补阳还五汤对局灶性脑缺血大鼠神经干细胞移植后凋亡相关基因表达的影响

目的:探讨补阳还五汤对局灶性脑缺血大鼠神经干细胞移植后凋亡相关基因Bag-1、Bcl-2表达的影响。方法:选取SD大鼠,复制局灶性脑缺血大鼠模型,按神经功能缺损评分进行分层,随机分为模型组、空白移植组、移植组、补阳传统饮片组、补阳超微饮片组,每组15只,分别于细胞移植后7、14、28d观察神经功能评分,采用补阳还五汤超微饮片与传统饮片予以干预,于相应时间点处死大鼠后采用免疫组化法检测凋亡基因Bag-1、Bcl-2的表达。结果:补阳传统饮片组、补阳超微饮片组大鼠神经功能得到明显恢复,Bag-1、Bcl-2蛋白表达上升显著,在各时间点(7、14、28d)与模型组比较差异均有统计学意义(P0.01或P0.05);补阳超微饮片组促神经功能积分的恢复及上调Bcl-2、Bag-1蛋白表达作用优于补阳传统饮片组,差异有统计学意义(P0.01或P0.05)。结论:补阳还五汤可促进神经功能的恢复,上调Bag-1、Bcl-2蛋白表达,且超微饮片的作用较传统饮片更加显著。     

补阳还五汤对局灶性脑缺血大鼠神经导向因子Slit2及其受体Robo1蛋白表达的影响

目的观察补阳还五汤对局灶性脑缺血大鼠神经导向因子Slit2及其受体Robo1蛋白表达的影响,探讨其对脑缺血神经保护作用机制。方法采用改良大脑中动脉线栓法建立脑缺血模型(MCAO),90只SD大鼠按照随机数字表法分成假手术组、模型组、补阳还五汤组共3组,每组30只,每组分别于脑缺血后3天、7天、14天检测相关指标,采用修订神经功能评分(m NSS)观察大鼠神经功能恢复情况,采用免疫组化、Western-blot检测各组大鼠脑缺血后不同时间点Slit2,Robo1蛋白的表达。结果各个时间点MCAO模型大鼠动物都出现了明显的神经功能缺损,补阳还五汤组可显著缓解这些神经症状,降低行为学评分。免疫组化及Western-blot检测结果显示模型组Slit2,Robo1蛋白在第3,7天表达增多,与同时间段假手术组比,差异有统计学意义(P0.01,P0.05),随后表达逐渐下降,补阳还五汤组能上调Slit2表达,第3天上调最明显(P0.05),同时上调Robo1表达,其中在7天上调最明显,与同时段模型组比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论补阳还五汤能调控脑缺血后大鼠Slit2,Robo1蛋白的表达,促进神经功能恢复,这可能是其治疗脑缺血的机制之一。     

补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血后血管内皮生长因子及其受体Flk1的影响

目的探讨补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血后血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(Fetal liver kinase1,Flk1)的影响。方法大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组、补阳还五汤组,大脑中动脉线栓法复制局灶性脑缺血模型,采用免疫组织化学法和酶联免疫法检测各组动物脑内VEGF、Flk1的表达和蛋白水平,同时评价动物神经功能。结果在正常大鼠脑内有少量VEGF和Flk1阳性细胞,脑缺血后VEGF和Flk1阳性细胞增加;与模型组比较,尼莫地平、补阳还五汤均能改善模型大鼠的神经功能缺失症状,增强VEGF和Flk1的表达,提高VEGF蛋白水平(P<0.05);于7、14d补阳还五汤作用强于尼莫地平(P<0.05)。结论补阳还五汤增强大鼠局灶性脑缺血后VEGF及Flk1的表达和提高VEGF蛋白水平,是其抗脑缺血的可能作用机制之一。     

补阳还五汤联合骨髓间充质干细胞移植对脑缺血再灌注大鼠行为学及脑梗死体积的影响

目的:研究补阳还五汤联合骨髓间充质干细胞移植对局灶性脑缺血再灌注大鼠行为学及脑梗死体积的影响。方法:用右侧大脑中动脉线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,检测脑梗死体积,并比较其神经功能行为积分。结果:移植组与联合组均能够使大鼠神经功能损害评分降低,以联合组第7d恢复最为明显(P0.05)。脑组织切片经TTC染色,可见右侧大脑中动脉供血区出现大小不等的梗死灶,MSCs组及补阳还五汤联合MSCs组与缺血再灌注组比较有显著意义(P0.01),前两者之间比较无显著性意义(P0.05)。结论:补阳还五汤联合骨髓间充质干细胞移植可减少局灶性脑缺血再灌注大鼠脑梗死体积,改善脑缺血后神经行为症状。     

