龟羚帕安丸对帕金森病大鼠转录因子EB介导自噬调控机制的研究

目的：研究龟羚帕安丸治疗帕金森病（PD）对转录因子EB（TFEB）表达的影响及其机制。方法：将PD大鼠模型随机分为模型组、西药组、中西药组、中药低、中、高剂量组，每组15只，另取15只正常大鼠作为假手术组。模型组及假手术组给予等容积生理盐水，其余组给予相应药物灌胃，各组均连续给药4周。PD大鼠处死后，将中脑黑质组织剥离出来，运用蛋白质印迹法（Western Blotting）检测TFEB、微管相关膜蛋白轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）、泛素结合蛋白P62（P62）、酪氨酸羟化酶（TH）、α-突触核蛋白（α-syn）的表达量。结果：与假手术组比较，模型组、西药组、中西药组、中药各剂量组黑质内TFEB、LC3Ⅱ、TH蛋白表达显著降低（P<0.01），P62、α-syn表达显著增高（P<0.01）；与模型组比较，西药组、中西药组、中药各剂量组黑质内TFEB、LC3Ⅱ、TH蛋白表达显著增高（P<0.01），P62、α-syn表达显著降低（P<0.01）。结论：龟羚帕安丸可通过TFEB激活自噬-溶酶体系统，增强神经细胞自噬活性，增加LC3Ⅱ、TH表达，促进α-syn、P62降解及清除，发挥神经保护作用。     

龟羚帕安丸对PD大鼠中脑黑质Caspase-3、SYN表达及行为学的影响

目的:观察龟羚帕安丸对帕金森病(PD)大鼠病理学、行为学及中脑黑质突触核蛋白(SYN)、Caspase-3表达的影响。方法:采用6-OHDA注射法建立PD大鼠模型,造模成功大鼠随机分为模型组、美多芭组、龟羚帕安丸大、中、小剂量组(4、2、1 g·kg~(-1)),同时设立假手术组,假手术组、模型组给予等容积生理盐水,连续灌胃给药4周。观察各组大鼠旋转行为、中脑黑质细胞病理学及Caspase-3、SYN表达情况。结果:与假手术组比较,模型组大鼠神经细胞变性坏死明显增多,旋转圈数多,SYN、Caspase-3表达明显升高(P0.01);各用药组大鼠旋转圈数显著低于模型组,SYN、Caspase-3表达显著低于模型组(均P0.01)。结论:龟羚帕安丸可以改善帕金森病模型大鼠病理改变及行为学,下调Caspase-3、SYN表达可能是其治疗帕金森病的机制之一。     

龟羚帕安丸对PD大鼠中脑黑质IL-1β、iNOS、IL-6、IFN-γ表达的影响

目的观察龟羚帕安丸对帕金森病(PD)大鼠中脑黑质IL-1β、IL-6、i NOS、IFN-γ表达的影响。方法采用6-OHDA注射法建立PD大鼠模型,造模成功大鼠随机分为模型组,美多芭组(10mg·kg-1),龟羚帕安丸高、中、低剂量组(4,2,1g·kg-1),同时设立假手术组。假手术组、模型组给予等容积生理盐水,其他组予相应药物,连续灌胃给药30天。免疫组织化学法检测中脑黑质IL-1β、IL-6、i NOS、IFN-γ蛋白表达。结果龟羚帕安丸能明显抑制炎症因子IL-1β、IL-6、i NOS、IFN-γ表达。结论龟羚帕安丸通过降低IL-1β、IL-6、i NOS、IFN-γ表达,通过抗炎作用,对多巴胺能神经元产生保护作用,可能是龟羚帕安丸治疗PD的作用机制之一。     

