脑卒中患者血浆中α-突触核蛋白及其寡聚体形成量变化的研究

目的 探讨脑卒中患者血浆中α-突触核蛋白（α-synuclein,α-Syn）含量的变化,以及血浆对α-Syn寡聚体形成的影响.方法 收集2012年3月至5月首都医科大学宣武医院神经科诊断为脑卒中的住院患者50例,另收集年龄和性别与之相匹配的30例健康人群为对照组.用ELISA法检测各组人群血浆中的α-Syn总量及寡聚体形成量.结果 脑卒中患者血浆α-Syn总含量及寡聚体形成量较对照组均有显著增加.结论 脑卒中患者血浆中α-Syn含量增高增强其寡聚体的形成.     

食蟹猴脑与结肠中寡聚化和磷酸化α-突触核蛋白的增龄性变化的相关性分析

目的研究寡聚化和磷酸化α-突触核蛋白(α-synuclein,α-Syn)在食蟹猴结肠和脑中的增龄性变化及其相关性。方法ELISA方法检测寡聚化和磷酸化α-Syn在不同年龄段食蟹猴结肠与脑中不同部位含量的变化,分析结肠和脑中寡聚化和磷酸化α-Syn含量变化的相关性。结果寡聚化与磷酸化α-Syn含量随年龄增加而增加,其中老年猴与青年及中年猴比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结肠中的寡聚化和磷酸化α-Syn水平与颞叶、海马、纹状体和丘脑中的水平有相关性。结论食蟹猴结肠和脑中寡聚化和磷酸化α-Syn含量随老化而增加,结肠和脑中寡聚化和磷酸化α-Syn含量变化呈正相关。     

寡聚化和磷酸化α-突触核蛋白在不同年龄段食蟹猴脑不同部位突触小体中的表达分布

目的 研究寡聚化(oligomer-α-synuclein,oligo-α-Syn)和磷酸化α-突触核蛋白(phosphorylated-α-Synuclein,p-α-Syn)在不同年龄段食蟹猴脑不同部位突触小体中的表达差异。方法 酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测oligo-α-Syn与p-α-Syn在不同年龄段食蟹猴脑不同部位突触小体中的表达。结果 在老年食蟹猴的前额叶、枕叶、颞叶、海马、纹状体和丘脑中,突触小体中寡聚化与磷酸化α-Syn表达较青年与中年猴显著增加,且差异有统计学意义(P<0.01)。结论 食蟹猴颞叶、海马、纹状体和丘脑突触小体中α-Syn寡聚化与磷酸化表达呈增龄性增加。     

帕金森病患者血浆增强α-突触核蛋白寡聚体形成

目的 研究帕金森病（Parkinson＇s disease,PD）患者血浆对α-突触核蛋白（α-synuclein,α-Syn）寡聚体形成的影响.方法 将重组人α-Syn加入PD和对照血浆中,37 ℃振荡孵育144 h,免疫印迹方法鉴定α-Syn寡聚体形成情况,ELISA方法分析α-Syn寡聚体形成的相对质量浓度.结果 α-Syn在 PD患者血浆中形成寡聚体含量明显高于对照组.结论 PD患者血浆可促进α-Syn寡聚体形成.     

帕金森病患者血浆增强α-突触核蛋白细胞毒性及其机制研究

目的 研究帕金森病（Parkinson's disease,PD）患者血浆对α-突触核蛋白（α-synuclein,α-Syn）细胞毒性的影响及其机制。方法 将重组人α-Syn加入PD和对照血浆中,采用免疫印迹法及酶联免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）法鉴定α-Syn寡聚体和磷酸化形成情况。在原代神经培养基中加入终浓度为5 μmol/L的α-Syn单体及寡聚体,同时添加30%（体积分数）PD血浆、正常人血浆和胎牛血浆,孵育14 d后,MTT及流式细胞技术观察细胞死亡情况。酶活力试剂盒检测各组原代神经元中蛋白磷酸酶2A（protein phosphatase 2A,PP2A）酶活力。结果 PD患者血浆较正常受试者（normal subject,NS）血浆可促使更多的α-Syn磷酸化和寡聚化。与NS血浆相比,添加到原代神经元培养物中的PD血浆导致更多细胞在细胞外α-Syn存在下死亡,同时伴有PP2A活力降低。结论 PD患者血浆中可能通过降低PP2A酶活力使α-Syn发生磷酸化,导致其聚集并进一步使得原代培养神经元死亡。     