补阳还五汤联合神经干细胞移植对脑缺血大鼠血管新生影响

目的:探讨补阳还五汤联合神经干细胞移植对脑缺血大鼠血管新生的影响。方法:采用大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血大鼠模型,将动物随机分为正常组、假手术组、模型组、补阳还五汤组、NSCs移植组和移植联合中药组,给予不同处理,分别于第1d、7d、14d和28d处死动物,采用免疫组织化学法观察大鼠海马区血管新生情况。结果:正常组大鼠脑内海马区存在一定的Brd U、v WF阳性细胞,脑缺血7d达高峰,然后逐渐下降;移植联合中药组Brd U、v WF的表达显著增强,在第7d和第14d时明显多于其他各组(P0.05)。结论:补阳还五汤联合神经干细胞移植可促进局灶性脑缺血大鼠海马区血管新生。     

补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤大鼠线粒体分裂蛋白Drp1、Fis1及细胞色素C表达的影响

目的:观察补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤大鼠线粒体分裂蛋白Drp1、Fis1及细胞色素C表达的影响。方法:将45只健康SD大鼠分为正常对照组、模型对照组、补阳还五汤组各15只,模型对照组以及补阳还五汤组给予Bannister's颈动脉引流法以建立大鼠缺血再灌注脑损伤的动物模型,补阳还五汤组于造模造模后腹腔给药补阳还五汤0.4ml/(kg·d)1次,共用药7d,其余两组给予使用方式、剂量及使用频率和补阳还五汤组相同至实验结束。比较各组大鼠情况、神经功能缺损评分、海马神经细胞凋亡率、Drp1,Fis1和cyt-c的表达水平、Ca~(2+)荧光强度、钙调神经磷酸酶活性比较。结果:治疗后,与正常对照组相比,模型对照组及补阳还五汤组Drp1、Fis1及cyt-c表达水平较高(P0.05),神经功能评分较高(P0.05),海马神经元细胞凋亡率较高(P0.05),Ca~(2+)浓度及钙调神经磷酸酶活性较高(P0.05);与模型对照组相比,补阳还五汤组Drp1、Fis1及cyt-c表达水平较低(P0.05),神经功能评分较低(P0.05),海马神经细胞凋亡率较低(P0.05),Ca~(2+)浓度及钙调神经磷酸酶活性较低(P0.05)。结论:补阳还五汤可在一定程度上下调缺血再灌注脑损伤大鼠Drp1、Fis1、cyt-c的表达水平以及海马神经细胞凋亡率,抑制线粒体分裂减轻大鼠海马神经元缺氧复氧损伤,缓解脑缺血进一步损伤,有望为临床治疗方面提供新的干预方法。     

芪棱汤对局灶性脑缺血再灌注大鼠HIF-1α的影响

目的探讨芪棱汤对局灶性脑缺血再灌注大鼠HIF-1α表达的影响。方法将大鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组及芪棱汤组。采用颈内动脉线栓加环扎法复制大鼠局灶性脑缺血再灌注模型（MCAO／Reperfusion）。HE染色观察病理形态学变化。在再灌注后不同时间点采用免疫组化法检测HIF-1α表达。结果与模型组相比，补阳还五汤组及芪棱汤组能够改善脑缺血再灌注时的病理损伤；能够促进HIF-1α阳性细胞在各时间点的表达（P〈0．05）；且芪棱汤的治疗效果高于补阳还五汤（P〈0．05）。结论芪棱汤能通过促进HIF-1α表达上调达到神经保护作用，且芪棱汤优于补阳还五汤。     

补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血损伤血脑屏障的影响

目的观察补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血损伤血脑屏障的保护作用,阐明该方抗脑缺血的机理。方法采用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血模型。将SD大鼠随机分为假手术组、模型组和补阳还五汤组,造模后24 h给药,补阳还五汤组给予补阳还五汤灌胃,假手术组、模型组给予等量生理盐水灌胃。造模后7 d,评价各组大鼠神经功能并处死取材,四氮唑红染色观察大鼠脑组织梗死体积,HE染色观察大鼠脑微血管的一般形态,ELISA检测大鼠脑组织内基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP-2、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白水平及血清中血管性血友病因子(vWF)的表达。结果与模型组比较,补阳还五汤组能显著改善神经功能行为评分,减少脑梗死体积,降低MMP-9、MMP-2、VEGF、vWF水平。病理观察结果显示,补阳还五汤组脑组织病理变化较模型组减轻。结论补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血具有保护作用,其作用可能与保护血脑屏障,抑制MMP-9、MMP-2、VEGF、vWF的表达有关。     

