LINC00607通过抑制miR-372影响A549/DDP细胞的增殖和凋亡

目的探讨LINC00607对肺癌顺铂耐药细胞系(A549/DDP)增殖、凋亡的影响和可能的分子机制。方法 RTq PCR检测肺癌组织、癌旁组织、A549、A549/DDP中LINC00607和miR-372的表达水平。将A549/DDP分为pc DNA3.1组、pc DNA3.1-LINC00607组、(pc DNA3.1-LINC00607+miR-NC)组、(pc DNA3.1-LINC00607+miR-372)组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和集落形成实验检测细胞增殖;流式细胞测量术检测细胞凋亡; Western blot检测cleaved-caspase-3和Ki67蛋白表达;双荧光素酶报告基因和RT-qPCR实验确定LINC00607对miR-372的靶向调控作用。结果与癌旁组织比较,肺癌组织中LINC00607表达显著降低,miR-372表达显著升高(P0.05)。与A549细胞比较,A549/DDP细胞中LINC00607表达显著降低,miR-372表达显著升高(P0.05)。与pc DNA3.1组比较,pc DNA3.1-LINC00607组A549/DDP细胞存活率、克隆形成数、Ki67蛋白表达显著降低,而凋亡率、cleaved-caspase-3蛋白表达显著升高(P0.05)。与(pc DNA3.1-LINC00607+miR-NC)组比较,(pc DNA3.1-LINC00607+miR-372)组A549/DDP细胞存活率、克隆形成数、Ki67蛋白表达显著升高,而凋亡率、cleaved-caspase-3蛋白表达显著降低(P0.05)。LINC00607靶向负调控miR-372表达。结论 LINC00607通过下调miR-372能够抑制A549/DDP细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

miR-29b通过调控Bax基因抑制LPS诱导的肺泡上皮细胞系A549凋亡

目的探讨miR-29b对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞系A549凋亡的影响及其机制。方法将体外培养的A549细胞分为对照组、LPS组(给予10 mg/L的LPS处理)、LPS+miR-NC组(转染miR-29b mimics阴性对照后给予LPS处理)、LPS+miR-29b组(转染miR-29b mimics后给予LPS处理);用RT-qPCR检测细胞中miR-29b的表达水平;MTT法检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3蛋白的表达;双荧光素酶报告基因实验检测Bax和miR-29b的靶向关系。结果与对照组相比,LPS组、LPS+miR-NC组和LPS+miR-29b组细胞中miR-29b、Bcl-2蛋白的表达水平和细胞存活率均明显降低,而细胞凋亡率和Bax、cleaved caspase-3蛋白的表达水平均明显升高(P<0.05);与LPS组相比,LPS+miR-29b组细胞中miR-29b、Bcl-2蛋白的表达水平和细胞存活率均明显升高,而细胞凋亡率和Bax、cleaved caspase-3蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实Bax是miR-29b的潜在靶基因。结论miR-29b可抑制LPS诱导的A549细胞凋亡,其作用机制可能与靶向调控Bax表达有关。     