龟羚帕安丸对帕金森病大鼠模型中脑黑质细胞Nestin蛋白,Nestin mRNA及DAT蛋白的影响

目的:观察龟羚帕安丸对帕金森病(PD)大鼠黑质细胞巢蛋白(Nestin),多巴胺转运体(DAT)及Nestin mRNA表达的影响。方法:大鼠黑质致密部注射6-羟基多巴胺(6-OHDA),后大鼠ip阿扑吗啡(APO)诱导旋转建立PD大鼠模型。PD大鼠随机分为模型组,多巴丝肼组,龟羚帕安丸高、中、低剂量组,同时设立假手术组,模型组。假手术组每日ig同等容积的生理盐水;多巴丝肼组ig多巴丝肼混悬液(10 mg·kg~(-1)·d~(-1));龟羚帕安丸高、中、低剂量组ig龟羚帕安丸混悬液(4,2,1 g·kg~(-1)·d~(-1)),连续30 d。免疫组化法检测各组大鼠中脑黑质Nestin,DAT蛋白表达,原位杂交法检测各组大鼠中脑黑质Nestin mRNA的表达。结果:模型组黑质细胞Nestin,DAT蛋白,Nestin mRNA表达均显著低于假手术组(P0.01);各治疗组Nestin蛋白,Nestin mRNA,DAT蛋白表达均显著高于模型组(P0.01)。结论:龟羚帕安丸治疗帕金森病的作用机制可能与上调Nestin,DAT表达,促进神经的修复和再生,增加多巴胺(DA)含量有关。     

龟羚帕安丸对帕金森病大鼠神经干细胞移植后中脑黑质TH、GDNF、Ptx3表达的影响

目的观察龟羚帕安丸对帕金森病大鼠神经干细胞移植后中脑黑质TH、GDNF、Ptx3表达的影响。方法 6-羟基多巴注射法建立帕金森病模型后,60只造模大鼠随机分为空白对照组,美多芭组,龟羚帕安丸高、中、低剂量组,神经干细胞移植组,各组灌胃给药28 d。然后,免疫组化法检测大鼠中脑黑质TH、GDNF、Ptx3蛋白表达,原位杂交法检测TH mRNA表达。结果与神经干细胞移植组比较,美多芭组、龟羚帕安丸组TH、GDNF、Ptx3蛋白及TH mRNA表达均显著增加(P0.01)。结论龟羚帕安丸可增加帕金森病大鼠中脑黑质TH、GDNF、Ptx3蛋白表达,可能是其治疗帕金森病的作用机制之一。     

龟羚帕安丸对PD大鼠神经干细胞移植及中脑黑质Nurr1、Shh表达的影响

目的观察龟羚帕安丸对帕金森病(PD)大鼠神经干细胞(NSCs)移植后中脑黑质的细胞存活数以及核受体相关因子1(Nurr1)、音猥因子(Shh)蛋白表达的影响。方法采用6-羟基多巴(6-OHDA)注射法建立PD大鼠模型,将60只造模成功大鼠随机分为空白对照组,移植对照组,美多芭组(10 mg·kg~(-1))和中药低、中、高剂量组(龟羚帕安丸1,2,4 g·kg~(-1));各组给予右侧纹状体注射移植5μL NSCs悬液,空白对照组注射5μLPBS;灌胃给药,每日2次,连续28 d。免疫组化法检测PD大鼠中脑黑质的NSCs存活数以及Nurr1、Shh蛋白表达情况。结果与空白对照组比较,移植对照组的NSCs存活数、Nurr1及Shh蛋白表达水平明显升高(P 0.01)。与移植对照组比较,各治疗组的中脑黑质NSCs存活数以及Nurr1、Shh蛋白表达明显升高(P 0.05,P 0.01)。结论龟羚帕安丸能够促进PD大鼠NSCs移植后的细胞存活,可能与其上调大鼠中脑黑质Nurr1、Shh蛋白表达水平有关。     

龟羚帕安丸对帕金森病大鼠行为学及中脑黑质Nurr1、TH、Nurr1mRNA、THmRNA的影响

目的:观察龟羚帕安丸对帕金森病(PD)大鼠行为学及中脑黑质细胞孤儿核受体相关因子1(Nurr1)、酪氨酸羟化酶(TH)以及其mRNA表达的影响。方法:采用6-OHDA注射法建立PD大鼠模型,造模成功大鼠随机分为模型组,美多芭组(10mg/kg),龟羚帕安丸4g/kg、2g/kg、1g/kg组,假手术组、模型组给予等容积生理盐水,连续灌胃给药30天。观察各组大鼠旋转圈数变化,免疫组织化学法检测中脑黑质Nurr1、TH蛋白表达,原位杂交法检测中脑黑质Nurr1mRNA、THmRNA表达。结果:与假手术组比较,模型组Nurr1、TH蛋白及其mRNA表达均显著降低;与模型组比较,各治疗组Nurr1、TH蛋白及其mRNA表达均明显升高,旋转圈数显著降低;起效剂量为1g/kg,剂量范围为1g/kg⁴g/kg。结论:龟羚帕安丸通过提高Nurr1表达,进而上调下游靶基因TH的表达,从而诱导神经干细胞分化为成熟多巴胺能神经元,并最终转化为神经递质DA,可能是龟羚帕安丸治疗PD的作用机制之一。     