补阳还五汤对脑缺血大鼠不同时间点PAI-1、tPA、ICAM1、VCAM1表达的影响

目的探讨补阳还五汤(BYHWT)对大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠不同时间点纤溶酶原激活抑制物-1(PAI-1)、组织型纤溶酶原激活物(t PA)、细胞间黏附分子1(ICAM1)和血管细胞黏附分子1(VCAM1)表达的影响。方法用颈内动脉线栓法建立局灶性脑缺血大鼠模型,观察缺血后1、3、7 d神经症状积分,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血浆中PAI-1、t PA的表达,Western blot法检测脑组织中ICAM1、VCAM1蛋白质表达,实时荧光定量法(RT-PCR)测定脑组织中Icam1、Vcam1 m RNA的表达。结果补阳还五汤组神经症状积分(7 d)低于模型组和依达拉奉组(P0.01);补阳还五汤组大鼠血浆PAI-1表达在脑缺血后3 d比依达拉奉组明显降低(P0.01);依达拉奉组和补阳还五汤组大鼠血浆t PA表达在缺血后3、7 d比假手术组明显降低(P0.01);假手术组、依达拉奉组和补阳还五汤组大鼠脑组织Icam1、Vcam1 m RNA的表达在脑缺血后1、3、7 d比模型组均明显降低(P0.01),ICAM1蛋白表达在脑缺血后3、7 d比模型组明显降低(P0.01);补阳还五汤组大鼠脑组织VCAM1蛋白表达在脑缺血后1、3、7 d比模型组明显降低(P0.01)。结论补阳还五汤能明显下调PAI-1、上调t PA的表达,降低黏附分子,PAI-1在治疗后3 d降低最明显,t PA在治疗后1 d升高最明显,黏附分子在治疗后7 d降到最低值。从而有效控制血栓的形成,抑制炎性细胞的黏附、聚集和激活,拮抗缺血性脑损伤,保护脑组织。     

补阳还五汤对局灶性脑缺血大鼠APJ、Apelin、p-PI3K/AKT表达的影响

目的:观察补阳还五汤对局灶性脑缺血大鼠脑组织APJ、Apelin、p-PI3K表达的影响,研究补阳还五汤的作用机制。方法:将成年大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型组和补阳还五汤组,采用大脑中动脉线栓法建立大脑中动脉阻塞模型,每组于给药后1、3、7 d处死,用Western blot及RT-PCR法检测各组不同时间点APJ、AKT、p-PI3K的蛋白及APT、Apelin mRNA表达。结果:补阳还五汤组各时间点APJ、p-PI3K、p-AKT蛋白及APT、Apelin mRNA表达显著高于模型组(P0.05)。结论:补阳还五汤可减轻局灶性脑缺血后大鼠脑组织的损伤,其机制与调节缺血后脑组织APJ、Apelin、p-PI3K、p-AKT的表达有关。     

补阳还五精简方对局灶性脑缺血大鼠脑组织APJ表达的影响

目的观察补阳还五精简方对局灶性脑缺血大鼠脑组织APJ蛋白和基因表达的影响,并探讨其作用机制。方法采用大脑中动脉线栓法建立大鼠局灶性脑缺血模型,实验大鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组和补阳还五精简方组,各给药组给予相应药物灌胃。分别于给药第3、7日Western blot、RT-PCR检测各组大鼠脑组织APJ蛋白和基因表达。结果补阳还五精简方组和补阳还五汤组各时间点APJ蛋白和基因表达均高于模型组和假手术组(P0.05),补阳还五精简方组与补阳还五汤组各时间点APJ蛋白表达无明显差异,但补阳还五精简方组APJ基因表达高于补阳还五汤组(P0.05)。结论补阳还五精简方可通过促进缺血后脑组织APJ的表达发挥对大鼠脑组织的神经保护和修复作用。     

