神经型一氧化氮合酶在早期糖尿病大鼠肾组织中的表达

目的:观察早期糖尿病大鼠肾组织内神经型一氧化氮合酶的表达变化。方法:实验于2005-03/10在锦州医学院科学实验中心与组织胚胎学实验室完成。60只两三月龄大鼠随机数字表法分成糖尿病模型组和正常对照组,每组30只。禁食12h后糖尿病组一次性腹腔注射链脲佐菌素50mg/kg,建立链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠模型,对照组注射相同体积的柠檬酸缓冲液。分别在第1,2,4周3个时间点处死动物,取肾组织,采用亚硝酸还原酶法检测一氧化氮的含量;采用免组织化学染色法检查致密斑处神经型一氧化氮合酶的表达,采用Mivnt细胞图像分析系统测定一氧化氮合成酶在致密斑处阳性细胞的灰度值。结果:在实验过程中,无动物死亡,全部进入结果分析。①1周时糖尿病模型组大鼠肾组织神经型一氧化氮合成酶含量明显低于正常对照组,差异有显著性意义[(1068.01±61.61),(2329.99±200.62)mmol/L,P<0.05];2,4周时糖尿模型病组大鼠肾组织神经型一氧化氮合成酶含量逐渐升高,2周时与对照组差异无显著性意义[(2334.59±192.40),(2372.11±193.34)mmol/L,P>0.05];4周时差异有显著性意义[(4939.51±133.44),(2407.30±174.94)mmol/L,P<0.05]。②1周病程时糖尿病模型组大鼠肾皮质一氧化氮水平低于正常对照组,差异有显著性意义[(8.56±1.25),(11.23±2.08)μmol/L,P<0.05],2周病程时高于同期正常对照组,差异有显著性意义[(13.71±1.86),(9.93±2.01)μmol/L,P<0.05],4周病程时显著高于同期正常对照组,差异有极显著性意义[(16.29±2.46),(10.99±1.64)μmol/L,P<0.01]。③各病程糖尿病模型组大鼠血糖均高于正常对照组大鼠,差异有显著性意义(P<0.01)。结论:在糖尿病大鼠肾脏病变的早期,肾组织内一氧化氮合成减少,可能主要是由于神经型一氧化氮合酶合成减少造成的。     

运动结合补充葛根素干预糖尿病大鼠一氧化氮及一氧化氮合酶的变化

目的:分析有氧运动结合补充葛根素对链脲佐菌素所致糖尿病大鼠血清及肝脏中的一氧化氮含量和一氧化氮合酶活性的影响。方法:实验于2005-08/2006-01在江西师范大学体育学院完成。①选取8周龄雄性Sprague-Dawley大鼠60只,随机数字表法分为5组:正常对照组、模型对照组、运动组、葛根素组、运动 葛根素组,12只/组。②除正常对照组外,其余各组均喂以高脂饲料,腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型。血糖值≥14.7mmol/L且尿糖为～者确定为造模成功。正常对照组仅以普通饲料喂养,腹腔注射等体积0.1mmol/L的枸椽酸盐缓冲液。③造模后,运动组进行跑台训练,跑台坡度为0°,每天以10～15m/s的速度运动30min,共训练8周。葛根素组每天按500mg/kg体质量给予葛根素灌胃,共8周。运动 葛根素组跑台训练的同时给予葛根素灌胃。正常对照组、模型对照组不进行任何干预。各组均以普通饲料喂养。④分别于造模后第3天、造模后第8周末对各组大鼠尾静脉取血测定空腹血糖。造模后第8周末,各组大鼠乙醚麻醉,心脏取血,离心取上层无溶血血清,硝酸还原酶法测定一氧化氮含量。取新鲜肝脏组织1g,用40mmol/L的磷酸钾缓冲液制成匀浆,离心取上清检测一氧化氮合酶活性。结果:共54只大鼠进入结果分析。①空腹血糖检测结果:造模后第3天～第8周末,各模型组空腹血糖值均明显高于正常对照组(P<0.01)。与模型对照组比较,造模后第3天葛根素组、运动组、运动 葛根素组空腹血糖值无明显变化[(18.3±4.7),(18.6±3.0),(18.9±4.6),(19.1±2.9)mmol/L,P>0.05],第8周末均不同程度下降,尤以运动 葛根素组明显[(22.3±4.2),(9.4±2.0)mmol/L,P<0.01]。②造模后各组大鼠血清中一氧化氮含量及一氧化氮合酶活性的比较:与模型对照组比较,运动组、葛根素组一氧化氮含量及一氧化氮合酶活性均明显降低(P<0.01或0.05),运动 葛根素组降低的幅度尤为显著[(58.58±8.97),(30.80±14.80)μmol/L;(2.0±0.23),(0.92±0.13)μkat/L;P均<0.01]。③造模后各组大鼠肝脏组织中一氧化氮含量及一氧化氮合酶活性的比较:与模型对照组比较,运动组、葛根素组、运动 葛根素组一氧化氮合酶活性略有下降,但差异无显著性意义[(0.26±0.02),(0.23±0.03),(0.21±0.01),(0.19±0.03)μkat/L,P>0.05];运动组、葛根素组一氧化氮含量均明显降低[(4.21±0.83),(2.86±0.64),(3.39±0.86)μmol/L,P<0.05],运动 葛根素组降低至(1.75±0.31)μmol/L,差异尤为显著(P<0.01)。结论:有氧运动结合补充葛根素,能够有效降低糖尿病大鼠血清及脏肝中一氧化氮含量及一氧化氮合酶的活性。     