龟羚帕安丸对帕金森病大鼠模型多巴胺能神经元凋亡影响的研究

目的：观察龟羚帕安丸对帕金森病模型大鼠多巴胺能神经元凋亡的影响,探究龟羚帕安丸治疗帕金森病的可能机制。方法：用6-羟基多巴胺（6-OHDA）诱导建立帕金森病（Parkinson′s dieses,PD）大鼠模型,随机分为5组,分别给予龟羚帕安丸大、中、小剂量,美多芭,同等容积的生理盐水灌胃治疗;同时设立假手术组,给予同等容积的生理盐水灌胃;1 d 1次,共30 d。用TUNEL观察多巴胺能神经元凋亡的变化,用免疫组织化学技术观测黑质神经元Bcl-2和Bax的表达及Bcl-2/Bax的比值。结果：龟羚帕安丸大、中、小剂量组及美多芭组TUNEL检测阳性细胞数及Bax阳性细胞明显降低,Bcl-2及Bcl-2/Bax的比值显著升高（ P＜0．05）。结论：龟羚帕安丸可以通过调节Bcl-2和Bax的表达,减少PD大鼠的神经细胞凋亡而发挥保护神经元的作用,此是其治疗帕金森病的作用机制之一。     

龟羚帕安丸对帕金森病大鼠模型氧化应激反应的影响

目的：探究龟羚帕安丸对帕金森病大鼠模型氧化应激反应的影响。方法：用6一羟基多巴胺（6一OHDA）建立帕金森病（PD）大鼠模型,随机分为模型组,美多巴组,龟羚帕安丸大剂量组、中剂量组、小剂量组。分别每日管饲同体积的生理盐水,关多巴10mg·（kg·d）-1,龟羚帕安丸4．0g·（kg·d）-1、2．0g·（kg·d）-1、1．0g·（kg·d）-1。另设假手术组,常规饲养,每日管饲同体积的生理盐水。每日1次,共30d。观察血浆中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）实验后的变化。结果：与假手术组比较,模型组SOD的活性、GSH含量明显减少,MDA含量明显增多,差异具有统计学意义（P〈0．05）;与模型组比较,药物组SOD的活性、GSH含量明显增多,MDA含量明显减少,两组之间的差异具有统计学意义（P〈0．05）;龟羚帕安丸大剂量组SOD值显著高于美多巴组（P〈0．05）,龟羚帕安丸大剂量组GSH、MDA与美多巴组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：龟羚帕安丸可增加帕金森大鼠模型血浆中增加SOD的活性和GSH的含量,减少MDA的含量,减轻氧化应激对神经细胞的损伤,可能是其治疗帕金森病的作用机制之一。     

电针、艾灸预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌自噬相关蛋白LC 3、Beclin 1表达的影响

