M3受体通过激活MEK1/2-ERK1/2信号通路促进H9c2心肌细胞生存

目的研究毒蕈碱型胆碱受体(M受体)对H9c2心肌细胞MEK1/2-ERK1/2信号通路的调控作用及其对细胞活力的影响。方法 H9c2心肌细胞用非选择性或选择性M受体拮抗药处理30 min之后,以氨甲酰胆碱刺激细胞,然后用Western Blot检测全细胞蛋白质中MEK1/2和ERK1/2磷酸化水平的变化,采用Alamar Blue法检测细胞活力。结果以氨甲酰胆碱刺激H9c2心肌细胞能显著增加MEK1/2和ERK1/2的磷酸化水平,这种活化作用可被非选择性M受体拮抗药阿托品完全阻断;M3受体选择性拮抗药DAU 5884可以阻断氨甲酰胆碱对MEK1/2-ERK1/2的激活,但M1、M2和M4受体的选择性拮抗药则没有这种阻断作用;在无血清的培养基中,氨甲酰胆碱能增加H9c2心肌细胞的生存能力,这种细胞保护作用可被阿托品和DAU 5884消除。结论在H9c2心肌细胞中,氨甲酰胆碱通过M3受体调控MEK1/2-ERK1/2信号通路,并由此促进细胞的生存。     

甘精胰岛素抗胰岛β细胞脂性凋亡的信号转导通路

目的研究甘精胰岛素(glargine)是否通过胰岛素特有的信号途径(磷脂酰肌醇3激酶—蛋白激酶B通路,PI3K-PKB/Akt)激活核因子κB(NF-κB),揭示其完整的抗胰岛β细胞凋亡途径,寻找保护β细胞药物靶点。方法Western blot检测glargine和普通胰岛素(RI)抗β细胞脂性凋亡时PKB/Akt活性的变化,以及PI3K抑制剂wortmmanin对NF-κB活性的影响;流式细胞仪测定wortmmanin对glargine和RI抗凋亡作用的影响。结果Glargine或者RI增加PKB/Akt活性,PI3K抑制剂wortmmanin可阻断它们的抗凋亡作用,从而证实glargine和RI的抗凋亡作用通过PI3K-PKB/Akt途径;wortmmanin可阻断glargine和RI诱导的NF-κB激活,证明它们抗脂性凋亡时PI3K-PKB/Akt通路处于NF-κB的上游。结论glargine和RI激活PI3K-PKB/Akt通路导致NF-κB途径激活,从而发挥抗凋亡作用。     

牛蒡子苷元通过抑制PI3-K/Akt信号通路诱导肝癌细胞凋亡

目的 探讨天然木脂素类化合物牛蒡子苷元对肝癌细胞生长的抑制作用及其可能机制。方法 采用不同浓度的牛蒡子苷元处理HepG2 和Hep3B 细胞,通过MTT 法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,免疫印迹检测细胞中caspase-9 和caspase-3 的活化情况以及抗凋亡蛋白的表达。进一步通过转染Akt 质粒以及使用PI3K 抑制剂,探讨牛蒡子苷元对肝癌细胞PI3K/Akt 信号通路的影响。结果 牛蒡子苷元能以浓度依赖性方式显著抑制肝癌细胞增殖并促进其凋亡,同时抑制肝癌细胞中PI3K/Akt 信号通路活化,降低抗凋亡蛋白Bcl-xL、Mcl-1 和survivin 的表达,抑制mTOR 和S6K 的磷酸化;细胞过表达Akt 活化蛋白后可抑制牛蒡子苷元的上述效应,而PI3K 抑制剂联合作用可增强上述效应。结论 牛蒡子苷元可通过抑制PI3K/Akt 信号通路下调抗凋亡蛋白的表达进而促进肝癌细胞凋亡。     

氨甲酰胆碱和毛果芸香碱对血管内皮细胞M受体基因表达的调节作用

目的：比较氨甲酰胆碱和毛果芸香碱对血管内皮细胞M受体基因表达调节作用的异同点。方法：氨甲酰胆碱和毛果芸香碱分别孵育培养的牛主动脉内皮细胞10h后，提取细胞总RNA，RT-PCR方法测定M受体5个亚型mRNA的表达。结果：M_1～M_5受体mRNA在牛主动脉内皮细胞上均有表达，氨甲酰胆碱和毛果芸香碱孵育后表达量均增加，但二者之间无差异。结论：氨甲酰胆碱和毛果芸香碱对M受体5个亚型的基因表达均发生了相同的影响，两者对M受体可能的作用尚不能解释其对血管张力的影响。     

