血管内皮生长因子mRNA在高氧诱导新生鼠视网膜异常新生血管化模型中的表达

目的：分析血管内皮生长因子（VEGF）在高氧诱导视网膜异常新生血管化大鼠模型中的表达变化，探讨VEGF在高氧诱导视网膜新生血管化进程中所起的作用。方法：150只SD新生大鼠随机分为氧诱导模型组和正常对照组，各75只。氧诱导模型组大鼠吸入浓度（80±2）% 7 d，随后在正常空气环境。视网膜铺片ADP酶染色了解视网膜血管形态改变；常规苏木精-伊红染色定量反映视网膜血管增生情况，判断建模成功。半定量逆转录 聚合酶链反应（RT-PCR)定量反映视网膜VEGF mRNA转录水平的变化。结果：氧诱导模型组7日龄时视网膜血管明显收缩、阻塞，出现大片无灌注区；14日龄见新生血管形成；苏木精-伊红染色见模型组14日龄大鼠视网膜出现较多新生血管内皮细胞核；RT-PCR结果显示，氧诱导模型组7 d时VEGF mRNA转录水平明显低于对照组，停氧后逐渐增强。VEGF mRNA的表达在新生血管发生前升高，随新生血管退行逐渐下降。结论：未成熟视网膜VEGF mRNA的转录水平与组织氧状态呈密切负性相关关系；停氧后视网膜的相对缺氧导致VEGF mRNA转录上调，促使视网膜血管病理性增生。VEGF的异常表达在ROP的新生血管化进程中起重要作用。［中国当代儿科杂志，2007，9（4）：371-374］     

HIF-1α干扰RNA抑制早产儿视网膜病小鼠模型视网膜新生血管形成的研究

目的：探讨特异性抑制缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）的表达对早产儿视网膜病变（retinopathy of prematurity,ROP）小鼠模型视网膜新生血管的抑制作用。方法：新生C57BL/6J小鼠48只,随机分为实验组和对照组（每组24只）,采用Smith方法制备ROP模型。生后12 d 时实验组玻璃体腔注射HIF-1α特异性小片段干扰RNA 表达载体pSUPERH1-siHIF-1α,同时对照组玻璃体注射空载体。Western blot检测两组小鼠视网膜HIF-1α和血管内皮生长因子（VEGF）的表达,FITC-Dextran荧光照影视网膜铺片和组织切片观察两组小鼠视网膜新生血管和新生血管内皮细胞核数目的差异。结果：实验组小鼠HIF-1α和VEGF的表达较对照组明显下降（P<0.01）;实验组突破视网膜内界膜血管内皮细胞核数较对照组明显减少（P<0.01）。结论：特异性抑制HIF-1α能有效抑制ROP视网膜新生血管的形成。     

基于HMGB1/NF-κB/NLRP3轴探讨褪黑素对氧诱导视网膜病变的保护作用北大核心CSCD

目的观察褪黑素(melatonin,Mel)对新生小鼠氧诱导视网膜病变(oxygen-induced retinopathy,OIR)的保护作用,并探讨HMGB1/NF-κB/NLRP3轴在其中的作用。方法7日龄C57BL/6J新生小鼠随机分为对照组、模型组(OIR组)及Mel处理组(OIR+Mel组),各组n=9。采用高氧诱导法制备OIR模型。苏木精-伊红染色和视网膜铺片法检测视网膜结构和新生血管;免疫荧光染色法检测HMGB1/NF-κB/NLRP3轴相关蛋白和炎性因子及淋巴细胞抗原6G表达;比色法检测髓过氧化物酶活性。结果OIR组视网膜结构被破坏,出现大片无灌注区和新生血管,OIR+Mel组可见破坏的视网膜结构改善,新生血管和无灌注区减少。与对照组相比,OIR组HMGB1/NF-κB/NLRP3轴相关蛋白和炎性因子表达升高(均P<0.05),淋巴细胞抗原6G表达和髓过氧化物酶活性升高(均P<0.05);Mel处理后,上述各指标降低(均P<0.05)。与对照组相比,OIR组视网膜中褪黑素受体表达降低;Mel处理后,褪黑素受体表达较OIR组升高(均P<0.05)。结论Mel可能通过抑制HMGB1/NF-κB/NLRP3轴减轻OIR新生小鼠视网膜损伤,且可能通过褪黑素受体途径发挥作用。     

