蒲葵子总黄酮对帕金森病细胞模型中人神经母细胞瘤细胞的保护作用

目的探讨蒲葵子总黄酮(TFFL)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP~+)诱导的帕金森病细胞模型中人神经母细胞瘤细胞(SK-N-SH)损伤的影响。方法以正常培养的SK-N-SH作为正常组。SK-N-SH用2000μmol/L MPP~+处理48 h建立帕金森病细胞模型,依据不同处理分为模型组、低浓度组(5μg/ml TFFL)、中浓度组(15μg/ml TFFL)、高浓度组(45μg/ml TFFL)、阴性组、干扰组(转染BLACAT1小分子干扰RNA)、对照组、转染组[转染微小RNA(miR)-29c-3p]、质粒组、载体组(转染pcDNA-BLACAT1)。试剂盒检测丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、还原性谷胱甘肽(GSH)水平;甲基噻唑基四唑检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;qRT-PCR法检测BLACAT1、miR-29c-3p表达量。结果与正常组比较,模型组细胞存活率和GSH水平降低,miR-29c-3p表达降低(0.29±0.05 vs 1.00±0.03,P0.05),MDA水平和LDH活性升高,细胞凋亡率升高,BLACAT1表达水平升高(4.01±0.42 vs 1.00±0.04,P0.05)。低、中、高浓度组较模型组;干扰组较阴性组;转染组较对照组细胞存活率升高,GSH水平升高,MDA水平和LDH活性降低,细胞凋亡率降低(P0.05,P0.01)。BLACAT1可靶向调控miR-29c-3p; BLACAT1过表达逆转TFFL对MPP~+诱导的细胞增殖、凋亡及氧化应激的作用。结论 TFFL可通过调控BLACAT1/miR-29c-3p分子轴,抑制MPP~+诱导的SK-N-SH氧化应激、凋亡及促进细胞增殖,进而保护神经细胞。     

LncRNA ZBTB20-AS1靶向miR-132-3p/MAPT轴影响阿尔茨海默病的发生发展

目的探讨长链非编码(Lnc)RNA锌指蛋白ZBTB20反义RNA1(ZBTB20-AS1)靶向miR-132-3p/微管相关蛋白tau(MAPT)轴对阿尔茨海默病(AD)发生发展的影响。方法采用Aβ_(25～35)(20μmol/L)处理SK-N-SH细胞构建AD细胞模型。将si-con、si-ZBTB20-AS1、miR-con、miR-132-3p mimics、si-MAPT分别转染SK-N-SH细胞,经Aβ_(25～35)处理后,反转录及荧光定量PCR(RT-qPCR)检测ZBTB20-AS1和miR-132-3p的表达水平,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测MAPT、细胞周期蛋白(Cyclin)D1和活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Cleaved-caspase)-3的表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证ZBTB20-AS1和miR-132-3p、miR-132-3p和MAPT的靶向关系。结果 AD细胞模型中ZBTB20-AS1和miR-132-3p的表达水平显著升高,MAPT的表达水平显著降低。沉默ZBTB20-AS1、过表达miR-132-3p或沉默MAPT均可促进SK-N-SH细胞增殖,抑制Aβ_(25～35)诱导的细胞凋亡。miR-132-3p是ZBTB20-AS1的靶基因,ZBTB20-AS1可靶向负性调控miR-132-3p表达。MAPT是miR-132-3p的靶基因,miR-132-3p可靶向调控MAPT表达。抑制miR-132-3p表达或过表达MAPT均可逆转沉默ZBTB20-AS1对Aβ_(25～35)诱导的SK-N-SH细胞增殖和凋亡的影响。结论沉默ZBTB20-AS1通过调控miR-132-3p/MAPT轴可促进SK-N-SH细胞增殖,抑制Aβ_(25～35)诱导的SK-N-SH细胞凋亡。     

