文昌鱼石蜡连续切片的制作和苏木精-伊红染色

目的介绍文昌鱼石蜡连续切片的制作和苏木精-伊红(HE)染色的方法。方法利用Leica EG1150分体式石蜡包埋机;Leica VT1000S手动轮转切片机;Leica HI1210摊片机;Leica HI1220烘片机制作文昌鱼石蜡连续切片并进行HE染色。依据对脱水和透明过程中文昌鱼外观的变化以及镜下切片结果的反复比较,总结出各个步骤的时间参数。结果利用上述方法获得清晰的文昌鱼石蜡连续HE染色切片,我们选择了头部、胸部、腹部、尾部四个有代表性的文昌鱼断面,在片中可以清楚地分辨脊索、神经管、鳃、卵巢、肌节、肠等结构。结论本文成功建立文昌鱼石蜡连续切片的制作和HE染色方法,并为研究脊椎动物的起源提供基础资料。     

斑马鱼器官石蜡组织切片制作与观察

为观察斑马鱼(Danio rerio)器官的组织结构,丰富斑马鱼基础形态学资料。本实验以斑马鱼心脏和肝脏为材料,优化斑马鱼石蜡组织切片制作方法,并制作斑马鱼器官组织切片,用苏木精-伊红(HE)染色并采集图像分析。斑马鱼心肌纤维呈梭形,细胞间质少;肝细胞呈多边形,细胞核呈圆形,居中。     

微小组织结构石蜡切片的制备

正微小组织结构是指在组织工程构建过程中获得,具有体积小、结构相对简单等特点的组织样结构;与从成体器官分离、临床病理穿刺活检等途径获取的组织显著不同,因此在制备微小组织结构石蜡切片时,存在诸多问题。本科室根据微小组织的结构特点,通过改良和优化经典石蜡包埋、切片制备方法,分析适合微小组织结构石蜡包埋切片的制作方案,最终完成厚度为5 μm连续石蜡切片的制作,其蜡带完整,HE染色可见微小组织结构的细胞形态正常、着色效果好、色泽对比饱满、各层次结构     

斑马鱼3D解剖互动系统的制作

目的制作斑马鱼三维(3D)解剖互动系统软件。方法采用光学显微镜和微计算机断层扫描技术(Micro-CT)研究斑马鱼的组织构造,并收集其形态结构图像。使用Photoshop对获得的连续切片(HE染色)的图片进行校正,使用Autodesk 3ds Max 2012 64-bit-English软件进行三维模型建立。结果获得了斑马鱼骨骼的3D成像和连续切片图像(雄鱼144张,雌鱼179张),实现了斑马鱼重要器官的3D重构,建立了斑马鱼3D解剖互动系统(V 1.0),获得了计算机软件著作权登记证书(证书号:软著登字第0989966号)。结论斑马鱼3D解剖互动系统软件制作的完成为研究斑马鱼立体形态学奠定了基础。     

二次包埋法手工制作病理学教学组织芯片

目的探讨手工制作教学组织芯片方法的可行性。方法利用组织芯片制备系统,通过二次包埋法,手工制作病理教学组织芯片,经HE染色,光镜下检测组织芯片制作质量。采用四川省病理技术专业委员会对石蜡切片HE制片质量评定得分标准对切片进行评分,并与传统教学组织切片比较。结果组织微阵列(TMA)蜡块中的组织芯点排列整齐,与受体蜡块融合紧密;组织芯片切片基本完整,厚薄均匀,经HE染色后组织形态可利用率为94%～100%,切片质量评分优秀率79%,良好率10%。二次包埋法手工制作的教学组织芯2片与传统组织切片制作方法制作的教学组织切片质量无明显差异性(χ=3.073,P0.05)。结论二次包埋法手工制作教学组织芯片方法简便易行,经济实用低消耗,具有高效快速染色均一性好、自身内对照和可比性强的特点,可在病理教学中推广应用。     

