血红素氧化酶-1介导脂联素在脓毒症肺损伤中的保护作用

目的 探讨血红素氧化酶-1(heme oxygenase,HO-1)介导脂联素(adiponectin,APN)在脓毒症肺损伤中的保护作用.方法 80只雄性Wistar大鼠采用随机数字表法分为4组(每组20只):对照组(C组)、脓毒症模型组(LPS组)、脂联素预处理组(APN组)和HO-1抑制剂锌原卟啉IX(zinc protoporphyrin IX,ZnPP IX)干预组(Zn组).各组分别于腹腔注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS) (20 mg/kg)或0.9％氯化钠溶液后6h,采用酶联免疫吸附法检测血清中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)和白介素(interlukin-6,IL-6)的含量.采用分光光度法测定一氧化氮(nitric oxide,NO)浓度、肺组织丙二醛(malonaldehyde,MDA)和髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性变化.采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)法检测肺组织HO-1、诱导型一氧化氮合成酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)mRNA的表达水平.观察5d内大鼠生存情况,并绘制生存曲线. 结果 与C组比较,LPS组、APN组和Zn组血清TNF-α [(321.3±11.2)、(132.5±10.2)、(311.7±12.4)vs (52.1±1.4)] ng/L、IL-6[(2 229.26±210.25)、(1 134.14±11.24)、(2 028.27±167.04)vs(55.38±0.23)] ng/L、NO[(103±10)、(79±8)、(97±9)vs(48±3)] μmol/L和肺组织匀浆MDA[(16.209±0.151) 、(5.943±0.310)、(13.238±0.326)vs(3.081 ±0.017)] μmol/g、MPO[(12.42±0.46)、(6.77±0.14)、(10.45±0.21)vs(2.74±0.06)] U/g水平显著升高(P＜0.05),生存率显著下降(20％ vs 100％;70％ vs 100％;30％ vs 100％,P＜0.05);与LPS组比较,APN组血清TNF-α [(132.5±10.2)vs (321.3±11.2)] ng/L、IL-6 [(1 134.14±107.13)vs(2229.26±210.25)] ng/L、NO[(79±8)vs (103±10)] μmol/L和肺组织匀浆MDA[(5.943±0.310)vs (16.209±0.151)] μmol/g、MPO [(6.77±0.14)vs (12.42±0.46)] U/g水平显著降低(P＜0.05),肺组织HO-1 mRNA[(8.73±0.24)vs(1.54±0.03)]显著升高(P＜0.05),iNOS mRNA[(1.42±0.15)vs(2.01±0.10)]显著下降(P＜0.05),生存率显著增高(70％ vs 20％,P＜0.05);与APN组比较,Zn组血清TNF-α[(311.7±12.4)vs(132.5±10.2)] ng/L、IL-6[(2 028.27±167.04)vs(1 134.14±107.13)]ng/L、NO[(97±9)vs(79±8)] μmol/L和肺组织匀浆MDA[(13.238±0.326)vs(5.943±0.310)] μmol/g、MPO[(10.45±0.21)vs(6.77±0.14)] U/g水平显著升高(P＜0.05),肺组织HO-1 mRNA[(2.66±0.14)vs (8.73±0.24)]显著下降(P＜0.05),iNOS mRNA[(2.06±0.23)vs(1.42±0.15)]显著升高(P＜0.05),生存率显著下降(30％ vs 70％,P＜0.05). 结论 HO-1可能介导了APN在脓毒症性肺损伤中的保护作用.     

线粒体通透性转换孔与心肌细胞缺氧/复氧过程中炎症反应关系的实验研究

目的 探讨线粒体通透性转换孔(mitochondrial permeability transition pore,mPTP)功能状态与心肌细胞缺氧/复氧损伤过程中炎症反应的关系.方法 心肌细胞培养72 h后,采用随机数字表法将其随机分为4组:空白对照组(Sham 组)、缺氧/复氧损伤对照组(AR组)、mPTP开放抑制剂环孢素A(ciclosporin A,CSA)后处理组(CSA组)、mPTP开放剂苍术苷(atractyloside,ATR)后处理组(ATR组).实验结束后检测各组心肌细胞乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)漏出率、心肌细胞凋亡、线粒体膜电位的变化和心肌细胞核转录因子-κB p65(nuclear factor-κB p65,NF-κB p65)与磷酸化核转录因子-κBp65 Ser536(p-NF-κB p65 Ser536)蛋白的表达量,并检测心肌细胞培养上清液白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)与肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的浓度.结果 与AR组比较,CSA组LDH漏出率显著降低[(27.2±2.6)％,(19.0±2.3)％](P＜0.01),早期凋亡细胞百分比显著降低[(33.4±2.8)％,(15.4±2.3)％](P＜0.01),p-NF-κB p65 Ser536蛋白表达量显著降低(5.1±0.7,4.4±0.4)(P＜0.01),IL-6和TNF-α浓度均显著降低[IL-6 (190±10),(170±11) ng/L;TNF-α(129±9),(118±12) ng/L](P＜0.01).与AR组比较,ATR组LDH漏出率显著升高[(27.2±2.6)％,(32.1±3.6)％](P＜0.01),早期凋亡细胞百分比显著升高[(33.4±2.8)％,(43.0±3.3)％](P＜0.0l),p-NF-κB p65 Ser536蛋白表达量显著升高(5.1±0.7,5.8±0.6)(P＜0.01),IL-6和TNF-α浓度均显著升高[IL-6 (189±10),(205±9) ng/L;TNF-α(129±9),(144±10) ng/L] (P＜0.01).结论 mPTP开放状态能够通过调控心肌细胞缺氧/复氧过程中的炎症反应而显著影响缺氧/复氧心肌细胞损伤的程度.     