目的:观察针灸预处理对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠心肌自噬相关蛋白LC 3、Beclin 1表达的影响,探讨针灸预处理在MIRI过程中对自噬调控的作用机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、缺血预适应(IP)组、电针组和艾灸组,每组8只。冠状动脉结扎法建立大鼠MIRI模型。电针组及艾灸组造模前分别电针或艾灸"内关"穴,每次20min,每日1次,连续7d。HE染色法及透射电镜检测左心室心肌病理形态学的变化,TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况及凋亡指数,Western blot法检测LC 3、Beclin 1蛋白在心肌细胞中的表达。结果:模型组心肌损伤较严重,心肌细胞排列紊乱、边界模糊,炎性细胞浸润,部分横纹坏死、溶解,线粒体结构紊乱、模糊,空泡化严重,并出现大量双层膜结构的自噬小体;IP组、电针组及艾灸组心肌损伤较模型组轻微,肌纤维大多正常,肌丝间局灶性水肿,线粒体丰富伴空泡增多,偶见自噬体。与假手术组比较,模型组凋亡指数、LC 3Ⅱ及Beclin 1蛋白表达水平、LC 3Ⅱ/LC 3Ⅰ均明显升高(P0.01),LC 3Ⅰ蛋白表达显著下降(P0.01);与模型组比较,IP组、电针组及艾灸组凋亡指数、LC 3Ⅱ及Beclin 1蛋白表达水平、LC 3Ⅱ/LC 3Ⅰ均明显降低(P0.01),LC 3Ⅰ蛋白表达明显升高(P0.05,P0.01);电针组凋亡指数、LC 3Ⅱ及Beclin 1蛋白表达水平、LC 3Ⅱ/LC 3Ⅰ明显低于IP组及艾灸组(P0.05),而LC 3Ⅰ蛋白表达水平则显著高于IP组及艾灸组(P0.01)。结论:IP、电针或艾灸"内关"穴预处理对MIRI大鼠均具有保护作用,可对MIRI大鼠心肌的自噬产生调节作用,尤以电针最佳,而这种适度调节MIRI过程中的自噬水平可能与下调LC 3Ⅱ、Beclin 1蛋白的表达有关。     

川陈皮素防治肝缺血再灌注损伤的作用机制研究

目的探究川陈皮素防治肝缺血再灌注损伤(hepatic ischemia reperfusion injury,HIRI)的作用及机制。方法 SD大鼠随机分为对照组、模型组和川陈皮素(10 mg/kg)组,采用ELISA法检测各组大鼠血清中丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase, ALT)和天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase, AST)活性;采用苏木素-伊红(HE)染色法考察各组大鼠肝组织病理变化;采用透射电子显微镜(TEM)观察各组大鼠肝细胞线粒体结构;采用Western blotting和qRT-PCR考察各组大鼠肝组织自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(microtubule associated protein 1 light chain 3-Ⅱ,LC3-Ⅱ)、自噬相关基因-7 (autophagy-related gene-7,ATG-7)、p62蛋白和mRNA表达情况。采用H2O2诱导大鼠肝细胞BRL建立氧化损伤细胞模型,设置对照组、模型组和川陈皮素(10μmol/L)组,采用Western blotting和qRT-PCR考察各组细胞Beclinl、LC3-Ⅱ、ATG-7、p62蛋白和mRNA表达情况;采用MitoTracker染色和免疫荧光法考察各组细胞自噬蛋白与线粒体的共定位情况;考察自噬抑制剂和诱导剂对川陈皮素细胞保护作用的影响。结果与对照组比较,模型组大鼠血清ALT和AST活性均显著升高(P0.05),肝组织病变,肝细胞线粒体数目增加,结构错乱,受损的线粒体被吞噬,肝组织中LC3-Ⅱ、Beclin1、ATG-7蛋白和mRNA表达水平显著升高(P0.05),p62蛋白和mRNA表达水平显著降低(P0.05);与模型组比较,川陈皮素组大鼠血清ALT和AST活性明显降低(P0.05),肝组织病变程度减轻,线粒体形态变化得到明显改善,肝组织中LC3-Ⅱ、Beclinl、ATG-7蛋白和mRNA表达水平显著降低(P0.05),p62蛋白和mRNA表达水平显著升高(P0.05)。氧化损伤细胞模型中BRL细胞LC3-Ⅱ、Beclin1、ATG-7蛋白和mRNA表达水平显著升高(P0.05),p62蛋白和mRNA表达水平显著降低(P0.05),Beclin1和MitoTracker的共定位数目增加;与模型组比较,川陈皮素组BRL细胞中LC3-Ⅱ、Beclin1、ATG-7蛋白和mRNA表达水平显著降低(P0.05),p62蛋白和mRNA表达水平显著升高(P0.05),Beclin1和MitoTracker的共定位数目减少;自噬抑制剂3-MA (1、5 mmol/L)显著增强川陈皮素对BRL细胞的保护作用(P0.05),自噬诱导剂雷帕霉素显著抑制川陈皮素对BRL细胞Beclin1蛋白和mRNA表达水平的下调作用(P0.05)。结论川陈皮素对HIRI具有较好的防治作用,其机制可能与抑制线粒体自噬有关。     