LINC00617靶向miR-218对肺癌吉西他滨耐药性的影响北大核心CSCD

目的:研究LINC00617对肺癌细胞增殖、凋亡及吉西他滨耐药性的影响及机制。方法:采用不同浓度(2、4、6、8μmol/L)吉西他滨处理肺癌A549和吉西他滨耐药细胞A549-Gem细胞,CCK8法和克隆形成实验检测吉西他滨对A549细胞存活率和克隆形成数,qRT-PCR检测细胞中LINC00617和miR-218的水平,Western blot检测细胞中Ki67和Caspase3表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,双荧光素酶报告系统验证LINC00617和miR-218的靶向关系。结果:随着吉西他滨(2、4、6、8μmol/L)浓度升高,A549细胞存活率逐渐降低,A549-Gem细胞存活率无显著变化,最高浓度(8μmol/L)吉西他滨时A549-Gem细胞存活率(97.01±7.26)%显著高于A549(43.21±5.35)%;LINC00617在A549-Gem细胞中含量(3.19±0.14)显著高于A549细胞(1.00±0.08)(P<0.05);抑制LINC00617或过表达miR-218后细胞存活率和克隆形成数均降低,凋亡率升高,增殖蛋白Ki67含量降低,凋亡蛋白Caspase3含量升高,差异均具有统计学意义(P<0.05);LINC00617靶向负调控miR-218的表达;过表达miR-218增强了抑制LINC00617对A549-Gem细胞增殖、凋亡和吉西他滨耐药性的作用。结论:LINC00617可靶向miR-218调控A549-Gem细胞的增殖、凋亡及吉西他滨耐药性,也是肺癌潜在的分子靶点。     

TPX2对人肺癌细胞增殖、凋亡及cleavedcaspase-3表达的影响

目的 探讨Xklp2靶蛋白(TPX2)对人肺癌细胞增殖、凋亡及活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved caspase-3)表达影响。方法 培养人肺癌细胞A549,分为Control组(不进行细胞转染)、siRNA-NC组(细胞转染TPX2 siRNA control)、TPX2 siRNA组(细胞转染TPX2 siRNA),采用实时荧光定量PCR (qPCR)和Western blot检测TPX2 siRNA的转染效果。取转染后各组细胞,采用噻唑蓝检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测cleaved caspase-3蛋白表达情况。结果 TPX2 siRNA组中,TPX2 mRNA、蛋白水平和细胞光密度(OD)值均明显低于Control组和siRNA-NC组,细胞凋亡率、细胞中cleaved caspase-3蛋白表达水平均明显高于Control组和siRNA-NC组,差异均有统计学意义(P值均<0.05);而siRNA-NC组中,TPX2 mRNA、蛋白水平及细胞OD值、细胞凋亡率、细胞中cleaved caspase-3与Control组比较,差异均无统计学意义(P值均＞0.05)。结论TPX2 siRNA能够干扰人肺癌细胞A549中TPX2的表达。下调TPX2的表达能够抑制人肺癌细胞A549增殖,促进caspase-3活化,促进人肺癌细胞A549的凋亡。     

桔皮素对人非小细胞肺癌细胞生长及侵袭的影响

目的:探讨桔皮素(TGN)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞生长和侵袭的影响及其分子机制。方法:体外培养非小细胞肺癌A549细胞,分别用不同浓度的TGN处理,MTT比色法检测细胞活性,Annexin V-FITC/PI染色及流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell检测细胞侵袭,RT-PCR分析MMP-2和MMP-9的mRNA表达水平,Western blotting检测Ki67、Cyt C、caspase-3、cleaved caspase-3、MMP-2、MMP-9、Akt、p-Akt以及p-PI3K表达水平。结果:桔皮素剂量依赖性地抑制A549细胞增殖(P0.05),同时伴随有增殖标记分子Ki67表达水平的下调。分析发现,桔皮素诱导细胞中Cyt C、caspase-3和cleaved caspase-3的表达上调(P0.01),加速A549细胞的凋亡。此外,桔皮素作用后,A549细胞中侵袭相关蛋白MMP-2和MMP-9的表达量下降,且侵袭数目随桔皮素浓度增加而减少。进一步研究表明,桔皮素作用后A549细胞中p-Akt和p-PI3K表达水平降低(P0.05),阻断PI3K/Akt信号通路后,不同浓度TGN对细胞活性影响没有变化。结论:桔皮素能抑制A549细胞生长及侵袭,促进细胞凋亡,可能通过抑制PI3K/Akt信号通路的激活起作用。因此,本研究将为非小细胞肺癌的防治提供新的研究方向。     