镁对慢性阻塞性肺疾病大鼠血管钙化和弹力纤维降解的影响及机制

目的探讨镁在慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)大鼠血管钙化和弹力纤维降解中的作用及可能机制。方法SD大鼠40只,随机分为低镁组、高镁组、模型组、对照组各10只。低镁组、高镁组、模型组雾化吸入丙烯醛制备COPD模型,对照组雾化吸入蒸馏水。造模成功后,低镁组给予低镁饮食(镁元素质量构成比0.02%)、高镁组给予高镁饮食(镁元素质量构成比0.20%),对照组和模型组给予正常饮食(镁含量正常),连续14 d。干预结束,检测4组血镁含量;处死大鼠取胸主动脉和肺组织,采用von Kossa染色法检测胸主动脉钙化程度,邻甲酚酞络合酮比色法测定胸主动脉壁钙含量,实时荧光定量PCR法检测肺组织弹力纤维mRNA相对表达量,Western blot法检测肺组织基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-9、MMP-2相对表达量。结果镁干预14 d,高镁组血镁含量[(1.33±0.45)mmol/L]高于低镁组[(0.62±0.24)mmol/L]、模型组[(0.91±0.34)mmol/L]、对照组[(0.91±0.15)mmol/L](P<0.05),且对照组和模型组高于低镁组(P<0.05),模型组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);低镁组、模型组、高镁组、对照组肺组织弹力纤维mRNA相对表达量(0.14±0.09、0.31±0.05、0.81±0.04、0.95±0.08)依次增高(P<0.05);对照组胸主动脉几乎无钙化,模型组胸主动脉一定程度钙化,低镁组胸主动脉弥漫性钙化,高镁组胸主动脉钙化程度较模型组、低镁组轻;低镁组、模型组、高镁组、对照组胸主动脉壁钙含量[(13.21±0.22)、(8.12±0.55)、(5.21±0.35)、(3.98±0.15)μg/mg]依次降低(P<0.05),肺组织MMP-9相对表达量(6.12±0.15、4.21±0.32、2.21±0.25、1.98±0.05)、MMP-2相对表达量(4.34±0.09、3.21±0.15、1.61±0.21、1.55±0.15)依次降低(P<0.05)。结论镁可通过下调肺组织MMP-9、MMP-2表达,进而抑制COPD大鼠血管钙化及弹力纤维降解。     

原花青素对高脂饮食诱导大鼠脂肪肝的防治研究

目的 探讨原花青素对高脂饮食诱导的大鼠脂肪肝的预防及治疗作用。方法 雄性Wistar大鼠60只,随机分为空白对照组、模型组、花青素低剂量治疗组(低剂量组)和花青素高剂量治疗组(高剂量组)各15只。空白对照组大鼠喂食普通饲料,模型组和低、高剂量组给予高脂饲料,低、高剂量组分别给予50、200mg/(kg·d)花青素灌胃,对照组和模型组给予质量分数0.9%氯化钠溶液灌胃。喂养8周后,禁食12h处死大鼠,收集血清和肝脏组织。观察各组肝组织病理学改变,检测血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平及血清超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性和丙二醛含量。结果 对照组大鼠肝组织结构正常,模型组大鼠肝组织出现大面积小叶内肝细胞脂肪变性、气球样变性和炎性细胞浸润,低剂量组和高剂量组肝脏脂肪变性明显减轻、无明显气球样变、无炎性细胞浸润;模型组血清总胆固醇[(3.98±0.29)mmol/L]、三酰甘油[(0.85±0.14)mmol/L]、低密度脂蛋白胆固醇[(1.41±0.19)mmol/L]、谷丙转氨酶[(13.84±1.92)u/L]、谷草转氨酶[(22.93±2.35)u/L]、丙二醛[(3.63±0.23)μmol/L]水平高于对照组[(1.45±0.21)mmol/L、(0.57±0.07)mmol/L、(0.98±0.20)mmol/L、(8.91±2.13)u/L、(16.90±0.87)u/L、(1.51±0.32)μmol/L]和高剂量组[(1.57±0.28)mmol/L、(0.60±0.08)mmol/L、(1.02±0.11)mmol/L、(9.57±1.81)u/L、(17.86±1.75)u/L、(2.34±0.15)μmol/L](P0.05),低剂量组血清谷丙转氨酶[(10.50±1.23)u/L]低于模型组(P0.05);模型组超氧化物歧化酶[(199.62±18.25)u/mL]、谷胱甘肽过氧化物酶[(326.75±27.90)u/mL]活性低于对照组[(313.87±12.98)、(448.23±35.89)u/mL]、高剂量组[(283.54±10.92)、(442.44±32.87)u/mL]和低剂量组[(269.53±20.38)、(397.25±27.56)u/mL](P0.05),高、低剂量组与对照组两两比较差异无统计学意义(P0.05)。结论 原花青素可能通过抗氧化机制实现对高脂饮食大鼠脂肪肝的保护作用。     

L-精氨酸对严重腹腔感染大鼠肠黏膜上皮的保护作用

目的 探讨L-精氨酸(L-Arg)对严重腹腔感染时肠黏膜上皮损伤的影响.方法 将18只Wistar大鼠随机分为两组,每组9只.采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备严重腹腔感染动物模型.L-Arg组于CLP后腹腔注射盐酸L-Arg(300 mg/kg);模型组给予等量生理盐水.两组均于术后24 h采血测定血清一氧化氮(NO)及诱生型一氧化氮合酶(iNOS)水平;光镜下观察小肠黏膜组织病理学变化,并检测肠黏膜上皮损伤指数.结果 CLP后大鼠均出现小肠黏膜病理损害,L-Arg组小肠黏膜病理损害明显减轻,肠黏膜上皮损伤指数(3.4±0.6)与模型组(4.1±0.5)比较差异有显著性(P＜0.05).L-Arg组血清NO水平[(76.1±26.2)μmol/L]虽低于模型组[(87.3±16.7)μmol/L],但差异无显著性;而L-Arg组iNOS水平[(30.6±7.4)U/L]显著低于模型组[(44.4±6.6)U/L],差异有显著性(P＜0.01).结论 L-Arg能降低严重腹腔感染大鼠血清iNOS水平,减轻严重腹腔感染时肠黏膜上皮的损伤.     

