低密度脂蛋白亚组份对血管细胞黏附分子-1表达的影响

背景探讨低密度脂蛋白( low density lipoprotein, LDL)亚组份与人脐静脉内皮细胞( human umbilical vein endothelial cells, HUVEC)的血管细胞黏附分子-1( vascular cell adhesion molecule-1, VCAM-1)表达之间的关系,初步探讨 LDL亚组份致动脉粥样硬化( atherosclerosis, AS)作用可能的分子机制. 目的观察不同 LDL亚组分对 HUVEC VCAM 1表达的影响. 设计随机对照的实验研究. 地点和对象本实验在北京市心肺血管疾病研究所动脉硬化研究室进行,体外培养 HUVEC. 干预体外培养 HUVEL,分别加入 25,50,100 mg/L的小而密低密度脂蛋白( small dense low density lipoprotein, sLDL)、大而轻 LDL、氧化 sLDL和氧化大而轻 LDL,共孵育 12 h和 24 h. 主要观察指标采用细胞表面 ELISA和 RT-PCR分别测定 VCAM-1蛋白表达及 mRNA水平. 结果 HUVEC经 25,50,100 mg/L的 sLDL刺激 12 h后, VCAM 1表达呈浓度依赖性明显增高( 0.233± 0.036,0.260± 0.052,0.365± 0.036,F=20.883,P< 0.05).刺激 12h后,与大而轻 LDL 0.231± 0.075, oxsLDL 0.287± 0.034及氧化大而轻 LDL0.258± 0.043相比, sLDL明显诱导 HUVEC的 VCAM 1表达 (F=17.211,P< 0.05). 结论 sLDL显著诱导人脐静脉内皮细胞 VCAM 1的表达,可能是 sLDL更易引起动脉粥样硬化的机制之一.     

低密度脂蛋白亚组份对血管细胞黏附分子-1表达的影响

背景：探讨低密度脂蛋白(LOW DENSITY LIPOPROTEIN，LDL)亚组份与人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells，HUVEC)的血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1)表达之间的关系，初步探讨LDL亚组份致动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)作用可能的分子机制。目的：观察不同LDL亚组分对HUVEC VCAM-1表达的影响。设计：随机对照的实验研究。地点和对象：本实验在北京市心肺血管疾病研究所动脉硬化研究室进行，体外培养HUVEC。干预：体外培养HUVEL，分别加入25，50，100mg／L的小而密低密度脂蛋白(small dense low-density lipoprotein，sLDL)、大而轻LDL、氧化sLDL和氧化大而轻LDL，共孵育12h和24h。主要观察指标：采用细胞表面ELISA和RT—PCR分别测定VCAM-1蛋白表达及mRNA水平。结果：HUVEC经25，50，100mg／L的sLDL刺激12h后，VCAM-1表达呈浓度依赖性明显增高(0．233&;#177;0．036，0．260&;#177;0．052，0．365&;#177;0．036，F=20．883，P&;lt;0．05)。刺激12h后，与大而轻LDL0．231&;#177;0．075。oxsLDL 0．287&;#177;0．034及氧化大而轻LDL 0．258&;#177;0．043相比，sLDL明显诱导HUVEC的VCAM-1表达(F=17．211，P&;lt;0．05)。结论：sLDL显著诱导人脐静脉内皮细胞VCAM-1的表达，可能是sLDL更易引起动脉粥样硬化的机制之一。     

