牛磺酸通过调控细胞周期蛋白抑制肝星状细胞增殖

目的进一步研究牛磺酸对肝星状细胞(HSC)增殖抑制作用的机制。方法用四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖;流式细胞仪测定细胞周期;免疫细胞化学和实时荧光定量PCR测定细胞周期调控蛋白Cyclin D1和P21waf1表达。结果牛磺酸对HSC增殖具有抑制作用,在浓度为5、10、20,30、40、50 mmol/L 作用48h时的抑制率分别为6.7%、14.4%、23.3%、32.2%、36.7%和45.6%,t值为2.939～6.369,P<0.05～0.01。流式细胞仪检测发现牛磺酸可阻滞HSC由G0/G1期向S期转换,使G0/G1期细胞增多,S期细胞减少。G0/G1期、S期细胞,牛磺酸浓度为40 mmol/L时,分别为(68.2±1.4)%和(26.2±1.3)%,与对照组分别为(56.2±1.7)%和(38.5±0.8)%,差异有统计学意义,t≥5.422,P<0.01。牛磺酸可抑制Cyclin D1表达、促进P21waf1表达,用免疫细胞化学染色结合数码图像分析系统软件分析发现牛磺酸浓度在40 mmol/L时HSC的Cyclin D1表达的平均吸光度为0.13±0.02,P21waf1为0.19±0.02,对照组分别为0.18±0.02和0.14±0.01,差异有统计学意义,t=6.689和t=6.528,P<0.01。实时荧光定量PCR检测也发现经40 mmol/L牛磺酸处理的HSC的Cyclin D1 mRNA表达量(拷贝数与106磷酸甘油醛脱氢酶比值)降低为5776.7±3345.0,对照组为18 400.6±1374.8,而P21waf1 mRNA表达量(拷贝/106磷酸甘油醛脱氢酶)增多为44 866.7±3910.7,对照组为16 933.3±960.9。结论牛磺酸通过抑制Cyclin D1表达、促进P21waf1表达,使HSC阻滞于G0/G1期,而抑制HSC增殖。     

耐药乳腺癌细胞细胞周期分析及调控异常的研究

目的 分析耐药乳腺癌细胞细胞周期及细胞周期调控异常特点.方法 用流式细胞仪分析耐药乳腺癌细胞的细胞周期特点,运用相应的抗体通过蛋白电泳及Western 印迹检测Cyclin E、A,P21/WAF1和CDK2在耐药乳腺癌细胞中的表达.结果 细胞周期为S期的细胞明显增加,而G1期细胞减少,G2/M期变化不明显.耐药细胞中Cyclin E、CDK2、P21/WAF1蛋白质的表达升高,Cyclin A无明显变化.结论 S期细胞增加是耐药乳腺癌细胞细胞周期改变特点,Cyclin E、 P21/WAF1和CDK2共同参与了耐药乳腺癌细胞S期的调控.     

角质细胞生长因子在常染色体显性遗传性多囊肾病肾组织中的表达

常染色体显性遗传性多囊肾病 (ADPKD)是一类常见的遗传性肾脏疾病。本研究通过观察角质细胞生长因子(KGF)在ADPKD患者肾囊肿组织中的表达及其对ADPKD囊肿衬里上皮细胞的体外作用,初步探讨KGF在ADPKD发病机制中的作用。一、材料和方法1 材料:A组:取 2002年 1月至 12月在我院     

肾上腺髓质素对大鼠肝星状细胞表达细胞周期蛋白的影响

目的探讨肾上腺髓质素(ADM)对活化肝星状细胞(HSC)表达细胞周期蛋白的影响。方法采用不同浓度的ADM对HSC-T6细胞进行干预12h、24h和48h。采用MTT法检测HSC-T6细胞增殖;采用SABC法检测细胞增殖核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和细胞周期素依赖性激酶抑制因子P21waf1的表达。结果在ADM10-7mol/L浓度下作用12h,24h,48h,细胞生长抑制率逐渐增加(分别是7.88%,17.58%,18.79%);在ADM10-7mol/L作用24h时,HSC的PCNA、cyclin D1和P21waf1表达的平均光密度分别为0.387±0.023、0.454±0.029和0.508±0.011,而对照组分别为0.246±0.030、0.209±0.014和0.401±0.033(t值分别为5.149、5.752和5.299,P<0.05),差异有显著性。相关性分析表明,PCNA和cyclinD1的变化呈正相关趋势(r=0.834,P<0.05),而PCNA和P21waf1呈负相关趋势(r=-0.770,P<0.05),cyclinD1和P21waf1呈负相关趋势(r=-0.796,P<0.05)。结论肾上腺髓质素可抑制HSC-T6细胞增殖。ADM作用HSC可能通过调控HSC的细胞周期,抑制PCNA和cyclinD1表达,促进P21waf1表达,从而发挥抑制HSC增殖作用。     

