阿托伐他汀钙片微生物限度检查方法学验证

摘 要 目的:探讨阿托伐他汀钙片的抑菌活性,并建立其微生物限度检查的方法。方法: 采用平皿法、培养基稀释法、薄膜过滤法对阿托伐他汀钙片进行抑菌活性试验,计算5种试验菌每次试验的回收率。结果:采用平皿法,可使大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌和黑曲霉的回收率高于70%;采用培养基稀释法,可使金黄色葡萄球菌的回收率高于70%;采用薄膜过滤法,可使白色念珠菌的回收率高于70%。结论:阿托伐他汀钙片对金黄色葡萄球菌和白色念珠菌有抑菌性。其微生物限度检查方法,细菌数测定采用离心沉淀法和培养基稀释法,霉菌数测定采用薄膜过滤法;控制菌检查采用常规法检验。     

精制冠心片微生物限度检查方法的建立

摘 要 目的：对精制冠心片微生物限度检查方法进行方法验证/适用性试验。方法: 根据中国药典2010年版和2015年版方法,分别进行试验。结果: 精制冠心片对枯草芽孢杆菌有明显的抑制作用;按中国药典2010年版方法,细菌计数采用培养基稀释法;按中国药典2015年版方法,需氧菌计数采用薄膜过滤法,霉菌和酵母菌计数采用平皿法,控制菌的检查采用常规法。结论:建立了精制冠心片的微生物限度检查方法。     

需氧菌总数计数方法研究示例与讨论

目的： 比较《中国药典》2015年版和2010年版应用平皿法进行药品微生物计数的异同,探讨药典改版对方法建立的影响。方法：按照《中国药典》2015年版和2010年版对厄贝沙坦氢氯噻嗪片和丙酸氟替卡松鼻喷雾剂的微生物计数方法进行方法适用性或验证试验。结果：确立了两种药物按新旧两版药典进行需氧菌总数和细菌数计数的方法。按照《中国药典》2010年版,两种药物均可采用培养基稀释法;按照《中国药典》2015年版,确立两种药物采用薄膜过滤法进行需氧菌总数计数。结论：两版药典试验结果相差较大,表明药典改版后加强了方法的科学性和准确性;平皿法尤其是培养基稀释法在2015年版药典实施以后,实际应用有明显改变。     

无菌预灌装培养平皿的质量控制

目的：通过对比3家不同供应商的无菌预灌装培养平皿实验结果,筛选出质量较好的平皿培养基,同时探讨其供应商筛选、进厂检查和使用方法,为无菌药品生产企业进行无菌预灌装培养平皿的质量控制工作提供参考。方法：分别对3家供应商的无菌预灌装培养平皿进行3个批次的模拟使用,培养基无菌性、内层包装袋无菌性、平皿密闭性和培养基适用性检查,筛选适合用于无菌生产区洁净环境微生物监测的平皿培养基。结果：3家供应商的模拟使用、培养基无菌性和内层包装袋无菌性实验结果没有差异,供应商A的平皿密闭性和培养基适用性实验结果较另外两家更好。结论：本实验方法可用于筛选质量较好的无菌预灌装培养平皿。     