不同亚型的帕金森病及多系统萎缩患者血浆α-突触核蛋白寡聚体浓度分析

目的 比较不同亚型帕金森病（Parkinson's disease,PD）和多系统萎缩（multiple system atrophy,MSA）患者血浆促进α-突触核蛋白（α-synuclein,α-Syn）寡聚体形成的能力。方法 选择性别与年龄匹配的健康受试者（Control）、震颤为主型PD（tremor dominant,PD-TD）、姿势不稳与步态困难为主型PD（postural instability gait difficulty,PD-PIGD）、小脑萎缩型MSA（MSA of cerebellar type,MSA-C）和混合型MSA（MSA between cerebellar and parkinsonism type,MSA-C+P）患者各10例,抽取血浆,与重组人α-Syn振荡孵育。Western blotting法和ELISA法检测各组α-Syn寡聚体形成量。结果 PD和MSA组α-Syn寡聚体形成量显著高于对照组（P<0.05）。虽然PD组α-Syn寡聚体形成量略高于MSA组,但差异无统计学意义。亚型分析显示,α-Syn寡聚体形成量在PD-PIGD组高于PD-TD组（P<0.05）,在MSA-C组高于MSA-C+P组（P<0.05）。结论 PD与MSA及其不同亚型患者血浆促进α-Syn寡聚体形成的能力不同。     

寡聚化α-突触核蛋白在不同年龄段食蟹猴消化道中的表达

目的 研究寡聚化α-突触核蛋白(oligomer-α-synuclein,oligo-α-Syn)在不同年龄段食蟹猴消化道中的表达差异.方法 Western blotting和ELISA方法检测oligo-α-Syn在不同年龄段食蟹猴消化道中的表达.结果 在老年食蟹猴的食管、胃底、十二指肠、空肠、回肠和结肠中,寡聚化α-Syn浓度较青年与中年猴显著增加,且差异有统计学意义(P＜0.01).结论 食蟹猴消化道的各部位中α-Syn寡聚体表达具有增龄性变化.     

帕金森病患者血清对α-突触核蛋白寡聚体形成的促进作用

目的研究帕金森病(PD)患者血清对外源性α-突触核蛋白(α-Synuclein,α-Syn)寡聚体形成的影响,初步分析血清促进α-Syn寡聚体形成的机制。方法将重组人α-Syn加入PD患者和对照组血清中,37℃振荡孵育,用免疫印迹方法鉴定α-Syn寡聚体的形成情况,用ELISA分析α-Syn寡聚体的形成量。结果α-Syn在血清中振荡孵育后主要形成二聚体和十四聚体。与对照组血清相比较,PD患者血清具有促进α-Syn寡聚体形成的作用。在血清中加入还原性谷胱甘肽可明显减弱PD患者血清促进α-Syn寡聚体形成的作用。结论PD患者血清促进α-Syn寡聚体的形成,其机制可能与α-Syn的氧化修饰有关。     

α-突触核蛋白寡聚体抑制大鼠原代培养神经元突起早期生长

目的 观察人α-突触核蛋白(α-synuclein,α-Syn)和其形成的寡聚体对大鼠原代培养神经元突起生长的影响,明确α-Syn的生理功能,探讨其寡聚化对神经元的毒性及其在帕金森病发病机制中的作用.方法 制备α-Syn的寡聚体,向分组培养的大鼠脑皮质神经元培养基中添加,培养1、2和4h后固定,观察对神经元突起生长的影响.神经元的突起以成像显微镜观察测量,Western blotting法、免疫荧光法实验进行鉴定.结果 添加α-Syn寡聚体组的神经元培养至1、2和4h时,其突起的平均长度均小于对照组和添加α-Syn单体组(P＜0.05).增加α-Syn寡聚体浓度,随浓度增高神经元突起的平均长度与对照组差异越大(P＜0.01).Western blotting法和免疫荧光实验明确了外源性α-Syn寡聚体可以从培养基进入到神经元内.结论 α-Syn寡聚体在原代神经元生长初期对其突起生长具有抑制作用,这一现象可能与其在帕金森病发病机制中的作用有关.     