靶向小干扰RNA对小鼠肺缺血/再灌注损伤时细胞凋亡及CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白的作用

目的 观察靶向小干扰RNA (siRNA)对小鼠肺缺血/再灌注损伤(PIRI)时细胞凋亡及CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的影响.方法 荧光标记法观察靶向siRNA在小鼠体内的分布并评估转染效率.C57BL/6J小鼠50只,随机分为5组(n=10):假手术组(Sham组)、缺血/再灌注组(I/R组)、I/R+载体组(VR+ Vehicle组)、I/R+阴性对照组(I/R+ Control-siRNA组)和I/R+ CHOP-siRNA组(I/R+ CHOP-siRNA组).取左肺,检测肺湿/干重比(W/D)、总肺水含量(TLW)和肺泡损伤定量评估(IQA),光镜和电镜观察肺组织结构改变,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot检测CHOP、葡萄糖调节蛋白78 (GRP78) mRNA和蛋白表达水平,原位末端转移酶标记(TUNEL)法检测细胞凋亡指数(AI).结果 靶向siRNA通过滴鼻法可有效分布于肺脏中.与Sham组比较,I/R组中CHOP、GRP78 mRNA和蛋白表达水平(0.80±0.03、0.80±0.02;0.80±0.04、0.84±0.02)均升高(P ＜0.05),W/D(5.24±0.49)、TLW(4.24 ±0.49)、IQA[(42.80 ±4.21)％]和AI[(34.50±1.51)％]均明显增加(P＜0.01)；肺组织形态结构发生明显损伤；与I/R+ Vehicle组和I/R+ Control-siRNA组比较,I/R+ CHOP-siRNA组中GRP78 mRNA和蛋白表达水平(0.84±0.04、0.85±0.04)无明显变化(P＞0.05),而CHOP mRNA和蛋白表达水平(0.40±0.03、0.44±0.04)均降低(P＜0.05),W/D(2.54±0.24)、TLW(1.54±0.24)、IQA[(16.71±2.33)％]和AI[(11.50±1.58)％]亦均降低(P＜0.01)；肺组织形态结构损伤减轻.结论 靶向siRNA对I/R损伤肺具有良好的保护作用,其机制可能与其对抗过度的未折叠蛋白反应(UPR)中CHOP介导的细胞凋亡有关.     

KIF1A过表达对氧糖剥夺-再灌注损伤PC12细胞的作用机制研究

目的:研究Kinesin-3家族成员蛋白(Kinesin-3 family member1A,KIF1A)对氧糖剥夺-再灌注诱导的PC12细胞活力、自噬和凋亡的影响,为进一步研究KIF1A在脊髓缺血再灌注损伤治疗方面提供理论依据。方法:PC12细胞(美国ATCC公司)分为四组:A组,对照组,无处理;B组,氧糖剥夺再灌注(oxygen glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)组,PC12细胞用无糖DMEM培养基,于含混合气体(95%N2和5%CO2)的37℃恒温箱内密闭缺氧培养4h;C组,pcDNA3.1空质粒组,PC12细胞转染pcDNA3.1空质粒48h,进行OGD/R处理;D组,pcDNA3.1-KIF1A质粒组,PC12细胞转染pcDNA3.1-KIF1A质粒48h,进行OGD/R处理。B、C、D组经OGD/R处理后,更换常规培养基,正常孵育24h,收集细胞总RNA及蛋白质,进行实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT PCR)和Western blot检测KIF1A mRNA和蛋白的表达情况;CCK8检测细胞存活率变化;凋亡ELISA及Caspase-3活性检测试剂盒检测细胞凋亡及Caspase-3活性;Western blot检测各组自噬相关基因LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、P62以及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路的蛋白表达变化。结果:与A组(1.00±0.00)相比,B组细胞KIF1A mRNA(0.41±0.05)和蛋白表达水平(0.52±0.07,P<0.05)显著下调;细胞活力[(51.60±7.35)%,P<0.05]显著降低。与B组(1.00±0.00)相比,C组空质粒对KIF1A mRNA(0.91±0.13)及蛋白质(1.08±0.08)表达,细胞活力[(51.60±7.35)%vs(47.30±4.16)%],细胞凋亡(1.95±0.18 vs 2.08±0.16,P>0.05)等无显著影响。而D组KIF1A过表达后能显著上调KIF1A mRNA(2.63±0.16)以及蛋白表达(2.51±0.18,P<0.05),显著缓解OGD/R引起的细胞存活率下降[(51.60±7.35)%vs(86.40±9.03)%]及凋亡[1.95±0.18 vs 1.36±0.12,P<0.05];与B组相比,D组自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值(1.68±0.14 vs 1.19±0.09,P<0.05)及pmTOR的表达(1.00±0.00 vs 1.26±0.02,P<0.05)显著受抑制,P62表达显著升高(0.53±0.05 vs 0.89±0.09,P<0.05)。结论:KIF1A过表达可促进缺血再灌注损伤诱导的PC12细胞存活、抑制细胞自噬与凋亡,其机制可能与抑制mTOR通路相关。     

