人型支原体实时荧光聚合酶链反应检测方法的初步建立

目的 建立一种快速、灵敏和特异的人型支原体实时荧光聚合酶链反应(real-time PCR)检测技术。 方法 依据人型支原体gap基因保守区域使用Beacon Designer 7.0软件设计引物和探针,建立人型支原体real-time PCR检测方法并优化。对优化后的方法进行实验室灵敏度、特异度和检测限评价,并与聚合酶链反应(PCR)进行比较。 结果 该real-time PCR对于人型支原体的检测限为50 cfu,PCR检测限为5103cfu,其检测灵敏度为PCR的100倍。所建立的检测方法对其他10种常见支原体、12种泌尿生殖道感染病原菌染色体及人类染色体的扩增均为阴性。 结论 本研究建立的real-time PCR方法可灵敏、特异的检测人型支原体,有望用于临床标本检测。     

宫颈上皮内瘤样变与生殖道衣原体及支原体感染

目的探讨沙眼衣原体、人型支原体及解脲支原体感染与宫颈上皮内瘤样病变（CIN）发病机制的关系。方法采用聚合酶链反应法对186例CIN的宫颈分泌物进行沙眼衣原体、解脲支原体及人型支原体DNA检测。结果186例CIN宫颈分泌物检测沙眼衣原体感染率明显升高，与对照组相比差异显著（P〈0．05），沙眼衣原体、人型支原体及解脲支原体混合感染率升高，与对照组相比差异显著（P〈0．05）；而人型支原体及解脲支原体感染两组差异无显著性（P〉0.05）；CIN各级感染率无明显差异。结论沙眼衣原体感染与CIN的发生可能密切相关。     

荧光定量聚合酶链反应和液体培养法检测解脲支原体感染的临床意义

目的:探讨荧光定量聚合酶链反应和液体培养法检测解脲支原体感染的临床意义。方法:用荧光定量聚合酶链反应和液体培养法检测生殖道感染患者216例,无临床症状体检者84例解脲支原体,及确诊解脲支原体感染患者治疗后解脲支原体,比较2种方法检测阳性率。结果:治疗前、后荧光定量聚合酶链反应阳性检出率均高于液体培养法(P<0.01),但治疗后拷贝数明显下降。结论:临床应根据荧光定量聚合酶链反应及液体培养结果,结合临床综合判断,避免液体培养法的低灵敏度造成漏诊,延误治疗或荧光定量聚合酶链反应的高灵敏度造成误诊。     

艾滋病相关支原体多重实时荧光聚合酶链反应检测方法的初步建立

目的 建立一种快速、灵敏和特异的艾滋病相关支原体(穿透支原体、发酵支原体和梨支原体)多重实时荧光聚合酶链反应(Multiplex real-time PCR)检测技术。 方法 使用Beacon Designer 7.0软件在穿透支原体和发酵支原体的ftsZ基因以及梨支原体的rpoB基因保守区域设计多重引物及荧光探针,建立并优化艾滋病相关支原体Multiplex real-time PCR检测体系。分别使用3种支原体阳性质粒标准品评价体系的灵敏度,使用8种其他支原体、14种常见致病菌和人类基因组核酸评价该体系的特异度,并与普通聚合酶链反应(PCR)检测方法进行比较。 结果 该Multiplex real-time PCR方法对穿透支原体和发酵支原体检测灵敏度为103拷贝,约为普通PCR的10倍,对梨支原体检测灵敏度为102拷贝,约为普通PCR 100倍。该体系对8种其他支原体、14种常见致病菌和人类基因组均不能扩增。 结论 本研究建立的Multiplex real-time PCR方法可同时快速、准确的检测穿透支原体、发酵支原体和梨支原体。有望用于临床标本检测,完善对艾滋病相关支原体的检测能力。     

聚合酶链反应快速诊断支原体肺炎的临床意义

聚合酶链反应快速诊断支原体肺炎的临床意义广东佛山市石湾医院儿科（５２８０３１）张石枚我院儿科自１９９５年５月至１９９６年５月用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对收治的３１６例小儿肺炎患者的咽分泌物进行肺炎支原体（ＭＰ）检测，部分病例同时做了血冷凝集试验进行对照...     