低密度脂蛋白与动脉粥样硬化关系的研究进展

低密度脂蛋白 (LDL)是致动脉粥样硬化的主要危险因素 ,近年来发现氧化LDL及小、密LDL(sLDL)具有更强烈的致动脉粥样硬化 (AS)作用 ,并成为AS研究的热点之一。 195 2年Glaind等首先发现在人类的大动脉粥样硬化灶存在着过氧化脂质 (LPO) ,静脉注射脂质过氧化物可以诱发动脉粥样硬化。巨噬细胞吞噬LDL变成泡沫细胞是动脉粥样硬化的根本改变 ,它主要是通过其表面存在着“清道夫”受体 ,大量吞噬氧化LDL ,这种吞噬方式无负反馈调节机制 ,所以大量的胆固醇蓄积于巨噬细胞内 ,最终形成泡沫细胞 ,氧化LDL可通过多种途径参与动脉粥样硬化得已形成与发展。抗氧化治疗可以抑制动脉粥样硬化的发生、发展。发现LDL的多样性是关于LDL本身研究的一大进展 ,LDL是由大小及理化性质不尽相同的颗粒组成 ,LDL的密度范围为 1.0 19～ 1.0 6 3 ,用不同的分析方法可将其分成 3～ 10个亚型 ,从冠心病关系来看可以分为小、密LDL(smalldenseLDL) ,大、轻LDL(LargerdenseLDL)及介于两者之间的亚组分为中间LDL。sLDL具有强烈的致AS作用 ,sLDL增高是血脂代谢紊乱的重要表现。     

过氧化物酶增殖物激活受体α激动剂降低高糖诱导的黏附因子的表达

目的探讨过氧化物酶增殖物激活受体(PPAR)α激动剂对高糖条件下人血管内皮细胞细胞间黏附因子-1(ICAM-1)和血管黏附因子-1(VCAM-1)表达的影响及相关机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞和HL-60细胞,酶联免疫吸附试验(ELISA)、HL-60细胞黏附试验及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测ICAM-1和VCAM-1的表达,Western blotting和共聚焦显微镜方法探讨NF-κB通路IκB、磷酸化-IκB蛋白水平及p65亚基的移位,流式细胞仪和共聚焦显微镜方法检测细胞内活性氧离子(ROS)水平,化学发光法测定烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶的活性。结果 (1)高糖(33 mmol/L)干预24 h能够显著增加内皮细胞ICAM-1和VCAM-1的表达;(2)PPARα激动剂非诺贝特、NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)和NADPH氧化酶抑制剂二联苯碘(DPI)显著抑制高糖诱导的ICAM-1和VCAM-1的表达;(3)高糖能够诱导内皮细胞IκBα的降解、磷酸化-IκBα蛋白水平的增加;另外,高糖可以显著增加内皮细胞NADPH氧化酶活性和细胞内ROS水平;非诺贝特则呈浓度依赖性的逆转高糖引起的上述效应。结论 PPARα激动剂非诺贝特通过抑制NF-κB通路和NADPH氧化酶的激活降低高糖诱导的人血管内皮细胞炎症因子ICAM-1和VCAM-1的表达。     

人脐静脉内皮细胞黏附分子1表达与活血中药对单核-血管内皮细胞黏附性能的干预

目的:观察活血注射液对氧化型低密度脂蛋白损伤人脐静脉内皮细胞后血管细胞黏附分子1的表达及与人单核细胞黏附的影响,探讨中药复方制剂防治动脉粥样硬化的作用机制。方法:实验于2004-03/12在北京中医药大学东直门医院中医内科学教育部重点实验室完成。①实验材料:活血注射液由丹参、川芎、红花、赤芍组成,比例为丹参2,其余药物为1,含生药2000g/L。新生儿脐带(由中日友好医院妇产科提供,产妇及其家属知情同意,实验符合赫尔辛基宣言中的伦理学标准)。②实验过程:以培养人脐静脉内皮细胞作为靶细胞,在内皮细胞培养基中加入氧化型低密度脂蛋白制备细胞损伤模型。③实验评估:采用蛋白定量法检测人脐静脉内皮细胞与单核细胞的黏附率[将人脐静脉内皮细胞,用M199培养液(对照组)和含不同浓度(10,20,40ml/L)的活血注射液、氧化型低密度脂蛋白等实验因子的培养液(实验组)温育12,24h,再加含单核细胞的M199培养液];反转录聚合酶链反应检测人脐静脉内皮细胞的血管细胞黏附分子1的mRNA表达;用流式细胞仪测定人脐静脉内皮细胞的血管细胞黏附分子1的蛋白表达[(将人脐静脉内皮细胞,分为对照组、氧化型低密度脂蛋白组与氧化型低密度脂蛋白 活血注射液(终浓度分别为10,20,40ml/L)组,分别作用12,24h)。结果:①人单核细胞与人脐静脉内皮细胞的黏附率在氧化型低密度脂蛋白作用12,24h后升高,均明显高于对照组(P<0.01),不同剂量活血注射液可明显抑制人单核细胞与人脐静脉内皮细胞的黏附率,与氧化型低密度脂蛋白组相比差异均有显着性(P<0.01),这种作用随着剂量的增加而增强。②氧化型低密度脂蛋白能明显上调人脐静脉内皮细胞的血管细胞黏附分子1的mRNA和蛋白表达水平,而不同剂量活血注射液能显著下调血管细胞黏附分子1的mRNA和蛋白的表达水平(P<0.05,P<0.01),与氧化型低密度脂蛋白组相比差异均有显着性(P<0.05,P<0.01),这种作用随着剂量的增加而增强。结论:氧化型低密度脂蛋白促进内皮细胞的血管细胞黏附分子1表达,活血注射液能通过下调血管细胞黏附分子1的表达抑制单核-血管内皮细胞黏附,保护人内皮细胞免受氧化型低密度脂蛋白所致毒性损伤,从而减少或抑制动脉粥样硬化的形成。     