内质网应激在高脂血症大鼠睾丸生殖细胞凋亡中的作用

目的:探讨内质网应激途径在高脂血症大鼠睾丸生殖细胞损伤中的作用。方法:42只雄性Wistar大鼠于鼠龄4周末随机化分为两组:对照组(12只)和高脂组(30只),分别给予普通饲料和高脂高热量饲料喂养建立高脂血症大鼠模型。第10周末(即鼠龄14周)全自动生化分析仪检测外周血甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)含量,TUNEL法检测睾丸组织中凋亡生殖细胞,免疫组化法检测睾丸组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及caspase-12蛋白表达,RT-PCR法检测睾丸组织GRP78及caspase-12 mRNA的表达。结果:高脂组大鼠血清TG、TC[(3.00±0.92)mmol/L、(3.04±0.39)mmol/L]较对照组[(1.43±0.41)mmol/L、(1.55±0.23)mmol/L]显著升高(P0.01),睾丸生殖细胞凋亡指数[(37.17±2.74)%]较对照组[(5.16±0.81)%]显著升高(P0.01);以精原细胞和精母细胞凋亡为主。高脂组睾丸组织中GRP78蛋白(0.32±0.03)及caspase-12蛋白(0.34±0.02)表达较对照组(0.19±0.01、0.12±0.01)明显升高(P0.01),GRP78 mRNA及caspase-12 mRNA(0.86±0.05、0.87±0.01)较对照组(0.37±0.03、0.34±0.03)明显增加(P0.01)。结论:高脂血症大鼠睾丸生殖细胞凋亡增多;内质网应激可能是高脂血症大鼠睾丸生殖细胞凋亡的主要途径之一。     

线粒体通透性转换孔在缺血后适应减轻兔肠缺血再灌注损伤中的作用

目的 观察线粒体通透性转换孔(mPTP)在缺血后适应减轻兔小肠缺血再灌注(I/R)损伤中的作用.方法 将新西兰兔40只随机分为假手术组(Sham组)、L/R组、缺血后适应组(IPO组)、mPTP抑制剂环孢素A组(CsA组)、IPO+ mPTP开放剂苍术甙组(IPO+ Atr组).分别干预后采集各组兔部分小肠组织标本,苏木素-伊红(HE)染色,检测小肠组织丙二醛(MDA)活性,提取肠线粒体,检测mPTP开放,Chiu氏6级评分法观察肠黏膜损伤,原位缺口末端标记法(TUNEL)法检测肠上皮细胞凋亡.结果 与Sham组比较,I/R组mPTP开放明显增加(I/R组3.53±0.36比Sham组1.37 ±0.16,P＜ 0.05);MDA活性明显增高[I/R组(0.98±0.14) nmol/mg比Sham组(0.34±0.03) nmol/mg,P＜0.05];肠黏膜损伤评分明显增高[I/R组(4.66±0.41)分比Sham组(0.92±0.58)分,P＜0.05];肠细胞凋亡指数明显增高[I/R组(60.34±6.02)％比Sham组(4.65±1.68)％,P＜0.05].与I/R组比较,IPO组和CsA组mPTP开放明显减少(IPO组2.32 ±0.23、CsA组2.62±0.18比I/R组3.53 ±0.36,P＜0.05);MDA活性明显减低[IPO组(0.55 ±0.04) nmol/mg、CsA组(0.62±0.06) nmol/mg比I/R组(0.98 ±0.14) nmol/mg,P＜0.05];肠黏膜损伤评分明显减低[IPO组(3.25±0.27)分、CsA组(3.52 ±0.55)分比I/R组(4.66 ±0.41)分,P＜0.05];肠细胞凋亡指数明显减低[IPO组(28.33±3.20)％、CsA组(20.49±4.10)％比I/R组(60.34±6.02)％,P＜0.05],与IPO组比较,IPO+ Atr组mPTP开放明显增加(IPO+ Atr组1.05±0.16比IPO组2.32±0.23,P＜0.05);MDA活性明显增高[IPO +Atr组(1.08±0.18) nmol/mg比IPO组(0.55±0.04) nmol/mg,P＜0.05];肠黏膜损伤评分明显增加[IPO+ Atr组(4.57±0.32)分比IPO组(3.25±0.27)分,P＜0.05];肠细胞凋亡指数明显增加[IPO+ Atr组(40.35±2.18)％比IPO组(28.33±3.20)％,P＜0.05].结论 缺血后适应能减轻兔肠I/R损伤,其机制可能与抑制mPTP开放有关.     

细胞凋亡抑制参与联合应用吗啡和肢体远隔缺血后处理的心肌保护作用

目的 探讨抗细胞凋亡在联合应用吗啡和肢体远隔缺血后处理(remote ischemic postconditioning,RIP)心肌保护中的作用. 方法 采用大鼠在体心肌缺血/再灌注损伤(ischemia/reperfusion injury,I/RI)模型,根据随机数字表法将60只SD大鼠分为4组(每组15只):缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)组(I/R组)、肢体RIP组(RIP组)、吗啡后处理组(M组)以及联合应用吗啡和肢体RIP组(M+RIP组).再灌注末留取缺血中心区、缺血边缘区和非缺血区心肌组织标本,应用Tunel染色法检测心肌细胞凋亡指数(apoptotic index,AI),应用实时定量PCR技术检测心肌细胞凋亡相关基因Bcl-2 mRNA和Bax mRNA表达,光学和电子显微镜观察缺血中心区心肌细胞形态. 结果 I/R组、RIP组、M组和M+RIP组缺血中心区心肌细胞AI分别为(49.1±4.9)％、(34.2±2.9)％、(39.7±3.2)％和(29.0±4.9)％,缺血边缘区心肌细胞AI分别为(12.7±2.2)％、(8.2±1.6)％、(10.4±2.7)％和(5.9±1.4)％.在缺血中心区和缺血边缘区,M+RIP组心肌细胞AI较I/R组和M组明显降低(P＜0.05),M+RIP组的Bcl-2 mRNA表达较I/R组、RIP组和M组明显增强(P＜0.05),而M+RIP组的Bax mRNA表达则较I/R组、RIP组和M组明显降低(P＜0.05),M+RIP组的Bcl-2/Bax较I/R组、RIP组和M组明显升高(P＜0.05).光学和电子显微镜检查显示,M+RIP组的心肌形态和线粒体结构明显改善. 结论 Bcl-2相关信号通路的细胞凋亡抑制是联合应用吗啡和肢体RIP的心肌保护作用机制之一.     