一种病理组织切片恒温染色台的设计

目的设计一种可提高组织切片苏木精-伊红(HE)染色速率及染色质量的病理组织切片染色装置。方法设计制作由水浴箱、带盖染色缸、电控箱三部分构成的组织切片恒温染色台,实验比对组织石蜡切片上的石蜡膜溶于二甲苯的互溶速率和镜下染色效果。结果在37.0℃条件下,石蜡膜在二甲苯中的溶脱时间比室温条件下缩短了近一半的时间,互溶速率两组比较差异有显著统计学意义(P<0.001);在减少1/2染色时间染制的切片组织色泽与室温条件下的染色效果类似,而且细小颗粒着色清晰。结论应用该设备条件的组织切片染色效果优于传统常温方法。     

影响淋巴结HE制片因素的探讨

淋巴瘤因其组织结构致密、细胞丰富等特点,使组织在脱水、透明、浸蜡、切片、染色等方面都受到一定的影响,导致病理诊断困难。作为一名合格的病理医师,要求懂得组织的石蜡包埋和HE染色的机制,熟练掌握石蜡切片和HE染色技术的操作并能够制出一张优质的病理玻片标本。本实验从石蜡切片和HE染色的机制出发,重点探讨淋巴结HE制片的注意事项。     

HE自动染片机应用体会

随着病理技术的发展，自动染片机以其卓越的性能及良好的染色效果已开始逐步取代人工染色，我科近年来在使用HE自动染片机的过程中，对染色程序及染色剂的选择与更换和染片数量进行观察分析和改进，从而提高了石蜡切片的染色质量。     

乙二胺四乙酸联合正丁醇在大鼠胫骨癌痛标本石蜡切片制作中的应用

目的 探索一种简便有效的制作大鼠胫骨癌痛标本石蜡组织切片的方法。方法 取大鼠胫骨癌痛模型组和正常组胫骨标本，使用乙二胺四乙酸（EDTA）加温脱钙联合正丁醇取代传统强酸脱钙、纯酒精脱水和二甲苯透明，制作石蜡切片后HE染色观察。结果 两组大鼠胫骨癌痛标本形态结构均保存完整。与传统方法相比，制片步骤简单，脱水和透明时间较为灵活，蜡块切割性能较好。结论 EDTA与正丁醇的联合应用，是大鼠胫骨癌痛标本石蜡组织切片制作适宜和可靠的方法。     

陈旧肾脏HE染色切片退掉盖玻片后行免疫组化检测

<正>在临床和科研工作中切片大部分都是以HE染色树胶封片,这样可样将切片长期保存。但是往往因为原有组织块丢失而或其他原因需要在原有石蜡HE染色切片原位基础上行免疫组织化学检测。本文就上述问题做了尝试并得到了较好的效果。1材料与方法实验室中存放的陈旧HE染色小鼠肾脏组织切片     

猫视神经连续切片的计算机三维重建

目的制备猫视神经的连续切片,选择合适的染色方法 ,寻找合适的配准方法 ,经图像采集及初步处理后利用计算机的三维重建技术,获得可视化的猫视神经三维结构。方法利用石蜡切片技术的制备猫视神经连续切片,采用特殊的神经三色染色法进行切片染色。利用数码显微镜及Motic Images Advanced 3.0和Motic Images Assembly 1.0软件对连续的猫视神经石蜡切片进行拍照,获得猫视神经连续切片的原始图像,将原始图像在GIMP软件中经过调整亮度对比度、初步图像配准、提取神经束膜图像信息后在Amira软件下,经过计算机在手工配准的基础上进一步自动配准,把二维的切片图像重建成三维的可视化图像。结果实验所得经三色染色的连续切片的原始图像上神经束膜能较好的与周围的组织区分;利用Amira三维重建软件,重建得到猫视神经三维结构图像,重建后的猫视神经结构三维图像可进行任意的切割、旋转、回复、拍照等操作。结论实验证明在不利用标志线的条件下,通过制备视神经连续切片,经过染色拍照,手工图像配准后利用计算机自动配准技术对视神经进行三维重建是完全可行的。     