加味涤痰汤对脑缺血再灌注损伤大鼠脑细胞自噬相关蛋白表达的影响

目的:探讨加味涤痰汤对脑缺血再灌注损伤大鼠脑细胞自噬相关蛋白表达的影响。方法:采用可逆性脑中动脉闭塞线栓法栓塞右侧大脑中动脉,构建脑缺血再灌注(CIR)损伤模型,随机分为假手术组、模型组、加味涤痰汤高、低剂量组(0. 768,0. 384 g·kg~(-1))和吡拉西坦组(0. 1 g·kg~(-1))。假手术组和模型组灌胃生理盐水,加味涤痰汤高、低剂量组灌胃加味涤痰汤,吡拉西坦组灌胃吡拉西坦片,灌胃10 m L·kg~(-1);给药7 d。给药24 h内,处死后行组织病理学检查,比较脑梗死体积、神经细胞凋亡和血清炎症因子水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)测定脑组织中自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3(LC3)Ⅱ,Beclin1,B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和p62的表达。结果:模型组脑组织梗死灶内细胞和血管坏死,神经元肿胀,间质水肿;加味涤痰汤高、低剂量组及吡拉西坦组脑组织少数神经细胞死亡,水肿减轻,神经细胞肿胀减轻。加味涤痰汤高、低剂量组及吡拉西坦组脑梗死体积和神经细胞凋亡低于模型组(P 0. 05),加味涤痰汤高、低剂量组及吡拉西坦组肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-2(IL-2)和白细胞介素-8(IL-8)水平降低(P 0. 05)。与假手术组比较,模型组LC3Ⅱ,Bcl-2和Beclin1蛋白及mRNA表达明显升高,p62蛋白及mRNA表达明显下降;与模型组比较,加味涤痰汤高、低剂量组及吡拉西坦组LC3Ⅱ和Beclin1蛋白及mRNA表达均明显降低,p62蛋白及mRNA表达明显升高,差异均具有明显性(P 0. 05)。结论:加味涤痰汤可改善MCAO/R脑组织损伤和自噬,减轻炎症反应,调节自噬活性,可能与下调LC3Ⅱ,Beclin1表达,上调p62表达有关。     

电针对CSR大鼠神经细胞自噬相关因子Beclin1 mRNA、LC3 mRNA表达的影响

目的通过观察电针颈夹脊穴对神经根型颈椎病(CSR)大鼠神经细胞自噬相关蛋白Beclin1 mRNA、LC3 mRNA表达的影响,探讨其对CSR大鼠镇痛过程中对自噬调控的作用机制。方法 SPF级SD大鼠按随机数字表分为模型组、针刺组、电针组,每组各10只。采用手术方法将尼龙渔线放至大鼠C6-7、T1神经根腋下复制CSR模型。造模后第3天开始取双侧C2-3、C6-7节段颈夹脊穴进行,电针组进行电针治疗,针刺组进行针刺治疗,每天1次,每次20min;模型组造模后第3天开始每天抓取1次;各组大鼠连续干预7天后处死。治疗后采用YLS-3E型痛分析仪测量机械性痛阈,WB法检测自噬底物P62蛋白的表达,RT-PCR法检测脊髓及神经组织Beclin1 mRNA、LC3 mRNA的表达。结果与模型组比较,电针组及针刺组各大鼠的痛阈值较模型组明显升高(P0.01);电针组与针刺组比较,电针组各大鼠的痛阈值较针刺组明显升高(P0.05);与模型组比较,电针组及针刺组的脊髓及神经组织P62的蛋白含量显著降低(P0.01)。与模型组比较,电针组及针刺组的脊髓及神经组织Beclin1 mRNA、LC3的mRNA含量显著升高(P0.01)。电针组与针刺组相比,脊髓及神经组织Beclin1 mRNA、LC3 mRNA含量显著性升高(P0.05)。结论电针及针刺颈夹脊穴对CSR大鼠均具有显著镇痛作用,可通过调节大鼠脊髓及神经组织神经细胞的自噬保护神经细胞,且电针颈夹脊穴疗效优于针刺颈夹脊穴,其作用机制可能与上调Beclin1 mRNA、LC3 mRNA有关。     