三七总皂苷对氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞血管细胞黏附分子1表达的影响水

背景:氧化低密度脂蛋白能诱导血管内皮细胞活化和黏附分子表达,在动脉粥样硬化形成早期起重要作用.三七总皂苷在心血管系统方面具有保护血管内皮细胞、显著改善动脉粥样硬化病变程度的药理作用.目的:验证三七总皂苷对氧化型低密度脂蛋白损伤内皮细胞后血管细胞黏附分子1的表达及与人单核细胞黏附的影响.设计、时间及地点:体外实验,分组对照,于2007-03/2008-05在北京中医药大学东直门医院中医内科学教育部重点实验室完成.材料:原代人脐静脉内皮细胞为美国Cascade Biologics公司产品;三七总皂苷(血塞通冻干粉针)为黑龙江珍宝岛制药有限公司产品,成分为三七总皂苷,批号:20040207.方法:以培养原代人脐静脉内皮细胞作为靶细胞.用氧化型低密度脂蛋白造成人脐静脉内皮细胞损伤模型.将培养的人脐静脉内皮细胞分为5组:氧化型低密度脂蛋白组(100 mg/L)、氧化型低密度脂蛋白+三七总皂苷组(终浓度分别为200,100,50 mg/L)、正常对照组.主要观察指标:光镜下观察细胞形态变化,四甲基偶氮唑盐法检测细胞活性;采用蛋白定量法检测人脐静脉内皮细胞与单核细胞的黏附率;用流式细胞仪测定人脐静脉内皮细胞的血管细胞黏附分子1的蛋白表达.结果:氧化型低密度脂蛋白作用人脐静脉内皮细胞后12,24 h时,人脐静脉内皮细胞损伤明显,细胞活性显著降低,人单核细胞与人脐静脉内皮细胞的黏附率显著升高,人脐静脉内皮细胞的血管细胞黏附分了1的蛋白表达水平也均明显升高,均明显高于正常对照组(P<0.05,P<0.01),而三七总皂苷能使氧化型低密度脂蛋白损伤的人脐静脉内皮细胞形态趋于正常,活性增强,并明显降低人单核细胞与人脐静脉内皮细胞的黏附率,以及显著降低血管细胞黏附分子1的蛋白的表达水平,与氧化型低密度脂蛋白组相比均有显著性差异(P<0.05,P<0.01),这种作用随着剂量的增加而增强.结论:三七总皂苷能通过下调血管细胞黏附分子1的表达抑制单核-血管内皮细胞黏附,从而发挥对血管内皮细胞的保护作用,这可能是其治疗动脉硬化闭塞症的机制之一.     

