喉鳞癌9p13-23区域微卫星杂合性缺失精细作图及其临床意义

背景与目的:微卫星(microsatellite)是广泛分布于生物基因组中的DNA重复序列,与许多重要基因紧密连锁。在肿瘤中微卫星象抑癌基因一样常常发生杂合性缺失(lossofheterozygosity,LOH)。在某些特定肿瘤中有些微卫星位点存在高频发的LOH“热点”,而与该肿瘤发生、发展相关的抑癌基因很可能就隐藏在这些“热点”附近。微卫星LOH的研究是寻找新的抑癌基因的重要方法。本研究旨在探讨喉鳞癌9p13-23区域微卫星LOH的热点及其与喉鳞癌患者临床病理特征的关系。方法:采用显微切割法从喉鳞癌组织石蜡切片中挑取肿瘤组织,苯酚氯仿抽提肿瘤组织和外周血淋巴细胞基因组DNA,应用9p13-23区域13个多态性微卫星标记对42例喉鳞癌组织及其相应的外周血淋巴细胞DNA进行PCR扩增和变性凝胶电泳,并对频发微卫星LOH的发生与喉鳞癌患者临床病理特征的关系进行比较分析。结果:(1)42例喉鳞癌组织9p13-23区域微卫星LOH的发生率是97.6%(41/42),LOH发生率最高者是位于9p22-23的D9S162(89.5%),其次是位于9p21的D9S171(80.0%),与p16基因紧密连锁的D9S1748的LOH发生率仅50.0%;(2)等位基因缺失作图发现42例喉鳞癌组织在9p13-23上存在两个明显的LOH较小区域,分别位于9p21的D9S161～D9S171之间和9p22-23的IFNA～D9S162之间;(3)年龄<60岁、声门     

肝外胆管癌染色体3p21.3区段微卫星不稳定和杂合性缺失分析

目的：研究肝外胆管癌染色体3p21．3区段的微卫星不稳定性（MSI）度杂合性缺失（LOH），探讨染色体3p21．3区段遗传不稳定性与肝外胆管癌的发生发展的关系，定位该区段上肝外胆管癌相关肿瘤基因。方法：用PCR-SSCP方法检测24例肝外胆管癌染色体3p21.3区段上D3S1568，D3S1621，D3S1578和D3S1289四个微卫星位点的MSI和LOH发生率．分析其与临床病理因素之间的关系。结果：24例肝外胆管癌组织中．四个微卫星位点的MSI和LOH平均发生率分别为7．23％和15．63％。其中D3S1621位点的LOH最高（45.83％．11／24），并与TNM分期、是否伴有局部／淋巴结转移相关（p〈0．05）。结论：染色体3p21．3区段D3S1621住点高频率杂合性缺失．提示3p21．3区段可能定位有肝外胆管癌的候选抑癌基因，并在肝外胆管癌的发生发展过程中发挥重要作用。     

p16INK4a和Ki67在胃癌及癌前病变中的表达和意义

目的:探讨p16INK4a、Ki67在慢性胃炎、胃上皮内瘤变、胃癌及癌旁非肿瘤性胃黏膜中的表达和临床意义。方法:采用免疫组织化学SP法检测23例慢性胃炎、16例胃低级别上皮内瘤变、16例胃高级别上皮内瘤变、45例胃癌及癌旁非肿瘤性胃黏膜组织样本中p16INK4a、Ki67的表达。结果:p16INK4a在慢性胃炎、低级别上皮内瘤变、高级别上皮内瘤变和胃癌细胞中均呈核浆型表达,阳性表达率分别为4.34%、25.00%、62.50%、66.67%,在癌旁非肿瘤性胃黏膜腺体上皮细胞中呈阴性表达;Ki67在慢性胃炎、低级别上皮内瘤变、高级别上皮内瘤变和胃癌组织细胞中呈核型表达,Ki67指数分别为17.39%、37.50%、56.25%和77.78%。结论:p16INK4a代偿性高表达是胃癌和胃癌前病变的重要免疫表型特征,联合检测p16INK4a和Ki67表达可作为胃癌诊断的分子靶标和可靠方法。     