上调miRNA-133a表达对心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的 观察上调miRNA-133a表达是否可改善缺血再灌注损伤后心肌损害及心脏功能.方法 建立活体大鼠心肌缺血再灌注损伤模型.将实验动物随机分为5组:(1)空白对照组(Sham组);(2)缺血再灌注损伤组(I/R组);(3)缺血再灌注损伤+miRNA-133a模拟物agomiR-133a组(I/R+ agomiR-133a组);(4)缺血再灌注损伤+阴性对照序列组(I/R+ scramble组);(5)缺血再灌注损伤组+生理盐水组(I/R+ NS组).于再灌注24h分别使用实时定量聚合酶链反应(Real-TimePCR)法检查心肌内miRNA-133a表达水平;经胸超声心动检查大鼠心脏功能;2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测心肌梗死以及TdT介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)检测心肌细胞凋亡.结果 I/R+ agomiR-133a组心肌内miRNA表达水平显著高于I/R组(P＜0.01).上调miRNA-133a表达水平可显著减少再灌注后心肌梗死面积[(37.0±3.1)％比(58.0±4.4)％,P＜0.01],抑制心肌细胞凋亡(38.4±6.0比15.7±5.2,P＜0.01),并改善心脏功能[LVEF:(64.8 ±2.9)％比(52.8±4.0)％,LVFS:(31.1±1.2)％比(25.2±0.8)％,P＜0.01].NS与scramble对再灌注后心肌损伤及心脏功能无显著影响.结论 上调心肌内miRNA-133a表达水平可显著减轻缺血再灌注损伤24h后心肌损害,并改善心脏功能.     

二氮嗪后处理对缺氧/复氧成年大鼠心肌细胞存活率及磷酸化糖原合成激酶-3β、Bcl-2和Bax表达的影响

目的 研究线粒体ATP-敏感性钾通道(mitochondrial ATP-sensitive potassium channel,mitoKATP通道)开放剂二氮嗪(diazoxide,DZ)后处理对成年大鼠心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)后细胞存活及对磷酸化糖原合成激酶-3β(phospho glycogen synthase kinase-3β,pGSK-3β),Bcl-2,Bax表达的影响. 方法 体外培养原代成年大鼠(30只)心肌细胞建立H/R损伤模型,按随机数字表法随机分为5组(每组6只):①Normal组:在二氧化碳(CO2)培养箱中持续培养6h组;②H/R组:缺氧3h复氧3h组;③DZ组:缺氧3h复氧3h,复氧5 min时给予100 μmol/L DZ组;④DZ+5-HD组:缺氧3h复氧3h,缺氧末给予100 μmol/L 5-羟葵酸盐(5-hydroxydecanoate,5-HD),复氧5 min时给予100μmol/L DZ组;⑤5-HD组:缺氧3h复氧3h,缺氧末给予100 μmol/L 5-HD组.复氧3h末通过计数细胞长杆率测定存活率,免疫印迹法测定心肌细胞内pGSK4β,Bcl-2和Bax的表达. 结果 复氧3h末,Normal组单个心肌细胞收缩幅度为(13.12±0.19)％,与Normal组比较,其他各组单个心肌细胞收缩幅度明显降低[H/R组为(7.97±0.22)％,DZ组为(10.48±0.20)％,DZ+5-HD组为(7.97±0.19)％,5-HD组为(8.22±0.22)％](P＞0.05),心肌细胞内Bcl-2表达水平降低,Bax表达水平升高(P＜0.05).DZ后处理组心肌细胞存活率为(64±5)％,与H/R组比较明显增高(P＜0.05),心肌细胞内Bcl-2、pGSK4β表达水平升高,Bax表达水平降低,而缺氧末即刻给予5-HD可以逆转DZ后处理的这些作用(P＜0.05);5-HD组与H/R组比较差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 DZ后处理可能通过激活mitoKATP通道、上调pGSK-3β及Bcl-2,下调Bax的表达增加H/R后成年大鼠心肌细胞的存活.     