NF-κB圈套寡核苷酸促进肺癌细胞A549凋亡的作用

目的:观察NF-κB圈套寡核苷酸对NF-κB活性的影响,研究其在肺癌细胞A549凋亡中的作用机制。方法: 用转染技术将FITC标记的NF-κB圈套寡核苷酸转入人肺癌细胞A549中,通过荧光倒置显微镜和共聚焦显微镜进行核内定位的观察,凝胶迁移率实验(EMSA)检测转染前后NF-κB活性的变化。生长曲线观察低活性NF-κB对细胞增殖的影响。流式细胞仪、TUNEL检测细胞凋亡率。Western blot检测NF-κB低活性引起的凋亡相关蛋白Bcl-2和Fas的改变。结果: NF-κB圈套寡核苷酸转染后定位于细胞核内,EMSA显示转染后NF-κB活性明显下降。A549细胞对NF-κB圈套寡核苷酸敏感,细胞生长速度减缓。转染NF-κB圈套寡核苷酸的A549细胞凋亡率增加。NF-κB 的低活性可以引起凋亡抑制蛋白Bcl-2表达水平下调和凋亡蛋白Fas表达增加。结论: NF-κB圈套寡核苷酸具有促进肺癌细胞A549凋亡的作用,其机制可能与NF-κB圈套寡核苷酸通过下调NF-κB的活性使凋亡蛋白Fas表达增加和凋亡抑制蛋白Bcl-2表达降低有关。     

下调lncRNA TTTY15靶向miR-4500抑制胶质瘤细胞A172生物学特性的实验研究CSCD

目的探讨下调lncRNA TTTY15靶向miR-4500对胶质瘤细胞A172增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及机制。方法用qRT-PCR法检测胶质瘤细胞和组织中TTTY15表达的差异。用Starbase软件预测TTTY15的靶基因, 发现其与miR-4500存在互补结合位点, 用荧光素酶报告系统鉴定二者的靶向关系。将胶质瘤细胞A172分为对照组、si-NC(转染siRNA对照组)、si-TTTY15(转染TTTY15 siRNA)、si-TTTY15+Anti-miR-NC(共转染TTTY15 siRNA、inhibitor对照组)和si-TTTY15+Anti-miR-4500组(共转染TTTY15 siRNA、miR-4500 inhibitor), 分别用CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡, 用Transwell小室检测细胞的迁移和侵袭, 用Western印迹法检测Bax、Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白的表达。结果胶质瘤细胞和组织的TTTY15表达均升高。TTTY15与miR-4500的表达呈负相关。TTTY15与miR-4500互为靶向关系。与对照组、si-NC组相比, si-TTTY15组胶质瘤细胞miR-4500表达升高, A172细胞存活率降低, 凋亡率升高, 细胞迁移数目和侵袭数目增多, Bax蛋白表达升高, Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白表达降低(P < 0.05)。与si-TTTY15+Anti-miR-NC组相比, si-TTTY15+Anti-miR-4500组胶质瘤细胞中miR-4500表达降低, 细胞存活率升高, 凋亡率降低, 细胞迁移和侵袭数目增加, 细胞中Bax蛋白表达降低, Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白表达升高(P < 0.05)。结论下调TTTY15靶向miR-4500可抑制胶质瘤细胞A172增殖、迁移、侵袭并诱导其凋亡。     