siRNA靶向干扰ROBO1基因表达对食管癌细胞周期、增殖及相关蛋白的影响

目的研究siRNA靶向干扰轴突导向受体蛋白(ROBO)1基因表达对食管癌EC109细胞增殖、细胞周期的影响及可能作用机制。方法实验将食管癌EC109细胞随机分为空白组、对照组、siRNA-ROBO1组,采用脂质体将阴性siRNA和siRNAROBO1转染EC109细胞;Western印迹检测ROBO1、细胞核相关抗原Ki-67(Ki-67)、增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白(Cyclin)D1蛋白的表达;CCK-8实验检测细胞的增殖活力;流式细胞仪检测EC109细胞周期的变化。结果干扰ROBO1表达后,EC109细胞中ROBO1蛋白的表达量较空白组显著降低(P0.05),细胞增殖活性显著降低(P0.05),G0/G1期细胞显著增加(P0.05),G2/M期细胞显著降低(P0.05),且siRNA-ROBO1组细胞中Ki-67、PCNA、Cyclin D1表达量较空白组明显降低(P0.05)。结论ROBO1可能通过影响食管癌细胞增殖、周期相关蛋白水平使细胞周期阻滞在G0/G1期,从而抑制食管癌细胞增殖。     

姜黄素对血管平滑肌细胞增殖及cyclinD1和p21waf1/cip1蛋白表达的影响

目的 观察姜黄素（curcumin）抑制大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和诱导细胞周期停滞的作用,以及对细胞周期蛋白cyclinD1,p21waf1/cip1表达的影响。方法 采用组织贴块法体外培养大鼠VSMC,MTT法测定姜黄素对VSMC增殖的抑制作用,流式细胞仪分析细胞周期分布,Western印迹法检测cyclinD1,p21waf1/cip1蛋白的变化。结果 MTT示不同浓度姜黄素(7.5～120 μmol/L)在24～72 h范围内,浓度和时间依赖性抑制VSMC增殖;30 μmol/L以上浓度姜黄素显著抑制增殖的VSMC细胞周期进程,使S及G2/M期减少(P<0.05),G0/G1期增加(P<0.05);30 μmol/L的姜黄素可抑制cyclinD1表达,促进p21waf1/cip1蛋白表达。结论 姜黄素具有明确的抑制VSMC增殖和细胞周期停滞的作用,其与cyclinD1,p21waf1/cip1蛋白变化有关。     

LOXL2基因沉默对人胃癌细胞株BGC823增殖的影响及其机制

目的观察赖氨酰氧化酶样蛋白2(LOXL2)基因沉默后人胃癌细胞株BGC823增殖情况变化,并探讨其相关机制。方法培养并收集人胃癌细胞株BGC823、正常胃上皮细胞株GES-1,采用real-time PCR检测LOXL2 mRNA,Western blotting法检测LOXL2蛋白。将BGC823细胞分为实验组、阴性组、对照组,其中实验组、阴性组分别转染LOXL2 siRNA、NS siRNA,对照组仅加入Lipofectamine2000试剂。继续培养48 h后,采用MTT实验观察细胞增殖抑制情况,流式细胞术观察细胞周期分布,采用real-time PCR检测增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期素D1(Cyclin D1)mRNA,采用Western blotting法检测PCNA、Cyclin D1蛋白。结果 BGC823细胞中LOXL2 mRNA及蛋白相对表达量均高于GES-1细胞(P均<0.05)。与对照组相比,实验组、阴性组细胞增殖抑制率分别为48.32%±3.91%、8.86%±2.98%。实验组G0/G1期细胞百分比高于阴性组与对照组,S期细胞百分比低于阴性组与对照组(P均<0.05)。实验组细胞中PCNA、Cyclin D1 mRNA及蛋白相对表达量均低于阴性组和对照组(P均<0.05)。结论 LOXL2基因沉默后,BGC823细胞增殖受到抑制,其机制可能与下调PCNA、Cyclin D1 mRNA及蛋白表达有关。     

