实验组织切片荧光染色后再行苏木素-伊红染色的方法及体会

目的:初步探索荧光染色后的组织切片再行苏木素-伊红(HE)染色的技术方法和操作程序. 方法:分别用5 μm石蜡、冰冻两种组织切片按常规间接免疫荧光加荧光化学方法进行荧光染色,然后用pH 4.7～5.0 50%的乙醇洗脱封片的缓冲甘油,再进行常规HE染色.分别用荧光显微镜与光学显微镜观察、拍照,进行HE染色效果比较.结果:荧光染色后的组织切片标本再行HE染色,其染色效果和组织细胞结构的清晰度与组织切片单独进行HE染色相比无明显差异.结论:本实验操作方法简单;结果可靠;增加了单张切片的信息含量;节约实验成本;更为组织细胞形态学检测方法的相互转化与衔接提供了技术和思维平台.     

基于临床思考中药的转化医学研究

临床疗效的高低,除与辨证立法、组方选药密切相关外,中药剂型的选择、汤剂的制备方法、量-时-效关系也是影响疗效的主要因素。从临床实践出发,思考不同中药剂型的疗效、制备方法对汤剂质量的影响及中药量-时-效关系,以期能加强、加快中药的转化医学研究,使得今后中药研究更加贴近临床,为临床用药提供指导。     

C60-IONP-GE11纳米粒对乳腺癌细胞的体外成像及光动力学研究

【摘要】目的：构建多功能MRI 对比剂C60-IONP-GE11,研究其体外细胞磁共振靶向成像效果及光动力学治疗效果。方法：免疫荧光染色验证EGFR高表达肿瘤细胞株;体外磁共振成像观察靶向组对比剂C60-IONP-GE11和非靶向组对比剂C60-IONP-RP的成像效果,普鲁氏蓝染色观察对比剂分布情况;CCK8法检测C60-IONP-GE11的细胞毒性;光动力学实验设置单纯激光组、C60-IONP-GE11无激光组、非靶向对比剂+激光组和实验组靶向对比剂C60-IONP-GE11+激光组4个处理组,相应处理后CCK8测其细胞存活率,活性氧检测实验观察不同组ROS产生水平,ImageJ半定量分析ROS荧光水平。结果：免疫荧光实验结果证实MD-MBA-231细胞膜上大量表达EGFR;C60-IONP-GE11体外MRI靶向实验可见T2WI呈负性强化,且T2WI信号随着靶向对比剂浓度增加而降低,线性回归方程为Y=145.898-30.269*X,R2=0.862;普鲁士蓝染色发现C60-IONP-GE11实验组可使MD-MBA-231细胞膜区明显蓝染,而非靶向对照组不能;体外毒性实验发现C60-IONP-GE11无明显细胞毒性;C60-IONP-GE11体外光动力学杀伤乳腺癌细胞,细胞存活率仅为（22.79±4.84）%,并可见细胞内大量活性氧生成,活性氧水平随C60-IONP-GE11浓度增加而增多。结论：C60-IONP-GE11多功能MR对比剂具有体外靶向乳腺癌细胞MR成像功能,几乎无毒,外加激光可靶向杀伤肿瘤细胞,同时具有MRI成像及PDT治疗作用。     

昆明山海棠胶囊遗传毒性及生殖毒性的研究

目的　探讨昆明山海棠胶囊的遗传毒性及生殖系统毒性。方法　根据《中药新药研究指南》,进行该制剂的特殊毒理实验研究。结果　昆明山海棠胶囊无移码突变和碱基置换效应;剂量低于2 5 0g·kg-1时,小鼠骨髓细胞姊妹染色单体交换频率(SCE)正常,高于此剂量,则可增加SCE频率,且使嗜多染红细胞微核率增加,并呈剂量依赖性;显性致死试验阳性;雌鼠均不能受孕;精子畸形率显著增高,随剂量增加而精子畸形率增高;对孕鼠重量、活胎重量及平均胎仔数等各项指标均无影响。结论　昆明山海棠胶囊具有低、中度的遗传毒性和一般生殖毒性,而无胚胎毒性。     

G-2407-3鼻腔喷雾剂及其辅料对鼻黏膜纤毛运动的影响

目的考察G-2407-3鼻腔喷雾剂及其辅料的鼻黏膜毒性作用。方法采用离体和在体蟾蜍上腭模型法,光学显微镜下观察纤毛持续运动时间,考察辅料和G-2407-3的纤毛毒性作用。结果离体法考察辅料A、B、三氯叔丁醇、羟苯乙酯对纤毛运动有影响,但是影响程度不同;通过在体法考察G-2407-3鼻腔喷雾剂对纤毛运动的影响,结果显示影响较少,离体法考察辅料B、羟苯乙酯对纤毛有一定的毒性,而辅料A、三氯叔丁醇毒性较小,而且均可逆。不同浓度的G-2407-3对纤毛有一定的毒性,该实验剂量下这种影响是可逆的。pH值在4~8范围内对纤毛运动影响较小,其中pH值为6.0时对纤毛影响最小;在体法考察G-2407-3与上述结果基本一致。结论G-2407-3鼻腔喷雾剂具有可行性。     