miR-486-5p靶向TRPM2对帕金森病模型细胞自噬和凋亡的影响

目的探讨微小RNA-486-5p(miR-486-5p)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP~+)诱导的帕金森病(PD)模型细胞凋亡及自噬的影响。方法用MPP~+诱导SK-N-SH细胞建立PD细胞模型,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)与Western印迹平行检测PD细胞模型中miR-486-5p、瞬时受体电位(TRP)M2的表达;将miR-486-5p mimics、miR-NC、si-TRPM2、si-NC转染至SK-N-SH细胞,转染后细胞分为Con组、MPP~+组、MPP~++miR-486-5p组、MPP~++miR-NC组、MPP~++si-TRPM2组、MPP~++si-NC组。流式细胞仪分析PD细胞模型凋亡率;Western印迹检测PD细胞模型自噬蛋白标记物微管相关蛋白轻链(LC)3Ⅱ、LC3Ⅰ、线粒体功能相关蛋白线粒体融合蛋白(Mfn)2、核呼吸因子(NRF)1及凋亡蛋白B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cleaved-caspase)3表达情况;双荧光素酶报告基因检测验证miR-486-5p与TRPM2的靶向调控作用。结果 MPP~+处理后的SK-N-SH细胞凋亡率明显升高(P<0.05),LC3Ⅱ、Bax、cleaved-caspase3蛋白表达水平明显升高(P<0.05),而Mfn2、NRF1、Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05);PD细胞模型中miR-486-5p表达水平降低(P<0.05),TRPM2表达水平升高(P<0.05);PD细胞模型中miR-486-5p过表达与干扰TRPM2的表达可明显降低细胞凋亡率与LC3Ⅱ、Bax、cleaved-caspase3蛋白表达(P<0.05),提高Mfn2、NRF1、Bcl-2蛋白表达(P<0.05);双荧光素酶报告实验证明miR-486-5p可靶向调控TRPM2的表达;TRPM2过表达可逆转miR-486-5p过表达对MPP~+诱导的SK-N-SH细胞中线粒体功能相关蛋白、自噬相关蛋白表达及细胞凋亡的作用。结论 miR-486-5p过表达可通过下调TRPM2的表达而抑制PD模型细胞凋亡及自噬。     

金莲花总黄酮下调miR-215-5p抑制PI3K/AKT信号通路影响AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖和迁移

目的 探讨金莲花总黄酮对血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞(CFs)增殖、迁移的影响和潜在机制。方法 不同浓度(0.2、0.4、0.8 mmol/L)的金莲花总黄酮作用于AngⅡ诱导CFs。细胞计数试剂盒检测细胞活力确定金莲花总黄酮使用浓度。Transwell实验、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞迁移、miR-215-5p表达水平。Western印迹检测磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)和蛋白激酶B(AKT)的磷酸化水平。将miR-215-5p模拟物、抑制物分别转染CFs,检测上调或下调miR-215-5p对AngⅡ诱导的CFs增殖和迁移的影响。结果 金莲花总黄酮作用于AngⅡ诱导的CFs后,细胞活力、迁移能力、miR-215-5p、磷酸化(p)-PI3K和p-AKT蛋白表达显著降低(P<0.05)。上调miR-215-5p表达后,AngⅡ诱导的CFs活力、迁移能力显著升高(P<0.05)。下调miR-215-5p表达后,AngⅡ诱导的CFs活力、迁移能力显著降低(P<0.05)。上调miR-215-5p表达能够显著降低金莲花总黄酮对AngⅡ诱导的CF...     