E1A激活基因细胞阻遏子蛋白在人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用

背景:研究内皮细胞凋亡的机制及其与动脉硬化形成的关系将为动脉粥样硬化的防治提供新的思路.而E1A激活基因的细胞阻遏子蛋白在内皮细胞凋亡中的作用,目前尚未见报道.目的:探讨E1A激活基因的细胞阻遏子蛋白在去血清诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用及其调控机制.时间及地点:实验于2007-10/2008-12在解放军沈阳军区总医院全军心血管病研究所实验室完成.材料:人脐静脉内皮细胞,Phoenix amphotropic 293细胞,pLNCX-CREG和pLNCX-GFP反转录病毒真核表达载体.方法:采用持续去血清培养的方法诱导内皮细胞凋亡,用TUNEL染色和Western blot检测去血清饥饿24,48,72 h后各实验组细胞中cleave-caspase3表达;用pLNCX-CREG和pLNCX-GFP反转录病毒真核表达载体转染人脐静脉内皮细胞,并筛选稳定表达的细胞克隆;应用Western blot检测E1A激活基因的细胞阻遏子蛋白的表达,并进一步应用流式双荧光染色分析E1A激活基因的细胞阻遏子蛋白过表达在去血清诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用.主要观察指标:cleave-caspase3表达量,人脐静脉内皮细胞凋亡率.结果:成功构建了E1A激活基因细胞阻遏子过表达的人脐静脉内皮细胞模型,证实内皮细胞E1A激活基因细胞阻遏子的表达随凋亡的增加而增加,E1A激活基因细胞阻遏子过表达的人脐静脉内皮细胞去血清饥饿后凋亡较对照组明显减少.结论:E1A激活基因细胞阻遏子过表达抑制了去血清诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡,机制可能与调控P13K蛋白表达有关.     

IL-4对小鼠小胶质细胞ICAM-1表达的影响

目的探讨白细胞介素-4(IL-4)对小鼠小胶质细胞炎症因子细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达的影响。方法用IL-4与小鼠小胶质细胞共同孵育,观察不同处理组细胞形态的变化。ELISA法检测IL-4孵育小胶质细胞培养上清中ICAM-1的浓度,同时采用RT-PCR技术检测细胞ICAM-1mRNA水平。结果 IL-4与小胶质细胞共同孵育后细胞形态随孵育时间发生变化,贴壁细胞逐渐减少,IL-4减少小胶质细胞分泌ICAM-1并下调mRNA的表达水平。结论 IL-4可能通过抑制ICAM-1的产生及分泌而参与小胶质的细胞迁移过程,从而在中枢神经系统中发挥神经保护作用。     

川芎嗪对氧化低密度脂蛋白诱导的内皮细胞凋亡反应的影响

目的研究川芎嗪对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的体外动脉粥样硬化(AS)样损伤内皮细胞抗凋亡蛋白Bcl-2及促凋亡蛋白Bax表达的影响,为川芎嗪临床应用提供新的理论及实验依据。方法 ox-LDL(50 mg/L,12 h)诱导体外培养的人冠状动脉内皮细胞,加入川芎嗪(1和10μmol/L),Western blot检测川芎嗪对Bcl-2及Bax蛋白表达的影响。结果 ox-LDL可抑制AS样损伤细胞模型Bcl-2蛋白的表达(与正常对照组比较,ox-LDL模型组Bcl-2与β-actin的相对光密度比值显著降低:0.33±0.08 vs.0.58±0.09,P<0.01),增加Bax蛋白的表达(ox-LDL模型组vs.正常对照组:0.67±0.10 vs.0.21±0.05,P<0.01);川芎嗪则可有效逆转上述病理改变[川芎嗪(1和10μmol/L)显著增加Bcl-2蛋白的表达:0.55±0.06,0.61±0.10,P<0.01;显著降低Bax蛋白表达:0.15±0.09,0.18±0.06,P<0.01]。结论川芎嗪靶向内皮细胞,抑制ox-LDL诱导的AS早期内皮细胞的凋亡反应,从而有效干预AS早期泡...     