雌激素调控Notch1信号通路对卵巢去势大鼠血管钙化的影响

目的探讨雌激素对去势大鼠血管组织Notch1信号通路的调控作用及对血管钙化严重程度的影响。方法 45只接受卵巢去势手术的SD大鼠,随机分为对照组、血管钙化模型组、雌激素干预组,每组15只,血管钙化模型组和雌激素干预组采用肌内注射维生素D_3和尼古丁灌胃诱导建立血管钙化模型,雌激素干预组皮下注射17-β雌二醇40μg/kg进行干预,1次/d,连续8周;对照组不进行药物干预处理。8周后,对3组大鼠主动脉进行Von Kossa染色,采用实时定量PCR法检测3组大鼠主动脉Notch1和Jagged1mRNA相对表达量,采用比色法测定主动脉碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)活性及钙水平。结果血管钙化模型组主动脉Notch1、Jagged1mRNA相对表达量(0.896±0.010、0.822±0.011)、ALP活性[(189.60±22.74)u/(mg·pro)]及钙水平[(71.28±7.66)μmol/g]均高于雌激素干预组[0.671±0.009、0.646±0.010、(130.48±20.33)u/(mg·pro)、(53.39±6.78)μmol/g]和对照组[0.423±0.008、0.479±0.009、(58.40±16.18)u/(mg·pro)、(20.56±4.87)μmol/g](P0.05),雌激素干预组高于对照组(P0.05)。结论补充雌激素能抑制维生素D_3和尼古丁诱导的卵巢去势大鼠血管钙化,雌激素干预Notch1信号通路表达可能是影响血管钙化形成和进展的重要机制之一。     

肾上腺髓质素对大鼠高血压的影响

目的:观察皮下注射肾上腺髓质素(adrenomedullin,ADM)对大鼠高血压的影响。方法:一氧化氮合酶抑制剂左旋硝基精氨酸诱导大鼠高血压,大鼠皮下注射脂质体携带的ADM治疗后,测定血浆亚硝酸盐含量和离体胸主动脉组织一氧化氮合酶的活性。结果:大鼠皮下每天注射左旋硝基精氨酸连续4周,血压明显升高,并且显著抑制大鼠胸主动脉一氧化氮合酶的活性犤对照组为(1.70±0.13)nmol/(g·min),空白脂质体组为(1.10±0.34)nmol/(g·min),低剂量ADM组为(1.23±0.36)nmol/(g·min),高剂量ADM组为(1.50±0.32)nmol/(g·min),n=6,P<0.05犦和减少血浆中亚硝酸盐的含量犤对照组为(21.60±2.30)mmol/L,单纯脂质体组为(9.65±2.11)mmol/L,低剂量ADM组为(13.35±3.20)mmol/L,高剂量ADM组为(18.45±4.00)mmol/L,n=6,P<0.001犦。皮下注射ADM浓度依赖性地减轻了左旋硝基精氨酸导致的高血压的程度;提高大鼠胸主动脉一氧化氮合酶的活性和增加血浆中亚硝酸盐的含量(P<0.05)。结论:ADM通过一氧化氮合酶/一氧化氮途径降低血压。     

内皮素-1受体拮抗剂对高脂血症家兔血管内皮功能的影响

目的探讨内皮素-1受体拮抗剂对高脂血症家兔血管内皮功能的影响。方法 24只雄性新西兰大白兔随机分为对照组、模型组和BQ-123干预的内皮素-1拮抗剂组(拮抗剂组),每组8只。对照组饲喂普通饲料,模型组和拮抗剂组均饲喂高脂饲料,第6周时对照组和模型组兔静脉注射生理盐水4mL/d,连续5周,拮抗剂组静脉滴注选择性内皮素A受体拮抗剂BQ-123 4mL/d,30min滴完,连续5周。10周后检测3组血清总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇水平;采用免疫组织化学SP法检测兔主动脉组织内皮素-1和C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)表达水平,采用PCR法检测兔主动脉组织CRP mRNA表达情况。结果拮抗剂组血清总胆固醇[(4.12±0.92)mmol/L]、三酰甘油[(1.43±0.58)mmol/L]、低密度脂蛋白胆固醇[(1.99±0.86)mmol/L]水平均低于模型组[(6.36±1.23)、(2.14±0.70)、(2.79±0.87)mmol/L](P0.05),血清高密度脂蛋白胆固醇水平[(2.15±0.56)mmol/L]高于模型组[(1.02±0.42)mmol/L](P0.05);模型组和拮抗剂组动脉粥样硬化病变相对面积(32.06%、12.35%)明显高于对照组(3.78%)(P0.01),模型组高于拮抗剂组(P0.05);拮抗剂组内膜厚度[(226.00±4.25)μm]、中膜厚度[(142.00±1.86)μm]、内膜面积[(0.34±0.04)μm2]、中膜面积[(0.46±0.04)μm2]均较模型组[(325.00±5.68)μm、(185.00±2.07)μm、(0.52±0.04)μm2、(0.73±0.05)μm2]明显下降(P0.05),与对照组比较差异无统计学意义(P0.05);拮抗剂组主动脉组织内皮素-1(1.39±0.78)、CRP mRNA(3.42±1.23)水平较模型组(3.98±0.76、6.37±1.66)明显下降(P0.05);主动脉组织中内皮素-1与CRP mRNA表达水平呈正相关(r=0.346,P=0.024)。结论内皮素-1激活的内皮素A受体可导致家兔动脉粥样硬化斑块CRP表达上调,选择性内皮素A受体拮抗剂可预防家兔动脉粥样硬化进展。     

