大鼠异位心脏移植（Ono术式）的流程及经验体会

目的总结建立大鼠同种异位心脏移植模型的经验、方法及体会。方法行大鼠同种异位心脏移植（Ono术式）120例。其中预备实验60例,正式实验60例。结果预备实验手术成功率为45％,正式实验手术成功率为85％。正式实验整个手术时间为（74．3±17．1）min,供心缺血时间（29．6±t0．3）min,供心摘取时间约（7．9±4．2）min。移植心存活时间为（11．1±5．7）d;5例心脏移植后大鼠长期存活,最大体重达740g。结论成功制备大鼠心脏移植模型,良好手术技术和严格的围手术期处理同等重要。     

白细胞介素12在大鼠颈部心脏移植排斥反应中的表达及意义

目的探讨白细胞介素12(IL-12)在心脏移植排斥反应中的表达及其与排斥反应的关系。方法采用大鼠颈部心脏移植模型,随机分为2组:同基因移植组,供、受体均为SD大鼠;异基因移植组,供、受体分别为W istar、SD大鼠。以β-Actin作内参照,分别于术后第1,3,5,7天取移植心脏,用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法观察IL-12的表达情况。结果随着术后天数的增加,异基因移植组IL-12表达逐渐升高,第7天达高峰(与对照组相比,P<0.01)。结论IL-12的表达与心脏移植急性排斥反应的发生发展密切相关,可作为心脏移植急性排斥反应的监测指标,对急性排斥反应的早期诊断和移植物的预后估计具有重要的临床意义。     

同种异体原位心脏移植8例治疗体会

目的 总结心脏移植的受体选择、手术技术、围手术期处理以及应用免疫抑制方案的临床经验.方法 共8例受体,术前诊断7例为扩张型心肌病,1例为缺血性心肌病,采用双腔静脉法原位心脏移植,术前均采用达利珠单抗进行免疫诱导治疗,术后基础免疫抑制方案为由环孢素A、霉酚酸酯和泼尼松组成的三联方案.结果 1例受体因颈椎畸形长时间尝试气管插管失败后行气管切开,造成供心冷缺血时间长达340 min,术后并发低心排血量综合征,于术后第13天死于多器官功能衰竭.其余7例受体术后恢复顺利,康复出院.结论 合适的受体、良好的供心保护、娴熟的手术技术以及合理的免疫抑制方案是临床心脏移植取得成功的关键.     

国际儿童心脏移植现况

随着心脏移植手术技术的提高与免疫抑制剂领域的发展,儿童心脏移植的长期存活率明显提高。为评估和研究医疗机构实体器官移植状态,国际心肺移植联合会(ISHLT)每年对来自全世界的注册资料进行统计总结并发表年报。本综述主要将ISHLT年报的主要内容、统计学方法及结果进行整理,介绍国际儿童心脏移植人口分布统计结果,免疫抑制剂的应用影响及术后并发症相关因素;并分析了儿童心脏移植的存活率及相关危险因素。     

国际儿童心脏移植现况

随着心脏移植手术技术的提高与免疫抑制剂领域的发展,儿童心脏移植的长期存活率明显提高。为评估和研究医疗机构实体器官移植状态,国际心肺移植联合会（ISHLT）每年对来自全世界的注册资料进行统计总结并发表年报。本综述主要将ISHLT年报的主要内容、统计学方法及结果进行整理,介绍国际儿童心脏移植人口分布统计结果,免疫抑制剂的应用影响及术后并发症相关因素;并分析了儿童心脏移植的存活率及相关危险因素。     

改进术式行心脏移植的护理

心脏移植是治疗终末期心脏病唯一的理想方法.而且心脏移植日趋成熟,手术及治疗范围不断改进,越来越多的终末期心脏病患者希望接受心脏移植,以改善存活质量,延长寿命.2004年,我院为2例终末期心脏病患者采用了改进术式即双腔静脉吻合法行同种异体原位心脏移植术.均已成活、生活质量良好.现将护理体会介绍如下.     