脂联素影响体外培养肝细胞乙醛氧化酶1表达的研究

目的研究脂联素(APN)对饱和脂肪酸(SFA)孵育HepG2细胞及HL-7701肝细胞乙醛氧化酶1(AOX1)分泌的影响,探讨APN对非酒精性脂肪肝脏病变(NAFLD)的治疗效果及机制。方法用100μmol/LSFA孵育细胞得到脂肪性HepG2细胞及HL-7701细胞,同时设立细胞对照组(未经100μmol/L SFA孵育)。然后采用不同浓度APN(0.5、1.0、1.5、2.5μg/mL)孵育脂肪性HepG2细胞及HL-7701细胞,将未经APN孵育的细胞作为对照。运用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测2种细胞AOX1基因表达,运用免疫印迹法检测2种细胞AOX1蛋白表达。结果与未经100μmol/L SFA孵育的对照组比较,经100μmol/L SFA孵育过的HepG2细胞及HL-7701细胞的AOX1基因及蛋白表达均明显增加(P<0.05),且HepG2细胞组明显高于HL-7701细胞组(P<0.05)。加入APN孵育细胞后,2种细胞AOX1基因及蛋白表达均明显低于未经APN孵育的对照组(P<0.05);并且随APN浓度升高,降幅增加。当APN浓度达到1.5μg/mL时,细胞AOX1表达的降低不再随APN浓度的增加而发生明显变化。在APN浓度相同的条件下,HepG2细胞组中AOX1基因及蛋白表达降低的幅度明显高于HL-7701细胞组。结论 APN能有效降低脂肪化肝脏细胞AOX1基因及蛋白表达,能很好的保护肝脏细胞,避免肝脏细胞发生NAFLD。     

siRNA沉默FOXO3a对三氧化二砷抑制内皮细胞增殖的影响

背景：课题组前期已证实As2O3可以促进乳腺癌细胞中FOXO3a因子的表达,并抑制肿瘤细胞中血管内皮生长因子的表达,但As2O3对血管内皮细胞增殖的影响,以及对血管内皮细胞中FOXO3a、血管内皮生长因子的影响尚未证实。目的：观察siRNA沉默FOXO3a对As2O3抑制人脐静脉内皮细胞增殖及血管生成的影响。方法：实验分为4组：①As2O3组：待人脐静脉内皮细胞贴壁,在含4μmol/LAs2O3的RPMI-1640培养基中培养。②control siRNA组：转染无关序列control siRNA后,细胞在含4μmol/LAs2O3的RPMI-1640培养基中培养。③FOXO3a siRNA组：转染FOXO3a siRNA后,细胞在含4μmol/LAs2O3的RPMI-1640培养基中培养。④对照组：与实验药物等体积PBS作为对照,细胞在完全培养基条件下培养。应用CCK-8方法检测细胞增殖情况,采用免疫细胞化学方法观察人脐静脉内皮细胞中FOXO3a、血管内皮生长因子蛋白的表达情况。结果与结论：与对照组相比,FOXO3a siRNA明显减弱了As2O3抑制人脐静脉内皮细胞增殖的作用,As2O3促进人脐静脉内皮细胞中FOXO3a蛋白的表达并抑制血管内皮生长因子蛋白的表达,FOXO3a siRNA处理后明显抑制FOXO3a蛋白表达且增加血管内皮生长因子蛋白表达。结果提示FOXO3a可能成为As2O3抑制肿瘤细胞增殖及血管生成治疗的重要靶点。     

ADMA对人脐静脉内皮细胞粘附功能影响的体外研究

目的观察非对称性二甲基精氨酸(ADMA)对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)粘附功能的影响。方法原代获取HUVECs,分别加入ADMA5μmol/L和10μmol/L培养48小时。测定细胞的数目、粘附和产生一氧化氮的能力。流式细胞仪检测细胞表面粘附分子的表达。结果与对照组相比,不同浓度的ADMA可显著抑制HU-VECs产生NO和粘附的能力、增强细胞表面ICAM-1和VCAM-1的表达。结论ADMA可抑制体外培养的HUVECs粘附功能。     

Estradiol enhances leukocyte binding to tumor necrosis factor (TNF)-stimulated endothelial cells via an increase in TNF-induced adhesion molecules E-selectin, intercellular adhesion molecule type 1, and vascular cell adhesion molecule type 1.