羊栖菜多糖通过调控miR-29b-5p/AQP9表达对过氧化氢诱导的星形胶质细胞氧化损伤的影响及机制

目的探讨羊栖菜多糖(SFPS)对过氧化氢(H₂O₂)引起星形胶质细胞氧化损伤的影响及作用机制。方法用200μmol/L H₂O₂处理细胞24 h作为H₂O₂组,以正常培养细胞作为对照(Con)组;分别用15 mg/L、30 mg/L、60 mg/L的SFPS培养液预处理24 h后用200μmol/L H₂O₂诱导处理24 h,分别记为H₂O₂+SFPS-L组、H₂O₂+SFPS-M组、H₂O₂+SFPS-H组。将miR-NC、miR-29b-5p转染至星形胶质细胞后用200μmol/L H₂O₂再诱导处理24 h,记为H₂O₂+miR-NC组、H₂O₂+miR-29b-5p组;将anti-miR-NC、anti-miR-29b-5p转染至星形胶质细胞后用60 mg/L的SFPS培养液处理24 h后再用200μmol/L H₂O₂诱导处理24 h,分别记为H₂O₂+SFPS+anti-miR-NC组、H₂O₂+SFPS+anti-miR-29b-5p组。丙二醛(MDA)试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)试剂盒分别检测MDA含量、SOD、GSH-Px活性;Western印迹检测水通道蛋白(AQP)9水平;流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-29b-5p和AQP9 mRNA表达水平;荧光素酶报告实验检测miR-29b-5p和AQP9的靶向关系。结果与Con组相比,H₂O₂组星形胶质细胞中MDA水平显著升高,SOD、GSH-Px活性显著降低(均P<0.05);与H₂O₂组相比,不同浓度SFPS组星形胶质细胞中MDA含量逐渐降低,SOD、GSH-Px活性显著升高,呈浓度依赖性(均P<0.05)。与Con组相比,H₂O₂组星形胶质细胞中Bcl-2表达水平显著降低,Bax、酶切caspase-3表达水平及细胞凋亡率均显著升高(均P<0.05);与H₂O₂组相比,不同浓度SFPS组星形胶质细胞中Bcl-2表达水平显著升高,Bax、酶切caspase-3表达水平及细胞凋亡率均显著降低,且均呈浓度依赖性(均P<0.05),与Con组相比,H₂O₂组星形胶质细胞中miR-29b-5p表达水平显著降低,AQP9 mRNA和蛋白表达水平均显著升高(均P<0.05);与H₂O₂组相比,不同浓度SFPS糖组星形胶质细胞中miR-29b-5p表达水平显著升高,AQP9 mRNA和蛋白表达水平均显著降低,且均呈浓度依赖性(均P<0.05)。miR-29b-5p组荧光素酶活性显著低于miR-NC组(P<0.05)。相较于miR-NC组AQP9蛋白表达水平,miR-29b-5p组显著降低;相较于anti-miR-NC组AQP9蛋白表达水平,anti-miR-29b-5p组显著升高(均P<0.05)。与H₂O₂+miR-NC组相比,H₂O₂+miR-29b-5p组星形胶质细胞中miR-29b-5p表达水平显著升高,AQP9表达水平显著降低,MDA水平显著降低,SOD、GSH-Px活性显著升高,Bcl-2水平显著升高,Bax水平和细胞凋亡率显著降低(均P<0.05),与H₂O₂组相比,H₂O₂+SFPS组星形胶质细胞中miR-29b-5p水平显著升高,AQP9水平显著降低,MDA水平显著降低,SOD、GSH-Px活性显著升高,Bcl-2水平显著升高,Bax水平及细胞凋亡率显著降低(P<0.05);与H₂O₂+SFPS+anti-miR-NC组相比,H₂O₂+SFPS+anti-miR-29b-5p组星形胶质细胞中miR-29b-5p水平显著降低,AQP9水平显著升高,MDA水平显著升高,SOD、GSH-Px活性显著降低,Bcl-2水平显著降低,Bax水平及细胞凋亡率显著升高(均P<0.05)。结论SFPS可抑制H₂O₂诱导的星形胶质细胞氧化应激和凋亡,保护H₂O₂引起的星形胶质细胞氧化损伤,其机制可能与miR-29b-5p和AQP9有关。     

miR-192-3 p调控PI3 K/Akt信号通路对小鼠巨噬细胞免疫细胞因子表达的影响

目的研究miR-192-3p对小鼠巨噬细胞免疫细胞因子表达的影响及机制。方法用HSP40诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7;将RAW264.7+HSP40(10μg/mL)组(10μg/mL HSP40处理)、RAW264.7+HSP40(10μg/mL)+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC并用10μg/mL HSP40处理)、RAW264.7+HSP40(10μg/mL)+anti-miR-192-3p组(转染anti-miR-192-3p并用10μg/mL HSP40处理)、RAW264.7+miR-NC组(转染miR-NC)、RAW264.7+miR-192-3p组(转染miR-192-3p mimics)、RAW264.7+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、RAW264.7+anti-miR-192-3p组(转染anti-miR-192-3p)、RAW264.7+HSP40(10μg/mL)+pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1并用10μg/mL HSP40处理)、RAW264.7+HSP40(10μg/mL)+pcDNA3.1-AKT1组(转染pcDNA3.1-AKT1并用10μg/mL HSP40处理)、RAW264.7+HSP40(10μg/mL)+anti-miR-192-3p+si-NC组(共转染anti-miR-192-3p和si-NC并用10μg/mL HSP40处理)、RAW264.7+HSP40(10μg/mL)+anti-miR-192-3p+si-AKT1组(共转染anti-miR-192-3p和si-AKT1并用10μg/mL HSP40处理),用脂质体法转染至RAW264.7细胞;qmiR-506法检测细胞中miR-192-3p的表达;ELISA实验检测细胞中IL-16、IL-18的含量;Western blot检测细胞中AKT1的蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性。结果与RAW264.7相比, HSP40处理的RAW264.7细胞中miR-192-3p的表达显著升高,AKT1的蛋白表达、IL-16、IL-18的含量均显著升高(P0.05)。抑制miR-192-3p、过表达AKT1可明显下调HSP40诱导的RAW264.7细胞中IL-16、IL-18含量;miR-192-3p可抑制野生型AKT1细胞的荧光活性,并负向调控AKT1的表达。抑制AKT1可逆转抑制miR-192-3p对RAW264.7细胞的炎性因子IL-16、IL-18的抑制作用。结论 miR-192-3p可促进小鼠巨噬细胞免疫细胞因子的分泌,其机制可能与直接调控PI3K/Akt信号通路相关,将可为肺炎的治疗提供新靶点。     