姜黄素联合顺铂调控PI3K/Akt信号通路对卵巢癌耐药细胞增殖、迁移和凋亡的影响北大核心CSCD

目的:讨论姜黄素联合顺铂对卵巢癌耐药细胞增殖、迁移及凋亡能力的作用,并分析其与PI3K/Akt通路的关系。方法:首先用不同浓度的姜黄素及顺铂单独处理细胞株,根据各浓度细胞的存活率确定35µmol/L姜黄素、4.0 mg/L顺铂疗效最好,用于后续实验。将卵巢癌耐药细胞分为空白对照组、姜黄素单独处理组(35µmol/L)、顺铂单独处理组(4.0 mg/L)、姜黄素+顺铂联合处理组(35µmol/L+4.0 mg/L),采用MTT法、Transwell小室、流式细胞术检测四组细胞的生长抑制率、迁移细胞数及细胞凋亡率;Western blot检测四组细胞中p-PI3K及p-Akt蛋白表达水平;PCR检测四组细胞中PI3K、Akt、Ki67、Bcl-2、Bax mRNA表达水平。结果:与空白对照组比较,其余三组细胞生长抑制率及细胞凋亡率均显著升高,迁移细胞数显著减少(P<0.05),且姜黄素+顺铂联合组细胞生长抑制率及细胞凋亡率显著高于姜黄素组、顺铂组,迁移细胞数则低于姜黄素组、顺铂组(P<0.05);与空白对照组比较,姜黄素处理组及姜黄素+顺铂联合组细胞中p-PI3K、p-Akt蛋白及PI3K、Akt、Ki67、Bcl-2 mRNA表达水平均显著降低、Bax mRNA显著升高(P<0.05),且联合组细胞表达量明显低于姜黄素处理组(P<0.05),而顺铂单独处理组细胞中PI3K、p-Akt蛋白及PI3K、Akt、Ki67、Bcl-2、Bax mRNA表达水平无明显变化(P>0.05)。结论:姜黄素联合顺铂能够提高卵巢癌耐药细胞的敏感性,抑制细胞的增殖及迁移,同时诱导细胞凋亡,这一过程可能通过下调PI3K/Akt通路的表达实现。     

miR-195对肺癌A549细胞生物学行为的调控作用

目的:探讨微小RNA(mi R)-195对肺癌细胞株A549生长、凋亡及迁移等生物学行为的影响和其相关作用机制。方法:对体外培养的A549细胞转染mi R-195 mimics,分别采用CCK-8法和流式细胞术检测细胞活力、周期分布及凋亡情况;Transwell实验检测细胞的迁移能力;Western blot检测相关调控因子cyclin D1、CDK2、Bcl-2和p-Rb/Rb的蛋白水平;双萤光素酶报告基因分析法预测及验证其可能的靶基因。结果:在A549细胞中过表达mi R-195可显著抑制细胞活力并引起细胞周期阻滞,同时细胞迁移率降低,而细胞凋亡率显著上升(P0.05);此外,细胞中cyclin D1、CDK2、Bcl-2及p-Rb的蛋白水平均显著下降(P0.05)。双萤光素酶报告基因分析显示MYB可能是mi R-195的靶基因,且在过表达mi R-195的A549细胞中回补MYB可部分逆转mi R-195对细胞活力、凋亡及迁移的影响。结论:mi R-195可靶向MYB抑制肺癌A549细胞的生长和迁移,并促进其凋亡。     

下调TCF3抑制非小细胞肺癌细胞的增殖和迁移能力

目的:探索下调T细胞因子3(TCF3)抑制非小细胞肺癌细胞增殖和迁移的分子机制。方法:运用Lipofectamine 2000转染法将siTCF3和阴性对照siRNA(NCsiRNA)转染非小细胞肺癌A549和H1299细胞;运用real-time PCR和Western blot分别测定TCF3的mRNA和蛋白水平;运用萤光素酶报告基因实验测定TCF3的转录活性;MTT、克隆形成实验、Transwell实验和Annexin V-FITC/PI染色联合流式细胞术分别测定细胞的活力、克隆形成能力、转移能力及细胞凋亡率;Western blot检测Wnt、c-Myc、基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP-13、金属蛋白酶组织抑制物(TIMP)-1的蛋白表达水平。结果:与NCsiRNA转染组的细胞比较,siTCF3显著抑制A549细胞和H1299细胞中TCF3的mRNA和蛋白水平(P0.01)。TCF3转录活性和c-Myc蛋白表达水平明显低于NCsiRNA细胞(P0.05)。MTT实验结果显示,培养24 h、48 h、72 h和96 h的A549-siTCF3和H1299-siTCF3细胞活力均显著低于NCsiRNA细胞(P0.05)。与NCsiRNA细胞相比,siTCF3显著抑制A549细胞和H1299细胞的克隆形成能力(P0.01)。Transwell实验结果显示A549-siTCF3和H1299-siTCF3细胞迁移数显著低于A549-NCsiRNA和H1299-NCsiRNA组细胞(P0.05)。流式细胞术分析结果显示A549-siTCF3细胞和H1299-siTCF3细胞的凋亡率显著高于A549-NCsiRNA和H1299-NCsiRNA细胞(P0.01)。Western blot实验结果显示,下调TCF3表达能抑制Wnt蛋白的表达,MMP-9和MMP-13的蛋白表达明显降低,TIMP-1的蛋白表达增高。结论:siTCF3显著抑制A549细胞和H1299细胞的增殖和迁移能力,并诱导细胞凋亡,其分子机制可能通过下调Wnt通路活性以及调控MMP家族关键成员的表达而实现。     