Adhesion of leukocytes to endothelial cells is a critical step in the development of acute and chronic inflammatory lesions. We report here that estradiol treatment of cultured human umbilical vein endothelial cells stimulated up to a twofold increase in TNF-induced adhesion of both polymorphonuclear leukocytes and PMA-activated peripheral blood mononuclear cells. This effect was more evident (threefold increase) when endothelial cells were cultured on the basement membrane glycoprotein laminin. Progesterone, but not testosterone, had a similar stimulatory effect. Estradiol also promoted a slight increase in interferon gamma-stimulated endothelial cell adherence for peripheral blood mononuclear cells, but no effect of estradiol was observed when adhesion of leukocytes to endothelial cells was stimulated with IL-1 or IL-4. The estradiol-induced increase in leukocyte binding to human umbilical vein endothelial cells was partially blocked by antibodies to the adhesion molecules E-selectin, intercellular adhesion molecule type 1 (ICAM-1), and vascular cell adhesion molecule type 1 (VCAM-1). Indirect immunofluorescence techniques showed that estradiol produces an increase in TNF-induced cell surface expression of these molecules. Northern blot analysis demonstrated a transient increase in TNF-induced expression of mRNA for E-selectin, ICAM-1, and VCAM-1 in endothelial cells treated with estradiol. Our data demonstrate that estradiol has important regulatory functions in promoting leukocyte-endothelial cell interactions that might contribute to the observed predominance in females of some autoimmune inflammatory diseases.     

Lysophosphatidylcholine, a component of atherogenic lipoproteins, induces mononuclear leukocyte adhesion molecules in cultured human and rabbit arterial endothelial cells.

Accumulation of monocyte-derived foam cells in focal areas of the arterial intima is one of the key events in early atherogenesis. We have examined the effect of lysophosphatidylcholine (lyso-PC; lysolecithin), a major phospholipid component of atherogenic lipoproteins, on the expression of adhesion molecules for monocytes, such as vascular cell adhesion molecule-1 (VCAM-1) and intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1), in cultured human and rabbit arterial endothelial cells. Cultured rabbit aortic endothelial cells treated with lyso-PC showed increased mRNA and cell surface expression of VCAM-1 and ICAM-1, which was associated with increased adhesion of monocytes and monocyte-like cells (THP-1, U937). In cultured human iliac artery endothelial cells, lyso-PC similarly induced both VCAM-1 and ICAM-1, whereas in umbilical vein endothelial cells only ICAM-1 was up-regulated. In all endothelial cells examined, the effect of lyso-PC on E-selectin (endothelial-leukocyte adhesion molecule-1) expression was negligible, thus differentiating this stimulus from other endothelial activators, such as interleukin 1, tumor necrosis factor, or lipopolysaccharide. We conclude that lyso-PC can selectively induce VCAM-1 and ICAM-1 in arterial endothelial cells and that this action, in addition to its monocyte chemoattractant activity, may play an important role in monocyte recruitment into atherosclerotic lesions.     

KLF4反义基因对内皮细胞血管性血友病因子、纤溶酶原抑制物-1表达的影响

目的 探讨类果蝇分节因子4(Kroppel-like factor4,KLF4)反义基因对原代人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中血管性血友病因子(vWF)、纤溶酶原抑制物-1(PAI-1)表达的影响,明确KLF4在内皮细胞调节血栓形成中的作用.方法 胰蛋白酶消化法分离和培养原代HUVEC,采用同源重组方法 构建携带反义KLF4基因腺病毒,实时定量(Real-time)PCR、Western blot、激光共聚焦显微镜法检测转染KLF4反义基因后内皮细胞KLF4、PAI-1、vWF mRNA和蛋白的表达.结果 成功构建出携带反义KLF4基因片段的重组腺病毒(Ad-反义KLF4),以感染复数值200的重组腺病毒感染HUVEC,KLF4 mRNA相对表达水平由0.59±0.01下降至0.44±0.06,同时HUVEC中vWF mRNA相对表达水平升至1.17±0.05,与感染携带绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad-GFP)组(1.04±0.03)相比,差异均具有统计学意义(P<0.05).而HUVEC中PAI-1 mRNA相对表达水平增加至0.73±0.01,与感染Ad-GFP组(0.67±0.04)相比,差异无统计学意义(P>0.05).与感染Ad-GFP组相比,感染Ad-反义KLF4的HUVEC中vWF、PAI-1蛋白表达水平明显增加.结论 KLF4反义基因可下调KLF4表达,促进内皮细胞中vWF、PAI-1的表达.KLF4可能参与内皮细胞抗栓作用的转录调节.     