Tritonx—100在弹力纤维染色中的应用及意义

弹力纤维染色在病理诊断中应用广泛 ,且有多种染色方法。有些经典的染色方法染色时间较长 ,操作步骤较复杂 ,分化不易掌握 ,造成染色效果不佳。在实际工作中我们根据弹力纤维组织结构特点及染色原理 ,经过反复实验 ,通过加入Ｔｒｉｔｏｎｘ - 10 0液处理切片 ,对常规弹力纤维染色方法加以改良 ,大大缩短了染色时间 ,结构显示清晰 ,效果满意。1　材料与方法1.1　标本选择 :尸检人正常主动脉组织存档蜡块 10例 ,经中性神福尔马林固定 ,常规石蜡包埋切片 ,厚度约为 4μｍ ,方法分为 :改良维多利亚蓝加Ｔｒｉｔｏｍｘ- 10 0液染色法为实验组 ,常…     

急性放射病防治药物—“500”

“500”是预防和治疗核辐射损伤的药物。经药物合成、剂型、药效、药理毒性、药物代谢及人体试用等研究,证明本药能降低辐射反应的程度,减少染色体的畸变率,对动物与人体辐射损伤具有良好的防治作用,与其他辐射防     

重组人干扰素α-2a口含片剂的豚鼠毒性试验

目的评价重组人干扰素α-2a(rIFNα-2a)口含片剂对豚鼠口腔黏膜及内脏器官的毒性作用。方法设试验组、赋形剂组及空白对照组,每组用6只豚鼠,试验组口含rIFNα-2a片剂(300 IU/片),1片/d,含5~7min,连续含服6 d。赋形剂组口含乳糖颗粒片剂(0.15 g/片),方法同上。空白对照组未含任何物质。临床观察6 d后全部活杀。剖检口腔黏膜、咽部黏膜及内脏等器官,10%甲醇液固定,常规病理制片,HE染色,光镜观察。结果试验组与赋形剂组和空白对照组之间的组织病理学所见相似,均未见明显毒性病理损伤。结论rIFNα-2a口含片剂对豚鼠口腔黏膜及内脏器官均未见明显毒性作用,证实rIFNα-2a口含片剂安全可靠。     

中性粒细胞碱性磷酸酶染色实验条件探讨

目的探讨中性粒细胞碱性磷酸酶染色的实验条件。方法用40％、60％、80％的丙酮-枸缘酸固定液对中性粒细胞碱性磷酸酶染色固定条件进行测定。同时用2-氨基-2-甲基-1．3-丙二醇（pH9．4—9．6）缓冲液、巴比妥（pH9．2）缓冲液、Tris（pH9．2）缓冲液配制的基质液分别在10、15、20分钟的染色条件进行测定。结果是选择60％的丙酮-枸缘酸固定30秒染色结果最好。三种不同的缓冲液和三个不同的孵育时间的染色结果经多因素方差分析,P〈0．05,结果有统计学意义。结论最佳染色条件为60％的丙酮-枸缘酸固定30秒,用Tris（pH9．2）缓冲液配制的基质液,孵育时间为15分钟。本方法帮助鉴别慢性粒细胞性白血病和类白血病有较大的实用价值。     

脑恶性胶质瘤的瘤内化

脑胶质瘤是中枢神经系统中最常见的肿瘤，也是神经外科的一个治疗难题。常规手术加放疗或化疗等措施虽然有效，但结果不能令人满意。以生物降解聚合体做载体的化疗药缓释剂型瘤内应用，具有选择性高、神经毒性低的优点，为胶质瘤的治疗开辟了新途径。     

基准剂量法在长期暴露毒性评价中的研究进展

风险评估是为了评价特定危害因素下的人群暴露水平。传统毒性分析方法常采用未观察到有害作用剂量（ NOAEL）对毒性结果进行定量,除以不确定系数,以外推得到人群的安全摄入水平（ ADI）和参考剂量（ RfD）。多年实践证明,NOAEL法过多依赖实验设计,在安全性评价应用中存在诸多局限性。基准剂量（ BMD）法是一种新的确定RfD的方法,具有诸多优点,能更科学地进行风险评估。该文综述了BMD法原理及分析软件、与NOAEL相比的优点、在长期暴露毒性实验中应用及方法完善等的研究进展,为后期在长期暴露毒性实验及其他化合物风险评估中的应用提供相关参考。     