3种咪唑类抗真菌乳膏剂微生物限度检查方法学研究

目的建立硝酸咪康唑、酮康唑、曲安奈德益康唑3种咪唑类抗真菌乳膏剂的微生物限度检查方法。方法采用含5%聚山梨酯80的pH 7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液制备3种乳膏剂1：10供试液,并稀释至1：20和1：50,分别加入金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉接种无菌平皿中,按照《中国药典》2015年版四部1105考察平皿法及稀释-平皿法计数方法适用性;分别取3种乳膏剂加入无菌pH 7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液和十四烷酸异丙酯两相系统中萃取,取萃取后的下层水相的上清液薄膜过滤处理后,分别加入5种试验菌,进行萃取-薄膜过滤法计数法适用性试验;分别取未经萃取-薄膜过滤处理和经过萃取-薄膜过滤的1：10供试液,接种至不同体积的胰酪大豆胨液体培养基中,按照《中国药典》2015年版四部1106进行控制菌检查适用性试验。结果通过平皿法或稀释处理,3种乳膏剂的3种细菌类试验菌回收率即符合要求;3种乳膏剂对白色念珠菌、黑曲霉均有较强的抑菌作用,无论是平皿法还是稀释处理后的平皿法,2种试验菌回收率均远小于0.5,不符合方法适用性要求。萃取-薄膜过滤法可有效去除3种咪唑类抗真菌乳膏剂对各试验菌的抑菌作用,3种乳膏剂的试验菌回收率均在0.5~2.0,符合计数方法适用性要求。经过萃取-薄膜过滤处理的供试液控制菌检出优于未经处理的供试液。结论采用萃取-薄膜过滤法可解决样品抑菌性的去除和滤膜堵塞的问题,适用于3种咪唑类抗真菌类乳膏剂的微生物限度检查。     

地拉罗司分散片微生物限度检查方法研究

目的 建立地拉罗司分散片的微生物限度检查方法。方法 根据中国药典2015年版四部通则1105非无菌产品微生物限度检查中的微生物计数法,通则1106非无菌产品微生物限度检查中的控制菌检查法和通则1107非无菌药品微生物限度标准进行方法适用性试验。微生物限度检查方法学适用性试验采用常规法筛查了抑菌性,然后利用稀释和中和原理改进供试液的制备,即将中和剂3%聚山梨酯-80、0.3%卵磷脂添加至pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液作为稀释液,需氧菌总数计数（稀释成1：500）及霉菌和酵母菌总数计数（稀释成1：50）均采用平皿法,控制菌检查法采用培养基稀释法（500 mLTSB）。结果 5种试验菌的回收试验结果均在0.5~2.0之间。结论 该方法适用于地拉罗司分散片微生物限度的检查。     

不锈钢载体型过氧化氢蒸汽灭菌生物指示剂芽孢计数方法的建立

目的  建立不锈钢载体型过氧化氢蒸汽灭菌生物指示剂总芽孢计数的方法。方法  采用不同洗脱液及不同超声参数组合充分洗脱不锈钢载体上的芽孢，并对其进行激活、培养和计数，以考察生物指示剂的芽孢回收率；通过重复性实验确定其最优试验参数，建立总芽孢计数检测方法，并对该方法进行精密度和重现性验证。结果  以含0.1%吐温80的灭菌纯化水作为洗脱液，超声频率40 kHz、功率500 W为超声条件作用50 min，芽胞回收率最高可达135.6%，确定该实验参数组合为样品最佳处理条件；3名实验人员分别对3批生物指示剂开展重复性实验，其精密度相对标准偏差在4.0%〜14.8%范围内，重现性相对标准偏差分别为8.4%、11.6%和13.8%，该方法的精密度和重现性达到中国药典2020年版的要求。结论  研究建立的检测方法可用于不锈钢载体型过氧化氢蒸汽灭菌生物指示剂芽孢载量计数。     

微孔板与标准平皿Ames试验比较研究

目的 使用鼠伤寒沙门菌和大肠埃希菌及阳性剂开展基于6孔板、24孔板和标准10 cm平皿的Ames试验，为确立标准化微孔板Ames试验奠定研究基础。方法 6种不同鼠伤寒沙门菌（TA97、TA98、TA100、TA102、TA1535、TA1537）和1种大肠埃希菌（WP2 uvrA）经鉴定及扩增后，分别使用标准平皿、6孔板和24孔板在有无S9代谢活化条件下使用不同浓度的阳性剂开展平板掺入法Ames试验。所有样本置37℃培养约48 h后进行菌落计数。结果 所有试验条件下均出现浓度相关性的回复菌落形成率增加，且最高浓度条件下的菌落数高于对照组3倍。然而微孔板中可出现阴性背景菌落数过少的情况，阳性剂的用量也不能照搬标准平皿中的浓度设置。结论 本研究所用条件可成功开展基于6孔板和24孔板的Ames试验，其试验条件和背景数据需要经过摸索与积累。     

