PCR扩增利什曼原虫kDNA动物实验研究对内脏利什曼病早期诊断的价值

本文报道了用ＰＣＲ扩增Ｌ．ｄｏｎｏｖａｎｌ种特异性ｋＤＮＡ片段来检测不同时间采集的感染金地鼠组织样品，结果表明在腹腔接种感染后第４天就可以从金地鼠外周血和脾组织内检测到病原体ｋＤＮＡ的存在，感染后第４８天，５只金地鼠的外周血和脾组织样品ＰＣＲ检测结果都为阳性，扩增产物经与地高辛标记的重组质粒ｐＬＫ２探针斑点杂交得到进一步证实。由此可见，用ＰＣＲ技术检测外周血或肝、脾组织进行内胜利什曼病的早期诊断是可行的。     

新疆克拉玛依地区皮肤利什曼病病原体SSU rRNA基因及k …

应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术，对皮肤利什曼病（ＣＬ）病人（Ｐ１７）的病原体ＳＳＵ ｒＲＮＡ基因及ｋＤＮＡ进行分析。将新疆克拉玛依地区皮肤利什曼病患者病变组织及有关利什曼原虫种株，Ｌ．ｉｎｆａｎｔｕｍ，Ｌ．ｔｒｏｐｉｃａ，Ｌ．ｄｏｎｏｖａｎｉ Ｘｉｎｊｉａｎｇ“７７１”株，分别抽提各标本的基因组ＤＮＡ和ｋＤＮＡ后，再用相应的引物，Ｒ２２２和Ｒ３３３ＰＣＲ扩增ＳＳＵ ｒＲＮＡ基因（３９７ｂｐ片段）和１     

PCR技术用于我国新疆皮肤利什曼病病原体SSUrDNA的扩增及其同源性研究

本文采用引物Ｒ２２２和Ｒ３３３，对来自我国新疆克拉玛依地区的１２份皮肤利什曼病（ＣＬ）患者的皮肤病变组织标本进行ＰＣＲ扩增。结果显示１２例ＣＬ患者病变组织均出现预期的３９７ｂｐ的阳性扩增区带。同时用地高辛标记的Ｌ．ｔｒｏｐｉｃａＳＳＵｒＤＮＡ扩增产物探针进行斑点杂交及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交。斑点杂交结果显示：Ｌ．ｔｒｏｐｉｃａＳＳＵｒＤＮＡ扩增产物探针只与１２例ＣＬ患者的ＣＬ－ＰＣＲ－ＡＰ出现阳性杂交信号，与Ｌ．ｔｕｒａｎｉｃａ、Ｌ．ｉｎｆａｎｔｕｍ无阳性杂交信号，上述探针与１２例ＣＬ患者的ＣＬ－ＰＣＲ－ＡＰＳｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交均出现阳性杂交区带。以上结果证实Ｌ．ｔｒｏｐｉｃａ与我国新疆克拉玛依地区皮肤利氏曼病病原体ＳＳＵｒＤＮＡＰＣＲ扩增产物存在同源关系     

采用基因释放剂对微量及陈旧标本进行直接PCR扩增

为简化ＰＣＲ方法和减少标本用量，利用基因释放剂不提取ＤＮＡ，比较了利用基因释放剂和不用基因释放剂，对微量肝素抗凝血、微量结肠粘膜组织和含有ＰＣＲ抑制剂的ＤＮＡ标本直接进行ＰＣＲ扩增。结果，利用基因释放剂，可扩增出目的产物，不用基因释放剂 扩增出目的产物。提示利用基因释放剂直接进行ＰＣＲ，简单快还，不用提取ＤＮＡ，适于微量，含有ＰＣＲ抑制剂的ＤＮＡ及陈旧组织标本的检测。     

应用套式聚合酶链反应检测孕妇弓形体感染

本文应用套式聚合酶链反应（ＮＰＣＲ）对孕妇外周血Ｔｏｘｏ－ＤＮＡ进行检测，结果阳性率为１．０４％（３／２８９），其中１例ＮＰＣ生者终上妊娠后其羊水、胎儿脑组织ＮＰＣＲ呈阴性，胎儿肺组织呈阳性。对ＮＰＣＲ阳性病例应用ＰＣＲ检测均为阴性。孕妇弓形体感染常导致先天性弓形体感染综合征，胎儿降生及后天发育不良，故对孕妇弓形体感染进行监测，对优生优育具有重要意义，而ＮＰＣＲ为有力的检测手段。     

多聚酶链反应和寡核苷酸探针检测衣原体

本研究所用引物和探针序列选自衣原体１６Ｓ ｒＲＮＡ基因。以生物素末端标记制备探针。多聚酶链反应（ＰＣＲ）扩增物作琼脂糖凝胶电泳和ＤＮＡ斑点杂交，证实引物为衣原体属特异性。ＰＣＲ检测灵敏度达到相当于１个拷贝的衣原体ＤＮＡ分子。生物素化寡核苷酸探针ＤＮＡ斑点杂交的直接检测灵敏度为１００ｐｇ，结合ＰＣＲ扩增的检测灵敏度为１ｆｇ。本法高度敏感、特异，且方法简便，对于衣原体感染诊断和分子流行病学调查具有较好     