正常月经周期各时相人子宫内膜上皮细胞Cyclin G1蛋白及其mRNA的表达

目的观察正常月经周期各时相人子宫内膜上皮细胞中细胞周期素G1（Cyclin G1）蛋白及其mRNA的表达特点,并探讨其意义。方法分别采用免疫组化法和RT-PCR技术检测正常妇女月经周期不同时相子宫内膜Cyclin G1蛋白及其mRNA。结果 Cyclin G1蛋白在增殖期子宫内膜上皮细胞仅有微弱表达或无表达,在分泌早期其表达逐渐增多,到分泌中晚期呈高表达,且定位在细胞核内。Cyclin G1 mRNA的表达与Cyclin G1蛋白的表达一致。结论 Cyclin G1在人正常子宫内膜上皮细胞的表达具有明显的时相特点,其在子宫内膜的表达特点与孕激素周期性分泌一致,可能对子宫内膜上皮细胞的增殖具有负调控作用。     

ZNF217在非小细胞肺癌细胞中的表达及其对细胞增殖活性和克隆形成能力的影响

目的研究锌指蛋白(ZNF)217在非小细胞肺癌细胞中的表达及其对细胞增殖活性及克隆形成能力的影响。方法以Real-time PCR和Western印迹检测ZNF217在非小细胞肺癌细胞和正常人肺上皮细胞中的表达变化。短发夹RNA(shRNA)-ZNF217慢病毒干扰载体感染非小细胞肺癌细胞,Real-time PCR和Western印迹检测干扰效果。MTT检测细胞增殖变化,细胞克隆实验检测细胞克隆能力变化,流式细胞术检测细胞周期和凋亡变化,Western印迹检测细胞中p21、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白水平。结果非小细胞肺癌细胞中ZNF217表达水平明显高于正常人肺上皮细胞(P0.05)。shRNA-ZNF217慢病毒干扰载体可以成功下调非小细胞肺癌细胞中ZNF217的表达水平。沉默ZNF217后的非小细胞肺癌细胞的增殖能力降低,细胞克隆能力也降低,细胞G1期比例升高,细胞凋亡率也升高,细胞中p21蛋白水平升高,Cyclin D1蛋白水平下降,Bax蛋白水平也升高。结论 ZNF217在非小细胞肺癌细胞中高表达,沉默其表达可以抑制非小细胞肺癌细胞增殖和克隆形成能力,阻碍细胞G1期向S期进展,诱导细胞凋亡。     

HO-1活性改变对肝癌细胞周期调控因子CKS1和Cyclin D的影响

目的探讨血红素加氧酶(HO)-1活性改变对肝癌细胞株Hep G2细胞周期蛋白(Cyclin)依赖性激酶调节亚基(CKS)1和Cyclin D的影响。方法采用靶向抑制HO-1的小分子RNA(siRNA)沉默细胞癌Hep G2细胞HO-1基因的表达,应用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)测定Hep G2细胞的增殖情况,应用RT-PCR法测定HO-1、CKS1和Cyclin D mRNA,应用Western印迹检测HO-1、CKS1和Cyclin D蛋白表达水平。结果 MTT实验结果显示,HO-1 siRNA转染组细胞转染后24 h和48 h的吸光度较空白对照组显著降低(P0.01),HO-1 siRNA转染组细胞转染后48 h的HO-1、CKS1和Cyclin D mRNA水平较空白对照组显著降低(P0.01),HO-1 siRNA转染组细胞转染后48 h的HO-1、CKS1和Cyclin D蛋白水平较空白对照组显著降低(P0.01)。结论 HO-1的活性降低可抑制肝癌Hep G2细胞的增殖,其调控作用可能通过降低Hep G2细胞CKS1和Cyclin D表达而实现。     

State of knowledge of helminth fauna of freshwater fishes of Poland

A total 89 fish and lamprey species has been recorded from Polish freshwater habitats. Twenty-seven of them (30.3%) have not been surveyed for parasitic helminthes. Some of the latter fishes are either rare or not easily accessible. Other live only in specific habitats in scattered localities. An important obstacle for studying parasite faunas of some fishes may be their status on an endangered species. Among the non-surveyed fishes, are those which have been relatively recently introduced to Poland or migrated there on their own. The present paper attempts to review all hitherto not studied helminthologically fish species, their habitats, localities and current protection status.     

高血压降压治疗目标的再认识

根据传统的高血压水平的定义,1993年WHO高血压治疗指南提出血压控制目标为<140/90mm Hg(1mm Hg=0.133kPa),但是并非所有患者都必须将血压降至同一水平,而应根据患者情况进行个体化治疗。Framingham进行的一项长达10～12年的心血管事件研究发现,第5年后,正常上限血压[收缩压(SBP