碱性成纤维细胞生长因子荧光真核表达载体构建及对过氧化氢诱导血管内皮细胞凋亡的影响

背景：已证实外源性碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）可抑制血管内皮细胞凋亡。目的：构建表达bFGF的荧光真核表达载体,探讨其对过氧化氢（H2O2）诱导的血管内皮细胞凋亡和凋亡相关蛋白的影响。方法：通过基因亚克隆构建荧光真核表达载体pcDNA3.1-bFGF-GFP,利用脂质体介导将bFGF基因导入人脐静脉内皮细胞内,通过荧光观察和RT-PCR检测基因的表达。实验分为3组,对照组（转染pcDNA3.1）、过氧化氢组（转染pcDNA3.1＋H2O2）和bFGF转染＋过氧化氢组（转染pcDNA3.1-bFGF-GFP＋H2O2）,流式细胞术测定细胞凋亡率,Western blot检测caspase-3 P17活性亚单位和Bax蛋白表达。结果与结论：成功构建荧光真核表达载体pcDNA3.1-bFGF-GFP,该载体转染人脐静脉内皮细胞后,bFGF mRNA显著增加,并可观察到绿色荧光。与对照组相比,过氧化氢组细胞凋亡率和caspase-3 P17活性亚单位、Bax蛋白的表达量都明显增加（P〈0.01）,而bFGF转染＋过氧化氢组的细胞凋亡率和caspase-3 P17活性亚单位、Bax蛋白的表达量则比过氧化氢组显著降低（P〈0.01）。证实bFGF基因转染能抑制过氧化氢诱导的血管内皮细胞凋亡,其作用机制可能与调控Bax蛋白表达和caspase-3活性有关。     

Effect of antisense KLF4 gene on the expression of vWF and PAI-1 in endothelium cells

OBJECTIVE: To investigate the effect of antisense KLF4 (Krüppel-like factor 4) gene on the expression of vWF and PAI-1 in endothelial cells. METHODS: Human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) were isolated from umbilical vein and cultured in endothelial cell medium. The recombinant adenoviral plasmid carrying the antisense KLF4 gene was constructed by homologous recombination. KLF4, PAI-1 and vWF mRNAs and proteins expression were detected by real time-PCR, Western blot, and confocal laser microscopy. RESULTS: Recombinant adenoviral plasmid carrying the antisense KLF4 gene (Ad-KLF4AS) was constructed successfully. Compared with the control Ad-GFP infection group, Ad-KLF4AS at a 200 MOI can down-regulate the expression of KLF4 gene in HUVEC (from 0.59 ± 0.01 to 0.44 ± 0.06) (P < 0.05), and increase vWF mRNA (from 1.04 ± 0.03 to 1.17 ± 0.05) and protein expression (P < 0.05). PAI-1 mRNA and protein of Ad-KLF4AS infection group was higher than that of Ad-GFP infection group. PAI-1 mRNA between the two groups had no significant difference (P > 0.05). CONCLUSIONS: Down-regulation of KLF4 leads to increase in expression of vWF and PAI-1 in endothelial cells. KLF4 might play an important role in regulation of endothelial coagulant function.     

地氟醚预处理对缺氧/复氧损伤时核因子-κB转导通路效应分子的影响

目的：探讨地氟醚预处理对于核因子（NF）-κB信号转导通路激活后效应分子的影响。方法：选用人脐静脉内皮细胞株（ECV304）。将细胞分为5组：（1）空白对照组;（2）缺氧/复氧（A/R）组;（3）A/R＋肿瘤坏死因子-α（TNF-α,10ng.mL-1）刺激组（A/R＋TNF-α组）;（4）地氟醚1.0MAC预处理＋A/R组（Des＋A/R组）;（5）地氟醚1.0MAC预处理＋A/R＋TNF-α（10ng.mL-1）刺激组（Des＋A/R＋TNF-α组）。应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法分别检测各组细胞的细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）和白细胞介素-8（IL-8）的基因表达水平。结果：A/R组较对照组细胞的ICAM-1、VCAM-1和IL-8mRNA表达水平均有所增加;而经地氟醚预处理后,Des＋A/R组细胞的mRNA表达较A/R组有明显降低。结论：地氟醚预处理可抑制TNF-α刺激的内皮细胞表面黏附分子及炎性介质的基因表达水平。