实时荧光定量-聚合酶链反应方法检测肺炎支原体

目的 建立一种快速、灵敏、特异的肺炎支原体实时荧光定量-聚合酶链反应(real-time PCR)检测方法,以期用于临床肺炎支原体感染检测。 方法 通过测序分析和序列比对,选取肺炎支原体p1基因中保守区域设计特异性引物和荧光探针,建立和完善此real-time PCR检测方法,并进行扩增效率、灵敏度及特异度评价。与已报道的肺炎支原体常规聚合酶链反应(PCR)方法进行150份临床标本检测能力比较。 结果 建立的real-time PCR方法对肺炎支原体的检测限约为10 cfu。使用该方法对9株肺炎支原体ATCC标准株和30株临床分离株核酸扩增均为阳性;对10种其他支原体、13种常见呼吸道病原菌染色体及人类染色体扩增结果均为阴性。同时,临床标本的检测结果显示该方法检测灵敏度优于常规PCR。 结论 本研究建立的real-time PCR方法可快速、灵敏、特异地检测标本中肺炎支原体核酸,可适用于临床肺炎支原体诊断。     

PCR检测肺炎支原体DNA

ＰＣＲ检测肺炎支原体ＤＮＡ余钟声汪天林尚世强陈志敏俞锡林（浙江医科大学附属儿童医院儿科研究所，杭州３１０００３）关键词支原体聚合酶链反应肺炎支原体肺炎（ＭＰＰ）病理形态可呈各种类型，但其肺部体征轻，无实验室依据时常易漏诊。１９８９年Ｂｅｒｎｅｔ等〔１...     

非淋菌性尿道炎支原体、衣原体检测及药敏分析

目的调查非淋菌性尿道炎患者支原体、衣原体感染情况,以及支原体对不同药物的体外敏感性。方法沙眼衣原体和生殖道支原体检测采用套式聚合酶链反应技术;应用支原体药敏试剂盒,对泌尿生殖道标本进行支原体型别鉴定及10种抗生素耐药性检测。结果417例标本中共检测出支原体245例,其中解脲脲原体(Uu)阳性150例(61.3%),显著高于人型支原体(Mh)感染40例(16.3%)及Uu-Mh混合感染55例(22.4%)(P<0.01);同时检测出生殖道支原体(Mg)63例,阳性率为15.2%;沙眼衣原体(Ct)52例,阳性率为12.5%。药敏结果显示,91.5%的支原体有不同程度的耐药,且混合感染的耐药性明显升高。结论支原体对常见的交沙霉素、红霉素、四环素等已产生一定的耐药性,及时进行药敏试验,选择高效药物,实施足剂量和足疗程用药,对降低支原体耐药株的产生、防止复发和提高治愈率将起到重要作用。     

尿道炎衣原体和支原体检测

尿道炎衣原体和支原体检测广东深圳市人民医院（５１８０２０）叶其伟彭保曾真我们从１９９５年２月～１９９５年６月用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对临床诊断为尿道炎的男病人进行了尿道分泌物衣原体和支原体检测。现将结果报告如下。资料与方法临床资料①非淋病性尿道炎...     

北京地区部分性乱者生殖支原体感染状况的调查

本文报告了应用聚合酶链反应检测北京地区１２５名性乱者和１２９名健康人生殖支原体（Ｍｇ）感染情况。结果表明，前者的检出率为１９．２０％，后者未查出阳性。提示该地区性乱人群中存在生殖支原体感染，在ＳＴＤ防治工作中应予重视.     

