丁酸钠诱导MCF-7细胞凋亡过程中端粒酶活性的变化

目的　研究丁酸钠诱导MCF 7细胞凋亡过程中端粒酶活性变化及其机制。方法　采用MTT法和倒置相差显微镜观察不同浓度丁酸钠对MCF 7细胞的抑制作用 ,流式细胞仪和琼脂糖凝胶电泳检测 2 .5mmol/L丁酸钠作用后的细胞凋亡情况 ,TRAP ELISA法检测端粒酶活性变化 ,RT PCR分析端粒酶各组分的mRNA表达情况。结果　丁酸钠对MCF 7细胞的抑制作用具有时间和剂量依赖性 ,AnnexinV/PI双染法显示 ,2 .5mmol/L丁酸钠作用 72h后 ,细胞凋亡率为 84 .3% ,琼脂糖凝胶电泳可见间隔为 180bp的DNA梯状条带。 2 .5mmol/L丁酸钠作用 2 4和 4 8h后 ,端粒酶活性分别下降为1.82± 0 .2 2和 1.6 1± 0 .0 9。RT PCR显示 ,端粒酶逆转录酶 (hTERT)表达下降 ,而端粒酶RNA模板(hTR)和端粒酶相关蛋白 (hTP1)表达无明显改变。结论　丁酸钠诱导MCF 7细胞凋亡过程中端粒酶活性下降 ,其机制可能与丁酸钠下调hTERT转录水平有关。     

三氧化二砷对GLC-82细胞的增殖抑制机制

[目的] 探讨三氧化二砷对肺癌细胞株GLC-82细胞的增殖抑制作用及其作用机制。[方法] 以不同浓度的三氧化二砷作用于体外培养的GLC-82细胞，MTT法检测细胞生长抑制率，应用流式细胞仪及Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡，TRAP-PCR-ELISA法检测细胞凋亡前后的端粒酶活性。[结果] 三氧化二砷可显著降低GLC-82细胞的端粒酶活性，抑制细胞的生长，诱导细胞发生凋亡。并呈现出明显的量-效与时-效关系。[结论] 三氧化二砷对肺癌细胞株GLC-82具有明显的增殖抑制作用。降低细胞端粒酶活性，诱导细胞发生调亡，可能是其重要作用机制之一。     

鸦胆子油乳对宫颈癌SiHa细胞的抑制

目的：探讨鸦胆子(Brucea javanica)油乳在体外对宫颈癌SiHa细胞的抑制作用及其作用机制。方法：以鸦胆子油乳（2.5、5.0、10、20、40、80 μg/ml）作用于SiHa细胞24、48、72 h,以MTT法检测鸦胆子油乳对SiHa细胞增殖的抑制作用;透射电镜观察细胞的超微结构;琼脂糖凝胶电泳观察SiHa细胞基因组DNA片段化改变;流式细胞术测定AnnexinV/PI双染色后SiHa细胞凋亡率。结果：MTT结果显示,鸦胆子油乳以剂量和时间依赖方式对SiHa细胞增殖有明显的抑制作用,其中80 μg/ml 药物作用72 h时的抑制率可达92.43%;20 μg/ml药物作用后,透射电镜下可观察到细胞出现凋亡小体,琼脂糖凝胶电泳显示细胞凋亡特征性的DNA片段化“梯状”条带;流式细胞仪检测显示,10、20、40 μg/ml药物组作用48 h后凋亡率分别为（8.02±241）%、（51.60±7.67）%、（77.22±5.80）%。结论：鸦胆子油乳能够抑制SiHa细胞增殖,其作用机制可能为诱导SiHa细胞发生凋亡。     