缺血/再灌注大鼠脑和血浆中α-突触核蛋白含量的变化

目的探讨缺血/再灌注大鼠脑和血浆中α-突触核蛋白(α-Synuclein,α-Syn)含量的变化。方法将30只雄性Wistar大鼠用随机数字表法分成假手术对照组(10只)和缺血/再灌注组(20只)。用线栓法制作大脑中动脉梗阻(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,缺血1.5h后,再恢复灌注24h;用Western blotting法和ELISA法检测大脑缺血半暗带、梗死核心区和血浆中α-Syn的含量变化。结果缺血半暗带α-Syn表达量显著增加,而梗死核心区和血浆中α-Syn无显著性变化。结论缺血/再灌注可增加缺血半暗带中α-Syn的含量。     

一种检测帕金森患者血浆促进α-突触核蛋白寡聚体形成能力的方法

目的 建立一种检测帕金森病（Parkinson＇s disease,PD）患者血浆促进外源性α-突触核蛋白（α-synuclein,α-Syn）寡聚体形成的方法.方法 利用本室自制的鼠抗人α-Syn单克隆抗体建立检测α-Syn寡聚体的酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent,ELISA）方法.将不同质量浓度（200、100、50、25、12.5 μmol/L）重组人α-Syn在正常人和PD患者血浆中分别振荡孵育（37 ℃、280 r/min）24、48、72、96 h.用所建立的ELISA法检测振荡后血浆中的α-Syn寡聚体含量.结果 所建立ELISA方法可以特异性检测α-Syn寡聚体,不识别α-Syn单体.重组人α-Syn在质量浓度为100 μmol/L、血浆稀释3倍以下、振荡孵育48 h条件下可以在PD患者血浆中形成较多的寡聚体,并与对照血浆中形成的α-Syn寡聚体含量对比差异最大.结论 成功建立了一种检测PD患者血浆促进α-Syn寡聚体形成能力的方法,该方法可以用于诊断PD患者血浆的潜在病理变化.     

α-突触核蛋白的突变体A53T对小胶质细胞激活的影响

目的：探究重组人的野生型α-突触核蛋白(wild type alpha-Synuclein, WT α-Syn)和重组人的α-突触核蛋白突变体A53T(α-Synuclein mutant A53T, α-Syn A53T) 对原代小胶质细胞的影响。方法：无菌培养原代小胶质细胞,细胞静息状态下加药处理,通过免疫荧光染色观察小胶质细胞的形态和Western Blot半定量分析CD11b的变化。结果：高浓度的WT α-Syn可以激活小胶质细胞;CD11b蛋白表达量明显升高;而2 μmol/L和5 μmol/L的α-Syn A53T均能激活小胶质细胞,CD11b蛋白表达量均升高。结论：相同浓度的WT α-Syn和α-Syn A53T,α-Syn A53T更容易激活小胶质细胞。     

2型糖尿病患者血浆肌肉抑制素与C肽相关性分析

目的:测定2型糖尿病(Type 2 diabetes,T2D)患者血浆肌肉抑制素(Myostatin)和C肽含量的变化,探讨二者在T2D发病机制中的作用。方法:酶联免疫分析法检测42例T2D患者和20例健康体检者血浆肌肉抑制素的含量,化学发光法测定空腹C肽浓度,临床生化检测血浆中脂质、血糖和胰岛素含量。结果:与健康对照组比较,T2D患者空腹血糖、胰岛素、甘油三酯和收缩压水平显著增加(P<0.05)。T2D糖尿病患者血浆肌肉抑制素水平比健康对照组显著增加(46.22±13.78 pg/L vs 86.83±29.10 pg/L,P<0.01)。T2D患者血浆肌肉抑制素水平与血浆C肽呈显著负相关(r=-0.56,P<0.01)。结论:T2D患者血浆中肌肉抑制素水平升高,且与血浆C肽水平呈显著负相关。     

帕金森病和多系统萎缩患者红细胞中α-突触核蛋白寡聚体含量及其与临床症状的相关性

目的分析帕金森病(PD)和多系统萎缩(MSA)患者红细胞中的α-突触核蛋白寡聚体(RBC-O-α-Syn)含量及其与临床症状的相关性。方法收集2020年7月至2021年10月从首都医科大学宣武医院功能神经外科、神经内科招募的PD患者296例, MSA患者85例, 同期从北京老年纵向研究社区队列招募健康对照(HC)受试者403名。ELISA测试RBC-O-α-Syn含量。单变量线性回归模型分析各种运动和非运动评分, 如帕金森病统一评定量表(UPDRS)Ⅲ、多系统萎缩统一评定量表(UMSARS)Ⅲ、简易智力状态检查量表(MMSE)、快速眼动睡眠行为障碍-香港(RBDQ-HK)及蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评分与RBC-O-α-Syn含量的相关性。受试者工作特征(ROC)曲线评估RBC-O-α-Syn区分PD、MSA患者和HC受试者的特异度、灵敏度和曲线下面积(AUC)。结果 HC组受试者年龄(70±8)岁;PD患者年龄(64±9)岁, 其中, 震颤为主型PD(TD-PD)115例(38.9%), 姿势不稳步态障碍为主型PD(PIGD-PD)132例(44.6%), H-Y分期为2期的患...     