用简并性引物RT—PCR技术检测大鼠舌味蕾细胞谷氨酸受体表达

为快速、有效地用ＰＣＲ检测不同组织，根据大鼠脑中谷氨酸受体家族ＤＮＡ序列，在高同源区设计出对谷氨酸家族有专一性的简并性引物。用此引物通过ＰＣＲ扩增自来大脑的多种谷氨酸受体，而味蕾细胞ＰＣＲ产物克隆后的ＤＮＡ序列，仅有脑内代谢型谷氨酸受体四型相一致；在缺少味蕾的舌上皮组织则无此种ＰＣＲ产物。以含味蕾细胞的ＰＣＲ产物为模板，合成同位素标记的ＲＮＡ探针，用ＲＮＡ酶保护法进一步检测ｍＧｌｕＲ４在不同组织中     

PCR产物真核TA克隆法构建基因表达重组体

ＰＣＲ产物真核ＴＡ克隆法构建基因表达重组体金春元张学王筠孙开来用ＰＣＲ方法扩增目的基因并与载体ＤＮＡ连接是目前常用的ＤＮＡ克隆技术之一。一般多用限制性内切酶将ＰＣＲ产物与载体ＤＮＡ分子特异切割，重新连接，组装成一个重组体。此项技术要求对ＰＣＲ产物进行...     

套叠式（Nested）PCR检测乳汁中HBV－DNA

本文应用Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ技术，检测了５２例血清ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性（ＰＣＲ检测）产妇和１５例血清ＨＢＶ－ＤＮＡ阴性（ＰＣＲ检测）产妇乳汁中的ＨＢＶ－ＤＮＡ。结果表明：５２例阳性产妇乳汁中ＨＢＶ－ＤＮＡ经第一次扩增后，１２例ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性。经第二次扩增后，４０例阳性（阳性率７６．９％）；１５例阴性产妇乳汁中ＨＢＶ－ＤＮＡ经两次扩增后均为阴性。作者认为，Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ技术是检测血清ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性产妇乳汁是否排泌ＨＢＶ的简便、灵敏、特异的方法。乳汁中含有ＨＢＶ应停止哺乳。     

多聚酶链反应检测恙虫病立克次体核酸

作者设计合成一对恙虫病立克次体ｓｔａ５８基因的ＤＮＡ引物，分别从恙虫病立克次体ｋａｒｐ、Ｇｉｌｌｉａｍ及ＣＭＹ株基因组中扩增出１ｋｂ片段，普氏及莫氏立克次体、西伯利亚立克次体和贝氏柯克斯体则不能，表明该引物为恙虫病立克次体种特异。以含ｓｔａ５８基因片段的重组质粒为模板作敏感性鉴定，表明ＰＣＲ可检测到１０ｐｇ的靶ＤＮＡ。用该引物作ＰＣＲ检测实验感染恙虫病立克次体的小鼠血、腹水及脾标本均获满意结果。     

小鼠免疫共刺激信号B7—2 cDNA的克隆与序列测定

应用反转录ＰＣＲ的技术从小鼠脾细胞中克隆了免疫共刺激信号Ｂ７－２编码区ｃＤＮＡ。小鼠脾细胞经ＬＰＳ刺激２４ｈ后，提取总ＲＮＡ，以总ＲＮＡ为模板进小鼠Ｂ７－２ｃＤＮＡ的反转录ＰＣＲ扩增，获得一特异扩增带，与预期值相符，将扩增的ＤＮＡ克隆于ｐＵＣ１８质粒中，序列测定表明其序列与文献报道一致。     

Leber遗传性视神经病三种组织间mtDNA基因型差异…

采用ＰＣＲ技术对我国两个Ｌｅｂｅｒ遗传性视神经病家系成员外周血，头发和口腔粘膜３种组织线粒体ＤＮＡ进行扩增，限制性酶切分析，以探计组织间ｍｔＤＮＡ基因型是否存在差异，结果发现一例患者ｍｔＤＮＡ基因型杂合，并且３种组织间突变型ｍｔＤＮＡ所占比例不同，证明线粒体ＤＮＡ组织间存在差异性。     

巨细胞病毒mRNA表达与活动性感染关系的研究

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＤＮＡ在９０年代初已广泛应用，但其亚临床型或潜伏感染均呈阳性反应。本文用两对引物对ＨＣＭＶｍＲＮＡ进行即刻早期（ＩＥ）、晚期（Ｌ）基因反转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增，首次在国内从临床标本中检测出...     