石蜡切片浸银染色显示大脑锥体细胞的新方法

目的 :组织学包埋制作大脑组织切片的特殊染色方法 ,用火棉胶技术。此法操作时间长 ,步骤复杂 ,单张切片 ,不宜批量教学标本的制作。为此我们研究了一种操作简单 ,适于大批制作的方法。方法 :用石蜡包埋组织块浸银染色显示大脑锥体细胞。结果 :锥体细胞显示清晰。结论 :与传统方法比较 ,此实验方法比较简单、稳定 ,且可连续切片 ,有利于大批教学标本的制作。     

甲基丙烯酸羟乙酯塑料包埋切片技术在小鼠胎脑组织学分析中的应用

目的 探索塑料包埋切片法在小鼠胎脑组织学分析中的应用。 方法 取胚胎期13.5d（E13.5）小鼠,4% 多聚甲醛4℃固定过夜,分离胎鼠头部,甲基丙烯酸羟乙酯(HEMA)塑料包埋组织并切片;对切片进行HE 染色。 结果 与石蜡包埋相比,采用HEMA塑料包埋的方法进行胎鼠脑组织学分析,形态结构保存较完整、HE染色效果较清晰。 结论 利用塑料包埋技术进行小鼠胎脑组织学分析,优于石蜡包埋方法。     

油红O染色在甲醛固定的乳腺富于脂质癌中的实践应用

在临床病理诊断中,常规HE切片中常可见到胞质透亮或胞质内有许多大小不等的圆形空泡,此现象是水泡样变、黏液样物质、脂肪或脂质组织,还是溶解了的糖原,往往不易区分,这就要依赖于脂肪染色、黏液染色、糖原染色等来鉴别。黏液染色和糖原染色可用石蜡包埋后切片染色即可,而脂肪染色不能用常规石蜡包埋组织切片。日常病理诊断工作中,很多标本可能未行冷冻或者在冷冻时未考虑脂肪染色的问题,但在常规HE染色切片观察时却要考虑或验证其脂质或脂肪成分。为弥补新鲜冷冻时未行脂肪染色,本文收集1例已明确诊断为乳腺富于脂质癌的剩余标本,用甲醛固定后的标本来制作冷冻切片进行油红O脂肪染色,并记录甲醛固定30天内的标本中脂肪染色情况。     

塑料包埋技术在骨组织研究中的应用

目的研究塑料包埋技术制作的不脱钙硬组织切片,确定制作的关键步骤及用于骨组织研究的优点。方法选取狗胫骨节段或带有金属种植体的骨材料塑料包埋,LeicaSP1600切片机（德国）切片,用苦味酸品红染色观察,并与常规石蜡包埋相比较。结果不脱钙骨组织经塑料包埋技术处理后,可清楚地观察类骨质形成、多孔材料及种植体周围骨组织的整合程度。与常规石蜡包埋相比,染色层次分明,组织移位形变小。结论应用规范塑料包埋技术制作不脱钙硬组织切片,更有利于行骨形态计量分析以及材料与骨整合的研究。     

TUNEL法原位检测心肌细胞凋亡的改进

目的：脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）是检测细胞凋亡的常用方法,但以往仍有TUNEL假阳性率高的报道。本实验目的在于探讨应用TUNEL检测心肌细胞凋亡时增强其特异性的方法。方法：缺血再灌注心肌组织的石蜡切片（2 μm）和冰冻切片（3 μm）进行TUNEL染色。分为石蜡切片HE染色组,石蜡切片常规TUNEL组,冰冻切片改良TUNEL组。石蜡切片常规TUNEL组完全按照试剂盒说明书进行,光学显微镜下观察;冰冻切片改良TUNEL组使用荧光素（FITC）标记的dUTP及4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI）双重荧光染色,在共聚焦显微镜下观察。结果：TUNEL改良法凋亡背景清晰,阳性细胞主要分布在缺血再灌注损伤区域,其凋亡检出率与石蜡切片HE染色相比无显著差异（P>0.05）;常规TUNEL组凋亡背景清晰度较差,非缺血再灌注损伤区域亦有大量阳性细胞出现,其凋亡率明显高于石蜡切片HE染色（P<0.01）。结论：冰冻切片改良TUNEL法可能是更适宜研究SD大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的方法。     