血浆 25-羟维生素D在2型糖尿病动脉硬化损害中的作用

目的 探讨血浆25-羟维生素D[25(OH)D]在2型糖尿病(T2DM)患者动脉硬化损害中的作用。方法 回顾性分析160例T2DM患者的临床资料,根据动脉硬化(atherosclerosis, AS)检测结果,将T2DM组患者分为单纯T2DM组(69例)和T2DM+AS组(91例),另选取160例同期健康者作为对照组。检测各组血浆25(OH)D、RAAS改变,采用多因素logistic回归对AS的危险因素进行分析。结果 与对照组比较,T2DM+AS组、单纯T2DM组血糖和血脂相关指标、BMI、PRA、AngⅡ、ALD、25(OH)D等差异有统计学意义(P＜0.05);与单纯T2DM组比较,T2DM+AS组年龄增大,FBG、HbAlc、PRA、AngⅡ、ALD升高,HDL-C、25(OH)D降低(P＜0.05);血浆25(OH)D与PRA、AngⅡ、ALD均呈负相关(r=-0.611、-0.591、-0.639,P＜0.05);多因素Logistic回归分析显示,年龄、HbAlc、PRA可能是T2DM患者AS的危险因素,HDL-C、25(OH)D则可能是保护因素(P＜0.05)。结论 T2DM患者血浆25(OH)D降低,RAAS水平升高,25(OH)D缺乏可能通过对RAAS的负向调控而参与AS发生。     

突变型α-突触核蛋白对大鼠原代培养神经元突起生长作用研究

目的观察人α-突触核蛋白(α-synuclein,α-Syn)和其突变体A30P和A53T对大鼠原代培养神经元突起生长的影响,明确α-Syn的生理功能,揭示突变体A30P和A53T在帕金森病的发病机制中的作用。方法取大鼠大脑皮质神经元分组培养,在细胞外添加A30P、A53T和α-Syn,培养1 h、2 h和4 h后固定,比较A30P、A53T与α-Syn对神经元突起生长的影响。神经元突起以成像显微镜观察测量,Western blotting法、免疫荧光法、单克隆抗体阻断实验鉴定各蛋白作用的特异性。结果添加α-Syn组的神经元培养至1、2和4 h时,其突起的平均长度大于对照组和添加A30P、A53T组(P<0.05)。A30P、A53T组和对照组的神经元突起长度差异无统计学意义(P>0.05)。增加蛋白的含量,浓度越高,α-Syn组神经元突起的平均长度与添加A30P和A53T组差异越大(P<0.01)。Western blotting和免疫荧光实验明确了外源性α-Syn可以从培养基进入到神经元内,并均匀分布在胞体和突起。而A30P和A53T组,并未发现。结论α-Syn在原代神经元生长初期对其突起生长具有促进作用,突变体A30P和A53T,无促神经元突起生长作用,这一现象可能与其在帕金森病发病机制中的作用有关。     

α-突触核蛋白在大鼠脊髓的表达

目的研究α-突触核蛋白(α-Synuclein,α-Syn)在正常大鼠脊髓中的表达。方法利用2种抗α-Syn单抗3D5和2E3进行免疫组化染色,观察α-Syn在脊髓的表达和分布;用免疫荧光双标方法观察α-Syn与神经肽Y(NPY)共存的情况。用Luxol fast blue染色鉴别有髓与无髓神经纤维。结果α-Syn主要存在于脊髓灰质神经元核及灰质无髓神经纤维中。富含α-Syn的神经纤维主要分布在脊髓灰质的第Ⅰ、Ⅱ层,而α-Syn核阳性神经元主要分布在第Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ层;后根第Ⅰ、Ⅱ层一小部分α-Syn阳性纤维与NPY共存;前角细胞核呈α-Syn阳性神经元胞质中存在NPY,而其他部位的α-Syn核阳性神经元胞质中无NPY。结论α-Syn存在于大鼠脊髓灰质的神经元核及无髓神经纤维中,部分阳性神经纤维和神经元胞体呈NPY免疫阳性反应。     

α-突触核蛋白和葡糖脑苷脂酶在食蟹猴不同脑区的表达

目的研究α-突触核蛋白(α-synuclein,α-Syn)及葡糖脑苷脂酶(glucocerebrosidase,GCase,GBA)在食蟹猴不同脑区的表达。方法 Western blotting方法及免疫组织化学法检测α-Syn和GBA在食蟹猴纹状体和小脑皮质的表达。酶活性分析法检测GBA活性。免疫荧光双重标记法观察α-Syn和GBA的共定位。结果α-Syn和GBA在胞质和神经末梢中存在共定位。α-Syn、GBA在纹状体和小脑部位均有表达,但α-Syn在纹状体表达量高于小脑,而GBA在纹状体表达量低于小脑。此外,纹状体的GBA酶活性低于小脑。结论不同脑区α-Syn、GBA表达量不同,α-Syn表达量与GBA表达量呈反向关系。     