血糖波动对2型糖尿病合并肺癌患者化疗效果的影响

目的分析2型糖尿病合并肺癌患者血糖波动对化疗的影响。方法 80例2型糖尿病合并肺癌患者,根据日内平均血糖波动幅度(mean amplitude of plasma glucose excursion,MAGE)是否高于3.9mmol/L将患者分为正常波动组42例和高波动组38例。观察并比较2组肿瘤标志物、炎症因子水平及不良反应发生情况。结果高波动组MAGE[(5.75±1.28)mmol/L]、日间血糖平均绝对差[(1.45±0.64)mmol/L]、变异系数(1.68±0.73)、最大血糖波动幅度[(6.58±2.34)mmol/L]、空腹血糖[(7.26±1.52)mmol/L]和餐后2h血糖水平[(9.89±2.63)mmol/L]高于正常波动组[(3.79±1.03)mmol/L、(1.13±0.38)mmol/L、1.25±0.79、(4.11±1.52)mmol/L、(6.28±1.07)mmol/L、(7.68±1.65)mmol/L],差异均有统计学意义(P<0.05),高波动组患者癌胚抗原[(16.15±1.34)mg/L]、神经元特异性烯醇化酶[(18.92±4.32)mg/L]、细胞角蛋白19片段[(7.34±2.28)mg/L]、糖类抗原19-9[(77.26±6.67)u/mL]、糖类抗原153[(51.18±5.73)u/mL]、糖类抗原125[(85.19±7.16)u/mL]和鳞状上皮细胞癌抗原[(4.57±1.39)μg/L]、白细胞介素-6[(28.79±6.23)mg/L]、高敏C-反应蛋白[(23.46±3.42)mg/L]、肿瘤坏死因子-α[(56.57±7.56)ng/L]水平高于正常波动组[(12.62±2.32)mg/L、(16.39±3.63)mg/L、(5.27±1.47)mg/L、(55.41±5.21)u/mL、(43.25±5.54)u/mL、(62.23±6.43)u/mL、(2.46±0.75)μg/L、(17.22±3.51)mg/L、(11.64±3.25)mg/L、(39.75±5.64)ng/L](P<0.05),高波动组静脉炎(31.58%),消化道反应(31.58%),口腔溃疡(26.32%),肝、肾功能损害(44.74%)等化疗不良反应发生率高于正常波动组(7.14%、11.90%、4.76%、14.29%)(P<0.05)。结论 2型糖尿病合并肺癌患者高幅度的血糖波动不利于肿瘤标志物水平和炎症细胞因子水平的控制,且可增加化疗不良反应发生率。     

糖尿病早期大鼠坐骨神经电生理改变及胰岛素的影响

目的:观察糖尿病早期大鼠坐骨神经电生理改变及胰岛素对其的影响。方法:实验于2005-09在南通大学药理教研室完成。从18周龄健康雄性SD大鼠36只中随机数字表法取28只造模,8只作为正常对照组。给予大鼠一次性腹腔注射链脲菌素造成胰岛素依赖性糖尿病模型,正常对照组给予等体积的柠檬酸盐缓冲液。给药72h后造模大鼠尾静脉取血,邻甲苯胺法测定血糖浓度,非空腹血糖大于16.0mmol/L纳入糖尿病模型。将纳入糖尿病模型的大鼠随机分为糖尿病模型组和胰岛素治疗组。造模成功后的第2天,每天给予胰岛素治疗组大鼠皮下注射精蛋白锌胰岛素注射液(长效胰岛素,40U/mL),给药时间在下午5点左右,胰岛素起初剂量4U/只,次日上午测定其血糖值,控制大鼠非空腹血糖值在10mmol/L以下(不低于3.9mmol/L),调整胰岛素用量为4～6U。2周时停止给药,并再次测定大鼠的血糖和体质量。糖尿病模型组不作任何处理。糖尿病模型组与正常对照组与胰岛素治疗组同时间进行血糖和体质量的测定。麻醉各组大鼠分离、暴露坐骨神经,测定其感觉神经动作电位潜伏期、波幅及传导速度。结果数据行方差分析,两两比较使用Scheffe检验。结果:在28只造模SD大鼠给予链脲菌素后第72h,有15只大鼠血糖值为16.05～20.89mmol/L,超过16.0mmol/L,造模成功,纳入糖尿病模型。将造模成功的糖尿病模型大鼠分为糖尿病模型组8只,胰岛素治疗组7只;和正常对照组大鼠8只一起进入结果分析。①糖尿病模型组坐骨神经感觉神经动作电位的传导速度与波幅和正常对照组相比显著降低,差异有显著性意义[(40.34±1.68),(55.47±9.05)m/s,P<0.01]O[(510.73±22.10),(637.37±29.28)μV,P<0.01]O潜伏期延长[(1.54±0.13),(1.19±0.13)ms,P<0.01]。给予胰岛素治疗后能有效逆转这些变化,坐骨神经感觉神经动作电位传导速度增加至(48.57±1.86)m/s,波幅上升至(593.72±22.62)μV,潜伏期缩短至(1.31±0.06)ms,与糖尿病模型组比较差异有显著性意义。②造模后2周糖尿病模型组血糖值显著高于正常对照组,差异有显著性意义[(20.1±2.0),(5.1±0.6)mmol/L,P<0.01];给予胰岛素治疗后血糖值显著降低至(6.6±1.8)mmol/L,与糖尿病模型组比较差异有显著性意义(P<0.01)。结论:在糖尿病早期(2周)即存在感觉神经功能的损害,起始因素为高血糖,通过胰岛素控制血糖后,能有效防止神经病损。     