帕病2号方对帕金森病模型大鼠黑质神经元形态学的影响

目的：探讨帕病2号方对帕金森病（PD）模型大鼠中脑黑质神经元的保护作用。方法：采用6-羟基多巴胺（6-OHDA）左侧纹状体两点注射法建立PD大鼠模型,经阿扑吗啡（APO）诱导表现恒定右侧旋转且30 min内旋转速度大于7 r·min^-1者,视为成功PD大鼠模型。14只PD大鼠随机分为模型组、治疗组,同时设立正常组、假手术组。正常组、假手术组、模型组给予等容积蒸馏水,治疗组给予帕病2号方（32.0 g·kg^-1）,连续灌胃给药4周。通过Nissl染色及免疫组化方法检测中脑黑质神经元Nissl小体的变化及酪氨酸羟化酶（TH）、核因子E2相关性因子2（Nrf2）、血红加氧酶1（HO-1）的变化。结果：与正常组比较,模型组PD大鼠黑质神经元Nissl小体严重损伤,TH阳性细胞数目显著减少（P〈0.01）,Nrf2核蛋白、HO-1蛋白表达显著增强（P〈0.01）。与模型组比较,帕病2号方治疗组能明显增加PD大鼠黑质神经元内Nissl小体数量,增加TH阳性细胞数目（P〈0.05）,同时明显上调Nrf2核内表达及HO-1蛋白的表达（P〈0.05）。结论：帕病2号方干预对PD大鼠模型黑质神经元具有明显保护作用,可能与上调Nrf2核内表达和HO-1表达有关。     

电针对帕金森病小鼠SIRT3/PINK1/Parkin通路介导的线粒体自噬的影响

目的：观察电针“风府”“太冲”“足三里”对帕金森病（PD）小鼠中脑黑质沉默调节蛋白3(SIRT3及其下游PTEN诱导的假定激酶1(PINK1)、PARK2基因编码蛋白（Parkin）介导的线粒体自噬的影响,探讨电针治疗PD的可能机制。方法：C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、电针组、假电针组,每组12只。采用腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶复制PD小鼠模型。电针组小鼠给予针刺“风府”“太冲”“足三里”,每天1次,每次20 min,连续12 d。以旷场实验评估各组小鼠的运动能力;免疫组织化学法检测各组小鼠中脑黑质区酪氨酸羟化酶（TH）、α-突触核蛋白（α-syn）阳性表达;透射电镜观察黑质区神经元超微结构;免疫荧光染色法检测小鼠黑质自噬轻链蛋白3(LC3)的阳性表达;实时荧光定量PCR法检测小鼠黑质TH、α-syn、SIRT3、PINK1、Parkin和线粒体自噬受体蛋白P62、Beclin-1、LC3ⅡmRNA表达水平;Westernblot法检测小鼠黑质TH、α-syn、SIRT3、PINK1、Parkin、P62、Beclin-1、LC3Ⅱ蛋白表达水平。结...     

补阳还五汤对脊髓缺血再灌注损伤后细胞自噬相关蛋白影响的研究

目的:探讨补阳还五汤对脊髓缺血再灌注损伤(SCII)后细胞自噬相关蛋白Beclin 1、微管相关蛋白1轻3 (LC3)、P62影响的机制。方法:48只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、观察组和3-甲基腺嘌呤(3-MA)组。模型组腹腔内注射生理盐水,观察组在模型制备的前3天灌胃补阳还五汤,3-MA组腹腔注射3-MA注射液,然后夹闭腹主动脉40 min后开放。模型制备后,在缺血3 h、6 h后进行行为学评分、取材,免疫组化检测Beclin 1、LC3、P62的表达。结果:在缺血3 h后、6 h后,与假手术组比较,模型组行为学评分下降(P0.05),Beclin 1、LC3、P62蛋白表达升高(P0.05)。与模型组比较,观察组、3-MA组行为学评分升高,Beclin 1、LC3、P62蛋白表达降低(P0.05)。在缺血3 h后,与3-MA组比较,观察组行为学评分及P62蛋白表达较高(P0.05);在缺血6 h后,与3-MA组比较,观察组行为学评分较高(P0.05),Beclin 1、LC3、P62蛋白表达较低(P0.05)。结论:补阳还五汤通过调节Beclin 1、LC3和P62蛋白的表达,不仅可以促使细胞自噬发生,加快消化、降解受损、衰老、失能的细胞,给细胞的再生、重建提供原料,而且可以抑制细胞自噬过度发生,减少细胞凋亡程序,从而达到双向调节,保护神经细胞的目的。     