miR-212-5p调控NF-κB影响CSE诱导的MRC-5细胞炎症因子释放和凋亡

目的 研究miR-212-5p对香烟烟雾提取物(CSE)诱导的人胚肺成纤维细胞(MRC-5)炎症因子释放和凋亡的影响和机制。方法 MRC-5分成对照(Control)组、CSE(CSE诱导)组、CSE+miR-NC(转染mimics control, CSE诱导)、CSE+miR-212-5p(转染miR-212-5p mimics, CSE诱导)组，实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测miR-212-5p表达，用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-8、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平，用CCK-8法检测细胞增殖活性，用流式细胞术检测细胞凋亡变化，用Western印迹方法检测细胞中C-半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3、核因子(NF)-κB p65蛋白表达。用NF-κB信号激活剂和miR-212-5p mimics联合处理经CSE诱导的MRC-5,同样测定细胞中炎症因子分泌、细胞增殖、凋亡和C-Caspase-3、NF-κB p65蛋白表达。结果 与Control组比较，CSE组MRC-5中miR-212-5p表达水平明显降低，细胞分...     

灵芝提取物通过miR-143-3p对Aβ25～35诱导的神经细胞损伤的影响

目的 探讨灵芝提取物对β淀粉样蛋白(Aβ)_25～35诱导的神经细胞损伤的影响及其可能的作用机制。方法 采用Aβ_25～35诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞PC12建立阿尔茨海默病(AD)细胞模型,不同浓度的灵芝提取物处理PC12细胞,anti-miR-NC、anti-miR-143-3p分别转染至PC12细胞后进行Aβ_25～35处理24 h, miR-NC、miR-143-3p mimics分别转染至PC12细胞后加入10 mg/L灵芝提取物与Aβ_25～35处理24 h;采用噻唑蓝(MTT)法、流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡;采用试剂盒检测丙二醛(MDA)的水平和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的活性;采用实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-143-3p表达量。结果 Aβ_25～35作用条件下,灵芝提取物可明显降低细胞凋亡率、MDA水平、miR-143-3p表达量(P<0.05),明显升高细胞活力和SOD、CAT的活性,且呈剂量依赖性(P<0....     

沉默环状RNA溴域PHD手指转录因子通过靶向miR-15a-5p对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞损伤影响的研究

目的 探讨沉默环状RNA溴域PHD手指转录因子（circBPTF）对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞（hRMEC）损伤的影响及其可能作用机制。方法 取对数生长期hRMEC加入浓度为5.5 mmol/L葡萄糖培养基处理24 h为正常对照（Con）组，加入浓度为25 mmol/L葡萄糖培养基处理24 h为HG组。将si-NC、si-circBPTF、miR-NC、miR-15a-5p mimic、si-circBPTF和miR-15a-5p inhibitor（共转染）分别转染至hRMEC，转染成功后加入浓度为25 mmol/L葡萄糖培养基处理24 h，分别为HG+si-NC组、HG+si-circBPTF组、HG+miR-NC组、HG+miR-15a-5p mimic组、HG+si-circBPTF+miR-15a-5p inhibitor组。qRT-PCR法检测circBPTF、miR-15a-5p表达，试剂盒检测丙二醛（MDA）与超氧化物歧化酶（SOD）活性，细胞计数试剂盒8法与流式细胞术分别检测细胞活力及凋亡率，双荧光素酶报告实验检测circBPTF与miR-15a-5p的靶向关系...     

miR-92a-3p靶向GPR124调控糖尿病肾病足细胞损伤的机制

目的研究miR-92a-3p对糖尿病肾病足细胞损伤的影响及其机制。方法构建高糖(30 mmol/L)诱导的小鼠足细胞损伤模型;将高糖+anti-miR-92a-3p组(转染anti-miR-92a-3p)、高糖+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、高糖+pcDNA组(转染pcDNA)、高糖+pcDNA-GPR124组(转染pcDNA-GPR124)、高糖+anti-miR-92a-3p+si-con组(共转染pcDNA-GPR124和si-con)、高糖+anti-miR-92a-3p+si-GPR124组(共转染pcDNA-GPR124和si-GPR124)至小鼠足细胞,用30 mmol/L高糖处理48 h。Western印迹检测各组细胞中结蛋白(Desmin)、G蛋白耦联受体(GPR)124的蛋白表达;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;qRT-PCR检测各组细胞中miR-92a-3p、GPR124的表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞荧光活性。结果与对照组相比,高糖处理组小鼠足细胞中Desmin蛋白表达和细胞凋亡率均显著升高,miR-92a-3p表达明显升高,GPR124表达明显降低(P<0.05);抑制miR-92a-3p、过表达GPR124均可下调Desmin蛋白表达和细胞凋亡率;miR-92a-3p可抑制WT-GPR124足细胞的荧光活性,且负调控GPR124的蛋白表达;敲减GPR124可逆转抑制miR-92a-3p对高糖诱导的小鼠足细胞的保护作用。结论抑制miR-92a-3p可保护高糖诱导的小鼠足细胞损伤,其机制可能与靶向GPR124有关,将可为糖尿病肾病的治疗提供新方向。     