灯盏花素对糖尿病大鼠早期肾皮质一氧化氮和血管紧张素Ⅱ水平的影响

目的:以肾脏肥大指数、肾小球形态结构、一氧化氮和血管紧张素Ⅱ水平为指标,观察灯盏花素对糖尿病大鼠早期肾脏的保护作用。方法:实验于2006-03/06在遵义医学院珠海校区中心实验室完成。实验分组:雄性Wistar大鼠34只,腹腔单次注射链脲佐菌素65mg/kg制备糖尿病大鼠模型,将造模成功(血糖≥16.65mmol/L)30只大鼠随机分为糖尿病组和灯盏花素治疗组,每组10只;另设正常对照组10只。实验过程:灯盏花素治疗组给予20mg/(kg·d)腹腔注射灯盏花素注射液持续4周,糖尿病组及正常对照组给予同体积的生理盐水。实验评估:①4周后计算肾脏肥大指数(肾脏肥大指数=双侧肾质量/体质量׉)。②苏木精-伊红染色观察肾小球病理形态变化。③硝酸还原酶法测定血清及肾皮质组织一氧化氮水平。④放免法测血浆及肾皮质组织血管紧张素Ⅱ水平。结果:参加实验34只大鼠,有4只未达糖尿病成模标准,最终30只大鼠进入结果分析。①肾脏肥大指数:糖尿病模型组、灯盏花素治疗组显著高于正常对照组[(13.29±4.73)/1000,(11.07±2.19)/1000,(4.78±0.06)/1000,P<0.01],灯盏花素治疗组低于糖尿病模型组(P<0.05)。②肾小球病理形态:正常对照组大鼠肾小球血管袢薄而清晰,内皮细胞和系膜细胞数目正常;糖尿病大鼠肾小球血管壁可见玻璃样变性,基底膜增厚,系膜基质增生;灯盏花素治疗后肾小球血管壁未见明显变性,基底膜未见明显增厚,其病理变化明显改善。③血清及肾皮质组织一氧化氮水平:糖尿病模型组、灯盏花素治疗组显著高于正常对照组[血清一氧化氮水平:(31.36±4.21),(27.03±3.54),(25.21±3.39)μmol/L,P<0.05;肾皮质组织一氧化氮水平:(1.95±0.25),(1.27±0.32),(0.73±0.12)μmol/g,P<0.01]。灯盏花素治疗组低于糖尿病模型组(P<0.05,P<0.01)。④血浆和肾皮质组织血管紧张素Ⅱ水平:糖尿病模型组显著高于正常对照组[血浆血管紧张素Ⅱ水平:(693.98±297.22),(356.48±85.21)ng/L,P<0.05;肾皮质组织血管紧张素Ⅱ水平:(6964.56±2128.48),(3127.07±1519.98)pg/g,P<0.01]。灯盏花素治疗组低于糖尿病模型组(P<0.05)。结论:灯盏花素在降低糖尿病大鼠肾脏肥大和改善肾脏形态结构的同时还可降低外周血及肾皮质组织一氧化氮与血管紧张素Ⅱ水平,在一定程度上可改善糖尿病早期的肾损害。     

外源性一氧化氮对创伤愈合过程中一氧化氮合酶表达及瘢痕形成的影响

目的:应用组织化学、免疫组织化学及计算机辅助图像分析方法,观察外源性一氧化氮在创伤愈合过程不同时间,对一氧化氮合酶表达和胶原形成的影响,探讨其在促进创伤愈合和抑制病理性瘢痕形成中的机制。方法:实验于2004-09/2006-03在河北省人民医院整形烧伤外科及河北省人民医院临床医学研究中心完成。以硝普钠为一氧化氮供体,将60只大鼠随机分为对照组及硝普钠0.5,1,2,4mmol/L组,每组12只,通过建立大鼠创伤模型,并分别在创面局部应用50g/L葡萄糖溶液、0.5,1,2,4mmol/L硝普钠,观察及测量创伤后3,7,10,14d的肉芽组织生长情况、一氧化氮合酶的表达情况和肉芽组织中羟脯氨酸含量。结果:60只大鼠全部进入结果分析。①形态学观察:对照组于创伤后14d可完全愈合;硝普钠0.5mmoL/L组及1mmoL/L组肉芽组织生长良好,且愈合时间较对照组提前三四天;硝普钠2mmoL/L组及4mmoL/L组愈合情况不良,完全愈合时间延迟,皮肤张力较低,炎症反应明显。②一氧化氮合酶蛋白表达:大鼠皮肤创伤后角质形成细胞、汗腺、毛囊和骨骼肌细胞以及创伤后肉芽组织的炎症细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞均不同程度的表达一氧化氮合酶蛋白。对照组在第3天和第14天分别呈现一氧化氮合酶阳性颗粒表达高峰,而硝普钠各组仅在第7～10天出现表达一氧化氮合酶阳性高峰,呈先增加后减少的趋势。③羟脯氨酸含量:对照组从创伤后第3,7,10,14天羟脯氨酸含量进行性增加[依次为(1.637±0.127),(2.250±0.169),(2.420±0.201),(2.908±0.241)mg/g];硝普钠0.5mmol/L组在创伤后第3,7天羟脯氨酸含量低于对照组[(1.435±0.147),(1.766±0.211)mg/g,P<0.05或P<0.01],而在第10天和第14天羟脯氨酸含量均高于对照组[(3.128±0.240),(3.437±0.239)mg/g,P<0.01];硝普钠1mmol/L组和2mmol/L组在第10天和第14天的羟脯氨酸含量明显高于对照组[(1mmol/L组:(3.244±0.245)(3.582±0.282)mg/g,P<0.01;硝普钠2mmol/L组:(3.666±0.263),(4.301±0.268)mg/g,P<0.01);硝普钠4mmol/L组仅在创伤后第3天表现比对照组多[(1.912±0.139)mg/g,P<0.01),其余均与对照组水平相近。结论:局部应用外源性一氧化氮具有显著的促修复作用,主要体现在伤后第7～10天,小剂量的一氧化氮促进创面愈合的作用远远大于大剂量一氧化氮。     