化痰通络方对急性脑梗死大鼠rt-PA溶栓后神经细胞自噬途径中Beclin1与LC3蛋白表达的影响

[目的]观察化痰通络方对急性脑梗死大鼠重组组织纤溶酶原激活剂(rt-PA)溶栓后神经细胞自噬途径中自噬相关蛋白(Beclin1)及微管相关蛋白轻链3(LC3)蛋白表达的影响。[方法]选择160只健康SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、rt-PA组、化痰通络方联合rt-PA组(简称中药组),每组采用6 h、1 d、3 d和7 d 4个时相。采用自身栓子法制备大鼠大脑中动脉栓塞模型(MCAO),rt-PA组与中药组分别给予尾静脉注入rt-PA(浓度为5.67 mg/kg)及联合化痰通络中药(浓度为7.2 g/kg)干预,每日2次。于相应时间点采用Western blot检测各组大鼠大脑皮质梗死区组织中Beclin1及LC3蛋白的表达。[结果]Western blot结果显示:与假手术组相比,模型组在4个时相中Beclin1和LC3蛋白的相对丰度值均明显增高(P0.05);采用rt-PA和rt-PA联合化痰通络法干预后,4个时相内Beclin1与LC3蛋白的相对丰度值均明显下降(P0.05);且rt-PA联合化痰通络组下降更加显著,与rt-PA组比较差异有统计学意义(P0.05)。[结论]化痰通络方可通过降低神经细胞自噬途径中Beclin1与LC3蛋白的表达,部分抑制神经细胞的过度自噬,进而保护神经细胞损伤,从而更好的防治急性脑梗死溶栓后缺血再灌注的发生与发展。     

化痰消瘀方对大鼠胃癌前病变的疗效及对自噬相关基因的影响

目的:评估化痰消瘀方对大鼠胃癌前病变(PLGC)的疗效,观察其对自噬相关基因的影响。方法:采用甲硝基亚硝基胍(MNNG)综合饥饱失常及生理盐水灌胃方法诱导SD大鼠构建PLGC模型,成模动物分为模型组及化痰消瘀方低(0.1 g/kg)、中(0.2 g/kg)、高(0.3 g/kg)剂量组,以健康SD大鼠为正常对照组(n=15)。给药期间记录各组大鼠生存状况、体质量变化。给药8 w后,通过HE染色检测胃黏膜组织病理学;通过RT-PCR和免疫组化检测自噬相关基因微管相关蛋白3(light chains 3,LC3)、Beclin1、P62 mRNA和蛋白表达;采用免疫印迹方法检测自噬相关基因Beclin1、P62蛋白表达及LC3Ⅱ/LCⅠ水平。结果:正常对照组大鼠毛色白且有光泽,活动敏捷,食量正常。模型组大鼠毛色黄而无光,活动迟钝,形体偏瘦,且食量少,体质量降低;化痰消瘀方各剂量组大鼠的一般状态及体质量介于正常对照组与模型组之间。HE染色可见健康大鼠胃黏膜上皮组织完整,有少量免疫细胞散在分布其中;模型组大鼠胃黏膜腺体紊乱,可见透壁,基底部腺体上皮增生,固有层及黏膜肌层可见大量炎症细胞浸润,伴有较明显的水肿;化痰消瘀方各组胃黏膜病变情况介于正常对照组与模型组之间。与正常对照组比较,模型组大鼠胃组织中LC3、Beclin1 mRNA及蛋白表达显著降低,P62 mRNA及蛋白表达显著升高;与模型组比较,各给药组胃组织中LC3、Beclin1 mRNA及蛋白表达及3Ⅱ/LC3Ⅰ水平显著上调而P62 mRNA及蛋白显著下调。结论:化痰消瘀方治疗PLGC安全可行,其作用机理可能与调节胃黏膜中自噬相关基因LC3、Beclin1、P62的表达有关。     