小鼠下颌下腺细胞培养及其生物学特性研究

目的：建立和完善小鼠下颌下腺细胞培养方法,并进行生物学特性研究,为涎腺疾病治疗奠定理论基础,并为组织工程涎腺再生提供技术支持。方法无菌环境下切取小鼠下颌下腺,胶原酶消化,接种于含有胎牛血清、表皮生长因子、胰岛素、氢化可的松及转铁蛋白的低糖 DMEM 培养基中培养,倒置相差显微镜及 HE 染色进行形态学观察,透射电镜观察特异性酶原颗粒,生长曲线评估细胞生长特性,特异性α-淀粉酶免疫荧光鉴定细胞来源。结果下颌下腺原代细胞为圆形或多边形,呈铺路石样排列,其生长缓慢,12 d 左右汇合至80％。传代细胞与原代形态相同。HE 染色显示胞核胞浆对比明显。生长曲线大致呈“S”型,与其他细胞增殖特点相似。特异性α-淀粉酶免疫荧光染色阳性,表明细胞为具有功能的涎腺细胞。结论成功地建立了小鼠下颌下腺细胞原代及传代培养,将为涎腺疾病的治疗和涎腺再生提供实验基础。     

低强度超声理疗防治犬下颌骨放射性骨坏死

目的 探讨低强度超声对犬下颌骨骨组织放射线损伤的修复作用,为临床防治颌骨放射性坏死提供新思路. 方法 建立下颌骨放射线损伤的动物模型,并用低强度超声对其进行治疗,通过微血管密度检测、Micro - CT、丽春红三色染色等观察低强度超声治疗组(实验Ⅱ组)与未用低强度超声治疗组(实验Ⅰ组),并与对照组进行比较. 结果 成功建立放射线损伤的动物模型.实验Ⅱ组微血管密度大于实验Ⅰ组.实验Ⅱ组骨小梁的骨体积分数、骨小梁厚度、骨表面积和骨体积的比值和骨小梁数量大于实验Ⅰ组(P＜0.05).丽春红三色染色可见实验Ⅰ组骨细胞大部分消失,松质骨小梁萎缩;实验Ⅱ组见大量骨质形成,形成越来越多的骨小梁,骨小梁边沿可见大量成骨细胞. 结论 低强度超声对放射线照射后的骨组织具有较好的修复作用.     

复方柴胡袋泡剂的药效学和毒性研究

复方柴胡袋泡剂在临床上主要用于上呼吸道感染性高热症。本试验对其进行了主要药效学和毒性研究。结果表明,对家兔致热模型具有显著清热作用;其体外抑菌实验对金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌均显示出抑制作用,最小抑菌浓度分别为0.0625g·ml~(-1)和0.125g·ml~(-1);其对小鼠腹腔毛细管通透性增高、蛋清诱发大鼠足跖肿胀及巴豆油诱发小鼠耳廓肿胀均有显著的抑制作用:且急性毒性和长期毒性实验显示该药对血液系统、各脏器均无异常影响。提示本药具有明确的解热、抑菌、抗炎作用,且在临床用量范围内安全可靠。     

β-淀粉样蛋白诱导的大鼠神经元损伤及神经生长因子的影响

实验测定β-淀粉样蛋白(β-AP)刺激新生大鼠培养神经元上清液中,LDH活性及神经元MTT值,初步研究了β-AP诱导的神经元毒性。结果发现,β-AP诱导的神经元培养上清液LDH活性增高与剂量呈正相关,并呈时间依赖性,说明β-AP具有特异的神经元毒性。实验过程中,对培养神经元结构的形态学观察也与测定结果符合。提示,β-AP在早老性痴呆的发生发展过程中具有重要作用。NGF对β-AP诱导神经元损伤的作用与剂量密切相关,在较低浓度(50～200U·ml~(-1))下,可有效地抑制LDH的活性增高和MTT值降低,具有保护作用;在较高浓度下(>200U·ml~(-1)),却出现与β-AP协同的神经毒性,加重损伤程度。     

新型螯合剂H-73-10的毒性实验

小鼠腹腔注射新型螯合剂H-73-10的LD_{50(5)为7.05克/公斤。以1/4LD50(5)的剂量给同种小鼠腹腔注射, 每天1次, 连续7天, 停药24小时后, 测得LDs㈣, 为7.09克/公斤, 表明无蓄积毒性。大鼠腹腔注射LD50(5)为3.6克/公斤比小鼠低。大鼠、狗和猴的亚急性毒性实验结果表明。药物局部刺激反应与浓度有关。大剂量给药, 胃肠道有一定反应。对外周血、肝、肾功能、血钙、血磷含量影响不大。病理学检查在肾脏近曲管上皮细胞胞浆内见有可逆性褐色颗粒沉着, 并伴有空泡晕。实验结果表明H-73-10的毒性比较低}     