血小板反应蛋白-1对多囊卵巢综合征大鼠血清内分泌腺来源血管内皮生长因子及卵巢组织形态学的影响

目的探讨血小板反应蛋白-1(thrombospondin-1, TSP-1)对来曲唑诱导的多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome, PCOS)大鼠血清性激素、内分泌腺来源血管内皮生长因子(endocrine gland-derived vascular endothelial growth factor, EG-VEGF)表达及卵巢组织形态学的影响。方法 50只雌性SD大鼠随机分为模型组30只和空白组20只,模型组将来曲唑1 mg/kg溶于质量分数1%羧甲基纤维素(carboxymethyl cellulose, CMC)溶液灌胃,2 mL/d,连续21 d,制备PCOS模型;空白组给予等体积质量分数1%CMC溶液灌胃,连续21 d。造模成功后,2组各处死10只大鼠。将模型组剩余20只大鼠随机分为PCOS组和治疗组各10只,空白组剩余10只大鼠为对照组,治疗组腹腔注射TSP-1溶液0.2 mL/d,PCOS组和对照组腹腔注射等体积生理盐水,均连续21 d。采用ELISA法检测血清睾酮、卵泡刺激素(follicle stimulating hormone, FSH)、黄体生成素(luteinizing hormone, LH)、TSP-1及EG-VEGF水平;采血后处死大鼠,取卵巢,称质量后行组织病理检查,采用免疫组织化学法检测卵巢组织TSP-1、EG-VEGF蛋白阳性表达率。实验过程中记录大鼠动情周期,计算药物处理前后大鼠体质量。结果空白组、对照组大鼠动情周期均正常,模型组应用来曲唑第13天动情周期消失,治疗组应用TSP-1第14天4只大鼠恢复规律的动情周期;PCOS组体质量增加值[(190.90±8.33)g]较治疗组[(165.00±10.36)g]、对照组[(170.30±9.30)g]大(P0.05),卵巢质量[(0.09±0.01)g]较治疗组[(0.07±0.01)g]、对照组[(0.07±0.01)g]大(P0.05),治疗组与对照组比较差异无统计学意义(P0.05);药物处理第22天,PCOS组睾酮水平[(92.01±15.46)nmol/L]高于对照组[(60.21±10.17)nmol/L]、治疗组[(62.26±9.68)nmol/L](P0.05),LH水平[(3.04±0.16)u/L]高于对照组[(2.50±0.20)u/L]、治疗组[(2.52±0.18)u/L](P0.05),TSP-1水平[(171.84±23.48)μg/L]低于对照组[(251.44±26.04)μg/L]、治疗组[(223.44±20.64)μg/L](P0.05);治疗组TSP-1水平低于对照组(P0.05),睾酮、LH水平与对照组比较差异无统计学意义(P0.05);3组FSH、EG-VEGF水平比较差异无统计学意义(P0.05);与PCOS组比较,治疗组大鼠卵泡和黄体数量略有增加,囊性扩张卵泡明显减少,颗粒细胞层增厚,排列紧密;3组TSP-1、EG-VEGF蛋白均呈阳性表达,PCOS组EG-VEGF蛋白强阳性表达率(80%)明显高于治疗组(0)和对照组(0)(P0.05),TSP-1蛋白强阳性表达率(50%)与治疗组(60%)、对照组(60%)比较差异无统计学意义(P0.05)。结论 TSP-1能改善PCOS大鼠血清性激素紊乱、卵巢排卵功能和卵巢组织形态,对卵巢组织EG-VEGF蛋白的表达有一定影响,其可能通过调节EG-VEGF发挥治疗PCOS的作用。     

谷氨酸转运体mRNA在糖尿病大鼠脑损伤中的表达

目的探讨谷氨酸转运体(EAAT)在糖尿病脑损伤时表达情况及作用机制。方法 Wistar大鼠28只,随机分成2组(每组14只):对照组(常规饲料喂养)、模型组(高糖高脂饲料喂养+STZ注射诱导胰岛素抵抗),均自由进食进水,12h光照周期。饲养1个月后,测定血糖。6个月后以RT-PCR检测大鼠脑皮质EAAT-1、EAAT-2、EAAT-3的mRNA表达情况。结果糖尿病模型组血糖[(20.016±1.984)mmol/L]明显高于正常值(P<0.01)及对照组[(3.82±0.123)mmol/L,P<0.01]。对照组胰腺组织中可见大量胰岛细胞,而糖尿病模型组胰腺组织中胰岛细胞显著减少。模型组EAAT-3mRNA表达与对照组相比明显增加(P<0.01)。结论 EAAT-3高表达可能是糖尿病脑细胞损伤的主要机制。     