肠炎宁片2015年版药典微生物限度检查法验证与评价

摘 要 目的：建立肠炎宁片微生物限度检查方法,并对方法进行验证和评价。方法: 需氧菌总数计数法及霉菌和酵母菌总数计数法均采用平皿法,供试液浓度分别为1∶100和1∶10。大肠埃希菌检查、耐胆盐革兰阴性菌检查和沙门菌检查均为常规法。结果: 5种试验菌的回收试验结果均在0.5~2.0之间。结论:该方法适用于肠炎宁片的微生物限度检查。     

曲安奈德原料药微生物总数检查法验证

目的 建立曲安奈德的微生物限度检查法并进行验证。方法 按平皿法对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉5种试验菌分别进行3次独立的平行试验,并分别计算各试验菌每次试验的回收率,以验证细菌、霉菌及酵母菌计数方法的可行性。结果 营养琼脂培养基中添加0.001% TTC菌体显色剂能有效地对细菌着色,保证细菌计数的准确性;用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100 mL加10 g聚山梨酯80的方法制备样品液,5种试验菌均取得了很好的回收率（>70%）。结论 所建立的曲安奈德原料药的细菌、霉菌及酵母菌的计数方法是可行的。     

流式细胞术和平板计数法用于地衣芽孢杆菌活菌制剂检测的比较研究

目的 考察流式细胞技术和平板计数法2种方法检测地衣芽孢杆菌活菌制剂（片剂、颗粒剂和胶囊剂）中芽孢数的不同。方法 分别采用BD FACSMicroCount全自动微生物分析系统和平板计数法检测不同水浴温度及不同水浴时间处理过的地衣芽孢杆菌活菌胶囊中的芽孢数。同时采用上述2种方法检测3种地衣芽孢杆菌活菌制剂（片剂、颗粒剂和胶囊剂）中的活菌数、芽孢数和芽孢率。结果 流式细胞技术和平板计数法对于检测不同水浴温度及不同水浴时间处理过的地衣芽孢杆菌活菌胶囊中的芽孢数无显著性差异。采用上述2种方法检测的3种地衣芽孢杆菌活菌制剂（片剂、颗粒剂和胶囊剂）中的活菌数、芽孢数和芽孢率的结果比较均无显著性差异。结论 流式细胞技术和平板计数法对于3种地衣芽孢杆菌活菌制剂（片剂、颗粒剂和胶囊剂）检测活菌数、芽孢数和芽孢率无显著性差异。     

Determining the Capability of a Drug Product to Be Terminally Sterilized: A Case Study Involving a Heat-Sensitive,Oxygen-Sensitive Drug Product

ABSTRACT

A decision scheme for determining the capability of a finished product dosage form to be terminally sterilized was presented and followed for a heat-sensitive, oxygen-sensitive drug product (DP). Studies were conducted first in a laboratory steam sterilizer and then in a production unit. When a nonheat-sensitive steam sterilization cycle produced unfavorable loss of potency and increases in the amount of impurities, a new heat-sensitive steam sterilization cycle was investigated. An acceptable product was produced by reducing the headspace oxygen level and reducing the heat delivered to the product during terminal sterilization. The amount of sterilizing steam heat delivered to the product was reduced by reducing the allowable temperature range from set-point of the terminal steam sterilizer, and by developing a new heat-sensitive cycle. The heat-sensitive cycle, with a model based upon a known relationship of the biological indicator, product D value, and the environmental bioburden, can achieve a 10^?6 sterility assurance level when it delivers an F_o ≥ 4 min. When the standard terminal sterilization model and cycle produced unacceptable levels of degradation, formulation/ production changes, and terminal sterilization model and cycle modifications were explored, before the DP was directed to aseptic filling. Acceptable moist heat terminal sterilization the DP was then achieved.     