女性淋病患者支原体(7种)感染状况研究

为了解我国女性淋病患者支原体 ( 7种 )合并感染状况。应用套式聚合酶链反应 (nPCR)和DNA序列测定方法对 5 1例女性淋病患者的阴道拭子标本中的解脲脲原体 (Uu)、人型支原体 (Mh)、肺炎支原体 (Mpn)、生殖支原体 (Mg)、穿通支原体 (Mpe)、发酵支原体 (Mf)、梨支原体 (Mpi)等 7种支原体核酸进行检测。结果表明 ,本组女性淋病患者Uu、Mh、Mpn、Mg、Mpe、Mf、Mpi的检出率分别为 43.1%、37.3%、35.3%、17.6 %、9.8%、7.8%、0 %。结果证实 ,我国女性淋病患者中支原体合并感染状况严重。     

系统性红斑狼疮伴尿道支原体感染146例分析

目的通过分析、了解系统性红斑狼疮（SLE）尿道支原体感染情况。方法对146例SLE患者的血清、痰及眼、尿道分泌物中的人型支原体及溶脲脲原体DNA进行套式聚合酶链反应（nPCR）检测,并对其中阳性产物进行DNA测序。结果本组SLE患者支原体感染阳性106例,其中伴尿道感染76例（71.7%）;阴性40例,伴尿路感染14例（35.0%）,两者比较差异有统计学意义（P〈0.001）。SLE活动期110例中,支原体感染阳性90例（81.8%）;SLE稳定期36例中,阳性16例（44.4%）,两者比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论支原体感染是SLE尿路感染的主要病原体。     

PCR对男性衣原体和支原体尿道炎的诊断价值

ＰＣＲ对男性衣原体和支原体尿道炎的诊断价值谢锦来黄明志李励献罗立君徐孝儒闵丽谦（福建省莆田县医院，莆田３５１１００）１９９５年３月～１９９６年３月采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对男性尿道炎患者进行砂眼衣原体（ＣＴ）和解脲支原体（ＵＵ）检测，以探讨ＰＣ...     

风湿病中关节炎与支原体感染的关系研究

目的　应用套式聚合酶链反应 (nPCR)检测技术探讨风湿病中关节炎与支原体感染的关系。方法　对 2 6例类风湿关节炎 (RA) ,2 4例反应性关节炎 (ReA)、3例系统性红斑狼疮 (SLE)、1例干燥综合症 (SS)、1例骨关节炎 (OA)、1例未分化结缔组织病 (UCTD)、3例强直性脊柱炎 (AS)病人关节液用nPCR方法联合检测支原体 :解脲脲原体 (Uu)、人型支原体 (Mh)、发酵支原体 (Mf)、关节炎支原体 (Mar)。结果　 2 6例RA患者中 ,2例Uu阳性、1例Mh阳性、1例Mar阳性。 2 4例ReA患者中 ,2例Uu阳性、2例Mh阳性。 3例SLE患者中 ,1例Uu阳性。2例Mh阳性 ,1例SS患者Mh阳性。结论　风湿病中关节炎与支原体感染有密切关系 ,支原体感染可能是风湿病发病的一个重要因素之一。     

多重聚合酶链反应检测生殖支原体感染

目的 建立一种敏感快速的多重聚合酶链反应（ＰＣＲ）用于检测生殖支原体（Ｍｇ）。方法 性病门诊患者５１１例，正常对照５６人，分泌物（女性为宫颈，男性为尿道拭子）标作用ＮＰ－４０裂解液一步法制备模板ＤＮＡ，设计Ｍｇ种属特异性引物及功能性结蛋白基因引物，先进行标准株的特异性与敏感性试验，然后进行临床标末的ＰＣＲ扩增反应。结果两对引物良好的特异性，对Ｍｇ标准株模板敏感性可达１０＾－６μｇ，临床标本检测，广     

77例肺炎支原体DNA检测和评价

目的探讨肺炎支原体DNA（MP-DNA）和超敏C反应蛋白（hs-CRP）对诊断支原体肺炎的敏感性和特异性,为临床提供准确快速的诊断依据。方法采用MP荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测患儿呼吸道分泌物标本中的MP-DNA水平,同时检测血清hs-CRP和MP-IgM的浓度,并与WBC计数进行比较。结果MP-DNA和hs-CRP对诊断支原体肺炎的敏感性均高于WBC计数,3个指标中敏感性以hs-CRP最高;特异性和阳性预测值以MP-DNA最高;阴性预测值和约登指数,MP-DNA和hs-CRP二者相差无几。结论MP-DNA检测对肺炎支原体的早期诊断有一定的价值。     