汉黄芩素诱导人卵巢癌细胞A2780凋亡及对细胞端粒酶活性的影响

背景与目的：诱导肿瘤细胞凋亡和调节端粒酶的活性可能成为肿瘤治疗的一条新途径,体内、外实验表明,汉黄芩素具有抗氧化活性和抑制肿瘤细胞生长的功效。本研究旨在评价汉黄芩素诱导卵巢癌A2780细胞凋亡作用和抑制端粒酶活性的能力。方法：应用MTT法、荧光显微镜及琼脂糖凝胶电泳等方法检测汉黄芩素对人卵巢癌细胞A2780的作用;利用TRAP-ELISA方法观察药物处理前后细胞端粒酶活性的变化。结果：汉黄芩素明显抑制A2780细胞增殖,抑制作用呈时间和浓度依赖性,48h的IC50为85μg／ml;用浓度为50、100μg／ml的汉黄芩素作用A2780细胞48h,细胞出现明显的凋亡形态学改变,琼脂糖凝胶电泳出现典型的DNA梯状条带。端粒酶的活性随着汉黄芩素浓度的升高而降低;当汉黄芩素浓度大于200la,g／rnJ时,A2780细胞端粒酶的活性受到明显的抑制。结论：50～250μg／ml汉黄芩素可抑制卵巢癌A2780细胞增殖和诱导细胞凋亡,其抗肿瘤作用机制与诱导凋亡有关,抑制端粒酶活性可能起部分作用。     

白英诱导人肺癌细胞凋亡及对Bcl-2的影响

目的研究白英水提取物对人肺腺癌SPC-A-1细胞株的凋亡诱导作用及对其Bcl-2表达的影响;探讨白英提取物诱导SPC-A-1细胞凋亡的可能机制.方法选用人肺腺癌SPC-A-1细胞株为研究对象,在体外与白英提取物4种不同浓度共同培养24、48、72、96 h,采用MTT法检测白英提取物对SPC-A-1细胞增殖活性的影响;琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪检测白英水提取物处理的SPC-A-1细胞株细胞凋亡;比较白英提取物处理前后SPC-A-1细胞凋亡相关基因Bcl-2表达的变化.结果白英提取物抑制SPC-A-1细胞增殖活性;琼脂糖凝胶电泳可见凋亡梯带;SPC-A-1细胞有很低的自然凋亡率(1.37±0.52)%,50.0 mg/ml白英提取物作用SPC-A-1细胞48h后,凋亡率为(33.25±4.39)%(P＜0.05);50.0 mg/ml白英提取物处理48h后的细胞凋亡相关基因Bcl-2表达率(24.41±2.96)%比未经处理的细胞(53.53±4.80)%表达率低(P＜0.001).结论白英水提取物对人肺腺癌SPC-A-1细胞株有抑制增殖、诱导其凋亡作用,细胞凋亡的机制可能与细胞凋亡相关基因Bcl-2表达下调有关.     

三氧化二砷(As2O3)诱导人肺腺癌GLC-82细胞凋亡及分子机制的研究

目的:探讨As2O3对人肺腺癌GLC-82细胞系抑制生长、诱导凋亡的生物学效应及作用机制.方法:通过MTT还原法检测As2O3对该细胞系生长的影响;用光学显微镜、流式细胞仪、DNA凝胶电泳和细胞凋亡原位检测(TUNEL)研究As2O3诱导细胞凋亡的情况;用RT-PCR、Northern blot或Western blot分析As2O3对c-myc、p53、p16和bcl-X等基因表达的影响.结果:As2O3能抑制GLC-82细胞的生长.As2O3处理GLC-82细胞后,光学显微镜下可见到明显的凋亡细胞,细胞周期的G1期前有低于2倍体的凋亡峰,DNA凝胶电泳显示出典型的凋亡特征:DNA有规律断裂形成的梯状图谱,蛋白水平的检测表明As2O3可使细胞c-myc基因表达下降,p16和p53表达升高.结论:As2O3能显著抑制GLC-82细胞生长、诱导细胞凋亡,并主要通过调节c-myc,p16和p53等基因的表达来实现.     