微小RNA-139-5p在缺氧诱导的原代心肌细胞凋亡中的作用及机制

目的研究微小RNA(miR)-139-5p在缺氧诱导的心肌细胞凋亡中的作用及机制。方法分离培养新生Wistar大鼠原代心肌细胞,将细胞进行无特殊(对照)、miR-139-5p模拟物(mimic)转染、miR-139-5p抑制剂(inhbitor)转染、缺氧、转染mimic+缺氧处理、转染inibitor+缺氧处理,转染mimic后采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测心肌细胞中miR-139-5p的表达;采用流式细胞术检测对照、转染、缺氧、转染mimic+缺氧、转染inibitor+缺氧处理后细胞的凋亡率;Western blot检测心肌细胞wnt信号通路wnt1、β-连环蛋白(β-catenin)以及B细胞淋巴瘤因子2(bcl-2)的蛋白表达水平。结果与对照无特殊处理细胞比较,转染miR-139-5p mimic后miR-139-5p的相对表达水平明显增高(14.01±0.50比1.51±0.16,P0.05)。与对照和转染处理后的细胞相比,缺氧后细胞的wnt1、β-catenin、bcl-2蛋白表达升高(均P0.05);缺氧后细胞凋亡率明显升高[(20.70±0.40)%比(0.88±0.18)%、(1.00±0.14)%,P0.05]。与缺氧后的细胞相比,转染mimic+缺氧细胞的wnt1、β-catenin、bcl-2蛋白表达明显降低(均P0.05),转染inhibitor+缺氧细胞的wnt1、β-catenin、bcl-2蛋白表达明显升高(均P0.05),转染mimic+缺氧细胞凋亡率明显升高[(36.10±2.30)%比(20.70±0.40)%,P0.05],转染inhibitor+缺氧细胞凋亡率明显降低[(14.5±1.10)%比(20.70±0.40)%,P0.05]。对照和转染处理后细胞的凋亡率和蛋白表达差异无统计学意义(P0.05)。转染mimic和缺氧对wnt1(F=53.887,P_(交互)0.05)、β-catenin(F=19.112,P_(交互)0.05)、bcl-2(F=15.368,P_(交互)=0.001)表达的影响存在交互作用。结论 miR-139-5p通过抑制wnt/β-catenin信号通路,降低心脏的保护因子bcl-2的表达,增加缺氧状态下心肌细胞的凋亡。     

LncRNA MCM3AP-AS1调控miR-19b-3p对OGD/R诱导的神经元细胞损伤的影响

目的 探讨LncRNA MCM3AP-AS1对氧糖剥夺再复氧(OGD/R)诱导的神经元细胞损伤的影响及其对miR-19b-3p的调控作用。方法 采用OGD/R诱导小鼠海马神经元细胞HT22建立细胞损伤模型，si-NC、si-MCM3AP-AS1、miR-NC、miR-19b-3p mimics、si-MCM3AP-AS1与anti-miR-NC、si-MCM3AP-AS1与anti-miR-19b-3p分别转染入HT22细胞后再进行OGD/R处理；采用qRT-PCR法检测MCM3AP-AS1、miR-19b-3p的表达量；根据试剂盒检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平；采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6水平；采用流式细胞术检测细胞凋亡率；双荧光素酶报告基因实验检测MCM3AP-AS1与miR-19b-3p的靶向关系。结果 转染si-MCM3AP-AS1或转染miR-19b-3p mimics可降低OGD/R诱导的HT22细胞中MDA、TNF-α、IL-6水平和凋亡率，SOD水平明显升高(P<0.05);MCM3A...     