调脂通络胶囊对动脉粥样硬化大耳白兔血脂及炎性因子水平的影响

目的探讨调脂通络胶囊对动脉粥样硬化大耳白兔总胆固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triacylglycerol,TG)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)、高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)、一氧化氮(nitric oxide,NO)、C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)水平的影响。方法日本大耳白兔36只,随机分为对照组6只和实验组30只。实验组饲喂高脂饲料制备动脉粥样硬化模型,对照组饲喂等体积普通饲料。模型制备成功后,实验组随机分为调脂通络高、中、低剂量组和血脂康组及模型组各6只,分别给予调脂通络胶囊浸膏4.92g/(kg·d)、2.46g/(kg·d)、1.23g/(kg·d),血脂康胶囊1mL/(kg·d)及等体积生理盐水灌胃,均2次/d,共30d。药物干预90d时处死白兔,光镜下观察主动脉壁病理变化;耳缘静脉采血,测定血清TC、TG、LDL、HDL、NO、CRP水平,并进行比较。结果对照组主动脉形态正常,动脉内膜光滑;模型组动脉粥样硬化斑块几乎布满血管腔,内皮细胞脱落,平滑肌细胞增生、迁移均较重,出现部分钙化、动脉瘤及大块粥样瘤;血脂康组和调脂通络低、中、高剂量组动脉粥样硬化斑块呈间断分布,内皮细胞脱落,平滑肌细胞增生、迁移均较模型组轻;TC、TG、LDL、CRP水平在调脂通络低剂量组[(14.50±1.36)mmol/L、(5.52±0.16)mmol/L、(13.73±0.51)mmol/L、(14.93±0.56)mg/L],中剂量组[(15.75±0.81)mmol/L、(5.58±0.12)mmol/L、(14.12±0.58)mmol/L、(14.81±0.69)mg/L],高剂量组[(15.73±1.93)mmol/L、(5.53±0.37)mmol/L、(14.03±0.55)mmol/L、(14.53±0.98)mg/L]和血脂康组[(15.21±0.85)mmol/L、(5.43±0.08)mmol/L、(13.56±0.83)mmol/L、(14.71±0.84)mg/L]均低于模型组[(18.59±1.34)mmol/L、(8.78±1.01)mmol/L、(21.35±2.52)mmol/L、(17.13±1.29)mg/L],且高于对照组[(1.23±0.13)mmol/L、(1.30±0.05)mmol/L、(1.28±0.03)mmol/L、(3.21±0.09)mg/L](P0.05),调脂通络低、中、高剂量组和血脂康组TC、TG、LDL、CRP水平比较差异无统计学意义(P0.05);调脂通络低、中、高剂量组和血脂康组NO水平[(86.25±1.90)、(87.23±3.81)、(87.84±2.61)、(87.09±2.84)mmol/L]均低于对照组[(105.40±4.63)mmol/L](P0.05),高于模型组[(83.12±2.58)mmol/L](P0.05);调脂通络低、中、高剂量组和血脂康组NO水平比较差异无统计学意义(P0.05);6组HDL水平比较差异无统计学意义(P0.05)。结论动脉粥样硬化大耳白兔应用调脂通络胶囊可能通过促进NO表达,抑制TC、TG、LDL、CRP表达来发挥抗动脉粥样硬化作用。     

代谢综合征大鼠左心室外膜收缩功能不全与心外膜脂肪小窝蛋白-1表达降低平行出现

目的:探讨代谢综合征大鼠心脏收缩功能及心外膜脂肪小窝蛋白-1表达的改变。方法:16只6周龄雄性SD大鼠随机分为代谢综合征模型组及对照组。模型大鼠给予小剂量链脲佐菌素、N-硝基-L-精氨酸甲酯盐酸盐联合高脂、高盐、高糖饲养6周。实验开始及结束时测定大鼠的体重、空腹血糖、胰岛素、血脂、口服糖耐量及血压水平,超声检测大鼠左心室射血分数及应变指数。实验结束时分离心外膜脂肪检测小窝蛋白-1的表达。结果:6周后,模型大鼠体重[(462±31.6)g比(406±49.4)g]、空腹胰岛素[(5.47±2.26)ng/mL比(2.69±0.61)ng/mL]、口服糖耐量曲线下面积[(1544.6±502.2)mg/(L.min)比(911.0±69.8)mg/(L.min)]、甘油三酯[(0.66±0.44)mmol/L比(0.28±0.07)mmol/L]、总胆固醇[(1.71±0.43)mmol/L比(1.01±0.29)mmol/L]及低密度脂蛋白水平[(0.66±0.25)mmol/L比(0.22±0.08)mmol/L]、收缩压[(163.0±26.0)mmHg比(117.5±11.5)mmHg]及舒张压[(121.8±15.5)mmHg比(90.5±16.6)mmHg]均高于对照组(P<0.05),而空腹血糖及高密度脂蛋白水平与对照组比较无明显差异(P>0.05)。左心室外膜收缩期周向应变及应变率均低于对照组[(-7.20±1.46)%比(-9.87±1.93)%],[(-1.56±0.35)1/s比(-2.19±0.49)1/s;均P<0.05]。模型大鼠心外膜脂肪小窝蛋白-1的表达明显低于对照组。结论:代谢综合征大鼠左心室外膜收缩功能不全与心外膜脂肪小窝蛋白-1表达降低平行出现。     

外源性一氧化氮供体硝普钠对兔Oddi括约肌细胞凋亡的影响

目的研究外源性一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP)对兔Oddi括约肌(SO)细胞凋亡的影响。方法新西兰大耳白兔24只,分离培养Oddi括约肌细胞,用TUNEL染色、MTT法及流式细胞术测定SNP对括约肌细胞凋亡的影响。结果 (1)TUNEL染色SNP处理后的SO细胞凋亡数目较对照组显著增加。(2)MTT法测定0.1mmol/L、0.5mmol/L、1.0mmol/L、2.0mmol/LSNP处理的SO细胞生长抑制率[(27.05±5.03)%、(51.75±4.45)%、(69.59±5.27)%、(94.93±4.25)%]显著高于对照组(P<0.05)。(3)流式细胞术测定加入SNP组的SO细胞凋亡率[(50.95±2.36)%、(61.38±1.21)%、(65.32±1.19)%、(73.40±3.06)%]显著高于对照组[(3.25±0.46)%,P<0.05]。结论外源性NO供体SNP可诱导SO细胞凋亡,其可能是SNP降低SO压力的机制之一。     