microRNA34a／p53信号通路在大鼠肺鳞癌发生过程中的表达及意义

目的：探讨microRNA34a／p53信号通路在大鼠肺癌发生过程中的表达及意义。方法：用免疫组化检测大鼠模型不同组织中p53蛋白表达情况;qRT－PCR技术检测正常大鼠肺组织、低级别上皮内瘤变、高级别上皮内瘤变（原位癌）、浸润癌中microRNA34a的相对表达量。结果：p53蛋白阳性表达率在正常对照组0（0／40）、低级别上皮内瘤变组45．5％（5／11）、高级别上皮内瘤变组（原位癌）76．5％（13／17）和浸润性癌组80．0％（16／20）中表达逐渐增高,阳性强度增高。p53蛋白在正常对照组与低、高级别上皮内瘤变、浸润癌阳性表达比较,差异有统计学意义（P＜0．05）。microRNA34a在正常对照组、低级别上皮内瘤变组、高级别上皮内瘤变组、浸润癌组中平均表达量逐渐降低,分别为0．9890±0．0942、0．8654±0．0356、0．0446±0．0017、0．0091±0．0041,浸润癌表达水平显著低于对照组、低级别上皮内瘤变组、高级别上皮内瘤变组（P＜0．05）。p53蛋白与microRNA34a在肺癌中的表达呈负相关性（P＜0．01）。结论：microRNA34a／p53通路与肺癌的发生发展具有密切关系,联合检测有利于肺癌的早期诊断。     

血管内皮生长因子-C及p63在早期食管癌和上皮瘤变组织中的表达

目的探讨血管内皮生长因子-C（VEGF—C）和p63蛋白在早期食管癌及上皮内瘤变组织中的表达及其临床意义。方法随机选取正常食管黏膜、低级别上皮内瘤变、高级别上皮内瘤变及早期食管癌组织共146例,应用免疫组织化学EnVision二步法检测VEGF—C和p63蛋白在不同病理阶段中的表达。结果不同病理阶段的VEGF—C表达差异有统计学意义（X^2=47．455,P〈0．001）。正常黏膜与高级别上皮内瘤变（X^2=26．483,P〈0．001）、正常黏膜与早期癌（X^2=36．721,P〈0．001）、低级别上皮内瘤变与高级别上皮内瘤变（X^2=10．025,P〈0．0083）、低级别上皮内瘤变与早期癌（X^2=16．734,P〈0．001）之间VEGF-C的表达量构成比差异均有统计学意义。病理阶段与VEGF-C表达程度间呈正相关（r=0．462,P〈0．001）。不同病理阶段的p63表达量构成比差异有统计学意义（X^2=28．962,P〈0．05）。正常黏膜分别与低级别上皮内瘤变（X^2=12．735,P=0．005）、高级别上皮内瘤变（X^2=20．421,P〈0．001）、早期癌（X^2=20．854,P〈0．001）各组间的p63表达量构成比差异均有统计学意义;病理阶段与p63表达程度间呈正相关（r=0．272,P〈0．05）。结论VEGF—C和p63蛋白与早期食管癌和上皮内瘤变发生显著相关,可作为预警指标。     

微卫星不稳定性和杂合性丢失与宫颈癌相关性的研究

目的 :探讨染色体微卫星不稳定性 (MSI)及杂合性丢失 (lossofheterozygosity ,LOH)在宫颈癌的发生及发展的相关性。方法 :运用p53(D17S786)、9p2 1(D9S171) 2对微卫星标志 ,结合PCR银染技术 ,分别检测 4 8例宫颈癌组织、癌旁组织及周围静脉血DNA的MSI(microsatelliteinstability)和LOH及其与临床分期和病理分级的关系。结果 :4 8例宫颈癌组织的 2个位点进行了微卫星MSI和LOH多态性分析 ,分别为 56%、2 5% ,临床病理分级 (P <0 0 5) ,不同病理分级的统计学分析差异有显著性。结论 :p53(D17S786)、9p2 1(D9S171) 2个不同的位点 17号、9号染色体上存在的抑癌基因的失活以及微卫星不稳定性可能在宫颈癌的发生发展中起重要作用     