早产儿并发肺炎与5种支原体感染的关系

目的　了解早产儿并发肺炎与支原体 (5种 )感染的关系。方法　收集 15 1例足月产儿和 10 1例早产儿的咽拭子标本 ,应用套式聚合酶链反应检测解脲脲原体 (Uu)、肺炎支原体 (Mpn)、人型支原体 (Mh)、生殖支原体 (Mg)和发酵支原体 (Mf)等 5种支原体核酸。结果　足月产儿Uu、Mpn、Mh、Mg、Mf检出率分别为 8.6 % ,3.3% ,2 .0 % ,0 %和 0 % ;早产儿分别为 4 1.6 % ,2 1.8% ,11.9% ,4 .9%和 0 % ,Uu、Mpn、Mh、Mg 4种支原体检出率显著高于足月产儿 (P <0 .0 1)。其中 4 9例剖宫早产儿的Uu、Mpn、Mh、Mg检出率也明显高于 98例足月剖宫儿。结论　新生儿早产与Uu、Mh、Mpn、Mg等支原体感染相关。     

4种肺炎支原体检验方法的临床应用

目的探讨由于肺炎支原体引发肺炎的咽拭子、咽拭子聚合酶链反应、血清被动凝集和免疫斑点这4种方法对儿童感染肺炎支原体的诊断与后期治疗的作用及临床价值。方法选取2010年3月至2011年10月临床诊断结果显示为患有肺炎支原体感染的儿童138例,每位患儿都进行对咽拭子的选取,并将选取的咽拭子做成快速培养与咽拭子聚合酶链反应,同时取患儿的血清采用血清肺炎支原体被动凝集法和免疫斑点的方法进行检测。对4种方法的检测结果进行采集和分析,并根据以往的治疗诊断案例和现今的结果进行对比。结果通过快速培养得出结果呈阳性的为66例,阳性率为47.8%,但所需要的检验时间为24h;采用咽拭子聚合酶链反应进行检测所得到的结果当中,呈现阳性的为82例,阳性率为59.4%,检验时间8h;采用血清肺炎支原体被动凝集法检测出阳性为116例,阳性率84.0%,检验时间为4h;采用免疫斑点法检测出阳性103例,阳性率74.0%,检验时间1h。结论根据临床医生对此次患儿的临床治疗结果,对不同患病体征的患儿需要采取不同的治疗手段。     

泌尿生殖道标本支原体的检出及药敏结果分析

目的 了解泌尿生殖道支原体感染情况并为临床合理用药提供依据。方法 取泌尿生殖道感染病人标本，使用Mycoplasma IST试剂盒培养解脲支原体(Uu)与人型支原体(Mh)并做6种抗生素敏感实验。结果 200份检测的标本中，支原体感染阳性53例。其中解脲支原体阳性46例，人型支原体阳性7例。单独Mh感染3例，Uu和Mh合并感染4例。支原体对6种抗生素的敏感性强弱依次为：原始霉素、强力霉素、交沙霉素、红霉素、氟氟沙星和四环素。结论 本实验说明了支原体在泌尿生殖道感染中有重要的地位，支原体的检测及抗生素敏感试验对临床合理用药进行治疗有重大意义。     

PCR检测淋病奈瑟菌、沙眼衣原体和解脲支原体的核酸

ＰＣＲ检测淋病奈瑟菌、沙眼衣原体和解脲支原体的核酸金小丽杨君瑞（温州市第三人民医院，浙江温州３２５０００）关键词聚合酶链反应淋病奈瑟菌沙眼衣原体解脲支原体核酸我们对８９７２例泌尿生殖系统感染的尿道及阴道分泌物和慢性前列腺炎的前列腺液用ＰＣＲ检测淋病奈...