CD44单抗A3D8对NB4细胞IL-3Rα及其下游信号通路的调节

目的探讨CD44单抗A3D8对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4细胞IL-3Rα及其下游PI3K/Akt信号通路的调节。方法以NB4细胞为研究对象,以同型抗体IgG1为阴性对照,以A3D8为实验组,A3D8诱导NB4细胞分化凋亡过程中,real-time RT-PCR方法检测IL-3Rα基因转录水平,运用Western blot法检测IL-3Rα及下游PI3K/Akt信号通路中重要信号分子,随后将PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002与A3D8联合,观察二者联合对NB4细胞PI3K/Akt信号通路的影响。结果 A3D8诱导NB4细胞分化凋亡过程,可明显下调NB4细胞中IL-3RαmRNA和蛋白表达水平,抑制PI3K/Akt信号通路;LY294002可增强A3D8对NB4细胞增殖和凋亡的抑制作用,并可进一步抑制PI3K/Akt信号通路。结论 A3D8可抑制NB4细胞IL-3Rα的转录水平和蛋白表达水平,并抑制其下游PI3K/Akt信号通路。     

PI3K/Akt信号通路在硫化氢保护PC12细胞对抗化学性缺氧损伤的作用

目的探讨硫化氢(H2S)对PC12细胞PI3K/Akt信号通路的影响及该通路在H2S神经保护中的作用。方法Western blot法检测H2S供体硫氢化钠(NaHS)处理PC12细胞诱导Akt磷酸化的水平;CCK-8比色法检测细胞存活率;应用碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率。结果应用不同浓度NaHS处理PC12细胞30 min,在50～400μmol.L-1浓度范围内,呈浓度依赖性地上调Akt磷酸化的水平,但随着NaHS浓度的增加,磷酸化Akt表达量逐渐下降;Ly294002明显抑制了NaHS对Akt磷酸化水平的上调作用。NaHS预处理可以保护PC12细胞对抗600μmol.L-1CoCl2诱导的损伤,使细胞存活率提高及细胞凋亡率降低。而在预处理前使用PI3K/Akt信号通路抑制剂Ly294002,则明显地减弱了H2S的神经细胞保护作用。结论 H2S可通过激活PI3K/Akt信号通路保护PC12细胞对抗化学性缺氧损伤。     

盐酸戊乙奎醚在老年患者全麻术前用药的应用体会

盐酸戊乙奎醚是一种长效抗胆碱药物,具有中枢及外周的抗毒蕈碱（M）和抗烟碱样（N）样作用,能选择性的作用于M1和M3亚型,而对M2亚型无明显拮抗作用,所以,与传统的抗胆碱药物相比较,具有对心血管影响小、抑制腺体分泌持久的优点.     

P13K/Akt信号转导通路的研究进展

PI3K/Akt信号传导通路在恶性肿瘤的发生、发展、治疗及转归中发挥着重要作用,PI3K作为联系胞外信号与细胞应答效应的桥梁分子,在一系列上游或旁路信号分子的影响下,作用于下游的信号分子对细胞的凋亡起非常重要的调节作用.在许多研究中已经证实PI3K和Akt的抗凋亡时,Akt的表达水平增高并通过保护细胞免受凋亡而促进癌细胞的生长.现就PI3K/Akt信号通路的组成与功能、调节以及其抗恶性肿瘤细胞凋亡作用机理等方面的研究进展作一综述.     

磷脂酸肌醇-3-激酶/蛋白激酶B信号通路在肺部疾病中的作用研究进展

磷脂酸肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路是细胞内与增殖、分化和凋亡相关的信号通路，是机体自我保护的重要通路。PI3K被激活后会使其下游分子Akt磷酸化，进而抑制细胞凋亡、调控细胞生存及增殖。PI3K/Akt信号通路在众多肺系疾病，如急性肺损伤、肺炎、哮喘、肺纤维化、肺癌等的发展进程中起着重要作用。该文对PI3K/Akt信号通路在肺系疾病进展中的作用机制进行了综述。     