缺氧缺血新生大鼠海马缺氧诱导因子1α和促红细胞生成素的表达

目的探讨新生鼠缺氧缺血后海马缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和脑源性促红细胞生成素(EPO)的表达。方法对7日龄SD新生大鼠结扎左侧颈总动脉并暴露在低氧环境建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型,以及单纯持续暴露在低氧环境建立低氧诱导模型。新生大鼠HIBD后0、1、6、16h和1、3、7天,用免疫组织化学染色观察海马HIF-1α和EPO的表达情况。低氧诱导0.5、1、2、3、5h后免疫组织化学染色法观察海马HIF-1α的表达。结果 HIBD组随复氧时间的延长,海马CA1区EPO阳性细胞计数先增加后降低,16h最高,差异有统计学意义(P<0.001),对照组各时间点差异无统计学意义(P>0.05);HIBD组各时间点EPO阳性细胞数均高于对照组(P<0.001)。HIBD组缺氧缺血后即刻(0h)海马齿状回见少量HIF-1α阳性细胞,复氧后各时间点和对照组均未见HIF-1α阳性细胞;持续暴露在低氧环境0.5h,HIF-1α开始表达,至3h时HIF-1α表达达高峰。常氧对照组未见HIF-1α表达。结论新生大鼠HIBD后内源性EPO分泌增加,低氧可诱导HIF-1α表达,推测HIF-1α/EPO缺氧信号转导系统可能参与缺氧缺血后海马神经元形成。     

新生大鼠缺氧缺血性脑病模型脑组织新生血管形成及调控因素

目的探讨新生大鼠缺氧缺血性脑病(HIE)模型脑组织新生血管形成及调控因素.方法 68只新生大鼠建立HIE模型组(44只)或行假手术组(24只).两组缺氧后1、3、7和14天各处死5只大鼠,用免疫组化方法检测脑组织内皮细胞、增生细胞核抗原和血管内皮生长因子(VEGF).模型组的其余24只新生大鼠建立HIE模型,于缺氧后3、12h,1、3、7和14d各处死4只大鼠,取缺氧缺血侧脑组织液氮速冻,用于提取RNA.假手术组的其余4只正常新生大鼠作假手术处理后即刻处死提RNA做正常对照.分析缺氧缺血侧脑组织毛细血管密度(BCDI)、增生毛细血管密度和VEGF表达.用RT-PCR检测VEGF和缺氧诱导因子-1α (HIF-1α) mRNA表达.结果模型组缺氧缺血侧脑组织坏死灶周围BCDI在第3天开始上升,并持续增加;BCDI显著高于假手术组(第14天13.29±3.90条/HPF vs 6.08±1.50条/HPF,P＜0.01).正常新生大鼠脑组织偶见增生毛细血管,而模型组缺氧缺血侧脑组织增生毛细血管密度在第3、7天(0.54±0.15条/HPF和0.90±0.25条/HPF)显著高于假手术组(0.12±0.05条/HPF和0.13±0.07条/HPF,P＜0.01).VEGF主要由神经元、毛细血管内皮细胞和软膜细胞等细胞表达.缺氧缺血后脑组织VEGF mRNA表达上调,12h时VEGF mRNA表达显著高于正常(1.56±0.27 vs 0.95±0.21, P＜0.05);HIF-1α mRNA表达上调先于VEGF,3h时HIF-1α mRNA表达即显著高于正常(1.07±0.21 vs 0.64±0.28, P＜0.05).结论新生大鼠HIE模型脑组织有新生血管形成; HIF-1介导的VEGF表达上调在此过程中可能起重要作用.     

