的抑制作用,探讨PEDF与DN的关系及对DN的保护作用. 方法 采用糖化小牛血清白蛋白（AGE-BSA）体外诱导人肾小球系膜细胞（HRMCs）,Western blot及RT-PCR法分别检测RAGE、PEDF蛋白和mRNA表达. 结果 （1） AGE-BSA（100～400 mg/L）呈浓度梯度减少HRMCsPEDF表达（P＜0.01）,升高RAGE表达（P＜0.01）;（2）重组PEDF蛋白（5～40 nmol/L）呈浓度依赖性抑制AGE-BSA介导RAGE蛋白在HRMCs的表达（P＜0.05）. 结论 AGEs通过降低PEDF表达,增加RAGE表达参与DN的发生,PEDF可能通过抑制AGE-RAGE轴对DN发挥保护作用.     

糖基化终末产物对真皮成纤维细胞细胞核因子κB活化的影响普罗布考的保护作用

目的 研究糖基化终末产物（AGEs）对真皮成纤维细胞（Fb）细胞核因子κB（NF-κB）活化的影响及普罗布考的保护作用. 方法 体外分离培养Fb,分为对照（Con）组、AGE-BSA组及普罗布考干预（Probucol）组.水溶性四唑盐（WST）法检测细胞增殖,免疫荧光染色检测NF-κB的活化、实时定量PCR检测MCP-1mRNA表达. 结果 与Con组相比,AGE-BSA组细胞增殖能力减退,NF-κB表达增加,细胞MCP-1mRNA表达升高（P＜0.05或P＜0.01）;与AGE-BSA组相比,Probucol组细胞增殖能力增强,NF-κB表达下降,细胞MCP-1mRNA表达下调（P＜0.05或P＜0.01）. 结论 普罗布考对AGE-BSA诱导的Fb的保护作用可能是通过促进Fb增殖,抑制NF-κB活化及减低MCP-1表达来实现的.     

整合素α5β1和FAK在上皮卵巢肿瘤组织中的表达及意义

目的研究整合素α5β1和黏着斑激酶（FAK）在卵巢上皮肿瘤组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法应用免疫组化方法检测49例卵巢上皮癌组织（观察组）和15例卵巢上皮良性肿瘤组织（对照组）中整合素α5β1和FAK的表达情况。结果观察组整合素α5β1和FAK的表达明显高于对照组（P〈0．05）;整合素α5β1阳性表达率与卵巢上皮癌组织的分化程度以及临床分期有关（P均〈0．05）,与患者年龄、肿瘤大小及组织学分型无关（P〉0．05）;FAK阳性表达率与卵巢上皮癌组织的临床分期有关（P〈0．05）,与患者年龄、分化程度、肿瘤大小及组织学分型无关（P〉0．05）;整合素α5β1、FAK在卵巢上皮癌组织中的表达呈正相关（r=0．490,P〈0．01）。结论整合素α5β1、FAK在卵巢上皮癌组织中的表达具有相关性,与卵巢上皮癌的发生、侵袭和转移密切相关。     

糖基化终产物对大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E尾加压素ⅡmRNA表达的影响

目的 探讨晚期糖基化终产物（AGEs）对大鼠近端肾小管上皮细胞NRK-52E尾加压素Ⅱ（urotensi n Ⅱ,UⅡ）mRNA表达及对细胞外基质（ECM）合成的影响.方法 在培养大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E中,分别加入不同浓度的糖化牛血清白蛋白（AGE-BSA）及其对照物牛血清白蛋白（BSA）进行刺激,ELISA法检测培养上清中纤连蛋白（FN）及Ⅳ型胶原 （Collagen Ⅳ）含量,RT-PCR检测细胞UⅡmRNA表达.结果 与加入BS A组比较,AGE-BSA组UⅡmRNA表达以时间和剂量依赖方式明显增加（P＜0.05）,培养上清中FN及Col Ⅳ含量也明显增加（P＜0.05）,与UⅡmRNA表达量呈正相关（r= 0 .92 2,0.878）.结论 AGEs能明显诱导大鼠肾小管上皮细胞UⅡmRNA表达 , 促进FN和Col Ⅳ分泌,提示UⅡ可能在AGEs引起的ECM合成增加中起一定作用,进而参与糖尿病肾病ECM积聚的病理过程.     