PI3K/Akt通路在糖尿病心肌病中的研究进展

糖尿病心肌病(diabetic cardiomyopathy,DCM)是由糖尿病引发心肌结构和功能的改变一类原发性心肌病变,区别于冠状动脉粥样硬化、高血压以及病毒等因素引起的继发性心肌病。磷酯酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol-3 kinase,PI3K)/Akt作为人体重要的信号传导通路,参与机体正常生长繁殖、调节新陈代谢等功能。PI3K/Akt信号通路的调控因子包括沉默信息调节因子1、同源性磷酸酶-张力蛋白、糖原合成酶激酶3β、雷帕霉素靶蛋白等。DCM发病过程中,PI3K/Akt信号通路的作用包括调节血糖水平、调节脂质代谢、保护内皮细胞、减轻炎症反应、改善心功能并抵抗纤维化、调节心肌细胞凋亡等。PI3K-Akt信号通路抑制剂的研发为PI3K-Akt通路靶向治疗提供了可能性。该文综述了PI3K/Akt通路在DCM中的研究进展。     

山楂叶总黄酮对H_2O_2诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的探讨山楂叶总黄酮(FMCL)对H2O2诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及机制。方法用H2O2刺激PC12细胞使其发生凋亡,MTT法检测PC12细胞活性,倒置显微镜观察细胞生长状况和形态变化,琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯状图谱,流式细胞仪检测PC12细胞亚二倍体比率及线粒体膜电位的变化。结果与模型组比较FMCL 100、30mg.L-1两组PC12细胞活性增强,贴壁生长数量增多,而圆缩脱落者减少,未见典型DNA梯状图谱,凋亡比率下降,线粒体膜电位回升,且在一定范围内存在剂量依赖关系。结论山楂叶总黄酮可抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与抑制线粒体途径的细胞凋亡有关。     

甘西鼠尾草注射液与丹参注射液对PC12细胞H2O2损伤保护作用比较研究

目的：比较甘西鼠尾草注射液与丹参注射液对PC12细胞H2O2损伤的保护作用。方法：采用细胞株培养的方法,建立PC12细胞H2O2损伤模型,通过MTT法和流式细胞分析仪检测细胞存活率和凋亡率;采用免疫细胞化学染色法检测PC12细胞bcl-2和bax表达。结果：PC12细胞经H2O2损伤后,细胞存活率降低、凋亡率增加,甘西鼠尾草注射液与丹参注射液处理组均可有效缓解上述改变（P〈0.05）;两药均使bcl-2表达增加（P〈0.05）,bax表达减少（P〈0.05）。结论：甘西鼠尾草注射液与丹参注射液对PC12细胞H2O2损伤具有明显保护作用。其机理可能与增强凋亡抑制因子bcl-2表达、抑制凋亡促进因子bax表达,进而抑制细胞凋亡有关。     

Inhibitory effect of the phosphoinositide 3-kinase inhibitor LY294002 on muscarinic acetylcholine receptor-induced calcium entry in PC12h cells

Phosphoinositide-3 kinase (PI3K) and phospholipase C (PLC) utilize the same phosphoinositides as substrates to produce different signaling molecules. These enzymes are activated by a similar set of cell signaling mechanisms, i.e., tyrosine kinases and G proteins, and affect common cell functions, including proliferation, motility, and intracellular trafficking. Despite these similarities, the interplay between these enzymes is not well understood. To address this issue, the effects of the PI3K inhibitor LY294002 on carbachol-induced calcium increase in PC12h cells were examined. As carbachol stimulates both Gq- and Gi-coupled muscarinic acetylcholine receptors (mAChRs), PI3K and PLC are activated simultaneously in this protocol. LY294002 was found to reduce the carbachol-induced calcium increase, and the reduction was attributed to suppression of calcium entry. As LY294002 did not affect either carbachol-induced calcium release or calcium entry induced by calcium store depletion, this agent was found to suppress calcium entry directly activated by mAChRs. Although PI3K was supposed to compete for substrates with PLC, the PI3K inhibitor did not enhance PLC-dependent cellular responses. As LY294002 was still effective by treating cells after carbachol stimulation, it is likely that this agent blocks the calcium entry channels directly.     