缺氧诱导因子1α及血管内皮生长因子在体外缺氧培养神经元中的表达及意义

目的研究体外培养的新生大鼠皮质神经元缺氧不同时间后缺氧诱导因子(HIF)1α及血管内皮生长因子(VEGF)的表达规律及意义。方法体外培养的新生大鼠皮质神经元于厌氧培养箱中缺氧0、2、4、8 h,用Western blot及real time PCR检测缺氧不同时间后神经元HIF-1α及VEGF mRNA及蛋白的表达。结果常氧培养的神经元中几乎不表达HIF-1α,VEGF表达较低;缺氧2 h后,神经元中HIF-1α及VEGF mRNA表达均显著增加;缺氧4 h后两者mRNA及蛋白表达最高;缺氧8 h后表达降低。结论缺氧增加神经元中HIF-1α及VEGF的表达,随着缺氧时间的增加呈先升高后降低的趋势。     

波动氧诱导的新生大鼠视网膜病变模型

目的制备80%至10%的波动氧所致SD新生大鼠视网膜病变的模型。方法新生SD大鼠随机分成两组,模型组(n=12)置于氧箱中,80%至10%的波动氧24 h交替,持续7天后转入空气中饲养5天。对照组(n=12)置于空气中。应用腺苷二磷酸酶染色组织化学法进行视网膜铺片观察视网膜血管改变,眼球切片HE染色观察突破视网膜内界膜的内皮细胞核,免疫组织化学法检测视网膜血管内皮生长因子(VEGF)表达。对两组进行比较,判断波动氧诱导模型的可靠性。结果与对照组相比,模型组新生大鼠视网膜周边血管走形迂曲,神经节细胞排列紊乱,细胞数目减少。模型组视网膜内皮细胞核数目较对照组明显升高,差异有统计学意义[(31.2±6.2)比(1.5±1.0),P<0.01]。模型组VEGF在视网膜神经节层、内核层、外丛状层及色素细胞层均有强表达,对照组仅在神经节细胞层、内核层有较弱表达。结论吸入高幅波动氧可导致新生大鼠视网膜血管增生性病变,血管增生性视网膜组织中VEGF表达明显增强,证实80%至10%的波动氧诱导SD新生大鼠视网膜病变模型可靠。     

The expression and significance of HIF-1α and VEGF in hypoxic neurons

目的 研究体外培养的新生大鼠皮质神经元缺氧不同时间后缺氧诱导因子(HIF)1α及血管内皮生长因子(VEGF)的表达规律及意义.方法 体外培养的新生大鼠皮质神经元于厌氧培养箱中缺氧0、2、4、8 h,用Western blot及real time PCR检测缺氧不同时间后神经元HIF-1α及VEGF mRNA及蛋白的表达.结果 常氧培养的神经元中几乎不表达HIF-1α,VEGF表达较低;缺氧2 h后,神经元中HIF-1α及VEGF mRNA表达均显著增加;缺氧4 h后两者mRNA及蛋白表达最高;缺氧8 h后表达降低.结论 缺氧增加神经元中HIF-1α及VEGF的表达,随着缺氧时间的增加呈先升高后降低的趋势.     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤血管内皮生长因子表达与新生血管形成关系的研究

目的观察新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）后不同时间脑组织中血管内皮生长因子（VEGF）蛋白的表达以及血管新生情况，探讨HIBD时脑组织VEGF蛋白表达与血管新生之间的相互关系。方法7日龄Wistar大鼠176只随机分成实验组（n=88）和对照组（n=88），两组分别在缺氧缺血（HI）后0、4、8、12、24、48、72h及7、14、21、28d（每个时间点8只）应用免疫组织化学染色方法检测VEGF蛋白的表达及血管新生情况。结果正常7日龄Wistar大鼠于脑组织多种细胞的胞浆中可见VEGF表达，9日龄时达高峰；HIBD后VEGF蛋白于HI后4h表达逐渐增加，于48h达高峰后逐渐下降，并且于HI后4h～14dVEGF表达明显高于对照组（P〈0．05，P〈0．01）。正常新生大鼠脑皮质中新生毛细血管数各时间点平均为3～8条／HP；而实验组于HI后3～28d的新生血管数为10～12条／HP，显著多于对照组（P〈0．01），并于HI后4～72hVEGF表达程度与新血管形成之间呈显著正相关（r=0．928，P〈0．05）。结论正常7～35日龄新生大鼠脑组织内有不同程度的VEGF蛋白表达。HI可诱导VEGF表达增加：VEGF参与了HIRD后腩组织新生血管的形成。     

