羟丁基壳聚糖预防大鼠腹腔粘连的实验研究

目的 探讨羟丁基壳聚糖对大鼠术后腹腔粘连的预防作用.方法 清洁级SD大鼠90只,雌雄各半,体重250～280 g,随机分为3组(n=30).采用纱布摩擦盲肠浆膜面制作腹腔粘连动物模型后,A、B组分别于盲肠表面喷涂2 mL浓度为2%的羟丁基壳聚糖溶液及透明质酸钠凝胶,C组旷置30 s后关腹.术后观察大鼠一般情况,术后2、4剧每组各取15只大鼠,行大体观察及组织学观察,双盲法行粘连程度分级.术后4周A、C组透射电镜观察创伤处盲肠壁的超微结构.结果 术后人鼠均存活至实验完成.术后2周,A、B组腹腔粘连程度较轻,纤维结缔组织及胶原增生较少,C组腹腔粘连较重,纤维结缔组织大量增生;根据Nair五级分级标准及组织学观察分级A、B组与C组差异有统计学意义(P＜0.05),A、B组间差异无统计学意义(P＞0.05).术后4周,A组粘连程度轻,纤维结缔组织及胶原增生少,C组腹腔粘连严重,纤维结缔组织及胶原大量增生,B组介于两者之间,3组分级差异有统计学意义(P＜0.05).透射电镜观察结果显示:A组成纤维细胞不活跃,胶原纤维较纤细,排列稀疏;C组成纤维细胞活跃,胶原纤维致密、紊乱.结论 羟丁基壳聚糖可显著减少大鼠腹腔术后纤维结缔组织增生,明显抑制成纤维细胞的活性,具有长时间预防腹腔粘连的作用.     

白藜芦醇预防大鼠椎板切除术后硬膜外粘连的实验研究

[目的]探讨白藜芦醇对椎板切除术后硬膜外粘连的预防作用。[方法]60只Wistar大鼠行L_2椎板切除术,形成3 mm×3 mm硬膜裸露区,随机平均分为3组。A组:术后给予白藜芦醇药物溶液干预;B组:术后给予生理盐水干预;C组:单纯椎板切除术组。术后6周处死动物并取材,行羟脯氨酸(hydroxyproline hyp)含量分析;肉眼观察硬膜外粘连情况,并行Rydell分级;样品行石蜡包埋并切片后,行免疫组织化学、HE染色。[结果]术后6周A组较B组、C组粘连程度轻,Rydell分级具有统计学意义(P0.05),B组、C组间差异无统计学意义(P0.05);A、B、C三组硬膜外瘢痕组织中羟脯氨酸的含量分别为(27.95±4.88)μg/mg、(42.85±4.57)μg/mg、(43.95±5.73)μg/mg,A组较B组、C组少,差异有统计学意义(P0.05),B组、C组间差异无统计学意义(P0.05);单位成纤维细胞及波形蛋白计数,A组较B组和C组少,差异有统计学意义(P0.05),B组、C组间差异无统计学意义(P0.05)。[结论]白藜芦醇能够良好的预防大鼠椎板切除术后出现的硬膜外粘连,并可抗炎及抑制成纤维细胞增殖。     

丝裂霉素C预防大鼠椎板切除后硬膜外粘连的量效关系及安全性

目的:探讨丝裂霉素C(MMC)预防大鼠椎板切除后硬膜外粘连的量效关系及其使用安全性。方法:60只SD大鼠随机分成5组,每组12只。分别切除L1椎板,术中各组分别以棉片浸透生理盐水(A组)或0.1mg/ml(B组)、0.3mg/ml(C组)、0.5mg/ml(D组)、0.7mg/ml(E组)的MMC,置于裸露的硬脊膜后方5min。A组应用生理盐水前后及B、C、D、E组应用MMC前后分别测定其体感诱发电位(SEP)潜伏期。术后4周处死大鼠,切取手术段脊柱,肉眼观察硬膜外粘连程度,行硬膜外瘢痕组织羟脯氨酸(HOP)含量测定、胶原组织面积测定及成纤维细胞计数。结果:A组应用生理盐水前后及B、C、D、E组应用MMC前后SEP潜伏期无明显改变。D、E组与A、B、C组比较硬脊膜与后方瘢痕组织粘连变轻,HOP含量降低,胶原面积减少,成纤维细胞计数减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。B、C组与A组比较硬脊膜与后方瘢痕组织粘连变轻,HOP含量降低,成纤维细胞计数减少,差异均有统计学意义(P<0.05),胶原面积差异无统计学意义(P>0.05)。D、E两组间及B、C两组间各项指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:0.5mg/ml浓度的MMC对预防大鼠椎板切除后硬膜外粘连具有较好的量效关系,且使用安全。     