同种异体原位心脏移植3例临床总结

目的：总结3例同种异体原位心脏移植成功的处理经验，探讨供心保护、免疫抑制剂的应用及感染、预防急性排斥反应等问题。方法：2000年11月和2001年3月先后为终末期肥厚型心肌病、扩张型心肌病和先天性心脏病三尖瓣闭锁行肺动脉环缩术后等3例病人成功地施行了心脏移植手术。术后应用环孢霉素A（CSA）和甲基强的松龙、强的松龙等免疫抑制剂。结果：3例患者已分别生存半年和3个月，心功能正常，生活质量良好。结论：心脏移植、供心保护、吻合技术以及围手术期处理是手术成功的关键。     

L-卡尼汀对大鼠心脏移植再灌注损伤保护作用的研究

目的　探讨L -卡尼汀对大鼠心脏移植再灌注损伤的保护作用。方法　采用大鼠颈部异位心脏移植模型 ,随机分为2组 :L -卡尼汀组 ,对照组。再灌注 2h测定心肌脂质过氧化终产物MDA、过氧化物歧化酶SOD的含量 ,电镜观察心肌组织的病理变化。TUNEL法染色检测细胞凋亡 ,以心肌凋亡阳性细胞数占总心肌细胞数的百分比作为心肌细胞凋亡指数。结果　L -卡尼汀组心肌线粒体等结构损伤明显减轻 ,心肌MDA明显减少 (P <0 0 1) ,SOD明显增加 (P <0 0 1) ,心肌细胞凋亡指数明显降低 [(7 14± 0 3 8) %vs (3 8 3 6± 3 16) % ,P <0 0 1) ]。结论　L -卡尼汀能有效减轻脂质过氧化反应 ,保护心肌线粒体 ,抑制心肌细胞凋亡 ,对心脏移植再灌注损伤有显著保护作用。     

血管内皮细胞与心脏保护

长期以来，心肌保护和心脏保存技术都是围绕保护心肌细胞方面改进，但目前许多实验证实血管内皮细胞损伤可导致手术后心肌水肿、早期心功能不全、移植排斥和动脉粥样硬化，从而降低患者的存活率。因此，血管内皮结构和功能损伤而影响供心保存及移植后存活已成为国内外学者的研究热点。     

左旋精氨酸对大鼠移植心脏保护作用的实验研究

用大鼠腹部心脏移植模型观察左旋精氨酸 (L- Arginine,L - Arg)对大鼠移植心的保护作用 ,并对其机制进行了初步探讨。采用大鼠异位心脏移植模型 ,将 Wistar大鼠随机分为 4组 :1组 7只 ,为空白对照组 ;2组 9只 ,为单独给以 L- Arg组(L- Arg以 5 %浓度混入普通饲料喂养大鼠 ) ;3组 8只 ,为环孢素 (Cyclosporine,Cs A)组 (移植前 1天 Cs A 10 mg/ kg灌胃 ,移植当天及移植后 1至 5天 Cs A 2 .5 mg/ (kg· d)灌胃 ;4组 10只 ,为 Cs A加 L- Arg组 (饲料同 2组 ,Cs A同 3组 )观察移植心存活时间 ,并在移植心停跳后抽血查硝酸盐 /亚硝酸盐…     

肝移植术后早期免疫原性的变化

目的探讨肝移植术后早期移植肝及宿主的供体免疫原性的动态变化。方法利用近交系大鼠,按Kamada的双套法行LEW→WF的原位全肝移植,将术后早期不同时期的移植肝或脾脏取出、分别注入移植后长期生存大鼠的腹腔内,观察能否诱导后者出现排斥反应。结果①移植12h后宿主的脾脏内存在最强的同种免疫刺激能力,2d后消失。②移植3d后的肝脏逐渐丧失了同种免疫刺激能力。结论移植肝和宿主的供体同种免疫原性在术后早期基本上消失了。     