干扰LINC00265上调miR-485-5p的表达影响缺氧诱导的心肌细胞凋亡、增殖机制研究

目的研究LINC00265对缺氧诱导的心肌细胞凋亡、增殖的影响及分子机制。方法将H9C2细胞分为对照组(未做任何处理)、模型组(缺氧处理3 h)、模型组+si-LINC00265组(转染siLINC00265后缺氧处理)、模型组+si-NC组(转染si-NC后缺氧处理)、模型组+miR-485-5p组(转染miR-485-5p后缺氧处理)、模型组+miR-NC组(转染miR-NC后缺氧处理)。实时荧光定量PCR(RTqPCR)检测LINC00265和miR-485-5p的表达水平;流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡;蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞增殖核抗原Ki67(Ki67)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)蛋白表达;双荧光素酶报告实验验证LINC00265和miR-485-5p的靶向关系。比较各组上述指标的差异。结果缺氧诱导的心肌细胞中LINC00265表达水平升高,miR-485-5p表达水平降低,G0-G1期细胞所占比例升高,S期细胞所占比例降低,细胞凋亡率升高,Ki67表达水平降低,Caspase3表达水平升高(P0.05)。干扰LINC00265或过表达miR-485-5p后,G0-G1期细胞所占比例降低,S期细胞所占比例升高,细胞凋亡率降低,Ki67表达水平升高,Caspase3表达水平降低(P0.05)。LINC00265野生型报告载体与miR-485-5p共转染后细胞荧光活性降低(P0.05);而LINC00265突变型报告载体与miR-485-5p共转染后细胞荧光活性无显著变化(P0.05)。结论干扰LINC00265可能通过上调miR-485-5p的表达抑制缺氧诱导的心肌细胞凋亡、促进细胞增殖。     

circNT5E靶向miR-377-3p对ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞增殖、迁移侵袭的影响

目的探讨环状RNA NT5E(circNT5E)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管平滑肌细胞增殖、迁移侵袭的影响,并探讨其机制是否与调控miR-377-3p表达有关。方法将人主动脉血管平滑肌细胞(HASMCs)分为对照(Con)组(正常培养的细胞)、ox-LDL组(50 μg/ml ox-LDL)、ox-LDL+si-NC组(转染小干扰RNA阴性对照,50 μg/ml ox-LDL)、ox-LDL+si-circNT5E组(转染si-circNT5E,50 μg/ml ox-LDL)、ox-LDL+miR-NC组(转染miR-NC,50 μg/ml ox-LDL)、ox-LDL+miR-377-3p组(转染miR-377-3p模拟物,50 μg/ml ox-LDL)、ox-LDL+si-circNT5E+anti-miR-NC组(转染si-circNT5E和anti-miR-NC,50 μg/ml ox-LDL)、ox-LDL+si-circNT5E+anti-miR-377-3p组(转染si-circNT5E和anti-miR-377-3p,50 μg/ml ox-LDL)。实时定量PCR(RT-qPCR)检测circNT5E和miR-377-3p表达;细胞计数法、Transwell实验检测细胞活力、迁移和侵袭细胞数。双荧光素酶报告实验和RT-qPCR确定circNT5E对miR-377-3p的靶向作用。结果 ox-LDL处理的HASMCs中circNT5E表达量、细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著升高(P0.05),miR-377-3p表达量显著降低(P0.05)。干扰circNT5E表达或过表达miR-377-3p可减弱ox-LDL对HASMCs增殖、迁移和侵袭的促进作用(P0.05)。circNT5E直接结合miR-377-3p,干扰circNT5E促进miR-377-3p表达,而过表达circNT5E抑制miR-377-3p表达(P0.05)。抑制miR-377-3p表达可逆转干扰circNT5E对ox-LDL诱导的HASMCs增殖、迁移和侵袭的抑制作用(P0.05)。结论干扰circNT5E表达可抑制ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞增殖、迁移侵袭,其机制与上调miR-374a-3p表达有关。     

lncRNA SNHG4/miR-152-3p对HepG2细胞增殖、凋亡及免疫因子的影响

目的:探究长链非编码RNA(lncRNA)SNHG4调控miR-152-3p对肝癌细胞增殖、凋亡及免疫因子的影响。方法:qRT-PCR检测肝癌细胞(HepG2、SNU-398、Hep3B)及永生化正常肝细胞THLE-2中SNHG4和miR-152-3p表达水平。将HepG2细胞分为si-NC组(转染si-NC)、si-SNHG4组(转染si-SNHG4)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-152-3p组(转染miR-152-3p)、si-SNHG4+anti-miR-NC组(共转染si-SNHG4与anti-miR-NC)、si-SNHG4+anti-miR-152-3p组(共转染si-SNHG4与anti-miR-152-3p)。qRT-PCR检测SNHG4和miR-152-3p表达水平；CCK8法检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡；Western Blot法检测PCNA、Bcl-2、Bax蛋白表达；ELISA法检测TNF-α、IL-6表达水平；双荧光素酶报告实验验证SNHG4和miR-152-3p靶向关系。结果:与永生化正常肝细胞THLE-2比较，肝癌细胞HepG2、S...     