悬浮培养GLC-82肺肿瘤细胞积聚体与蛋白激酶FAK、AKT、ERK和SRC活化的关系

背景与目的:蛋白激酶FAK部分介导肿瘤细胞在悬浮培养下细胞积聚体的形成,从而阻止细胞发生凋亡和促进细胞增殖,但是参与细胞积聚体形成的FAK下游通路尚不清楚。本研究旨在研究蛋白激酶FAK及其可能的下游分子ERK、AKT和SRC活化在悬浮状态肺癌GLC-82细胞积聚中的作用。方法:用polyHEMA悬浮培养观察肺正常细胞HBE和肿瘤细胞GLC-82积聚体形态;细胞凋亡用DNA琼脂糖凝胶电泳检测梯状DNA分析;细胞转化能力用软琼脂糖集落形成实验分析;磷酸化蛋白激酶水平用免疫印迹实验检测;RNA干扰实验降低FAK蛋白水平的表达。结果:GLC-82肺腺癌细胞在polyHEMA悬浮状态下能够存活和形成积聚体,肺正常细胞HBE在polyHEMA悬浮状态下发生凋亡和不形成积聚体。磷酸化FAK、ERK、AKT和SRC的水平和GLC-82积聚体有关。沉默FAK蛋白的表达,能够部分地阻断肿瘤细胞积聚体的形成,降低磷酸化ERK和AKT水平,以及降低软琼脂集落形成能力。FAKRNA干扰前后的GLC-82细胞软琼脂集落形成率分别为(12.2±1.1)%和(3.6±0.7)%(P=0.001)。结论:GLC-82肺癌细胞积聚体的形成部分由FAK信号通路介导,ERK和AKT是FAK的下游通路蛋白。     

硫酸酯化茯苓多糖对胃腺癌细胞MKN-45凋亡的影响

目的 探讨硫酸酯茯苓多糖(S-PCS3-Ⅱ)诱导胃腺癌细胞凋亡的作用。方法 体外培养低分化胃腺癌细胞株MKN-45,加入不同浓度的硫酸酯茯苓多糖作用于MKN-45细胞不同作用时间后,利用细胞形态学、流式细胞术(FCM)、DNA琼脂糖凝胶电泳、吖啶橙/溴化乙锭双染法、透射电镜等实验方法观察对细胞凋亡的影响。结果 硫酸酯茯苓多糖作用MKN45细胞后,细胞形态学观察见抑制细胞生长,浓度为0.5 g/L的硫酸酯茯苓多糖作用24 h、48 h、72 h后其凋亡率分别为(7.92±0.83)%、(20.68±1.75)%、(37.52±2.47)%,且DNA凝胶电泳出现梯状条带。荧光显微镜和电镜下可见典型的细胞凋亡形态变化。结论 硫酸酯茯苓多糖可诱导胃腺癌细胞凋亡来抑制胃腺癌细胞生长。     

SeO2诱导肺癌细胞凋亡中Bcl-2和P53表达及细胞内活性氧和Ca2+水平影响的研究

目的 探讨SeO2对三种肺癌肿瘤细胞A549,GLC-82和PG的增生,凋亡,Bcl-2和p53表达,活性氧和Ca2 水平的影响。方法 本实验采用流式细胞术测定了细胞的凋亡率,细胞中活性氧和Ca2 的水平以及Bcl-2和p53的表达。结果 10μmoL/L的SeO2作用48 h就能诱导47.8％的A549和40.8％的GLC-82细胞凋亡,而30 μmol/L的SeO2也能诱导37.8％的PG细胞凋亡。用不同浓度(3-30 μmoL/L)的SeO2处理细胞48 h,在A549细胞中,代表细胞Bcl-2表达的平均荧光强度从65.8下降至9.6,而在其它两种细胞中,Bcl-2的表达下降都不明显。P53的表达在三种细胞中都有不同程度的上升,在A549细胞中,从3.5上升至7.1,在GLC-82细胞中,从4.7上升至7.4,在PG细胞中,从7.8上升至9.0。SeO2能显著降低三种细胞内活性氧和Ca2 水平。结论 SeO2对三种肺癌肿瘤细胞均有诱导凋亡的作用,在凋亡过程中涉及到Bcl-2下调和p53上调,以及细胞内活性氧和Ca2 水平下降。     