干扰 Netrin-1 对白血病 K562 细胞体内外增殖迁移的影响 #br#

【摘要】 目的 探究干扰 Netrin-1 对白血病 K562 细胞体内外增殖迁移的影响。 方法 将 shRNA Netrin-1载体和空质粒载体转染至 K562 细胞, 细胞随机分为 3 组: Control 组、 shRNA-NC 组和 shRNA2-Netrin-1 组。克隆形成实验检测克隆形成率; Western 印迹检测 Netrin-1、 Ki67、 Survivin 蛋白表达; Transwell 检测侵袭细胞数; 划痕实验检测划痕愈合率; 建立白血病 K562 细胞裸鼠移植瘤模型, 检测 30 d 肿瘤体积和肿瘤重量变化; 免疫组化检测 Ki67、 VEGF 阳性细胞数。 结果 体外实验中, 与 Control 组比较, shRNA2-Netrin-1 组K562 细胞克隆形成率、 Ki67 和 Survivin 蛋白表达、 侵袭细胞数及划痕愈合率均降低 ( P< 0. 05); 体内实验中, 与 Control 组比较, shRNA2-Netrin-1 组裸鼠肿瘤体积、 肿瘤重量、 Ki67 阳性细胞数和 VEGF 阳性细胞数均降低 (P< 0. 05)。 结论 敲低 Netrin-1 表达可抑制白血病 K562 细胞体内外增殖及迁移。     

miR-200a对肺癌A549细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的探讨miR-200a在肺癌细胞中的表达及其对A549细胞增殖、迁移及凋亡等生物学功能的影响。方法采用RTPCR检测肺癌细胞株A549、H23、H460和永生化人支气管上皮细胞株16HBE的表达水平。采用脂质体转染法将miR-200a mimics和阴性对照序列(miR-negtive control,miR-NC)分别转染A549细胞,运用CCK-8实验和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力的改变情况;Transwell实验检测细胞迁移能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况。利用生物信息学方法预测miR-200a的靶基因。结果 miR-200a在肺癌细胞株A549、H23和H460相对表达水平均低于16HBE组,差异有统计学意义(P0.05)。miR-200a mimics和miR-NC组分别转染A549细胞,CCK-8实验显示miR-200a mimics组在第4、5天时的OD值明显低于miRNC组,差异有统计学意义(P0.05);平板克隆形成实验显示miR-200a mimics组细胞克隆形成率为(33.13±0.74)%,明显少于miR-NC组(45.57±1.27)%,差异有统计学意义(P0.05)。Transwell实验显示,miR-200a mimics穿膜细胞数为(71.60±17.90)个,少于miR-NC组[(140.20±17.88)个],差异有统计学意义(P0.05)。流式细胞术检测显示,miR-200a mimics凋亡率为(17.80±1.90)%,明显高于miR-NC组[(11.33±1.96)%],差异有统计学意义(P0.05)。生物信息学方法预测Tiam1等可能是miR-200a的靶基因。结论 miR-200a能够抑制肺癌细胞A549的增殖、迁移并促进其凋亡,为肺癌的治疗提供潜在靶点。miR-200a可能通过靶基因Tiam1发挥其对肿瘤的调控作用。     