长链非编码RNA SNHG15可通过靶向miR-24-3p/Atg12减轻缺氧诱导的心肌细胞损伤

目的 探讨长链非编码RNA （lnc RNA） 小核仁RNA宿主基因15（SNHG15）通过miR-24-3p/Atg12对缺氧诱导的心肌细胞损伤的影响。 方法 采用RT-qPCR检测 SNHG15和miR-24-3p在缺氧诱导的心肌细胞中表达,细胞设为对照组、缺氧组、缺氧+si-SNHG15组、缺氧+si-NC组、缺氧+miR-24-3p inh组、缺氧+inh-NC组、si-SNHG15+miR-24-3p inh组。采用MTT法、流式细胞术、Caspase-3试剂盒和Transwell法检测SNHG15和miR-24-3p对心肌细胞增殖、凋亡和迁移的影响,目的基因预测与筛选、荧光素酶报告基因检测验证SNHG15和miR-24-3p下游目的基因,Western blot检测Atg12蛋白及相关自噬基因的表达。 结果 随着过氧化氢处理持续时间的延长,心肌细胞内SNHG15水平明显升高,miR-24-3p水平明显降低,且呈时间依赖性（P<0.05）;与对照组相比,缺氧组细胞活力、迁移和侵袭性明显降低（P<0.05）,Caspase-3活性和细胞凋亡率均明显增加（P<0.05） ;与缺氧组相比,缺氧+si-SNHG15组细胞活力、迁移和侵袭性明显升高（P<0.05）,Caspase-3活性和细胞凋亡率均明显降低（P<0.05） ;miR-24-3p与SNHG15呈负相关,通过在线软件预测miR24-3p与SNHG15、Atg12可能的靶点,并用荧光素酶检测,结果显示,miR-24-3p与SNHG15、Atg12存在靶向调控关系;与缺氧组相比,缺氧+miR-24-3p inh组细胞活力、迁移和侵袭性明显降低（P<0.05）,Caspase-3活性和凋亡率明显升高（P<0.05）;与缺氧+miR-24-3p inh组相比,si-SNHG15+miR-24-3p inh组细胞活力、迁移和侵袭性明显升高（P<0.05）,Caspase-3活性和凋亡率明显降低（P<0.05）;与对照组相比,缺氧组Atg12、LC3蛋白的表达明显上调,p62表达明显下调（P<0.05）;与缺氧组相比,缺氧+miR-24-3p inh组Atg12蛋白和LC3表达均明显上调,p62表达明显下调（P<0.05）,与缺氧+miR-24-3p inh组相比,si-SNHG15+miR-24-3p inh组Atg12蛋白和LC3表达均明显下调,p62表达明显上调（P<0.05）。 结论 lnc RNA SNHG15可以通过调控miR-24-3p/Atg12轴来调控心肌细胞的增殖,减轻缺氧诱导的心肌细胞损伤。     

miR-107-3p靶向SLC25A38调控阿尔茨海默病模型细胞凋亡的分子机制

目的研究miR-107-3p对阿尔茨海默病(AD)模型细胞凋亡的影响及其分子机制。方法模型+miR-NC组(转染miR-NC)、模型+miR-107-3p组(转染miR-107-3p mimics)、模型+si-NC组(转染si-NC)、模型+si-SLC25A38(转染si-SLC25A38)、模型+miR-107-3p+pcDNA组(共转染miR-107-3p mimics和pcDNA)、模型+miR-107-3p+pcDNA-SLC25A38组(共转染miR-107-3p mimics和pcDNA-SLC25A38)均用脂质体法转染至PC12细胞,再进行AD细胞模型制造。噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率;qRT-PCR法检测细胞中miR-107-3p、SLC25A38的表达;Western印迹检测细胞中SLC25A38的蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞荧光活性。结果成功构建AD细胞模型;与对照组相比,模型组细胞中miR-107-3p表达下调,膜转蛋白的溶质载体(SLC)25A38表达上调;过表达miR-107-3p、抑制SLC25A38均可促进模型细胞的存活,抑制其凋亡;miR-107-3p可抑制野生型SLC25A38的荧光活性;过表达SLC25A38可逆转miR-107-3p对AD模型细胞存活和凋亡的影响。结论 miR-107-3p可提高AD模型细胞的存活,抑制凋亡,其机制与靶向SLC25A38有关。     