吡格列酮对AGE-BSA诱导大鼠平滑肌细胞增殖和PAI-1 mRNA表达水平的影响

目的探讨吡格列酮（Pio）对糖基化修饰的牛血清白蛋白（AGE-BSA）诱导大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖以及纤溶酶原激活物抑制剂1（PAI-1）mRNA表达的影响。方法体外制备的AGE-BSA以不同浓度和不同时间干预大鼠VSMCs,观察Pio对AGE-BSA作用的影响（1）MTT法观察VSMCs增殖;（2）半定量RT-PCR测定PAI-1 mRNA表达水平。结果（1）各浓度的AGE-BSA作用16h开始导致VSMCs增殖（P〈0.05）;（2）AGE-BSA导致PAI-1 mRNA表达水平升高,呈浓度、时间依赖性;（3）Pio可明显抑制AGE-BSA诱导的VSMCs增殖以及PAI-1 mRNA表达水平。结论Pio在2型糖尿病中可能通过抑制AGE-BSA诱导的VSMCs增殖和PAI-1 mRNA表达水平,在血管并发症方面起到有益作用。     

肿瘤生长因子β1及血小板衍生生长因子对肝窦内皮细胞整合素α6β1及黏着斑激酶表达的影响

目的：观察肿瘤生长因子β1(TGFβ1）及血小板衍生生长因子（PDGF）对大鼠肝窦内皮细胞（sinusoidal endothelial cell,SEC)整合素α6β1表达及黏着斑激酶（focal adhesion kinase,FAK)活性的影响。方法：用胶原酶原位灌注、Prercoll不连续密度梯度离心法分离大鼠SEC，并进行体外培养。采用细胞－ELISA和免疫沉淀－蛋白质酪氨酸激酶活性测定法，分别观察TGFβ1及PDGF对SEC表面整合素α6β1表达及FAK活性的影响。结果：经TGFβ1及PDGF作用24h后，α6β1蛋白表达明显强于对照组（P＜0．05），且呈剂量依赖性。作用至48h，表达继续增强，细胞中FAK的活性也明显增高（P＜0．05），虽于48h后回落，但仍明显高于对照组。结论：TGFβ1及PDGF可促进SEC表面整合素α6β1的表达及FAK活性增高，可能是它们参与肝纤维化发生的机制之一。     

PPAR-γ激活对糖基化终末产物引起的大鼠肾系膜细胞TGF-β及CTGF mRNA表达的影响

目的 观察过氧化物酶体增殖体激活受体-γ(PPAR-γ)激活对糖基化终末产物(AGEs)引起的大鼠肾系膜细胞TGF-β及CTGF mRNA表达的影响.方法 体外培养正常大鼠肾系膜细胞,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测不同浓度AGEs(0～400 μg/ml-1)及不同浓度PPAP-γ)激活剂(罗格列酮)和PPAR-γ阻断剂(GW9662)对AGEs(100 μg/ml-1)引起的TGF-β及CTGF mRNA表达的影响.结果 给予PPAR-γ激活剂可明显减轻AGEs引起的大鼠系膜细胞TGF-β、CTGF mRNA的表达.结论 PPAR-γ激活剂可以明显减轻AGEs对系膜细胞TGF-β、CTGF mRNA的表达影响,从而改善肾小球细胞外基质积聚,在糖尿病时起到肾脏保护作用.     

奥美沙坦对大鼠移植静脉内膜重构过程中整合素β-3/FAK信号蛋白表达的影响

目的:观察奥美沙坦对大鼠移植静脉内膜重构过程中整合素β-3(integrinβ-3)黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)表达的影响。方法:建立大鼠移植静脉桥模型,将36只雄性SD大鼠被随机分成模型对照组、奥美沙坦组及生理盐水对照组,每组12只。取移植静脉切片、HE染色观察各组血管壁内膜的厚度。采用免疫组化染色法观察各组血管平滑肌细胞(SMC)增殖核抗原(PCNA)的表达。采用Western blot法检测整合素β-3和FAK的表达。结果:与模型对照组相比,奥美沙坦组内膜的厚度明显减轻(P0.05);PCNA和FAK的表达明显降低(P0.05)。生理盐水对照组与模型对照组相比,内膜的厚度无明显减轻;PCNA和FAK的表达无明显改变。结论:大鼠移植静脉内膜重构过程中,伴随整合素β-3/FAK信号蛋白的表达,奥美沙坦可抑制大鼠移植静脉内膜重构,此作用可能与下调FAK信号蛋白的表达有关。     

microRNA-497在肾小球系膜细胞焦亡中的作用及机制

目的:探讨microRNA-497(miR-497)对高糖和胰岛素诱导的肾小球系膜细胞焦亡的调控作用。方法:高糖和胰岛素处理人肾小球系膜细胞(HRMC),在不同时间运用流式细胞仪检测细胞焦亡,实时定量PCR检测HRMC细胞中miR-497表达水平;转染不同浓度miR-497 mimic,检测细胞焦亡通路关键基因mRNA表达水平,运用Western印记检测NLRP1蛋白的表达水平;运用生物信息学和萤光素酶报告基因技术预测并验证miR-497对炎性小体NLRP1基因的靶向结合作用;miR-497 mimic和pc DNA-NLRP1分别单独转染或共转染后检测细胞增殖。结果:高糖和胰岛素处理48 h以上HRMC细胞焦亡水平显著增加(P0.05),miR-497表达水平显著降低(P0.05);miR-497 mimic转染显著抑制HRMC细胞焦亡,和焦亡通路关键基因IL-1β、TNFα和caspase-1表达水平下降(P0.05);miR-497可直接靶向作用于NLRP1基因并抑制NLRP1蛋白的表达;NLRP1过表达可消除miR-497对细胞焦亡的抑制作用。结论:miR-497 mimic抑制高糖和胰岛素诱导的肾小球系膜细胞焦亡。     