右美托咪定复合左布比卡因用于剖宫产术后硬膜外镇痛的临床研究

目的 探索右美托咪定(dexmedetomidine,Dex)联合低浓度左布比卡因在剖宫产术后硬膜外自控镇痛治疗中的应用可行性及对舒芬太尼消耗量的影响. 方法 90例足月孕单胎择期行剖宫产术的孕妇,ASA分级Ⅰ、Ⅱ级,按随机数字表法分为3组(每组30例):对照组(C组),舒芬太尼1.5 μg/kg+0.1％左布比卡因;Dex 1组(D1组),舒芬太尼1.5μg/kg+0.1％左布比卡因+Dex 0.02 μg·kg-1·h-1;Dex 2组(D2组),舒芬太尼1.5 μ.g/kg+0.1％左布比卡因+Dex 0.05 μg·kg1·h-1,各组药物均用生理盐水稀释至150 ml.孕妇均采用L～L4硬膜外腔联合蛛网膜下腔阻滞麻醉,术毕均快速泵注镇痛液2ml,背景输注速度为2ml/h,患者自控镇痛(patient controlled analgesia,PCA)锁定时间15 min,每次2 ml.记录术前产妇的一般资料,手术与麻醉时间,副作用(皮肤瘙痒、恶心、呕吐)的发生率,舒适度(Bruggrmann comfort scale,BCS)评分以及术后4、8、12、24、48 h的VAS评分和Ramsay评分,统计PCA键有效按压次数和48 h舒芬太尼用量. 结果 术后4、8、12、24、48 h,C组Ramsay评分[(2.0±0.5)、(1.7±0.5)、(1.6±0.6)、(1.6±0.5)、(1.8±0.4)分]明显低于D1组[(2.3±0.5)、(2.3±0.6)、(2.1±0.5)、(2.3±0.5)、(2.2±0.5)分]和D2组[(2.3±0.5)、(2.4±0.5)、(2.3±0.5)、(2.4±0.5)、(2.3±0.5)分](P＜0.05或P＜0.01);D1组[(0.5±0.6)、(0.8±0.9)、(0.9±0.9)、(1.0±0.9)、(1.1±0.8)分]和D2组[(0.4±0.6)、(0.5±0.7)、(0.7±0.7)、(0.8±0.8)、(0.9±0.7)分]VAS评分明显低于C组[(1.3±1.0)、(1.5±1.1)、(1.8±1.0)、(1.9±0.7)、(1.9±0.7)分](P＜0.05或P＜0.01).D2组皮肤瘙痒发生率(3.33％)明显低于C组(26.67％)(P＜0.05).D2组BCS评分[(3.1±0.7)分]显著高于C组[(3.1±0.7)分]与D1组[(1.9±0.7)分](P＜0.05或P＜0.01).C组48 h舒芬太尼消耗量[(1.041±0.025) μg/kg]明显大于D1组[(1.020±0.021)μ.g/kg]和D2组[(1.003±0.019) μg/kg](P＜0.01),且D1组比D2组消耗量大(P＜0.05). 结论 小剂量Dex能明显提高左布比卡因和舒芬太尼剖宫产术后的镇痛效果和安全性,具有良好的应用前景.     

右美托咪定不同途径给药对罗哌卡因腰丛-坐骨神经联合阻滞效果的影响

目的 评价右美托咪定(dexmedetomidine,Dex)不同途径给药方式对0.375％罗哌卡因腰丛挫骨神经联合阻滞(combined lumber plexus and sciatic nerve block,CLPSNB)效果的影响. 方法 90例CLPSNB患者按随机数字表法分为3组(每组30例):罗哌卡因组(R组),0.375％罗哌卡因50 ml行CLPSNB;罗哌卡因+Dex静脉注射组(D+R组),静脉输注Dex 1 μg/kg(输注时间10 min)同时0.375％罗哌卡因50 ml行CLPSNB;罗哌卡因局部麻醉药液混合Dex组(DR组),局部麻醉药Dex 1 μg/kg+0.375％罗哌卡因至50 ml行CLPSNB.R组和DR组同时静脉输注与D+R组相同容量的生理盐水.记录感觉阻滞和运动阻滞的起效时间和维持时间、术者的满意情况及副作用发生情况. 结果 3组感觉阻滞和运动阻滞的起效时间差异无统计学意义(P＞0.05);运动阻滞持续时间和首次使用镇痛药的时间DR组[(768±246) min和(1 080±300) min]、D+R组[(732±204) min和(1 050±288) min]显著长于R组[(420±126) min和(840±306) min] (P＜0.05);感觉阻滞持续时间DR组[(1008±258) min]显著长于R组[(624±216) min]、D+R组[(672±144) min](P＜0.05),而R组与D+R组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).术者满意率DR组(100％)高于R组(85％)(P＜0.05).3组患者均未出现恶心、呕吐、低血压、呼吸抑制等副作用. 结论 Dex混合于0.375％罗哌卡因行CLPSNB麻醉效果及术者满意度佳.     

不同剂量右美托咪定预注对利多卡因神经毒性的影响

目的 比较不同剂量右美托咪定(dexmedetomidine,Dex)预注对利多卡因致白兔中枢神经毒性的影响及可能机制. 方法 将40只新西兰白兔按随机数字表法分为4组(A、B、C、D组),每组10只:A组通过颈内静脉泵入含Dex 10 μg/kg的生理盐水8 ml,10 min后以4 mg· kg-1· min-1泵入利多卡因直到出现惊厥;B组泵入含Dex 5 μg/kg的生理盐水8 ml,同法泵入利多卡因;C组泵入等量生理盐水,同法泵入利多卡因;D组只泵入生理盐水8 ml.于白兔惊厥时抽血测利多卡因浓度,记录利多卡因剂量及发生惊厥时间,测脑组织天冬氨酸(aspartate,Asp)、谷氨酸(glutamic acid,Glu)、甘氨酸(glycine,Gly)、γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)的含量. 结果 产生中枢神经毒性所需利多卡因剂量、利多卡因血药浓度及发生惊厥时间,A组[分别为:(240±48) mg,(6.4±0.8)μg/kg,(822±122)s]、B组[分别为:(230±51) mg,(6.3±0.5)μg/kg,(802±114)s]较C组[分别为:(137±37) mg,(5.4±0.6) μg/kg,(510±76)s]明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05);Asp、Glu、Gly、GABA的含量,A组[分别为:(3.5±1.0)、(4.0±1.9)、(10.1±1.9)、(16.5±2.2) μmol/g]、B组[分别为:(3.7±0.8)、(4.2±1.9)、(11.4±2.2)、(17.4±2.4) mol/g]、C组[分别为:(4.7±1.0)、(6.8±1.9)、(13.7±1.9)、(20.9±3.4) μmol/g]明显高于D组[分别为:(1.5±0.8)、(2.4±1.2)、(4.7±1.6)、(5.7±2.8) μmol/g],差异有统计学意义(P＜0.05),而C组又明显高于A、B组(P＜0.05). 结论 预注Dex可以延缓利多卡因致惊厥反应的发生,增加利多卡因神经毒性的阈值,对中枢神经有一定的保护作用.     