反义Bmi-1 RNA转染对人肺癌细胞株A549体外增殖的影响

目的 研究转染反义Bmi-1 RNA对人肺腺癌细胞A549的体外增殖及细胞周期和凋亡的影响.方法 将表达反义Bmi-1 RNA的真核表达载体稳定转染A549细胞株,GA18筛选挑取阳性克隆.应用即时荧光定量RT-PCR及Western blot检测转染后Bmi-1基因在mRNA水平及蛋白水平的表达;应用MTT比色法及平板克隆形成实验检测A549细胞体外生长能力;用PI单染及Annexin-V-PI双染技术在流式细胞仪上检测细胞周期及凋亡情况.结果 Western blot结果显示转染反义Bmi-1RNA使A549细胞中Bmi-1蛋白表达量减少了95%;MTT检测细胞生长曲线表明反义Bmi-1 RNA使A549细胞生长速度明显减慢;平板克隆形成实验结果显示转染反义Bmi-1 RNA的A549细胞在平板中形成集落的数目(0.67±0.50)明显低于未转染组(73.0±4.1)及转染空质粒组(67.0±4.0,P<0.01);流式细胞仪结果显示反义Bmi-1使A549细胞阻滞在G_0/G_1期,但对细胞凋亡没有影响.结论 反义Bmi-1 RNA在体外对A549细胞增殖有明显的抑制作用,其抑制作用是通过使A549细胞阻滞在G0/G1期实现的.     

沉默PGRN基因对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

目的：探讨沉默颗粒蛋白前体（PGRN）基因对类风湿关节炎（RA）滑膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响及其相关机制。方法：按照脂质体法将siRNA PGRN、siRNA NC转染至RA滑膜成纤维细胞MH7A，记为siRNA NC组、siRNA PGRN组，对照组（Control）未进行转染处理；将siRNA PGRN转染RA滑膜成纤维细胞MH7A后，加入丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路激活剂Anisomycin，记为siRNA PGRN+Anisomycin组。采用qRT-PCR检测各组细胞PGRN mRNA表达水平；噻唑蓝（MTT）、克隆形成实验检测各组细胞增殖能力；流式细胞术检测各组细胞凋亡变化；Western blot检测各组细胞PGRN、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、增殖细胞核抗原（PCNA）、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X(Bax)蛋白、MAPK通路蛋白表达。结果：与Control组、siRNA NC组相比，siRNA PGRN组内PGRN mRNA及蛋白表达、克隆形成率、存活率明显降低，凋亡率明显升高，Cyclin D1、PCNA、Bcl-...     

腺病毒E1A蛋白对大鼠肺泡上皮细胞及人肺腺癌细胞凋亡的影响

目的:探讨腺病毒E1A蛋白对大鼠肺泡上皮细胞(CCL149)及人肺腺癌细胞(A549)在致凋亡因素TNF-α诱导下细胞凋亡影响。方法:将含腺病毒E1A基因完全编码区的Pneo-E1A质粒分别转染CCL149、A549细胞,用G418筛选抗性细胞克隆,用RT-PCR、免疫组化方法对单个细胞克隆进行筛选鉴定;将经鉴定确定的稳定转染E1A基因的阳性细胞克隆、对照质粒转染细胞克隆用致凋亡因素TNF-α刺激,用Hoechest荧光染色分析及流式细胞仪结合膜联蛋白V-FITC标记法检测细胞凋亡情况。结果:稳定转染E1A基因的CCL149细胞(C-E1A+)在30μg/LTNF-α作用前、后细胞的凋亡率分别为(2.63±0.8)%和(25.38±0.9)%,明显高于对照质粒转染细胞(C-E1A-)作用前的(0.62±0.3)%和作用后的(6.08±0.2)%,两组相比差别有统计学意义(P0.01);稳定转染E1A基因的A549细胞(A-E1A+)在30μg/LTNF-α作用前、后细胞的凋亡率分别为(5.12±0.5)%和(19.82±1.6)%,明显高于对照质粒转染细胞(A-E1A-)作用前的(2.02±0.7)%和作用后的(9.15±1.2)%,两组相比差别有统计学意义(P0.01)。结论:E1A蛋白能够增加细胞对致凋亡因素的敏感性,上调TNF-α诱导下的细胞凋亡。     