Antioxidant effect of erythropoietin on 1-methyl-4-phenylpyridinium-induced neurotoxicity in PC12 cells

The neuroprotective effects of erythropoietin on 1-methyl-4-phenylpyridinium (MPP(+))-induced oxidative stress and apoptosis in cultured PC12 cells as well as the underlying mechanism were investigated. Treatment of PC12 cells with MPP(+) caused the loss of cell viability, which was associated with the elevation in apoptotic rate, the formation of reactive oxygen species and the disruption of mitochondrial transmembrane potential. It was also shown that MPP(+) significantly induced upregulation of Bax/Bcl-2 ratio and activation of caspase-3. In contrast, erythropoietin reversed these phenotypes and had its maximum protective effect at 1 U/ml. The effect of erythropoietin was mediated by the phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) signaling pathway since erythropoietin failed to rescue cells from MPP(+) insult in the presence of the PI3K inhibitor, LY 294002. In addition, the downstream effector of PI3K, Akt, was activated by erythropoietin, and Akt activation was inhibited by LY 294002. Furthermore, the effect of erythropoietin on reactive oxygen species levels was also blocked by LY 294002. These results show that erythropoietin may provide a useful therapeutic strategy for the treatment of oxidative stress-induced neurodegenerative diseases such as Parkinson disease.     

灯盏乙素对过氧化氢致PC12细胞损伤的抗氧化作用

目的研究灯盏乙素对过氧化氢(H2O2)诱导PC12细胞损伤的保护作用。方法建立H2O2致PC12细胞损伤模型,倒置相差显微镜下进行一般形态学观察,化学比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)释放量及细胞培养液和细胞内丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果100μmol/L H2O2诱导PC12细胞4 h,细胞呈现明显损伤形态,LDH释放量增加,细胞培养液和细胞内MDA含量升高,SOD活性降低。灯盏乙素可明显改善形态学损伤,显著降低LDH释放量、细胞培养液及细胞内MDA含量,提高SOD活性。结论灯盏乙素对H2O2诱导PC12细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与提高PC12细胞的抗氧化能力有关。     

Antagonistic action of caffeine against LY294002-induced apoptosis in cerebellar granule neurons

AIM: To study the effect of caffeine on apoptosis induced by inhibition of 1-phosphatidylinositol 3-kinase in cerebellar granule neurons. METHODS: Cerebellar granule neurons culture, agar gel electrophoresis, and stress-activated protein kinase (SAPK)/c-Jun N-terminal protein kinase (JNK) assay kit to measure SAPK/JNK activity. RESULTS: LY294002 evoked apoptosis concentration-dependently in cerebellar granule neurons. But death resulting from LY294002 was prevented by caffeine in a concentration-dependent manner. The survival effect of caffeine was not affected by inhibitors of ryanodine-sensitive Ca2+ release, nor was it inhibited by L-type channel blockers and N-methyl-D-aspartate (NMDA) receptor blocker. In addition, RP-cAMP, H89, and KN62 were not able to inhibit the protective effect of caffeine. Phosphorylation of c-Jun was necessary for the induction of apoptosis induced by LY294002 in cerebellar granule neurons. But caffeine directly inhibited the activation of JNK and decreased phospho-c-Jun in granule neurons. CONCLUSION: Caffeine inhibited the activation of JNK and decreased the phosphorylation of c-Jun to protect granule neurons from LY294002-induced apoptosis.     

咖啡因对LY294002诱导的小脑颗粒神经元凋亡的拮抗作用(英文)

目的:研究咖啡因对磷酸肌醇-3-激酶抑制剂诱导的小脑颗粒神经元凋亡的作用及机制。方法:神经元体外培养,凝胶电泳,SAPK/JNK分析盒测定JNK活性。结果:LY294002浓度依赖性地触发小脑颗粒神经元凋亡,但咖啡因具有浓度依赖性的保护作用。此作用不受ryanodine-敏感性钙释放阻断剂、L-型钙通道阻断剂和NMDA受体阻断剂的影响。而且,RP-cAMP,H89和KN62均不能抑制咖啡因的保护作用。c-Jun的磷酸化是LY294002诱导神经原凋亡所必需,咖啡因可直接抑制JNK的活性,降低神经元内磷酸化c-Jun的含量。结论:咖啡因通过直接抑制JNK活性而抑制小脑颗粒神经元的凋亡。     