Bcl-2基因转染对心脏移植排斥反应相关因素表达的影响

目的　探讨Bcl-2基因转染对心脏移植排斥反应中细胞色素C、caspase -8和caspase -3表达的影响。方法　采用小鼠颈部心脏移植模型 ,随机分为 3组 :对照组 ,移植组 ,Bcl-2组。术后第 5d取移植心脏 ,用免疫组化方法观察细胞色素C、caspase-8和caspase -3表达情况。结果　移植组细胞色素C、caspase -8和caspase -3表达均明显升高 (与对照组相比 ,P <0 0 1) ;与移植组相比 ,Bcl-2组细胞色素C、caspase -8和caspase -3表达明显降低 (P <0 0 1)。结论　心脏移植排斥反应中移植心肌细胞色素C、caspase -8和caspase -3表达均明显上升 ,Bcl -2基因转染抗心脏移植排斥反应中心肌细胞凋亡作用可能与其下调细胞色素C、caspase -8和caspase -3的表达有关。     

Bcl-2基因转染对心脏移植排斥反应中心肌细胞凋亡的影响

目的　探讨Bcl-2基因转染对心脏移植排斥反应中心肌细胞凋亡的影响。方法　采用小鼠颈部心脏移植模型 ,随机分为 3组 :对照组、移植组、Bcl-2组。分别于术后第 1、3、5、7d各取 4只移植心脏 ,原位末端标记 (TUNEL)法染色检测心肌细胞凋亡 ,以心肌细胞凋亡阳性细胞数占总心肌细胞数的百分比作为心肌细胞凋亡指数 (apoptosisindex ,AI)。用免疫组化方法观察Bcl -2的表达情况。结果　移植组心肌细胞于术后第 1d即已出现凋亡 ,第 3d明显增加 ,第 7d达高峰。Bcl-2组术后第 1d心肌细胞即表达Bcl -2 ,第 3d表达明显增加 ,第 5d达高峰 ,第 7d仍维持高峰状态。Bcl -2组各时间点心肌细胞凋亡指数明显小于对应的移植组(P <0 0 1)。结论　Bcl -2基因转染对心脏移植排斥反应中心肌细胞凋亡有显著抑制作用     

Modified technique for spermatogonial stem cell transplantation into the seminiferous tubules in mouse model

This study aimed to develop a modified technique for spermatogonial stem cell (SSC) transplantation with the aid of an operating microscope in an infertile mouse model. Male neonatal C57BL/6 (B6) mice served as SSC donors. SSCs labeled with the PKH26-GL marker were detected by flow cytometry to verify purity. Adult B6 males were rendered infertile by busulfan treatment as the recipient. One month later the SSC suspension was delivered into recipient seminiferous tubules by manual microinjection under microscope with 100x magnification. This was compared to the conventional mechanical micromanipulator method via efferent ducts, rete testis, and seminiferous tubules, respectively. The volume injected and time required in the different procedures were compared. The recipient accepted manual microinjection via seminiferous tubules was subjected to histology, confocal laser scanning microscopy, and real-time fluorescent PCR at different checkpoints after transplantation. Positive controls received neither busulfan treatment nor transplantation. Negative controls were injected with an equal amount of transplant medium. The results showed that manual microinjection took 10 minutes per testis for the complete delivery of 50?µl of the SSC suspension, which was significantly less time-consuming and delivered a larger volume of SSC suspension than other methods. Transplanted SSCs demonstrated the earliest transference and colonization in recipient testes 7 days after transplantation. The newly generated germ cell layers appeared to be intact during spermatogenesis 90-days post-transplantation. This manual injection technique under microscope provides an alternative method to deliver the SSCs into the recipient seminiferous tubules.     