基于p38-MAPK信号通路探讨和厚朴酚对结直肠癌细胞增殖、凋亡的影响

目的基于p38-丝裂原活化蛋白激酶(p38-mitogen activated protein kinases,p38-MAPK)探讨和厚朴酚(honokiol,HNK)对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响.方法将体外培养HCT116细胞分为对照组(0 μmol/L)、HNK低剂量(20 μmol/L)、中剂量(40 μmol/L)和高剂量组(80μmol/L)。采用CCK-8法和克隆形成试验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western印迹检测p38、p-P38、细胞增殖指数67(cell proliferation index 67,Ki67)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、BCL2相关X蛋内(B-cell lymphoma-2 associated X protein,Bax)和裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋内酶3(cleaved Caspase-3)蛋白表达。将HCT116细胞分为空内对照组(0μmol/L)、HNK组(80μmol/L)、SB203580组(10 μmoL/L)和SB203580+HNK组(SB203580 10μmol/L+HNK 80 μmol/L),检测SB203580对各组细胞增殖、凋亡以及Ki67、cleaved Caspase3蛋白表达的影响。结果与对照组比较,HNK中高剂量组HCT116细胞的相对增殖率和克隆形成率明显降低,细胞凋亡率明显升高,Ki-67、Bcl-2蛋白表达明显下降,p-p38/p38、Bax和cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高(P<0.05),且随着HNK剂量增加,其作用明显增加(P<0.05)。与空白对照组比较,SB203580组细胞相对增殖率明显升高,细胞凋亡率明显下降,Ki67蛋内表达明显升高,cleaved Caspase-3蛋白表达明显下降(P<0.05);与SB203580组比较,SB203580+HNK组细胞相对增殖率明显下降,细胞凋亡率明显升高,Ki67蛋白表达明显下降,cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论HNK可以激活p38-MAPK信号通路,抑制HCT116细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

抗菌肽merecidin诱导人肺腺癌细胞系A549凋亡

目的探讨抗菌肽merecidin对人肺癌细胞系A549的作用及其机制。方法实验分为对照组(Ctrl)、顺铂干预组(cisplatin 40μmol/L)、merecidin干预组(merecidin 25/35μmol/L)、caspase抑制剂组(z-VAD-fmk)、caspase抑制剂+merecidin干预组(z-VAD-fmk+merecidin 25/35μmol/L)。MTT法检测细胞增殖,annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot检测caspase-3、8、9、激活型caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果抗菌肽merecidin明显抑制A549细胞增殖(P0.05),merecidin处理24 h后的IC_(50)值为34.8μmol/L。与Ctrl组相比,merecidin干预组的凋亡率显著升高(P0.05);与merecidin干预组相比,caspase抑制剂+merecidin干预组的凋亡率并没有下降。caspase-3、8、9蛋白表达无显著变化且未检测到激活型caspase-3蛋白表达。Bcl-2蛋白表达下调(P0.05)及Bax蛋白表达增多(P0.05)。结论抗菌肽merecidin可以抑制人肺腺癌细胞A549的增殖并诱导其凋亡。     