DIG—DNA探针检测弓形虫核酸

应用ＰＣＲ技术，对弓形虫Ｂ１基因的部分序列进行体外扩增，获得２０７ｂｐ的特异性核酸片段，并通过地高辛配基（Ｄｉｇ－１１－ｄＵＴＰ）标记作为探针，通过斑点杂交试验检测弓形虫核酸。实验表明，该探针能与ＲＨ、ＳＨ１、ＺＳ１、ＺＳ２及ＧＬ１株弓形虫核酸特异性杂交，最低检测量为２５ｐｇ纯化弓形虫核酸。在急性感染弓形虫的小鼠，该探针可于感染后第２天（２４ｈ后），从组织（肝、脾、及肾）中检测到弓形虫核酸，第３天（４８ｈ后）可从部分小鼠（１／５）外周血中检测到弓形虫核酸。表明该探针具有特异、敏感、快速、实用的特点，可望用于弓形虫病的早期诊断，适用于基层及流行病学调查。     

Leber遗传性视神经病三种组织间mtDNA基因型差异性的研究

采用ＰＣＲ技术对我国两个Ｌｅｂｅｒ遗传性视神经病（ＬＨＯＮ）家系成员外周血、头发和口腔粘膜３种组织线粒体ＤＮＡ进行扩增，限制性酶切分析、以探讨组织间ｍｔＤＮＡ基因型是否存在差异。结果发现一例患者ｍｔＤＮＡ基因型杂合，并且３种组织间突变型ｍｔＤＮＡ所占比例不同，证明线粒体ＤＮＡ组织间存在差异性。     

互隔交链孢霉毒素诱发人胎食管上皮组织c—Ha—ras点突变的研究

体外培养的人胎儿食管上皮组织经隔交链孢霉毒素ＡＭＥ或ＡＯＨ短时间（４ｈ）处理后，提取该组织高分子量ＤＮＡ；同时提取未经处理的人胎儿食管上皮组织ＤＮＡ（空白对照）以及食管癌组织和癌旁组织ＤＮＡ。提取的高分子量ＤＮＡ作为模板进行ＰＣＲ反应，ＰＣＲ扩增产物经ＨＰＡⅡ酶解后进行琼脂糖凝胶电泳分析结果。电泳结果显示，经ＨｐａⅡ酶解后，空白对照组、癌组织和癌旁组织ＤＮＡ的特异性扩增产物－１０４ｂｐ片段消失，经     

应用间接法原位PCR检测石蜡切片中HPV DNA

应用间接法原位ＰＣＲ检测石蜡切片中ＨＰＶＤＮＡ王剑波王伯马福成陈万录杨莉胡沛臻聚合酶链式反应（ＰＣＲ）是一种对特定的ＤＮＡ片段在体外经酶促反应进行快速扩增的技术。它是一种极其敏感的技术。间接法原位ＰＣＲ是先将待检基因在原位进行ＰＣＲ扩增，然后再用原...     

应用增强化学发光法检测PCR扩增的人巨细胞病毒核酸

本文报道用增强化学发光法（ＥＣＬ）检测ＰＣＲ扩增的人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）核酸。该检测系统用戊二醛将辣根过氧化物酶复合物（ＨＲｐ－ＰＢＱ－ＰＥＩ＋－ＮＨ３＋）与探针结合制成酶标基因探针。探针与靶ＤＮＡ结合后ＨＲＰ可催化检测系统中的发光底物，经增强剂将光信号放大，杂交信号通过Ｘ光片显影。实验证明，用ＥＣＬ检测ＰＣＲ扩增的ＨＣＭＶＤＮＡ产物，敏感性可达０．０１ｆｇ的ＤＮＡ片段，且仅与ＨＣＭＶＤＮＡ的扩增产物杂交。临床应用表明，此方法具有快速、简便、敏感、安全的特点。     

应用PCR技术检测血清抗双链DNA抗体

人工合成一段６２核苷酸的核苷酸序列，中间２５个核苷酸为随机合成。经ＰＣＲ扩增后提供一个含有亿万种结构变异ＤＮＡ片段库供体ＤＮＡ抗体反应。阳性病人血清沉淀的特异双链ＤＮＡ片段经ＰＣＲ扩增后出现特异的阳性扩增区带。结果表明，４０例ＳＬＥ血清经ＰＣＲ检测３２例为阳性，而Ｆａｒｒ放免法１４例为阳怀，两者之间有显著差异，４０例非ＳＬＥ结缔组织病人血清，两者阳性率分别为７．５％和２．５％，两者比较无明显差异。     

PCR技术检测活检组织中结核杆菌DNA

ＰＣＲ技术检测活检组织中结核杆菌ＤＮＡ赵跃武银平章刘正国郝远瑞徐纪跃党伟一作者单位：河南省人民医院病理科，郑州４５０００３多聚酶链反应（ＰＣＲ）是一项有效的体外ＤＮＡ扩增技术，尤在病原体检测方面。在一些可疑的活检石蜡切片中，有时也需要借助于该技术来协...