芪棱汤对脑缺血-再灌注大鼠 Caspase- 3蛋白表达的影响

目的观察芪棱汤对脑缺血再灌注大鼠Caspase-3蛋白表达的影响。方法采用颈内动脉线栓加环扎法复制大鼠脑缺血再灌注模型,于再灌注后不同时间点采用免疫组化法检测大鼠Caspase-3蛋白表达,采用TUNEL法检测凋亡细胞数。结果补阳还五汤组与芪棱汤组Caspase-3蛋白表达明显低于模型组,芪棱汤组Caspase-3蛋白表达明显低于补阳还五汤组;补阳还五汤组及芪棱汤组均能减少缺血半暗带神经元细胞的凋亡,而以芪棱汤组尤为显著。结论芪棱汤可以通过抑制Caspase-3蛋白表达,减少神经细胞的凋亡,达到神经保护作用。     

补阳还五汤对局灶性脑缺血大鼠海马区血管新生的影响

目的:探讨补阳还五汤对局灶性脑缺血大鼠海马区血管新生的影响。方法:采用大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血大鼠模型,将动物随机分为正常组、假手术组、模型组、尼莫地平组和补阳还五汤组,给予不同处理,分别于1 d、7 d、14 d和28 d处死动物,采用免疫组织化学法观察海马区血管新生情况。结果:正常脑内海马区存在一定的Brd U、v WF阳性细胞,脑缺血7 d达高峰,然后逐渐下降;补阳还五汤组可显著增强Brd U的表达,在第7 d、14 d时明显多于其他各组(P0.05)。结论:补阳还五汤可促进局灶性脑缺血大鼠海马区血管新生。     

补阳还五汤联合脂肪来源干细胞移植对脑缺血大鼠神经功能的影响

目的 探讨补阳还五汤联合脂肪来源干细胞（ADSCs）移植对脑缺血损伤大鼠的神经保护作用.方法 采用线栓法制备大鼠脑缺血模型,大鼠随机分为假手术组、模型组、ADSCs移植组（移植组）、补阳还五汤联合ADSCs移植组（联合组）.各组又分7、14、21d 3个时间点的亚组,观察各组大鼠不同时间点的神经功能评分、脑梗死面积及脑组织病理形态学变化.结果 与模型组比较,移植组、联合组大鼠造模后14、21d神经功能评分均显著降低（P＜ 0.05或P＜ 0.01）,且联合组大鼠21d神经功能评分明显优于移植组（P＜0.05）;各时间点移植组与联合组大鼠脑梗死面积明显小于同时相的模型组（P＜0.01）,且14、21 d联合组优于移植组（P＜0.05）;造模后HE染色显示模型组大鼠脑组织缺血周边神经元数量减少,细胞明显水肿,治疗后脑组织损伤明显减轻,联合组的病理损伤最轻.结论 补阳还五汤联合ADSCs移植能减轻脑缺血后神经功能损伤,具有脑保护作用.     

补阳还五汤精简方对局灶性脑缺血大鼠脑谷胱甘肽抗氧化系统的影响

目的观察补阳还五汤精简方对局灶性脑缺血大鼠脑谷胱甘肽抗氧化系统的影响,探讨其作用机制。方法将120只SD大鼠采用随机数字表法分成假手术组、模型组、补阳还五汤组、补阳还五汤精简方组。除假手术组外,其余各组采用大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血模型,造模2 h后,各给药组给予相应药物灌胃,假手术组、模型组给予等量生理盐水灌胃。各组分别于脑缺血后1、3、7 d检测脑组织还原型谷胱甘肽(GSH)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。同时,采用实时荧光定量PCR、Western blot检测大鼠脑缺血后γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)m RNA和蛋白的表达。结果与假手术组比较,模型组脑组织GSH含量及GSH-Px活性明显降低(P0.05,P0.01),γ-GCS m RNA及蛋白表达升高,其中第1日最明显(P0.05);与模型组比较,各给药组多能不同程度升高GSH含量及GSH-Px活性,同时上调γ-GCS m RNA及蛋白表达,其中第3日差异有统计学意义(P0.05)。结论补阳还五汤精简方通过调控脑缺血后谷胱甘肽抗氧化系统中GSH、GSH-Px及γ-GCS的表达,发挥抗氧化作用。     