原位心脏移植术后早期的血流动力学实验研究

目的通过心脏移植的实验研究,比较双腔静脉法同种异体原位心脏移植术与全心脏移植法同种异体原位心脏移植术的出血量,移植后心脏的早期血流动力学方面的不同。方法供、受体杂种犬16只,将实验动物分成双腔静脉心脏移植术组和全心脏移植术组,每组各8只,分别在全麻、中度低温体外循环下进行手术。记录术中出血量,术后采用GE—vivid7型彩色多普勒超声诊断仪,心电监护仪观察血流动力学指标。结果5例移植心脏自动复跳（双腔静脉心脏移植术组3例,全心脏移植法组2例）,3例移植心脏通过电除颤复跳（双腔静脉心脏移植术组1例,全心脏移植法组2例）,双腔静脉法心脏移植与全心脏移植法出血量对比为（475±20．81ml vs 545±26．45ml）,术后早期血流动力学参数两组均比较稳定。结论提高手术技术,避免吻合口出血,加强心肌保护是心脏移植手术的关键,双腔静脉法心脏移植在出血量方面少于全心脏移植术,两组心脏移植术后早期血流动力学方面无明显差异。     

肝脏移植术后受体感染性并发症的防治

目的：探讨儿童同种异体肝脏移植术后各种感染类型的防治特点。方法：2000年3月31日我科成功地进行了1例小儿同种异体背驮式肝移植，受体移植；受体为14岁男童，患先天性Carloli病，曾行两次胆道手术，术前患儿胆汁性肝硬化，复发性胆管炎，肝胆管结石，充血性脾肿大伴脾功亢进，为科末期肝病，结果：术后早期曾出现肺部感染等多器官并发症和急性排斥反应，术后17个月出现慢性排斥反应，经积极抗感染，抗病毒及免疫治疗得以控制，至今已存活2年余。结论：各种感染是儿童肝脏移植的主要并发症，根据药敏选择有效的抗生素控制细菌感染，早期应用更昔洛韦和长期服用FK506的免疫治疗，对巨细胞病毒感染的预防非常有效。     

肾移植受者留置导尿更换集尿袋的时机

目的探讨肾移植受者留置导尿更换集尿袋时机。方法采用排除标准选出2006年1-12月行同种异体肾移植手术的受者52例，随机数字法分组并于术后第2～8天进行尿培养后更换集尿袋，对尿培养结果进行分析。结果术后第2～5天尿培养未检出菌落，分别于术后第6、7、8天的尿液中各检出1、3、4株菌落；所有检出菌落的病例中男性5例、女性3例，其中18-30岁1例、31-40岁2例、41～50岁3例、51～60岁2例。结论肾移植受者留置导尿更换一次性集尿袋的最佳时间为术后第5天；肾移植受者尿液培养结果与年龄、性别无关。     

Xenogeneic and endogenous spermatogenesis following transplantation of rat germ cells into testes of immunocompetent mice

Spermatogonial stem cells (SSCs) are the foundation of spermatogenesis, and are characterised by their ability to self-renew and to produce differentiated progeny that form spermatozoa. It has been demonstrated that rat spermatogenesis can occur in the seminiferous tubules of congenitally immunodeficient recipient mice after transplantation of rat SSCs. However, the testis is often viewed as an immune-privileged site in that autoimmunogenic antigens on germ cells do not normally elicit an immune response in situ. In the present study, we tried to transplant rat SSCs into immunocompetent mice after depletion of their own germ cells by means of busulfan. The results showed that some transplanted SSCs could undergo complete spermatogenesis in recipient mouse testes, the rat spermatozoa being detected in 7 of 28 recipient epididymides. A significant increase in mouse spermatozoa was also noted in all 28 epididymides of recipient mice regardless of whether rat spermatozoa were concurrently present or not. These results suggest that transplanted rat SSCs can be tolerated in the testes of immunocompetent mice and that the transplantation of rat SSCs stimulates endogenous spermatogenesis in the recipient mice.