艾灸对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞自噬功能的影响

目的:观察艾灸对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心功能及自噬相关蛋白LC3、p62表达的影响,探讨艾灸防治CHF的可能机制。方法:SD大鼠随机分为正常组12只与造模组48只,采用腹腔注射盐酸多柔比星复制CHF模型,将建模成功的大鼠随机均分为模型组、艾灸组、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、自噬激动剂雷帕霉素(RAPA)组。艾灸组用艾条温和灸双侧"肺俞""心俞"穴,每日1次,每次20min,治疗3周。3-MA组按15 mg/kg给予3-MA混悬液腹腔注射,每日1次,共3周。RAPA组按2mg/kg给予RAPA混悬液灌胃,每日1次,共3周。观察大鼠的一般情况及行为体征;心功能测量仪检测大鼠心率(HR)、心输出量(CO)、左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)、左室内压最大上升或下降速率(±dp/dtmax);HE染色法观察心肌病理变化;Western blot法检测心肌细胞自噬相关蛋白LC3及p62表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠心肌细胞出现肿胀、空泡,肌纤维断裂、溶解,排列紊乱;与模型组比较,艾灸组和3-MA组大鼠心肌细胞的数量正常,心肌纤维排列相对整齐,RAPA组心肌细胞出现肿胀、空泡,心肌纤维断裂、溶解,排列紊乱等状况。与正常组比较,模型组HR和LVEDP明显升高(P0.01),CO、LVSP及±dp/dtmax明显下降(P0.01),LC3-Ⅱ表达、LC3-Ⅱ/Ⅰ明显升高(P0.01),而p62表达明显下降(P0.01)。与模型组比较,艾灸组和3-MA组HR和LVEDP明显下降(P0.05),CO、LVSP及±dp/dtmax明显升高(P0.05),LC3-Ⅱ表达、LC3-Ⅱ/Ⅰ明显降低(P0.01),p62表达明显升高(P0.01),而RAPA组LC3-Ⅱ/Ⅰ明显升高(P0.01),p62表达明显降低(P0.01)。结论:艾灸可以改善CHF大鼠心肌损伤,其作用可能与降低心肌细胞LC3-Ⅱ/Ⅰ、升高p62蛋白表达水平,发挥类似于3-MA的自噬抑制作用,抑制心肌细胞过度自噬、减轻心肌损伤有关。     

龟羚帕安丸对帕金森病模型大鼠神经干细胞移植后行为学及血清5-羟色胺、多巴胺、去甲肾上腺素的影响

目的探讨龟羚帕安丸联合神经干细胞(NSCs)移植治疗帕金森病(PD)的可能作用机制。方法采用6-羟基多巴(6-OHDA)腹腔注射法建立PD大鼠模型,造模成功大鼠随机分为空白对照组、移植对照组、美多芭组和龟羚帕安丸高、中、低剂量组各10只。空白对照组给予5μl PBS移植,其余各组给予5μl NSCs悬液移植。同时中药低、中、高剂量组分别给予龟羚帕安丸0.9、1.8、3.6 g/(kg·d)灌胃,美多芭组给予美多芭溶液50 mg/(kg·d)灌胃,移植对照组和空白对照组给予等容积生理盐水灌胃。每日2次,连续4周。于移植前(0周)和灌胃4周后观察各组大鼠旋转圈数并计算大鼠旋转圈数差值比(K值),检测灌胃4周时各组大鼠血清5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)含量。结果空白对照组大鼠4周时旋转圈数及K值明显高于其他各组(P0.01);中药各剂量组4周时大鼠旋转圈数及K值明显低于移植对照组及美多芭组(P0.05或P0.01);中药中剂量组4周时大鼠旋转圈数较中药高剂量组低,K值低于中药低、高剂量组(P0.01)。与空白对照组比较,其余各组大鼠血清5-HT、DA、NE水平均显著升高(P0.01)。中药中、低剂量组血清5-HT、DA、NE均显著高于美多芭组(P0.01);中药中剂量组血清5-HT、DA、NE高于中药低、高剂量组(P0.05或P0.01)。结论龟羚帕安丸可明显改善PD大鼠行为学症状,其机制可能与升高血清5-HT、DA、NE水平有关,以中剂量效果最好。