miR-423-5p通过调控UCHL1表达对H2O2诱导的人晶状体上皮细胞损伤的影响

目的探讨miR-423-5p对过氧化氢(H₂O₂)诱导的人晶状体上皮细胞损伤的影响及作用机制。方法采用H₂O₂诱导人晶状体上皮细胞,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测细胞中miR-423-5p和泛素羧基末端水解酶(UCH)L1 mRNA表达水平,Western印迹检测UCHL1、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2和Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平,酶联免疫吸附试验检测细胞培养上清液中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽还原酶(GSH-Px)水平,流式细胞仪检测细胞凋亡。转染miR-423-5p抑制剂或UCHL1过表达载体至人晶状体上皮细胞,上述相同方法检测干扰miR-423-5p表达或UCHL1过表达对H₂O₂诱导的人晶状体上皮细胞氧化应激及凋亡的影响。双荧光素酶报告基因实验验证miR-423-5p与UCHL1靶向关系。结果H₂O₂诱导可促进人晶状体上皮细胞凋亡、MDA和miR-423-5p表达及Bax蛋白表达(P<0.05),抑制细胞SOD和GSH-Px表达、UCHL1 mRNA和蛋白表达及Bcl-2蛋白表达(P<0.05)。干扰miR-423-5p或过表达UCHL1均可抑制人晶状体上皮细胞凋亡、MDA和Bax表达(P<0.05),促进细胞SOD和GSH-Px表达及Bcl-2蛋白表达(P<0.05)。miR-423-5p靶向负调控UCHL1表达,抑制UCHL1表达逆转了干扰miR-423-5p表达对人晶状体上皮细胞凋亡、MDA和Bax表达的抑制作用及对SOD、GSH-Px和Bcl-2蛋白表达的促进作用。结论miR-423-5p可能通过抑制UCHL1表达促进H₂O₂诱导的人晶状体上皮细胞氧化应激和凋亡,保护人晶状体上皮细胞免受H₂O₂损伤。     

miR-221通过细胞周期蛋白D1介导同型半胱氨酸诱导人冠状动脉内皮细胞损伤

目的研究miR-221通过细胞周期蛋白D1介导同型半胱氨酸(Hcy)诱导人冠状动脉内皮细胞(HCAEC)损伤。方法培养HCAEC并分为4组,对照组用无血清培养基处理,Hcy组用含有1 mmol/L Hcy的培养基处理,Hcy+NC(阴性对照)组转染NC抑制物后用含有1 mmol/L的培养基处理,Hcy+miR-221组转染miR-221抑制物后用含有1 mmol/L的培养基处理。采用荧光定量PCR检测miR-221的表达水平,Western blot检测细胞周期蛋白D1的表达水平,MTS检测细胞活力OD_(490 nm)水平,流式细胞术检测细胞周期,双荧光素酶报告基因实验验证miR-221靶向细胞周期蛋白D1。结果与对照组比较,Hcy组HCAEC的miR-221表达水平、细胞G0/G1期比例明显增加,OD_(490 nm)水平、S期及G2/M期比例、细胞周期蛋白D1表达水平明显降低。与Hcy组及Hcy+NC组比较,Hcy+miR-221组的miR-221表达水平、G0/G1期比例明显降低,OD_(490 nm)水平、S期及G2/M期比例、细胞周期蛋白D1表达水平明显增加。细胞周期蛋白D1基因mRNA 3′UTR第1224-1231碱基是miR-221的结合位点,miR-221能够降低野生型细胞周期蛋白D1双荧光素酶报告基因的荧光活力。结论 miR-221在Hcy诱导HCAEC损伤过程中表达增加,抑制miR-221表达能够减轻Hcy诱导的HCAEC损伤,靶向细胞周期蛋白D1是可能的分子机制。     

miR-141-3p靶向调控Keap1对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡、氧化应激和Nrf2/HO-1通路的影响

目的:探讨miR-141-3p通过靶向调控Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞氧化应激、凋亡和Nrf2/血红素氧合酶1(HO-1)通路的影响。方法:体外培养大鼠胚胎心肌细胞H9c2,构建心肌细胞H/R损伤模型。将H9c2细胞随机分为control组(正常培养的H9c2细胞)、H/R组(H9c2细胞经H/R处理)、H/R+miR-NC组(H9c2细胞NC转染经H/R处理)和H/R+miR-141-3p组(H9c2细胞转染miR-141-3p经H/R处理),每组设3个复孔。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法检测不同组别心肌细胞中miR-141-3p和Keap1表达水平,细胞毒性试验(CCK-8)法检测心肌细胞存活率,流式细胞术检测心肌细胞凋亡,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组心肌细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)表达水平,化学荧光法检测各组心肌细胞活性氧(ROS)含量,蛋白免疫印迹法(Western Blotting)检测Nrf2、HO-1蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验和Western Blo...