一种改良包埋模具和改良载玻片的设计与应用

在常规病理技术中[1,2],石蜡切片是诸多操作环节中非常重要的关键技术,能够为常规HE染色、特殊染色、免疫组化染色[3]及分子筛查等检测技术提供不同规格要求的组织切片。若宫腔刮出物、小脑占位组织、椎管内取出物等组织中的小灶组织疑有恶变或性质不能确定,可通过对原组织蜡块深切、连切、薄切等方式再进行常规HE染色,也可对重新切片的组织进行特殊染色、免疫组化染色等检测方法,以明确小灶组织的性质。     

正丁醇联合松节油替代二甲苯用于石蜡包埋

目的 寻找一种能够替代二甲苯透明剂的组织石蜡包埋方法。 方法 使用正丁醇和松节油的混合物替代常规石蜡包埋过程中无水乙醇、二甲苯的作用,收取卷茎蓼干预的多发性脑梗模型大鼠的脑、肾、胃、肝、十二指肠组织进行石蜡包埋,最终根据石蜡切片的效果、HE染色以及免疫组织化学结果对这种新型脱水程序做出评价。 结果 正丁醇和松节油的混合物可以替代常规石蜡包埋程序中无水乙醇的脱水、二甲苯的透明作用。经正丁醇、松节油混合物处理后的组织切片流畅,组织无变脆、变硬;HE染色后,新型脱水处理组织的细胞核、细胞质分明,组织的着色度、色泽、透明度与常规脱水程序无差异;通过大鼠不同组织做免疫组织化学染色,经对比结果与常规包埋组织免疫组织化学染色无差异。 结论 正丁醇联合松节油用于组织脱水既能够避免二甲苯对人的毒性作用,还可以减少无水酒精过度脱水对组织的破坏。     

肺癌石蜡包埋组织及新鲜标本组织芯片制备方法学探讨

目的：探讨和建立石蜡包埋组织和新鲜冷冻标本制备组织芯片的方法，以及在基因表达分析中的应用。方法：选取肺癌石蜡包埋组织90例，新鲜液氮冻存肺癌及癌旁组织20例，常规切片HE染色下确定穿刺部位，石蜡包埋组织芯片制作按Kononem等方法（1998），每例穿取0.6mm组织柱2条，制备180点阵组织芯片；而新鲜组织芯片参考Fejzo等方法（2001），并略作改良，制备50点阵组织芯片。所有组织芯片模块，经4цm切片、常规组织学染色和免疫组化染色，以评价其在形态学及基因表达分析中应用的可行性。结果：180点阵石蜡包埋肺癌组织芯片，组织排列整齐，HE染色后组织形态可观察率在98%以上；p53、c-myc、bcl-2、bax和Ki-67等免疫组化染色后，肺癌组织可见不同程度的抗原表达，组织点阵的形态可观测率在89%-95%之间。新鲜组织芯片经HE染色后，形态可观测率和基因表达可分析率在70%左右。结论：手工法组织芯片制备简便易行，使用组织少，不破坏原蜡块；实验均一性、可比性好，且节省试剂。与常规组织切片相比，2点0.6mm组织可以获得原蜡块95%以上的信息，完全可以用于组织形态学和蛋白水平上的基因表达分析；新鲜组织芯片技术已经初步建立，但尚有待于进一步完善制备技术和mRNA分析方法。     

无琼脂糖培养细胞的石蜡包埋方法

鉴于培养细胞的细胞爬片或涂片的HE染色、特殊染色和免疫组化染色存在缺陷,吴惠茜和高洁等[1,2]摸索了细胞的石蜡切片方法,证明细胞石蜡切片的HE和免疫组化染色均比细胞爬片和涂片的结果优良。近3年来,广东医学院病理学教研室在对鼻咽癌细胞系CNE2Z以及其他细胞株进行研究时,运