新生鼠吸入高氧视网膜血管发育与血管生成素2表达的变化

目的 研究新生鼠吸入高氧致视网膜病过程中血管生成素2(angiopoietin-2,ang-2)表达的变化规律,探讨其与新生鼠视网膜血管发育及新生血管形成之间的关系.方法 随机将80只新生Sprague-Dawiey大鼠(SD大鼠)分为高氧实验组和正常氧对照组,将其40只在生后24 h内置于(75±2)%氧环境中饲养7 d,然后返回室内空气饲养,以建立高氧模型;另40只在空气中饲养作为同龄对照组.两组各自在生后4 d(postnatal day 4 d4)、d 7、d 10、d 14和d 20等不同时间点处死,取左眼球用ADP酶(Adenosine diphosphate)组织化学染色法显示视网膜血管发育状况;取右眼通过常规HE染色以观察视网膜新生血管及计数突破内界膜且与其有联系的内皮细胞核数,定量反映视网膜血管增生情况,免疫组织化学方法标记视网膜ang-2的表达.结果 SD鼠视网膜血管出生后开始发育,d 20基本成熟;新生鼠吸高氧后从d 10开始出现新生血管,于d 14新生血管增生达到高峰;d 14实验鼠突破内界膜血管内皮细胞核数显著高于同龄对照组,分别为30.821与1.107个,P<0.001;d 7实验鼠ang-2表达明显低于同龄对照组及实验组d 10、d 14时间点,其平均光密度值分别为82.106 62±6.302 40与115.448 33±9.373 10、124.425 95±10.572 09、117.685 20±10.578 48,差异均有统计学意义,P<0.001,d 10实验鼠ang-2表达达高峰,高表达持续至d 14.结论 高氧可导致视网膜发育晚期出现大量新生血管,高氧并抑制ang-2的表达;新生血管形成与ang-2表达的变化相一致,提示吸入高氧的新生鼠的ang-2与视网膜新生血管发育关系密切.     

骨髓间充质干细胞移植对视网膜病变新生大鼠视网膜细胞凋亡的影响

目的：探讨早产儿视网膜病变（ROP）大鼠玻璃体内注射骨髓间充质干细胞（BMSCs）对视网膜细胞凋亡及视网膜中神经营养素-3（NT-3）、睫状神经营养因子（CNTF）表达的影响。方法：40只7 日龄 Sprague-Dawley新生大鼠随机分为正常对照组、ROP模型组、骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植组与磷酸缓冲液组（PBS组）,每组10只。采用高氧法制成 ROP 模型,持续高氧5 d后分别给予BMSCs移植组与PBS组玻璃体内注射BMSCs和PBS。移植7 d后,采用 TUNEL/DAPI、NT-3/DAPI、CNTF/DAPI免疫荧光双标法观察BMSCs移植对视网膜细胞凋亡及NT-3、CNTF表达的影响。结果：移植7 d后,正常对照组视网膜几乎未见TUNEL+ DAPI+细胞,BMSCs移植组视网膜可见少量TUNEL+ DAPI+细胞,显著低于ROP模型组与PBS组（P0.05）;正常对照组视网膜可见极少量的NT-3+DAPI+与CNTF+DAPI+ 细胞,ROP模型组与PBS组大鼠视网膜可见少量NT-3+DAPI+与CNTF+DAPI+ 细胞,较正常对照组增多,但差异无统计学意义（P>0.05）;BMSCs移植组大鼠视网膜NT-3+DAPI+与CNTF+DAPI+ 细胞数均显著多于ROP模型组与PBS组(P0.05）。结论：BMSCs移植可减轻ROP大鼠视网膜细胞的凋亡,其机制可能与其促进ROP大鼠视网膜细胞NT-3与CNTF的表达有关。     

缺氧诱导因子及其相关蛋白在肝母细胞瘤中的表达

目的 探讨缺氧诱导因子及其相关蛋白在肝母细胞瘤(hepatoblastoma,HB)中表达情况及其作用.方法 选择1998年至2009年入住我院并接受手术的肝母细胞瘤患儿及胆道闭锁患儿各30例,分为三组:肝母细胞瘤肿瘤组织、距肿瘤组织边缘5 cm以外的正常肝脏组织以及胆道闭锁活检肝组织,肿瘤组中以PRETEXT分期系统,将肿瘤组分为低分组(Ⅰ组+Ⅱ组,10例)和高分组(Ⅲ组+Ⅳ组,20例).采用免疫组织化学染色方法检测HIF-1α、HIF-2α、VEGF、GLUT-1、TGF-α在上述标本中的表达情况,并且比较各组的表达情况差异.结果 5种蛋白的阳性表达均主要表现为细胞质内棕黄色颗粒.肿瘤组HIF-1α、HIF-2a、VEGF、GLUT-1、TGF-a表达明显高于其他两组(P<0.01).肿瘤高分组中HIF-1α及TGF-α的表达水平高于低分组(P<0.05),而HIF-2α、VEGF、GLUT-1的表达两者无显著差别.结论 缺氧诱导因子及其相关蛋白在肝母细胞瘤中的表达均有增加,提示HIF可能在肝母细胞瘤的发生发展中起着重要作用,其中HIF-1α还可能是潜在的预后判断指标之一.     