右美托咪定对体外循环下心内直视手术患者外周血单核细胞信号通路的影响

目的评价右美托咪定对体外循环(CPB)下心内直视手术患者外周血单核细胞Toll样受体(TLRs)/髓样分化因子(My D)88/核转录因子(NF)-κB信号通路的影响。方法择期在CPB下行心脏瓣膜置换术患者90例,年龄30~64岁,体重45~68 kg,ASA分级Ⅱ或Ⅲ级,NYHA心功能分级Ⅱ或Ⅲ级,左室射血分数50%,采用随机数字表法分为3组(n=30):右美托咪定组1(D1组)、右美托咪定组2(D2组)和对照组(C组)。D1组和D2组分别在麻醉诱导前静脉泵注右美托咪定0.5μg/kg和1.0μg/kg负荷量,随后分别以0.2μg/(kg·h)和0.4μg/(kg·h)速率输注至术毕,C组则以等容量生理盐水代替。分别在麻醉诱导前(T0)、CPB后1 h(T1)、3 h(T2)、5 h(T3)、12 h(T4)和24 h(T5)这6个时间点采集血标本,采用流式细胞仪检测外周血CD14+单核细胞TLR2、TLR4和NF-κB的表达量及My D88的平均荧光强度;采用ELISA法检测血浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度。结果与T0比较,三组患者在T1~T5时外周血CD14+单核细胞TLR2、TLR4和NF-κB阳性表达率及My D88荧光强度,血浆中TNF-α浓度均增高(P0.05);与C组比较,D1和D2组在T1~T5时外周血CD14+单核细胞TLR2、TLR4和NF-κB阳性表达率及My D88荧光强度,血浆中TNF-α浓度均降低(P0.05);与D1组比较,D2组在T1~T5时外周血CD14+单核细胞TLR2、TLR4和NF-κB阳性表达率和My D88荧光强度,血浆中TNF-α浓度均降低(P0.05)。结论右美托咪定减轻CPB下心内直视手术患者全身炎症反应且呈剂量依赖,其机制与抑制TLRs/My D88/NK-κB信号通路的激活有关。     

阿法骨化醇对新诊断2型糖尿病患者胰岛β细胞第一时相分泌的影响

目的通过观察阿法骨化醇[1α-hydroxyvitamin D3,1,α-(OH)2D3]对初诊2型糖尿病患者胰岛β细胞第一时相分泌及血浆中25羟维生D[25-hydroxy vitamin D,25(OH)D]水平的影响,旨在初步探讨它们之间的相互关系。方法受试者分3组:初诊2型糖尿病组(Type 2 Diabetes mellitus,T2DM组)158例、初诊2型糖尿病+阿法骨化醇治疗组[T2DM+1,α-(OH)2D3组]155例及正常对照组(NGT组)152例,以葡萄糖刺激后3到5min急性胰岛素反应(3-5minutes acute insulin response,AIR3-5)来表示第一时相胰岛素分泌功能指数,测定胰岛β细胞第一时相胰岛素分泌功能指数、血浆中25(OH)D及血脂水平并进行比较分析。结果 T2DM组TC、TG、LDL-C、BMI均高于对照组,而AIR3-5、25(OH)D、HDL-C低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);T2DM+1,α-(OH)2D3组AIR 3-5、25(OH)D、TG、HDL-C与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),而TC、TG、LDL-C、BMI均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);T2DM+1,α-(OH)2D3组AIR 3-5、25(OH)D、HDL-C明显高于T2DM组,差异具有统计学意义(P<0.05),而TG明显低于T2DM组,差异具有统计学意义(P<0.05),TC、LDL-C、BMI与T2DM组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。AIR 3-5与25(OH)D、HDL-C呈正相关,与TC、TG、LDL-C、BMI均呈负相关。结论初诊T2DM患者25(OH)D、AIR 3-5水平降低,而使用阿法骨化醇治疗组,血浆中25(OH)D水平升高,胰岛β细胞第一时相胰岛素分泌功能得以明显改善,因此,阿法骨化醇提高了血浆中25(OH)D水平,改善了胰岛β细胞第一时相胰岛素分泌功能,同时改善了脂质代谢,可能对防治糖尿病及改善脂质代谢具有重要意义。