葡萄籽原花青素对AGEs诱导的内皮细胞分泌NO及ET-1的影响

目的观察葡萄籽原花青素（GSP）对糖基化终产物（AGEs）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）一氧化氮（NO）、内皮素（ET-1）生成及其mRNA表达的影响。方法牛血清白蛋白（BSA）与葡萄糖在体外共同孵育以制备糖基化终产物（AGE-BSA），将培养的HUVEC与不同浓度的GSP（5、15、25μg/ml）预孵育4h，再加入200μg/mlAGE-BSA共同培养，分别用硝酸还原酶法及放免法测定培养上清液中NO及ET-1的含量，用逆转录PCR（RT-PCR）检测一氧化氮合酶（eNOS）及ET-1 mRNA的表达，用激光共聚焦显微镜检测细胞内活性氧簇（ROS）的产生。结果HUVEC用AGE-BSA刺激后明显增强细胞内ROS产生，并能减少内皮细胞NO的分泌及eNOS mRNA的表达，增加内皮细胞ET-1的分泌及其 mRNA的表达（P〈0.01）。而GSP预孵育则对AGE-BSA诱导的上述作用具有显著的改善作用，并呈剂量依赖性（P〈0.01）。结论GSP可能通过抑制细胞内氧化应激而影响AGEs诱导的内皮细胞NO及ET-1生成，改善血管内皮功能，这对于防治糖尿病慢性血管并发症具有重要的意义。     

辛伐他汀减轻糖基化终末产物对内皮细胞环氧化酶2表达的影响

目的探讨辛伐他汀对糖基化终末产物(AGEs)诱导内皮细胞环氧化酶2(COX-2)表达的影响。方法体外以不同浓度的糖基化白蛋白(AGE-BSA)、辛伐他汀单独或联合作用于人脐静脉内皮细胞,检测细胞COX-2mRNA的表达及培养上清液中前列腺素E2(PGE2)的含量。结果 AGEBSA诱导内皮细胞COX-2mRNA的表达,作用呈剂量和时间依赖方式。辛伐他汀可降低AGE-BSA诱导的COX-2mRNA表达及PGE2产物浓度。结论 AGEs促进内皮细胞COX-2表达,辛伐他汀可减轻此作用。     

肿瘤生长因子β_1及血小板衍生生长因子对肝窦内皮细胞整合素α_6β_1及黏着斑激酶表达的影响

目的　观察肿瘤生长因子 β1(TGFβ1)及血小板衍生生长因子 (PDGF)对大鼠肝窦内皮细胞 (sinusoidalendothelialcell,SEC)整合素α6β1表达及黏着斑激酶 (focaladhesionkinase ,FAK)活性的影响。方法　用胶原酶原位灌注、Percoll不连续密度梯度离心法分离大鼠SEC ,并进行体外培养。采用细胞 ELISA和免疫沉淀 蛋白质酪氨酸激酶活性测定法 ,分别观察TGFβ1及PDGF对SEC表面整合素α6β1表达及FAK活性的影响。结果　经TGFβ1及PDGF作用 2 4h后 ,α6β1蛋白表达明显强于对照组(P <0 .0 5 ) ,且呈剂量依赖性。作用至 48h ,表达继续增强 ,细胞中FAK的活性也明显增高 (P <0 .0 5 ) ,虽于 48h后回落 ,但仍明显高于对照组。结论　TGFβ1及PDGF可促进SEC表面整合素α6β1的表达及FAK活性增高 ,可能是它们参与肝纤维化发生的机制之一。     

整合素αvβ3、黏着斑激酶在卵巢上皮性癌中的表达及意义

目的 整合素αvβ3、黏着斑激酶(FAK)在卵巢上皮性癌(OEC)组织中的表达及其与临床病理特征的关系.方法 采用免疫组织化学SP法检测49例卵巢上皮恶性肿瘤和15例卵巢上皮性良性肿瘤组织中整合素αvβ3和FAK的表达情况.结果 整合素αvβ3、FAK在OEC中的表达明显高于卵巢良性肿瘤组织;整合素αvβ3的表达与OEC组织的分化程度及临床分期有关;FAK的表达与OEC组织的临床分期有关;在OEC组织中整合素αvβ3、FAK的表达呈正相关.结论 整合素αvβ3、FAK共同参与OEC的侵袭和转移.