celecoxib抑制肝癌细胞株SMMC-7721增殖及诱导凋亡的研究

背景与目的:肝癌发病率高,治疗效果差,通过研究选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂celecoxib对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖、凋亡的影响,为治疗肝癌提供依据。方法:采用四氮唑盐比色法(MTT法)观察细胞增殖活力改变,流式细胞仪检测细胞凋亡率,透射电镜观察细胞形态改变,DNA提取行琼脂糖凝胶电泳观察DNA的"梯状"条带,免疫组化观察bcl-2基因和bax基因表达情况。结果:MTT法显示celecoxib在25、50、75、100μmol/L浓度下,24h抑制率分别为(15±3)%、(34.6±2.4)%、(56.8±1.0)%、(86.2±0.4)%,48h抑制率分别为(33.4±0.7)%、(66.7±1.8)%、(76.1±2.4)%、(97.3±0.8)%,(P<0.05);透射电镜观察到细胞凋亡的特征形态改变,如细胞体积缩小,胞膜皱缩,表面微绒毛消失,核固缩、异染色质沿核膜分布,有凋亡小体;流式细胞仪测定celecoxib组出现凋亡峰:24h50μmol/L组凋亡率分别为(14.6±1.1)%,100μmol/L组24、48h凋亡率分别为(40.5±2.0)%、(56.2±1.4)%,(P<0.01);DNA提取行琼脂糖凝胶电泳可见DNA的"梯状"条带,免疫组化显示经celecoxib干预后,bax基因表达增加,由阳性到强阳性,而bcl-2基因表达减少,由强阳性到弱阳性,并随时间和药物浓度变化而变化。结论:celecoxib抑制SMMC-7721细胞增殖,并呈剂量、时间依赖性,诱导SMMC-7721细胞凋亡,其机制之一可能是通过减少bcl-2基因的表达,而增加bax基因的表达,从而启动细胞凋亡。     

INDUCTION OF APOPTOSIS BY SeO_2 IN HUMAN LUNG CARCINOMA CELL LINE GLC-82

Thetraceelementselenium(Se)hasbeenshowntobecytotoxicinvitroinmultiplecellmodelsincludingbreastcancercelllineMCF-7[1],coloniccarcinomacellsHT29[2]andimmortalhumanhepaticcelllineHL-7702[3].Seleniumisanessentialcomponentofanumberofenzymespresentintheaminoacidselenocysteine(Se-Cys)andinhibittumorigenesisinbothanimalmodelsandhumans[3].SupplementingwithSeindietmayreducethehumancancerrisk[3].Clarketal.[4]foundthattheincidentoflungcancerwaslowerinSe-supplementedpatients.Apoptosisinducedbyselenium…     

Induction of apoptosis by SeO<Subscript>2</Subscript> in human lung carcinoma cell line GLC-82

Objective:To investigate the effect of selenium dioxide(SeO2) on human pulmonary adenocarcinoma GLC-82 cell lines to reveal its probable mechanism and the relationship between apoptosis and SeO2. Methods: Methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) method, flow cytometry (FCM), DNA agarose gel electrophoresis, light and electron microscope were used to study cell apoptosis in human pulmonary adenocarcinoma cell line GLC-82 treated by SeO2 at different concentrations (3, 10, 30μmol/L) and for different times (24, 48, and 72 h). Results: SeO2 significantly inhibited the proliferation and induced the cell apoptosis of GLC-82 at the different concentrations after treatment of 48h and 72 h. Conclusion: Selenium dioxide could inhibit the growth of lung cancer GLC-82 cells through inducing apoptosis. The effect of inhibition is dose-dependant and time-dependant.     