布地奈德对慢性支气管哮喘小鼠肺组织HIF-1α和VEGF表达及气道重塑的影响

目的：研究布地奈德对慢性哮喘小鼠缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子(VEGF)表达的调控和对血管生成、气道重塑的影响。方法：30只雌性BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组和治疗组,每组10只。卵清蛋白（OVA）激发试验建立哮喘小鼠模型,治疗组从第28天开始每日在OVA激发前1 h雾化吸入布地奈德100 μg/kg,对照组以PBS代替OVA。苏木精-伊红染色分析气管管壁厚度变化,Masson染色分析肺组织胶原沉积,免疫组织化学染色法检测肺组织血管生成情况,免疫组织化学染色法和Western blot检测HIF-1α、VEGF表达水平。分析气管管壁厚度、血管面积百分比与VEGF、HIF-1α表达的相关性。结果：模型组较对照组气道管壁增厚,肺组织胶原沉积、血管面积、HIF-1α和VEGF表达显著增加;治疗组较模型组气道管壁厚度、肺组织胶原沉积及血管面积减少,HIF-1α和VEGF表达显著下降。气道管壁厚度、血管面积分别与HIF-1α及VEGF表达呈正相关,HIF-1α与VEGF表达亦呈正相关。结论：布地奈德通过抑制HIF-1α、VEGF表达,明显减轻哮喘小鼠肺组织血管生成和气道重塑。     

Regression of retinopathy by squalamine in a mouse model

The goal of this study was to determine whether an antiangiogenic agent, squalamine, given late during the evolution of oxygen-induced retinopathy (OIR) in the mouse, could improve retinal neovascularization. OIR was induced in neonatal C57BL6 mice and the neonates were treated s.c. with squalamine doses begun at various times after OIR induction. A system of retinal whole mounts and assessment of neovascular nuclei extending beyond the inner limiting membrane from animals reared under room air or OIR conditions and killed periodically from d 12 to 21 were used to assess retinopathy in squalamine-treated and untreated animals. OIR evolved after 75% oxygen exposure in neonatal mice with florid retinal neovascularization developing by d 14. Squalamine (single dose, 25 mg/kg s.c.) given on d 15 or 16, but not d 17, substantially improved retinal neovascularization in the mouse model of OIR. There was improvement seen in the degree of blood vessel tuft formation, blood vessel tortuosity, and central vasoconstriction with squalamine treatment at d 15 or 16. Single-dose squalamine at d 12 was effective at reducing subsequent development of retinal neovascularization at doses as low as 1 mg/kg. Squalamine is a very active inhibitor of OIR in mouse neonates at doses as low as 1 mg/kg given once. Further, squalamine given late in the course of OIR improves retinopathy by inducing regression of retinal neovessels and abrogating invasion of new vessels beyond the inner-limiting membrane of the retina.     