胸腺瘤微卫星不稳定和杂合性缺失分析

目的：通过检测胸腺瘤微卫星不稳定（microsatellite instability，MSI）和杂合性缺失（loss of heterozygosity，LOH）发生频率，探讨上述遗传学改变与胸腺瘤临床病理的关系。方法：选择5个微卫星多态性标记，从石蜡包埋的存档标本中选取28例胸腺瘤组织和其对应的自身正常对照组织，提取DNA后用PCR扩增，6％聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE），银染显色后进行MSI和LOH分析。用免疫组织化学SP法观察EGFR、p53、Bcl-2及Ki-67在胸腺瘤中表达情况。结果：28例胸腺瘤中有11例出现MSI或LOH。在所检5个位点中D6S1708、TP53、DM、D11S988和D8S136微卫星不平衡发生率分别为21．4％（6／28）、10．7％（3／28）、14．3％（4／28）、10．7％（3／28）和0％（0／28）。D6S1708遗传学改变多为LOH（5／6），DM和D11S988位点分别仅有MSI和LOH。胸腺瘤MSI和LOH发生与患者年龄、性别、是否合并重症肌无力（myasthenia gravis，MG）、组织学分型、临床分期以及免疫组织化学EGFR、p53、Bcl-2、Ki-67表达差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论：D6S1708、TP53、DM和D11S988可以作为研究胸腺瘤微卫星的位点，微卫星不平衡可能在胸腺瘤的发生中起一定作用，但其与胸腺瘤临床病理特点的关系尚需进一步探讨。     

26例喉鳞状细胞癌微卫星不稳定性及杂合性丢失研究

[目的]在喉癌易感染色体区域8p23.2、9p21.1、3p24.3筛查肿瘤相关基因,探讨CSMD1基因与喉鳞癌的相关性.[方法]在8p23.2、9p21.1、3p24.3区域选择D8S518、D8S264、D9S251、D3S2303四个微卫星多态性标记,应用聚合酶链反应(PCR)-变性聚丙烯酰胺凝胶电泳-银染法对26例喉鳞癌进行微卫星不稳定性及杂合性丢失分析.[结果]4个多态性标记中的3个有不同程度的微卫星不稳定性及杂合性丢失.其中D9S251位点MSI检出率为19%.D8S518位点LOH发生率为5%,MSI的发生率为10%,总的突变率为15%.D8S264位点MSI发生率为9.5%.[结论]8p23.2、9p21.1区域可能存在与喉鳞癌发生有关的基因,CSMD1基因可能是一个与喉鳞癌有关的抑癌基因.     

Cyclin D1、p16和p21在胃癌发展中的意义

目的：探讨癌基因Cyclin D1、抑癌基因p16和p21与胃癌发展的生物学行为的关系。方法：采用免疫组化LSAB法测定43例胃癌、12例胃不典型增生组织和11例胃正常组织中Cyclin D1、p16和p21蛋白的表达。结果：Cyclin D1在正常胃组织中无表达，在胃不典型增生组织阳性率为33．3％，在胃癌组织中为55．8％。p16在正常胃组织中的阳性率为81．8％，胃不典型增生组织为41．7％，在胃癌组织中为48．8％(P＜0．05)。p21在正常胃组织中的阳性率为90．9％，在胃不典型增生组织中为58．3％，在胃癌组织中为46．5％。Cyclin D1与p16、p21分别呈负相关(P＜0．05，r＝-0．3538；P＜0．05，r＝-0．3317)。p16与p21无相关性(P＞0．05，r＝-0．0263)。结论：Cyclin D1的高表达，p16和p21的低表达在胃癌的发展中起着重要作用，并有可能成为研究胃癌发展的有用指标。     