Effect of SeO<Subscript>2</Subscript> on telomerase activity in human lung carcinoma cell line GLC-82

Objective: To observe the effect of inhibition of telomerase activity by selenium dioxide (SeO2) on lung carcinoma cell line GLC-82. Methods: TRAP-PCR-ELISA was used to study the changes of telomerase activity in human pulmonary adenocarcinoma cell line GLC-82 treated by SeO2 at the different concentrations (3, 10, 30 μmol/L) and for different times (24, 48, and 72 h). Results: SeO2 inhibited the telomerase activity of GLC-82 at the different concentrations after treatment of 24, 48 and 72 h. Conclusion: SeO2 inhibits from telomerase activity of human lung carcinoma line GLC-82. The effect of inhibition is dose-dependant and time-dependant.     

PCNA表达与肺癌细胞株凋亡的关系

 目的　探讨肺癌细胞株增殖细胞核抗原 (PCNA)的表达与肺癌细胞株凋亡的关系。方法　用三氧化二砷 (As2 O3 )诱导肺癌细胞株GLC 82凋亡。运用细胞培养、MTT、流式细胞技术 (FCM )检测及逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR)检测PCNA表达在细胞凋亡过程中的变化及相互关系。结果　三氧化二砷可明显抑制GLC 82细胞增殖 ,使细胞周期阻滞于G2 /M并随后凋亡 ,PCNA表达受到抑制。结论三氧化二砷诱导GLC 82凋亡过程中 ,PCNA表达受到明显抑制。对于耐药性肿瘤 ,PCNA活性的抑制可能代表一种新的化疗策略。     

高能电磁脉冲诱导肺癌细胞株GLC-82凋亡的研究

背景与目的:电磁脉冲(electromagneticpulse,EMP)辐射已用于饮食行业的灭菌,且较2450MHz连续微波辐射消毒更加有效。本研究探讨高能电磁脉冲对肺癌细胞GLC-82凋亡的影响,以发现治疗肿瘤的新手段。方法:以场强为6×104V/m的EMP2min内辐照5次,然后采用细胞计数、MTT、流式细胞术及SP免疫组化法检测bcl-2和p53蛋白的表达,并对表达强度用CMIAS-Ⅱ图像分析仪在放大400倍条件下进行分析,通过上述方法观察EMP对肺癌细胞GLC-82的损伤作用,所有数据经SPSS8.0软件进行分析。结果:EMP可明显抑制肺癌细胞GLC-82的增殖与活力。照射后细胞的MTT光吸收值(A570)与对照组相比,在辐照后0h,1h和6h明显降低。流式细胞术证明,GLC-82细胞在辐照后6h发生明显的凋亡,凋亡率达13.38%。免疫组化的图像分析表明,照射后GLC-82细胞有不同程度的bcl-2蛋白表达的下调及p53蛋白表达的上调。结论:EMP可诱导肺癌细胞GLC-82的凋亡。bcl-2及p53蛋白参与了GLC-82细胞的凋亡过程。     

EMP INDUCES APOPTOSIS IN HUMAN LUNG CARCINOMA CELL LINE GLC-82

The possibility of health risks resulting from exposure to electric and magnetic fields provides a strong motivation to determine how such fields interact with cells. The short, intense electromagnetic pulse (EMP) produced by high-altitude nuclear explosions may radiate over many hundreds of miles. Basically, EMP consists of a pulse of radio-frequency waves with a nearly instantaneous rise in the electric and magnetic fields and a subsequent decline in the fields. EMP radiation may be repre…     

二氟甲基鸟氨酸对K562细胞生长特性的影响及其与端粒酶活性的相关性

目的研究二氟甲基鸟氨酸(DFMO)对K562细胞生长特性、凋亡及端粒酶活性的影响。方法采用细胞计数、形态观察、FCM分析及DNA电泳分别检测DFMO处理的细胞生长速率、周期分布及细胞凋亡。按TRAP法对细胞端粒酶活性进行检测。结果DFMO处理的细胞生长速率明显减慢;G1期细胞增多而S期细胞减少;细胞表现凋亡诱导,且其端粒酶活性受到抑制。结论DFMO引起的K562细胞生长抑制及凋亡诱导与端粒酶活性抑制有关。端粒酶的失活是抑制多胺生物合成的抗癌分子机制重要事件之一。