mTOR/4EBP1/HIF-1α/VEGF信号通路在哮喘小鼠肺组织中的表达及意义

目的探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)/真核生物始动因子4E结合蛋白1(4EBP1)/缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/血管内皮生长因子(VEGF)信号通路在哮喘小鼠中的表达及意义。方法 40只SPF级6~8周龄雌性Balb/c小鼠随机分为对照组、哮喘组、布地奈德干预组及m TOR抑制剂(雷帕霉素)干预组,每组10只。卵清蛋白致敏激发建立哮喘小鼠模型,各干预组分别在激发前30 min给予雷帕霉素3 mg/kg腹腔注射或布地奈德混悬液1 mg雾化吸入,对照组和哮喘组以生理盐水代替。于末次激发24 h后处死小鼠,收集肺泡灌洗液(BALF),采用ELISA法测定HIF-1α、VEGF水平;取肺组织行苏木精-伊红(HE)染色观察其病理变化;免疫组化染色和Western blot法测定肺组织磷酸化的m TOR及4EBP1(p-m TOR及p-4EBP1)蛋白表达水平。Pearson法分析p-m TOR、p-4EBP1、HIF-1α、VEGF表达的相关性。结果与对照组相比,哮喘组气管及其周围炎性细胞浸润明显,分泌物增多;BALF中HIF-1α、VEGF水平显著升高(P0.01);肺组织p-m TOR、p-4EBP1表达显著增加(P0.01)。与哮喘组相比,各干预组气道炎症浸润明显减轻,分泌物减少;BALF中HIF-1α、VEGF水平明显下降(P0.01);肺组织p-m TOR、p-4EBP1表达显著降低(P0.01)。对照组及两干预组间相比上述指标变化差异均无统计学意义(P0.05)。哮喘组小鼠p-m TOR、p-4EBP1、HIF-1α、VEGF表达水平两两互呈正相关(P0.05),而对照组及两干预组各指标间无相关性(P0.05)。结论哮喘发生时p-m TOR、p-4EBP1、HIF-1α、VEGF可能协同参与了哮喘的发病过程。雷帕霉素能阻断这一过程,可能作为治疗哮喘的新靶点。     

缺氧诱导因子-1α在婴幼儿血管瘤及血管畸形中的表达与意义

目的 本研究拟通过检测缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、细胞增殖核抗原Ki-67、血管内皮标志抗原CD34在婴幼儿血管瘤不同时期、血管畸形和儿童正常皮肤中的表达,探讨缺氧在血管瘤血管生成、细胞增殖中的作用.方法 采用免疫组织化学S-P染色法,检测CD34、HIF-1α、VEGF和Ki-67在小儿血管瘤、血管畸形及正常皮肤组织中的表达,并计算微血管密度(MVD).结果 不同时期血管瘤之间,血管瘤与血管畸形、正常皮肤之间HIF-1α、VEGF、Ki-67、MVD均有显著性差异(P<0.05).血管瘤中HIF-1α表达分别与VEGF、Ki-67、MVD表达呈正相关;而血管畸形HIF-1α与VEGF表达不存在相关关系.结论 缺氧是不同时期血管瘤的普遍现象.HIF-1α能促进血管瘤血管生成.而在血管畸形中可能不存在缺氧的微环境,是"血管内皮细胞生长正常的血管形态异常",因此在血管畸形中不会发生内皮细胞的增殖,也不存在类似血管瘤那样出现增生期和消退期.     

1型糖尿病酮症酸中毒患儿缺氧诱导因子-1α与血管内皮细胞生长因子mRNA表达水平的变化

目的探讨1型糖尿病(T1DM)酮症酸中毒(DKA)患儿缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)与血管内皮细胞生长因子(VEGF)mRNA水平的变化。方法天津市儿童医院住院T1DM并DKA患儿30例,于确诊24 h内(DKA 1组)及DKA纠正后10 d(DKA 2组)采血,另选取同期住院的不伴感染、缺氧、肿瘤或结缔组织病的同年龄同性别患儿30例为对照组。实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法测定其外周血CD4+T淋巴细胞HIF-1α与VEGF mRNA的相对表达水平。PCR产物行琼脂糖凝胶电泳鉴定特异性。采用SPSS 13.0软件进行统计学分析。结果 3组HIF-1α及VEGF mRNA相对表达水平比较差异均有统计学意义(Pa<0.01)。DKA1组HIF-1α及VEGF水平明显高于对照组,差异有统计学意义(Pa<0.01);DKA纠正后HIF-1α及VEGF水平恢复,差异有统计学意义(P<0.05,0.01),但直至DKA纠正后10 d(DKA2组)仍未恢复至对照组水平,差异有统计学意义(P<0.01,0.05)。Real-timePCR产物行琼脂糖凝胶电泳,产物位于预期位置,确定产物特异性。结论 T1DM并DKA患儿CD4+T淋巴细胞HIF-1α与VEGFmRNA水平升高,且DKA纠正后HIF-1α与VEGF mRNA水平不能恢复至正常,这可能与T1DM并发症的发生发展有关。