积雪草总苷元抗抑郁作用机制的初步研究

目的探讨积雪草总苷元的抗抑郁作用机制。方法采用育亨宾毒性增强实验、阿朴吗啡致刻板运动实验、5-羟色胺酸诱导甩头实验、单胺氧化酶抑制实验等多种动物模型探讨积雪草总苷元抗抑郁作用的可能机制。结果积雪草总苷元不协同育亨宾和阿朴吗啡对小鼠的作用,但显著增加5-羟色氨酸致小鼠甩头作用和盐酸色胺致癫痫样作用。结论积雪草总苷元抗抑郁作用可能与其增加5-羟色胺能神经系统、抑制单胺氧化酶（MAO）有关。     

推进剂中纳米材料的毒理学研究进展

推进剂中的纳米材料主要是指利用纳米技术制造的具有纳米尺寸用于提高推进剂推进性能的材料,包括单一金属粉、复合金属粉、氧化物及稀土氧化物、碳纳米纤维与碳纳米管等,主要作为高能添加剂、燃烧催化剂、储能材料等。本文对推进剂中纳米材料的一般毒性、毒性靶器官、剂量-效应关系、国外航天领域对推进剂中纳米材料毒性的关注等方面进行了综述,对研究趋势和应对策略进行了展望,为更好地将纳米材料应用于推进剂领域及做好人员防护、环境治理提供参考。     

免疫抑制剂对人胰岛细胞的毒性作用

目的 探讨临床常用免疫抑制剂对人胰岛细胞的直接毒性作用.方法 应用体外分离纯化后培养的人胰岛细胞,以刺激系数和丫啶橙/碘丙啶染色为效应指标,检验低、中、高不同浓度免疫抑制剂对人胰岛细胞的直接毒性作用.结果 体外培养3天后,低浓度免疫抑制剂未表现出胰岛毒性作用;中浓度免疫抑制剂对胰岛的毒性不同,以他克莫司为重;高浓度免疫抑制剂有较强的胰岛毒性.结论 免疫抑制剂对人胰岛细胞直接毒性作用与浓度相关,选择低胰岛毒性免疫抑制方案有助于提高胰岛移植成功率.     

辛伐他汀促进兔肩袖损伤修复术后腱-骨愈合的实验研究

目的:探讨辛伐他汀/甲基纤维素凝胶对兔肩袖损伤修复术后腱-骨愈合的影响。方法:将36只成年雄性新西兰大白兔随机分为实验组、实验对照组、空白对照组,每组各12只。建立兔肩袖损伤修复模型后,实验组在肱骨大结节骨槽上注射辛伐他汀/甲基纤维素凝胶并将冈上肌缝合回足印区;实验对照组仅注射甲基纤维素凝胶并缝合回足印区;空白对照组不给予任何干预措施缝合回足印区。术后连续3天肌注庆大霉素(3mg/kg),无须制动固定。所有兔子在术后2、4、8周处死,取冈上肌与近端肱骨的交界区行甲苯胺蓝染色、血管内皮生长因子(VEGF)免疫组化染色、Masson染色及生物力学检测。观察兔冈上肌腱-骨愈合情况。结果:(1)生物力学结果显示:三组术后腱-骨界面的最大载荷及刚度随着时间点的延长而不断增强,差异有统计学意义(P<0.05);术后2周,实验组腱-骨界面的最大载荷及刚度与实验对照组及空白对照组比较无差异(P>0.05);术后4周及8周,实验组腱-骨界面的最大载荷及刚度显著高于实验对照组及空白对照组(P<0.05)。(2)甲苯胺蓝染色结果显示:术后2周,实验组腱-骨界面的成纤维细胞较对照组多;4周及8周见较多新生软骨细胞及骨细胞且腱-骨结合较对照组致密。(3)免疫组化结果显示:术后2周,实验组VEGF阳性细胞表达明显高于实验对照组及空白对照组(P<0.05);术后4周及8周,三组腱-骨界面的VEGF表达趋于下降。(4)Masson染色结果显示:术后4周,实验组腱-骨界面胶原纤维的走形及生成情况均优于其余两组。结论:局部应用辛伐他汀/甲基纤维素凝胶能够促进兔肩袖损伤术后腱-骨愈合,增强腱骨界面的生物力学强度。