常用消毒灭菌法效果评价

目的：熟悉压力蒸汽灭菌,紫外线消毒效果实验的检测方法。方法：依据中国药典2010版标准要求,用标准消毒灭菌的检测方法对常用消毒灭菌效果进行评价。结果：指示菌杀灭率≥99.9%。结论：通过实验证明,常用的压力蒸汽灭菌和紫外线消毒的检测方法效果理想,消毒合格。     

2种医院制剂微生物限度检查方法学适用性研究

目的：建立微生物限度检查方法,保证微生物限度检查结果的准确性。方法：依据《中国药典》2015年版四部通则1105及1106对制剂中需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数法及控制菌检查方法进行适用性验证。结果：宣肺止嗽丸需氧菌总数计数检查采用培养基稀释法,霉菌和酵母菌总数计数及控制菌检查采用常规法。消炎栓需氧菌、霉菌和酵母菌总数计数及控制菌检查均需采用供试液稀释法。结论：医院制剂微生物检验方法应该按照药典规定进行升级,完成方法学验证后进行检验。     

培养基用酪蛋白胨的质量研究

目的：考察国内外用于培养基的酪蛋白胨质量状况。方法：抽取目前国内外常用的6家企业（国外3家,编号为A、B、C;国内3家,编号为D、E、F）的14批酪蛋白胨样品,分别采用干燥失重、酸碱度、碱性沉淀和磷酸盐沉淀等理化分析方法,以及耐热菌数、色素生成能力、促生长能力等微生物学方法进行质量评价。结果：6个厂家样品澄明度良好,灭菌前后pH值稳定,个别样品存在磷酸盐沉淀或碱性沉淀阳性反应;国外产品总体微生物控制较好,未检出耐热菌,国内个别样品耐热菌数达390cfu·g^-1;不同企业产品色素生成能力存在明显差异;6家企业样品促生长能力均大于80%。结论：目前市场酪蛋白胨产品存在质量差异,国内产品批间差异大,国外个别产品在色素生成能力和磷酸盐沉淀或碱性沉淀等我国传统关注项目上也存在一定问题,生产中应根据不同培养基用途进行严格筛选。     

生孢梭菌孢子作为生物指示剂的研究

用生孢梭菌孢子作为输液产品湿热灭菌工艺的生物指示剂，采用残存曲线法测定生孢梭菌孢子在3种溶液中的耐热性，确定灭菌工艺的最小F0值，制订合理的灭菌工艺微生物学验证方案。     

生物洁净室真菌数的检测与评价

目的:探讨真菌数控制对生物洁净室洁净度评定的影响.方法:按照<医药工业洁净室(区)沉降菌的测试方法>GB/T16294～1996,静态下对我所百级、万级洁净室进行常规布点,营养琼脂培养基平板与玫瑰红钠琼脂培养基平板各半,放置30min后分别采样检测.结果:对5间洁净室17次检测出真菌菌落数进行分析,结果真菌的检出占被检出微生物总数的比例最高为47%,最低为21.6%,将细菌和真菌菌落数合计作为测试区域沉降菌数,百级不合格率增加50%,万级不合格率增加70%.结论:应重视真菌数对洁净室洁净度结果的影响.建议在洁净室(区)的空气洁净度级别标准中应增加真菌数的检测,计算细菌菌落数和真菌菌落数总和作为微生物最大允许数,以控制生物洁净室的洁净度.     

胰酪胨大豆培养基和改良马丁培养基药品无菌检查效果的比对研究

目的: 比较药品无菌检查用的胰酪胨大豆培养基(TSB)和改良马丁培养基(MMB)对细菌和真菌的检测灵敏度和促生长能力。方法: 选用3株细菌和3株霉菌试验菌株,分别采用《中国药典》无菌检查法规定的培养基适用性检查中半定量检测方法和以平板菌落计数法为基础计算试验菌株生长率的定量方法,分别测试培养基对试验菌株的促生长能力和检测灵敏度。结果: 6株试验菌株在不同生产厂家的受试TSB和MMB中,其生长管数和生长率经统计学分析,差异均无显著性(P>0.05),灵敏度可达到 < 0.1 cfu·mL^-1;不同生产厂家间两受试培养基对6株试验菌株的促生长能力和检测灵敏度差异也无显著性(P>0.05)。结论: 在一定的接种和培养条件下,TSB可替代MMB用于药品无菌检查中的需氧菌和真菌检测。