不同级别胃黏膜上皮瘤变组织TLR4表达与HP感染的相关性研究

目的:观察低级别和高级别上皮瘤变组织和胃癌组织TLR4的表达和HP感染的关系,探讨两者的相关性.方法:应用免疫组化方法检测30例正常胃黏膜,30例低级别上皮内瘤变组织,30例高级别上皮内瘤变组织及30例胃癌组织中的1LR4的表达.利用14C幽门螺杆菌呼气试验及改良Giemsa染色法检测HP,两项均阳性者诊断为HP感染.结果:TLR4在低级别上皮内瘤变组的阳性表达率为90.0%,高级别上皮内瘤变组为86.7%,胃癌组63.3%,正常组26.7%,HP阳性率在低级别上皮内瘤变组为93.3%,高级别上皮内瘤变组90%,正常组33.3%;低级别上皮内瘤变组、高级别上皮内瘤变组、胃癌组TLR4阳性率与正常组比较,P＜0.05,低级别上皮内瘤变组、高级别上皮内瘤变组TLR4阳性率与胃癌组比较,P＜0.05.TLR4表达与HP感染检测结果:HP感染的胃黏膜组织TLR4的阳性表达率为83.53%,HP阴性组TLR4阳性表达率为25.71%,TLR4表达和HP感染具有相关性r=0.152,P=0.012.HP感染与不同级别胃黏膜上皮瘤变组织TLR4表达的相关性检测结果:低级别胃黏膜组织TLR4的阳性表达率为88.89%,高级别胃黏膜组织为88.00%.胃黏膜上皮组织瘤变级别与,TLR4表达无相关性,P＞0.05.结论:低级别上皮瘤变和高级别上皮瘤变胃黏膜组织TLR4的阳性表达明显高于胃癌组织;HP感染和TLR4阳性表达呈正相关,HP感染的不同级别胃黏膜上皮瘤变组织之间,TLR4表达无相关性.     

Loss of heterozygosity of microsatellite loci on chromosome 9p in astrocytic tumors and its prognostic implications

Summary We analyzed 19 samples of various astrocytic tumors (3 astrocytomas, 5 anaplastic astrocytomas, and 11 glioblastomas) for loss of heterozygosity (LOH) on chromosome 9p at 6 microsatellite loci (D9S54, IFNA, D9S171, D9S104, D9S165, and D9S166). Polymerase chain reaction was performed and the products were electrophoresed on polyacrylamide gel. As many as 16 of the 19 samples (84%) exhibited LOH. Three of the 7 informative loci (43%) showed LOH at D9S54, 7 of 17 (41%) at IFNA, 8 of 14 (57%) at D9S171, 7 of 14 (50%) at D9S104, 4 of 8 (50%) at D9S165, and 2 of 7 (29%) at D9S166. LOH was recognized in 57% of the informative loci in anaplastic astrocytomas and 54% in glioblastomas, while it was seen in only 8% of the astrocytomas. Accumulation of LOH with progression or recurrence of tumor was seen in 2 patients. Although, the survival period of the patients correlated well to the histological types of astrocytic tumors, we could not find any obvious correlations between the presence/absence of LOH and the survival period in these patients. In conclusion, we speculate that LOH on chromosome 9p is involved in malignant progression of astrocytomas, but has no significance in predicting survival period in these patients.     

Cyclin D1和p16在青年妇女早期子宫颈鳞癌诊断中的表达及意义

目的探讨Cyclin D1、p16在青年妇女子宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia CIN）及子宫颈早期鳞状上皮癌中的表达意义。方法观察Cyclin D1、p16在CINⅠ级40例、CINⅡ及CINⅢ级各20例、早期浸润癌30例的免疫组织化学表达,设立30例正常子宫颈及慢性炎性反应子宫颈上皮作对照组。结果Cyclin D1、p16在正常子宫颈组织中低表达,在CINⅡ~Ⅲ级组和早期浸润癌组中表达升高,且有递增的趋势（P〈0.01）。Cyclin D1在正常子宫颈组与CINⅠ组,CINⅡ组与子宫颈癌组之间比较差异有统计学意义（P〈0.05）。p16在正常子宫颈组和CINⅡ组相比差异有统计学意义（P〈0.05）。CINⅠ级组中p16表达亦较低,与子宫颈癌组相比差异有统计学意义（P〈0.05）。在早期浸润癌中Cyclin D1与p16的表达无明显相关性（P〉0.05）。结论Cyclin D1和p16与CIN及癌变有密切关系,可作为恶性转化的指标之一。     