shRNA 沉默CCAT2 通过抑制自噬对非小细胞肺癌细胞A549 化疗敏感性的 影响

目的:探究shRNA沉默CCAT2抑制自噬对非小细胞肺癌细胞A549化疗敏感性的影响及机制。方法:细胞分为A549/DDP组、Scramble组、CCAT2 shRNA组,转染相应的shRNA处理细胞,RT-PCR检测CCAT2基因表达水平,CCK8检测A549/DDP的细胞活力,Hoeschst和流式细胞法检测细胞凋亡,Western blot检测B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活性半胱天冬酶3(cl-caspase-3)、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、LC3Ⅰ、Beclin1、p62蛋白表达水平。结果:与A549细胞株相比,A549/DDP细胞株中CCAT2表达水平显著升高。与A549/DDP组相比,CCAT2 shRNA组CCAT2表达水平显著降低,细胞活力显著降低,细胞凋亡率显著升高,凋亡相关蛋白Bax、cl-caspase-3蛋白表达水平显著升高,Bcl-2蛋白表达水平显著降低,自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白水平比率显著降低,Beclin1蛋白表达水平降低,p62蛋白表达水平升高。结论:沉默CCAT2可提高非小细胞肺癌细胞A549株化疗敏感性,作用机制可能与抑制自噬作用有关。     

miR-7靶向缺氧诱导因子1α对肝癌细胞的影响

目的：探究微小RNA-7(miR-7)靶向缺氧诱导因子1α(HIF-1α)对肝癌细胞迁移、凋亡及干细胞特性的影响。方法 ：采用慢病毒转染肝癌细胞MGCC97H,分为对照组、miR-7模拟物组、miR-7干扰组（转染miR-7模拟物组+干扰物）、HIF-1α过表达组（转染pc-HIF1α）和共转染组（转染miR-7模拟物+pc-HIF1α）,RT-PCR检测各组细胞miR-7、HIF-1α mRNA表达量,免疫印迹检测各组HIF-1α蛋白的表达量,Transwell实验检测细胞迁移能力,流式细胞法检测细胞凋亡情况,软琼脂克隆形成实验分析其干细胞特性,荧光素酶实验验证miR-7与HIF-1α靶向关系。结果 ：miR-7模拟物组细胞HIF-1α蛋白表达、迁移率、克隆形成率低于对照组,凋亡率高于对照组;HIF-1α过表达组细胞迁移率、克隆形成率高于对照组,凋亡率低于对照组;共转染组HIF-1α蛋白表达、细胞迁移率、克隆形成率低于HIF-1α过表达组,凋亡率高于HIF-1α过表达组。结论 ：miR-7靶向HIF-1α可降低肝癌细胞迁移能力及干细胞特性,促进细胞凋亡,miR-7及HIF-1α可能是...     

雷公藤甲素对非小细胞肺癌细胞系A549增殖的抑制和凋亡的诱导

目的探讨雷公藤甲素(TP)通过调控趋化因子受体4(CXCR4)基因表达对人非小细胞肺癌(A549)细胞增殖和凋亡的影响。方法实验分为4组:对照组、TP组(100 nm/L TP处理细胞)、CXCR4+TP组(转染质粒及TP处理细胞)和NC+TP组(转染空载质粒及TP处理细胞)。RT-qPCR和Western blot检测CXCR4表达以及转染效果;MTT法检测细胞增殖;AnnexinⅤ-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡;Western blot检测增殖及凋亡相关蛋白表达。结果雷公藤甲素能够抑制A549细胞中CXCR4 mRNA和蛋白的表达(P<0. 05)。雷公藤甲素可抑制A549细胞增殖,诱导其凋亡(P<0. 05)。转染pc DNA-CXCR4能够上调CXCR4 mRNA和蛋白的表达(P<0. 05)。上调CXCR4的表达能够部分逆转雷公藤甲素对A549细胞增殖抑制和凋亡诱导的作用(P<0. 05)。结论雷公藤甲素可能通过下调CXCR4的表达抑制A549细胞增殖,诱导细胞凋亡。