回输外引流胆汁和胰液对胰十二指肠切除术疗效的影响

目的 探讨回输外引流的胆汁和胰液对胰十二指肠切除术疗效的影响.方法 回顾性分析2005年6月至2009年3月滨州医学院附属医院收治的51例行胰十二指肠切除术患者的临床资料.根据是否回输外引流的胆汁和胰液分为回输组(32例)和非回输组(19例).观察两组患者术后胆汁和胰液日均引流量,手术情况,肠内营养耐受性,肝脏功能及营养状态等指标.应用x2检验、Fisher确切概率法、两独立样本t检验、Mann-Whitney U检验、单因素方差分析等对数据进行统计分析.结果 术后回输组患者肺部感染率为3％ (1/32),低于非回输组患者的26％( 5/19),两组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).回输组患者自术后4～10 d胰液日引流量显著低于非回输组(t=7.143,9.244,8.808,7.915,6.461,14.097,15.038,P＜0.05),而两组患者胆汁日均引流量比较,差异无统计学意义.营养支持治疗后,回输组患者腹泻发生率为9％(3/32),低于非回输组的37％(7/19),两组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).回输组达到全量肠内营养支持的平均时间为3d,短于非回输组的4 d(U=145.000,P＜0.05).回输组和非回输组患者术前TBil、DBil、IBil分别为(261±108)、(132±55)、(129±55) μmol/L和(239±92)、(124±46)、(116 +46) μmol/L;营养支持治疗12 d后,两组患者的上述指标分别为(39±19)、(20±10)、(19±9) μmol/L和(55±22)、(29±12)、(26±11) μmoL/L,回输组患者上述指标下降程度高于非回输组(t=7.324,8.437,5.827,P＜0.05).回输组和非回输组患者术前血清前白蛋白、视黄醇结合蛋白、转铁蛋白分别为(0.261±0.021)g/L、(34.3±2.8) mg/L、(3.08±0.26) g/L和(0.263 ±0.021 )g/L、(33.8±3.5) mg/L、(3.10±0.27)g/L;术后两组患者的上述指标迅速下降,营养支持治疗3d后各项指标逐步回升,12 d后,两组患者的上述指标分别为(0.238±0.025)g/L、(30.7±2.0)mg/L、(2.78±0.19)g/L和(0.222±0.025) g/L、(29.3±2.1)mg/L、(2.63±0.21)g/L,并且回输组患者的上述指标明显高于非回输组(t=4.615,6.097,4.913,P＜0.05).结论 胰十二指肠切除术后回输外引流的胆汁和胰液可提高患者对肠内营养耐受性,降低肺部感染发生率,促进血清胆红素水平降低,改善患者营养状态,具有较高实用价值.     

慢性肾功能损伤的肝移植受者转换为西罗莫司治疗的疗效观察

目的 观察慢性肾功能损伤的肝移植受者转换为西罗莫司治疗的疗效.方法 应用钙调磷酸酶抑制剂(CNI)并伴有慢性肾功能损伤的肝移植受者23例(其中19例应用他克莫司,4例应用环孢素A)转换为西罗莫司(SRL)治疗.SRL的起始剂量为4mg/d,次日为2 mg/d,应用高压液相色谱法测定全血SRL浓度,当血SRL浓度达5～8 μg/L后,停用CNI类药物,同时服用吗替麦考酚酯,1 g/d.记录受者入组前的基础血清肌酐(Cr)、肌酐清除率、肾小球滤过率(GFR),并分别于用药后第1、3、6、12和24个月时监测血SRL浓度、Cr、肌酐清除率、GFR,同时监测受者体重、血压、血细胞计数、肝功能和肝脏生化指标、血脂、尿蛋白.于用药后12个月时行肝脏穿刺活检确认有无排斥反应.结果 23例平均随访29.4个月,随访期内死亡2例,另21例于用药后1、3、6、12和24月时的Cr分别为(147.40±23.36)、(152.60±20.08)、(150.20±22.64)、(137.60±18.09)、(138.30±17.04)μmol/L,与Cr的基础值[(158.91±29.13)μmol/L]相比较,1、12、24个月时的差异有统计学意义(P＜0.05).用药后1、3、6、12和24月时的肌酐清除率分别为(0.97±0.18)、(0.99±0.14)、(1.00±0.17)、(1.07±0.29)、(1.14±0.12)ml/s,与基础肌酐清除率[(0.91±0.14)ml/s]相比较,1、12、24个月时的差异有统计学意义(P＜0.05).用药后1、3、6、12和24月时的GFR分别为(0.80±0.15)、(0.78±0.11)、(0.75±0.12)、(0.84±0.10)、(0.94±0.13),与基础GFR[(0.71±0.11)ml/s]相比较,1、12、24个月时的差异有统计学意义(P＜0.05).应用SRL后第1、3、6、12和24个月时,Cr≤123μmol/L者所占的比例分别为38.1％、33.3％、28.6％、47.6％和52.4％.随访期内无受者发生排斥反应.结论 慢性肾功能损伤的肝移植受者转换为西罗莫司治疗可改善其肾功能.转换治疗未增加排斥反应的发生率.     