自由基清除剂依达拉奉对H_2O_2损伤的PC12细胞释放谷氨酸的影响

目的:探讨H_2O_2对PC12细胞谷氨酸(GLU)释放的影响及依达拉奉的阻断作用。方法:用H_2O_2处理体外培养的PC12细胞建立细胞损伤模型,并加入不同剂量的依达拉奉(10~(-3),10~(-4),10~(-5),10~(-6), 10~(-7)mol·L~(-1)),显微镜下观察PC12细胞形态,MTT法检测活细胞存活率,GLU试剂盒测定细胞培养液中GLU的含量。结果:H_2O_2处理24 h后,细胞形态发生明显改变,胞体变小、突起缩回。MTT吸光值减小,活细胞数减少。GLU释放含量明显增加。依达拉奉组细胞形态明显改善,MTT吸光值显著增加, GLU释放含量明显降低。结论:在H_2O_2的作用下,PC12细胞GLU释放增加,加入依达拉奉后PC12细胞的GLU释放量减少。     

δ阿片受体激活对过氧化氢损伤的心肌细胞的保护作用

目的研究δ阿片受体激活剂D-丙(2)-D-亮-(5)-脑啡肽(DADLE)对过氧化氢(H2O2)损伤的心肌细胞的保护作用及其机制。方法分离乳大鼠心肌细胞,培养48h后分为正常对照、H2O2(200μmol.L-1)、H2O2+DADLE(1μmol.L-1)、H2O2+DADLE+纳曲吲哚(10μmol.L-1)和H2O2+DADLE+U0126(10nmol.L-1)组,继续培养48h。用[3H]TdR掺入法检测心肌细胞增殖反应,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡百分率,乳酸脱氢酶(LDH)活性测定试剂盒测定培养上清LDH活性,硫代巴比妥酸显色法测定细胞内丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性,Western蛋白印迹法检测细胞外信号调节激酶磷酸化(p-ERK)水平。结果①与正常对照组比较,H2O2组心肌细胞[3H]TdR掺入值明显降低,细胞凋亡率升高;培养上清LDH活性和MDA含量明显增加,SOD活性和Ap-ERK/AERK的比值降低。②与H2O2组比较,DADLE可使心肌细胞[3H]TdR掺入值升高,细胞凋亡率下降;培养上清LDH活性和MDA含量降低,SOD活性和Ap-ERK/AERK的比值升高。③分别加入δ阿片受体拮抗剂纳曲吲哚和ERK拮抗剂U0126,DADLE对上述指标的逆转作用被抑制。结论δ阿片受体激活对H2O2损伤的心肌细胞具有保护作用,其机制可能与其增强心肌细胞的抗氧化功能及促进ERK磷酸化有关。     

H_2O_2预处理对多巴胺损伤PC12细胞的适应性保护作用

目的探讨H2O2预处理对多巴胺(dopamine,DA)损伤PC12细胞的适应性保护作用。方法透射电镜、Hoechst染色和PI染色流式细胞仪(flowcytometry,FCM)观测细胞凋亡,MTT代谢率法观察细胞线粒体氧化磷酸化功能状态,Rh123染色FCM检测细胞线粒体膜电位(△Ψm)。结果50μmol·L-1DA作用PC12细胞24h后,电镜可观察到PC12细胞体积缩小,核染色质浓缩、边集,核碎裂等细胞凋亡征象。Hoechst33258染色显示,DA(50μmol·L-1)作用24h后,经H2O2预处理的PC12细胞的凋亡量较未预处理的明显减少。50、100和200μmol·L-1DA作用24h后,PC12细胞的凋亡率分别为(20.9±1.8)%、(40.5±6.4)%、(88.1±3.9)%,而经H2O2预处理的PC12细胞的凋亡率分别下降至(4.9±2.9)%、(12.0±1.4)%、(61.5±3.4)%(P<0.01)。20、40、80μmol·L-1DA作用细胞24h后,细胞MTT代谢率明显下降,而H2O2预处理抑制20、40、80μmol·L-1DA引起的PC12细胞MTT代谢率的下降(P<0.01)。50μmol·L-1DA作用24h后,PC12细胞的平均Rh123荧光强度由正常对照的(46.87±0.33)下降至(4.39±2.93),而经H2O2预处理的PC12细胞,其平均Rh123荧光强度仅下降到(10.50±0.28),下降程度明显减轻(P<0.01)。结论H2O2预处理对DA损伤PC12细胞具有适应性保护作用。