N-乙酰半胱氨酸对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注后肝肾功能的影响

目的探讨抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine, NAC)对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注(ischemia reperfusion, IR)损伤后肝、肾功能的影响。方法 36只雄性SD大鼠随机分为对照假手术组、对照IR组、糖尿病假手术组、糖尿病IR组、糖尿病NAC治疗后假手术组和糖尿病NAC治疗后IR组,每组各6只。糖尿病假手术组、糖尿病IR组、糖尿病NAC治疗后假手术组和糖尿病NAC治疗后IR组大鼠经腹腔注射链脲佐菌素60 mg/kg制备1型糖尿病模型。糖尿病模型制备成功1周后,糖尿病NAC治疗后假手术组和糖尿病NAC治疗后IR组大鼠灌胃给予NAC 1.5 g/(kg·d),其余各组大鼠给予等体积生理盐水,持续4周,对照IR组、糖尿病IR组和糖尿病NAC治疗后IR组通过结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注120 min制备IR模型。采用生物化学法检测大鼠血清谷丙转氨酶(glutamate pyruvic transaminase, GPT)、谷草转氨酶(glutamic oxaloacetic transaminase, GOT)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)、肌酸激酶(creatine kinase, CK)、肌酐(serum creatinine, SCr)水平,采用WST-1法检测大鼠血清超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活性,采用TBA法检测大鼠血清过氧化物丙二醛(peroxide malondialdehyde, MDA)水平。结果糖尿病4组大鼠血清GPT、GOT、LDH、SCr及MDA水平均高于对照IR组和对照假手术组(P0.05),血清SOD活性低于对照假手术组(P0.05)。糖尿病NAC治疗后IR组大鼠血清GPT、GOT、LDH、SCr水平低于糖尿病IR组(P0.05),血清MDA水平[(19.38±0.56)μmol/L]低于糖尿病IR组[(27.75±1.30)μmol/L](P0.05),SOD活性[(128.85±7.28)u/mL]高于糖尿病IR组[(105.72±10.13)u/mL](P0.05)。糖尿病NAC治疗后假手术组大鼠血清GPT、GOT、LDH、SCr水平低于糖尿病假手术组(P0.05),血清MDA水平[(13.38±0.62)μmol/L]低于糖尿病假手术组[(19.90±1.30)μmol/L](P0.05),SOD活性[(177.33±6.20)u/mL]高于糖尿病假手术组[(153.24±8.89)u/mL](P0.05)。糖尿病NAC治疗后IR组大鼠血清GPT、GOT、LDH、SCr和MDA水平高于糖尿病NAC治疗后假手术组(P0.05),SOD活性低于糖尿病NAC治疗后假手术组(P0.05)。糖尿病IR组大鼠血清GPT、GOT、LDH、SCr和MDA水平高于糖尿病假手术组(P0.05),SOD活性低于糖尿病假手术组(P0.05)。结论 NAC可减轻糖尿病大鼠合并IR损伤模型的氧化应激反应,从而降低对肝、肾功能的损伤。     

活血化瘀药对大鼠脑缺血再灌注血管源性脑水肿的影响

目的:探讨预防性应用活血化瘀药对大鼠脑缺血—再灌注所致血管源性脑水肿的作用。方法:大鼠138只单纯随机分为:对照组;假手术组;低剂量短时干预组;高剂量短时干预组;低剂量长时干预组和高剂量长时干预组,采用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞模型。测定大鼠神经功能缺损程度,检测脑水含量、血清及脑匀浆一氧化氮含量及光镜、电镜的病理改变。结果:药物干预组鼠神经功能缺损程度较对照组轻(P<0.01),药物干预组血清一氧化氮含量:假手术组(106.5±7.5)μmol/L,低剂量短时干预组(94.6±7.9)μmol/L,高剂量短时干预组(104.7±6.1)μmol/L,低剂量长时干预组(104.6±5.6)μmol/L,高剂量长时干预组(112.6±9.3)μmol/L较对照组(85.7±6.1)μmol/L高,差异有显著性意义(t=-7.673～-2.832,P<0.05),脑匀浆一氧化氮含量:假手术组(46.9±7.8)μmol/L,低剂量短时干预组(85.9±5.2)μmol/L,高剂量短时干预组(86.7±5.3)μmol/L,低剂量长时干预组(81.6±3.9)μmol/L,高剂量长时干预组(65.5±7.2)μmol/L较对照组(99.8±2.6)μmol/L低(t=7.011～20.361,P<0.01),病理损害较对照组轻。结论:活血化瘀药能减少缺血再灌注大鼠脑的一氧化氮产生,降低血管源性脑水肿的程度,减轻神经细胞损伤,具有抗缺血再灌注损伤作用。     

经迷走神经复合体注射胰高血糖素样肽-1对糖尿病大鼠胃排空的影响

[目的]研究经迷走神经复合体(DVC)注射胰高血糖素样肽-1(GLP-1)对糖尿病大鼠胃排空的影响,并探讨相关作用机制.[方法]30只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、糖尿病组及糖尿病GLP-1注药组.腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病大鼠模型,DVC区埋置套管.糖尿病成模2周后,GLP-1注药组经套管注入GLP-1,对照组注入等量生理盐水.检测各组大鼠体质量、血糖、胃排空率、血浆GLP-1浓度及胃黏膜GLP-1受体(GLP-1R)mRNA的表达量.[结果]糖尿病大鼠体质量较正常组显著降低(P＜0.05),血糖浓度[(28.0±1.8)mmol/L]较正常组[(5.7±0.5)mmol/L]明显升高(P＜0.05),胃排空率[(72±11)％]较对照组[(35±8)％％]明显升高(P＜0.05),血浆GLP-1浓度及胃黏膜GLP-1R较对照组无明显变化.GLP-1注药组大鼠的胃排空率[(39±12)％]、血糖浓度[(14.6±1.3)mmol/L]较糖尿病组明显降低(P均＜0.05),血浆GLP-1浓度[(15.35±2.21)pmol/L]及胃窦GLP-1R mRNA/β-肌动蛋白(β-actin)(1.33±0.22)较糖尿病组[(10.78±2.06)pmol/L、1.10±0.14,P均＜0.05)显著升高,胃排空率与血浆GLP-1浓度及胃窦GLP-1R mRNA表达量呈负相关(r=-0.786、-0.731,P均＜0.05),与胃底GLP-1R mRNA表达量无相关性.[结论]DVC区注射GLP-1可减慢糖尿病早期加速的胃排空率,作用机制可能是促进血浆GLP-1的分泌及胃窦GLP-1R的表达.