右美托咪定对全脑缺血/再灌注大鼠海马CA1区神经元GluR2蛋白表达的影响

目的 探讨右美托咪定(dexmedetomidine,Dex)预处理对全脑缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)大鼠海马CA1区神经元GluR2蛋白[α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸(α-amino-3-hydroxy-5-methyl4-isoxa-zolep-propionate acid,AMPA)受体中限制Ca2+通透的亚基]表达以及学习记忆能力的影响. 方法 按照随机数字表法将48只雄性SD大鼠分为4组(每组12只):假手术组(S组),I/R组,Dex组(D组),育亨宾+Dex组(YD组).使用四血管阻断法制作脑I/R模型,脑缺血5 min后行再灌注.D组于缺血前30 min腹腔注射Dex 100 μg/kg,YD组于对应时间点同时腹腔注射Dex 100 μg/kg和育亨宾0.1 mg/kg,S组和I/R组腹腔注射等量生理盐水.各组于再灌注后7d进行Morris水迷宫实验,测试各组大鼠的空间学习记忆能力.于再灌注72 h时,处死大鼠并分离海马CA1区,应用Western blot法测定GluR2蛋白的表达. 结果 与S组比较,I/R组大鼠的逃避潜伏期明显延长(P＜0.05)、停留目标象限时间[(32.1±5.0)s比(48.7±5.5)s]和穿越平台次数[(1.5±0.8)次比(5.0±1.2)次]明显减少(P＜0.05);与I/R组比较,D组的逃避潜伏期明显缩短(P＜0.05),停留目标象限时间[(40.6±2.1)s比(32.1±5.0)s]和穿越平台次数[(3.3 ±0.5)次比(1.5±0.8)次]明显增加(P＜0.05);与D组比较,YD组的逃避潜伏期明显延长,停留目标象限时间[(32.2±6.0)s比(40.6±2.1)s]和穿越平台次数[(1.6±0.8)次比(3.3±0.5)次]明显减少(P＜0.05);I/R组与YD组比较,差异无统计学意义(P＞0.05);I/R 72 h,I/R组大鼠海马CA1区GluR2蛋白表达显著下调(P＜0.01),D组GluR2蛋白表达下调比I/R组明显减小(P＜0.05),YD组GluR2蛋白表达水平明显低于D组(P＜0.05),YD组与I/R组比较,差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 Dex可减轻大鼠全脑I/R的学习记忆能力障碍,其机制可能与抑制脑缺血后海马CA1区GluR2蛋白表达的下调有关.     

丙泊酚预处理对大鼠心肌缺血/再灌注损伤中自噬潮的影响

目的 研究丙泊酚预处理对大鼠心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)期间自噬潮的影响及其机制. 方法 采用大鼠在体心肌I/R损伤模型,将90只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为5组(每组18只):①假手术组(Sham组),只穿线不结扎;②I/R组;③丙泊酚预处理组(P+I/R组);④Ⅰ型磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)抑制剂A66预处理组(A+I/R组);⑤丙泊酚+A66预处理组(P+A+I/R组).采用结扎冠状动脉左前降支的方法制备心肌I/R模型.除Sham组外,其余各组均缺血30 min,再灌注120 min.缺血前15 min,P+I/R组通过股静脉输注丙泊酚15 mg·kg1·h1;A+I/R组缺血前1h腹腔注射A66溶液10 mg/kg;P+A+I/R组在缺血前1h腹腔注射A66溶液10 mg/kg,缺血前15 min再通过股静脉输注丙泊酚15 mg·kg1·h-1.模型制备后取心肌,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyhetrazolium chloride,TTC)法染色并计算梗死面积百分比,酶标法测定乳酸脱氢酶(lactate dehydwgenase,LDH)活性,Western bolt法检测微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)-Ⅱ、P62蛋白的表达量,电子显微镜定性观察自噬体、自噬溶酶体的数量.结果 与I/R组比较,P+I/R组与P+A+I/R组梗死面积[(50.1±-3.9)％比(26.5±1.3)％、(42.6±1.9)％]显著减小(P＜0.05),血清LDH活性降低,LC3-Ⅱ表达水平降低,P62表达水平升高(P＜0.05),自噬体、自噬溶酶体明显减少.与P+I/R组比较,P+A+I/R组梗死面积[(26.5±1.3)％比(42.6±1.9)％]显著增加(P＜0.05),血清LDH活性升高,LC3-Ⅱ表达水平升高,P62表达水平降低(P＜0.05),自噬体、自噬溶酶体增加. 结论 丙泊酚预处理激活PI3K/蛋白激酶B(pmtein kinase B,Akt)通路,抑制I/R心肌中自噬潮进行,对大鼠心肌I/R损伤产生保护作用.     