宫颈鳞状细胞癌发生过程中基因丢失的研究

  目的 探讨宫颈鳞状上皮细胞癌发生发展过程中基因变化的规律。方法 选择46例伴有高级别不典型增生的宫颈鳞状上皮细胞癌,采用显微切割、聚合酶链反应、聚丙烯酰胺高压电泳、放射自显影等技术,对照分析正常组织、CIN（Ⅱ、Ⅲ级）、宫颈鳞状上皮细胞癌中,9号染色体上7个微卫星位点的LOH的变化。结果 CIN（Ⅱ、Ⅲ级）总LOH率为16 %,宫颈鳞状上皮细胞癌总LOH率为25 %。7个微卫星位点的LOH在前者依次为D9S171（30 %）D9S162（23 %）、D9S43（20 %）、D9S303 （17 %）、D9S753（12 %）、D9S242（11 %）,而在D9S1748上未发现有LOH的发生;后者依次为D9S171（41 %）、D9S43（33 %）、D9S162（31 %）、D9S242（24 %）、D9S303（17 %）、D9S753（17 %）、D9S1748（13 %）。有CIN（Ⅱ、Ⅲ级）三例患者（第16例在D9S303、第42例在D9S171、第34例在D9S162位点）在出现LOH,而在宫颈鳞状细胞癌中未有发生。结论 ① 从正常鳞状上皮至CIN再到浸润性宫颈鳞状细胞癌,有基因异常累积的发生;②P15基因的失活与宫颈癌的发生高度相关;③在D9S43、D9S162及D9S242上或其附近可能也存在与宫颈癌发生相关的抑癌基因;④有的高级别不典型增生与宫颈鳞状上皮细胞癌源自不同克隆,从基因水平为宫颈癌的"多灶性"发生提供了理论依据。     

p53 mutation and allelic loss of chromosome 3p, 9p of preneoplastic lesions in patients with nonsmall cell lung carcinoma

BACKGROUND: An accumulation of mutations can result in carcinogenesis. Comparing genetic alterations in preneoplastic lesions with those seen in cancer in the same patient may be helpful in the early diagnosis of lung carcinoma or preneoplastic lesions. METHODS: To identify genetic alterations that may play a role in the development of nonsmall cell lung carcinoma (NSCLC), the authors examined the p53 gene and microsatellite markers on chromosome 3p (D3S643, D3S1317), 9p (D9S171, IFNA) in 35 bronchial metaplastic lesions and 28 alveolar hyperplastic lesions from 61 patients. RESULTS: A total of 8 metaplastic lesions (1 squamous metaplasia and 7 dysplasias) and 3 alveolar hyperplastic lesions (with atypia) showed genetic alterations, including loss of heterozygosity (LOH) of 3p, 9p and mutations of the p53 gene. In an analysis of microsatellite markers, 5 of 35 cases of squamous cell carcinoma (SCC) and 3 of 26 cases of adenocarcinoma (Ad) showed LOH in both preneoplastic lesions and synchronous cancers. Nine patients (25.7%) with SCC and 6 patients (23.1%) with Ad were shown to have mutations of the p53 gene by single-strand conformation polymorphism. In 2 of these 9 patients with SCC, the same mutation was observed in both dysplasia and SCC. CONCLUSIONS: These findings suggest that several genetic alterations may occur in preneoplastic lesions or the early stage of SCC of the lung, whereas the genetic alterations examined appeared to occur relatively late in the pathogenesis of pulmonary adenocarcinoma.     

Characterization of genetic alteration patterns in human esophageal squamous cell carcinoma using selected microsatellite markers spanning multiple loci

In order to identify representative genetic alterations in esophageal squamous cell carcinomas (ESCC) and useful markers for future early detection, 34 ESCC samples with neighboring normal epithelia and 30 esophageal biopsy samples from Linzhou, P.R. China, were studied. Of the 38 microsatellite markers selected, half were linked with tumor suppressors. More than 40% of the tumor samples showed loss of heterozygosity (LOH) in at least one of the eight markers, D3S1067 and D3S1561 (both linked to hMLH1 locus), FABP2, D4S1613, D9S171 (p14ARF, p15INK4b, p16INK4a loci), Rb1 (intron), p53-2 (intron), and NM23-H1. Most of the 38 microsatellite markers did not display microsatellite instability (MSI) in more than 30% of the tumor samples, except D9S942 (p14ARF, p15INK4b, p16INK4a loci) and Bat26, which showed frequency at 32 and 41%, respectively. Of all the ESCC samples examined, 20 samples exhibited LOH in 25% or more of the informative markers. Three samples displayed MSI in more than 30% of the markers, indicating that MSI might be an important event in these subset ESCC cases. Statistically significant correlations were found between LOH of the hMLH1 locus and the general LOH status of the sample, and between the LOH of the hMLH1 locus and p53 mutations. In addition, correlation was found between MSI in D3S1067/D3S1561 and the general MSI status in the samples. However, MSI in the introns of hMLH1 and hMSH2 were not correlated with the general MSI status of the tumors. LOH analysis was also performed in 30 esophageal biopsy samples containing precancerous lesions with matching blood samples using nine microsatellite markers selected from the above studies. LOH frequence ranged from 0 to 33% in informative cases, mostly in the 9p21 and p53 gene regions, suggesting these regions are possible targets of genomic instability in early stage ESCC carcinogenesis. The results demonstrate the degree of genetic alterations at different loci of the chromosomes. Some of the microsatellite markers may be useful for the early detection of ESCC.     