补阳还五汤对脑缺血模型大鼠脑损伤的保护作用

目的:通过观察脑缺血模型大鼠脑组织CAMP反应元件结合蛋白CREB的表达及血液丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性,揭示补阳还五汤传统剂量或超微制剂对脑缺血大鼠模型脑的保护作用及机制。方法:建立脑缺血模型,分别于缺血1天及7天测定血液中SOD及MDA含量及用免疫组织化学法观察CREB的表达,以阳性细胞计数作为观察指标。结果:脑缺血后,MDA明显增加,SOD活性则明显降低,提示补阳还五汤能明显降低组织内的MDA和增加SOD活性,并上调CREB的水平,促进其活化表达。超微补阳还五汤以1/2传统生药剂量时即可达到传统补阳还五汤的效果,等剂量时效果明显增加。结论:复方超微补阳还五汤能通过降低组织内的MDA和增加SOD活性,并上调CREB的活化对大鼠脑缺血损伤进行保护,其作用优于传统补阳还五汤。     

超微补阳还五汤对脑缺血模型大鼠SOD、MDA及NGF的影响

目的:探讨超微补阳还五汤对脑缺血模型大鼠脑组织神经生长因子(NGF)、血浆丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)的影响。方法:建立脑缺血模型,药物治疗后测定血液中SOD及MDA含量及用免疫组织化学法观察NGF的表达。结果:脑缺血后MDA明显增加,SOD活性降低;超微补阳还五汤能明显降低组织内的MDA和增加SOD活性,并增强NGF的表达,超微补阳还五汤以1/2传统生药剂量时即可达到传统补阳还五汤的效果,等剂量时效果明显增加。结论:超微补阳还五汤能通过降低组织内的MDA和增加SOD活性,并增强NGF的表达对大鼠脑缺血损伤进行保护,其等效剂量优于传统补阳还五汤。     

补阳还五汤联合间充质干细胞移植对脑缺血再灌注损伤大鼠bFGF mRNA表达的影响

目的探讨补阳还五汤联合骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对脑缺血损伤的神经保护机制。方法将48只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、MSCs移植组(MSCs组)、补阳还五汤联合MSCs移植组(联合组),每组12只。建立局灶性脑缺血再灌注模型,MSCs组、联合组从尾静脉注入MSCs,联合组并给予补阳还五汤,给药10天后检测碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因表达情况。结果 MSCs组与联合组均能上调大鼠脑组织bFGFmRNA表达水平,与模型组和假手术组相比,差异均有统计学意义(P<0.05),联合组表达明显高于MSCs组(P<0.05)。结论补阳还五汤联合MSCs移植能通过上调脑组织bFGFmRNA表达水平,促进内源性神经营养因子bFGF基因表达而起对脑缺血再灌注损伤起保护作用。     

补阳还五汤对脑缺血大鼠神经功能及细胞形态的影响

目的:探讨补阳还五汤对局灶性脑缺血大鼠的神经保护作用。方法:189只大鼠随机分为假手术组、模型组和补阳还五汤组,每组63只,常规饲养1周后,采用线栓法制备脑缺血大鼠模型。补阳还五汤组动物于术后2 h后开始给药,给药剂量为5 g.kg-1.d-1,每日ig 1次。各组又分为三个亚组即分别于给药后7,14,21 d 3个时间点处死动物,观察各组不同时间点的脑梗死面积、神经功能评分及脑组织形态学变化。结果:各时间点补阳还五汤组脑梗死面积明显小于同时相模型组,其神经功能评分也均较模型组,差异具有统计学意义(P<0.05);且补阳还五汤组海马和皮质细胞形态明显改善,细胞排列较模型组整齐。结论:补阳还五汤促进脑缺血损伤后神经恢复和组织修复,具有脑保护作用。     

补阳还五汤对急性脑缺血大鼠血管新生影响的实验研究

目的探讨补阳还五汤对急性脑缺血大鼠血管新生的影响。方法采用大脑中动脉线栓法建立急性脑缺血大鼠模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组和尼莫地平组,给予不同处理,给药7d后处死大鼠,采用免疫组织化学法观察脑缺血区微血管密度（MVD）的变化及脑组织血管内皮生长因子（VEGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的表达情况,同时评价动物神经功能。结果与模型组比较,补阳还五汤组能改善模型大鼠的神经功能缺失症状,MVD显著升高,并增强VEGF和bFGF的表达。结论补阳还五汤可促进急性脑缺血大鼠缺血区血管新生,增强脑组织VEGF和bFGF的表达,可能是其抗脑缺血的作用机制之一。