不同剂量右美托咪定对髋关节置换术老年高血压患者术后谵妄的影响

目的 评价不同剂量右美托咪定(dexmedetomidine,Dex)对全身麻醉下老年高血压患者术后谵妄(postoperative delirium,POD)的影响. 方法 选择择期行髋关节置换术老年高血压患者120例,年龄65～85岁,采用随机数字表法分为高剂量Dex组(D1组)、低剂量Dex组(D2组)和对照组(C组),每组40例.麻醉诱导前D1组、D2组分别泵注Dex 0.6、0.2 μg/kg负荷量,10 min泵完,分别继续以0.4、0.2 μg·kg-1·h-1维持至手术结束前30 min;C组泵注等量生理盐水.观察时间点为给药前(T0)、给药后10 min(T1)、气管插管时(T2)、气管导管拔除时(T3)、术后6 h(T4)、术后24 h(T5)、术后48 h(T6).记录T0、T1、T2、T3各时点的MAP和HR情况,于T0、T3、T4、T5及T6时点采集静脉血检测血糖(blood glucose,Glu)、皮质醇(cortisol,Cor)和IL-6的血浆浓度,采用谵妄分级量表-98修订版(DRS)评估T4～T6时患者POD的发生情况. 结果 T2、T3时C组MAP [(135±12)、(127±12) mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)]、HR[(105±11)、(94±9)次/min]比T0时[(111±11)mmHg、(71±10)次/min]显著升高(P＜0.05),T3～T5时C组Glu[(9.8±0.7)、(9.6±0.4)、(10.6±0.6) mmol/L],Cor[(550±55)、(466±59)、(450±44) nmol/L]、IL-6[(175±14)、(115±10)、(81±8) μg/L]比T0时Glu[(4.2±0.4) mmol/L],Cor[(353±37)nrnol/L],IL-6[(58±6)μg/L]显著升高(P＜0.05);T1～T3时D1组MAP[(90±10)、(86±10)、(90±9) mmHg],HR [(62±8)、(63±11)、(66±9)次/min]比C组MAP [(121±10)、(135±12)、(127±12) mmHg]、HR[(79±12)、(105±11)、(94±9)次/min]明显降低(P＜0.05),T3～T5时D1组Cor[(421 ±39)、(345±35)、(325±35) nmol/L]、IL-6[(82±11)、(106±10)、(67±11) μg/L]比D2组Cor[(466±43)、(399±36)、(369±42) nmol/L],IL-6[(104±12)、(136±14)、(93±11)μg/L]明显降低(P＜0.05).与C组比较,D1组、D2组POD的发生率明显降低(P＜0.05),与D2组比较,D1组POD发生率明显降低(P＜0.05). 结论 持续泵注不同剂量Dex均能维持血流动力学稳定,减少POD的发生;高剂量Dex对POD的防治更有效;其机制可能与其减轻应激反应及抑制炎症反应水平有关.     

胰岛素对烫伤血清诱导骨骼肌成肌细胞凋亡的调控作用

目的 探讨胰岛素对烫伤大鼠血清诱导大鼠骨骼肌成肌细胞株L6凋亡的调控作用及机制.方法 体外培养L6细胞,按照随机数字表法分为对照组、烫伤血清组、胰岛素组和烫伤血清+胰岛素组.在上述4组细胞培养液中分别添加体积分数20％正常大鼠血清、体积分数20％烫伤大鼠血清、体积分数20％正常大鼠血清+100 nmol/L胰岛素、体积分数20％烫伤大鼠血清+100 nmol/L胰岛素,孵育48 h.行Hoechst 33258染色,于倒置荧光显微镜下观察细胞凋亡形态并计数凋亡细胞;行膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双标记染色,用流式细胞仪检测细胞凋亡率;蛋白质印迹法检测细胞磷酸化(p一)蛋白激酶B(Akt)、p-磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、Bax、Bcl-2、活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3( caspase-3)的蛋白表达量.对实验数据行组间或配对t检验.结果 (1)倒置荧光显微镜下可见,烫伤血清组凋亡细胞为每视野(59.6±3 9)个,显著多于对照组、胰岛素组、烫伤血清+胰岛素组[每视野(4 9±2.6)、(5 5±2 1)、(19.7±2 3)个,t值分别为28.53、29.86、21.53,P值均小于0.01].(2)流式细胞仪检测结果显示,烫伤血清组细胞凋亡率为(18.5±1.8)％,明显高于对照组、胰岛素组及烫伤血清+胰岛素组[(1.1±0 6)％、(1 5±0 3)％、(7.8±0.6)％,t值分别为22.41、22 83、13 92,P值均小于0 01].(3)蛋白质印迹检测显示,烫伤血清组Bax蛋白表达量(1.12±0.63)及活化caspase-3蛋白表达量(2.15±0.51)明显高于对照组(0.16±0 03、0.21±0.03,t值分别为3 80、10 69,P值均小于0 01),p-Akt蛋白表达量(0.20±0.03)明显低于对照组(0 42±0 07,t=-8.46,P＜0.01);Bcl-2及p-PI3K蛋白表达量(0.19±0 03、0.17±0.03)与对照组(0.26±0 09、0 28±0.07)接近(t值分别为-2.73、-1.14,P值均大于0 05).与烫伤血清组比较,烫伤血清+胰岛素组Bax蛋白表达量(0.40±0.14)和活化caspase-3蛋白表达量(0.83±0.18)明显降低(t=-3.23,P ＜0.05;t =6.66,P ＜0.01),Bcl-2、p-Akt及p-PI3K蛋白表达量均升高(0.39±0.10、0 78±0 03、0.47±0.12,t值分别为4.07、18.71、5 05,P＜0.05或P＜0.01).结论 烫伤大鼠血清可显著促进骨骼肌成肌细胞凋亡,胰岛素能通过PI3K/Akt信号途径抑制细胞凋亡.     

瑞芬太尼、芬太尼对过度肥胖患者麻醉效果及麻醉复苏质量的影响

目的 探讨芬太尼和瑞芬太尼对于肥胖患者全身麻醉效果及复苏的影响,探索联合应用两种药物的可行性,并找到较为可行的联合方式.方法 按随机区组设计将实施全身麻醉的肥胖患者分为4组,每组20例,分别是芬太尼组(F组),瑞芬太尼组(R组),芬太尼复合瑞芬太尼l组(RF1组)和芬太尼复合瑞芬太尼2组(RF2组),比较4组患者的全身...