宫颈鳞状上皮病变组织中乳头状瘤病毒和Ki-67及p16^INK4a蛋白表达意义的研究

目的：探讨Ki-67、p16^INK4a和人乳头状瘤病毒（HPV）在不同程度宫颈鳞状上皮病变组织中的表达及临床病理意义。方法：采用原位分子杂交及免疫组化方法,检测HPV的不同亚型、Ki-67、p16^INK4a蛋白在182例不同程度宫颈病变组织中的表达。结果：HPV在不同程度病变中总检出率52.19%（95/182）;在宫颈高级别上皮内瘤变及鳞癌组中检出最多的感染类型为HPV16/18,而HPV6/11在尖锐湿疣组检出率87.50%（21/24）最高;随着宫颈病变严重程度的增加,级别升高,Ki-67、p16^INK4a阳性程度呈递增趋势。Ki-67、p16^INK4a与HPV16/18型感染关系密切,χ^2=11.779 8,P〈0.01;Ki-67也与HPV6/11型有关。结论：HPV16/18型及Ki-67、p16^INK4a在宫颈高级别上皮内瘤变及鳞癌中表达明显升高,可能对宫颈鳞癌的发生、发展具有协同作用。     

人类第9号染色体微卫星改变与非小细胞肺癌发生及转移的关系

目的 探讨人类第９号染色体短臂（９ｐ）上微卫星改变与肺癌发生及转移的相关性。方法 应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合微卫星银染分析方法检测３２例非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）组织中两个微卫星标志物ＩＦＮＡ和Ｄ９Ｓ１７１的改变。结果 ３２例ＮＳＣＬＣ患者中,１４例（４３．８％）出现了微卫星标志物改变。其中伴有淋巴结转移的肺癌组织微中微卫星改变检出率为６４．７％,不伴转移的肺癌组织中微卫星改变检出率为２０％,     

ＰＰＡＲγ和ｐ２７在宫颈癌组织中的表达及其临床意义

目的　探讨ＰＰＡＲγ和ｐ２７在宫颈癌组织中的表达及其临床意义。方法　应用免疫组化法检测５０例宫颈癌、２５例宫颈上皮内瘤样变（ＣＩＮ）和１０例正常宫颈组织石蜡包埋组织中ＰＰＡＲγ、ｐ２７的表达。结果　ＰＰＡＲγ在ＣＩＮ和宫颈癌组织中的表达率分别为５２.０％（１３／２５）和７６.０％（３８／５０）,明显高于正常宫颈组织的１０.０％（１／１０）（Ｐ＜０.０５）。ｐ２７在ＣＩＮ和宫颈癌组织中的表达率分别为５６.０％ （１４／２５）和３２.０％（１６／５０）,显著低于正常宫颈组织的８０.０％（８／１０）（Ｐ＜０.０５）。ＰＰＡＲγ阳性表达在不同组织学类型中有统计学意义（Ｐ＜０.０５）;ｐ２７阳性表达在不同组织学类型中无统计学意义（Ｐ＞０.０５）;ＰＰＡＲγ和ｐ２７表达与宫颈癌患者的年龄、临床分期、分化程度均无相关性（Ｐ＞０.０５）。结论　ＰＰＡＲγ和ｐ２７可能参与了ＣＩＮ、宫颈癌的发生、发展,对宫颈癌的诊断有一定的帮助。