丝裂霉素C-几丁糖混合物预防硬膜外粘连的效果

目的探讨局部应用丝裂霉素C-几丁糖混合物预防椎板切除术后硬膜外粘连的效果。方法 48只SD大鼠随机分为3组,每组16只,分别为丝裂霉素C-几丁糖混合物组(A组)、丝裂霉素C组(B组)和生理盐水对照组(C组)。各组大鼠行L1椎板切除术,局部应用不同的药物。分别于术前及术后1天行后肢运动功能评分(BBB评分)。术后6周行大体标本观察、羟脯氨酸含量检测和组织病理学观察。结果用药前后各组BBB评分差异无统计学意义(P>0.05)。A组和B组大鼠硬膜外粘连程度明显轻于C组,A、B两组硬膜外瘢痕中羟脯氨酸含量较C组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);A、B两组之间差异无统计学意义(P>0.05)。HE染色见A组及B组硬膜外瘢痕组织增生较少,结构疏松;C组中可见硬膜外形成致密的瘢痕粘连。结论丝裂霉素C-几丁糖混合物能够有效减少瘢痕组织形成,预防硬膜外粘连。     

壳聚糖/聚乙二醇琥珀酸酯/丝裂霉素C释药系统预防椎板切除术后硬脊膜外瘢痕粘连的实验研究

目的 研究壳聚糖/聚乙二醇琥珀酸酯(chitosan/polyethylene glycols-suceinate,CH/PEG-SA)/丝裂霉素C(mitomycin C,MMC)薄膜局部释药系统对硬脊膜外瘢痕粘连的治疗作用. 方法 按摩尔比3:1制得PEG-SA后,将其与CH及MMC(质量比为1:1.5)在一定条件下制成CH/PEG-SA/MMC薄膜.取成年雄性SD大鼠30只,制作L1椎板切除模型.将大鼠按体重编号,随机分为I～Ⅵ组,每组5只.I组硬脊膜后方植入20 mg CH膜片,Ⅱ组植入20 mg CH/PEG膜片,Ⅲ组植入20 mg CH/PEG.SA膜片,Ⅳ组用0.05 mg/mL MMC溶液浸润硬脊膜5 rain,V组植入20 mg CH/PEG-SA/MMC膜片,Ⅵ组不作处理.术后4周取材,通过大体观察(Rydell评分)比较硬脊膜外瘢痕的增生情况;行免疫组织化学观察,计算羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)含量;HE染色行组织学观察.结果所有动物术后情况良好,无步态异常、躁动、感染、死亡,各组间Rydell评分比较差异均有统计学意义(JP<0.05).I～Ⅵ组硬膜外瘢痕组织中Hyp含量分别为(0.570 8 ±0.345 0)、(0.728 6 ±0.150 6)、(0.553 4 ±0.122 3)、(0.313 3 ±0.106 4)、(0.2619±0.1021)及(1.020 1±0.120 6)μg/mg:I～V组Hyp含量均低于Ⅵ组,差异有统计学意义(P<0.05);IV、V组与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组比较,差异有统计学意义(P<0.05).组织学观察见V组胶原纤维少且与硬脊膜平行排列,走向清晰、规则,有少量炎性细胞浸润及毛细血管,无巨噬细胞反应. 结论 CH/PEG-SA/MMC膜片能有效减少硬脊膜外瘢痕中Hyp含量,抑制椎板切除术后硬脊膜外瘢痕粘连,是一种预防瘢痕粘连的良好辅助治疗手段.     

6-O-羧甲基壳聚糖对兔耳增生性瘢痕的作用

目的 通过建立兔耳腹侧增生性瘢痕的模型,探讨6-O-羧甲基壳聚糖（carboxyl methyl chitosan,6-O-CM-CH）局部注射对瘢痕的作用.方法 新西兰大白兔12只,在兔耳腹侧制备直径约1 cm、深达软骨膜的圆形瘢痕123个,随机将新西兰大白兔分为A、B、C3组,每组4只.分别于术后第30天、第40天瘢痕组织内注射药物,于术后第35天、第45天取瘢痕样本,分析成纤维细胞密度、羟脯氨酸含量和瘢痕增生指数.A组为治疗组,瘢痕内注射6-O-CM-CH（500μg/ml）;B组为对照组1,注射曲安奈德（10 mg/ml）;C组为对照组2,注射生理盐水.结果 A组与C组相比,瘢痕组织HE染色和胶原染色均可见胶原成纤维细胞密度降低（P＜0.05）,羟脯氨酸含量降低（P＜0.05）,瘢痕增生指数降低（P＜0.05）,两组间差异有统计学意义;A组与B组相比较,成纤维细胞密度、羟脯氨酸含量、瘢痕增生指数差异均无统计学意义（P＞0.05）.结论 6-O-CM-CH局部注射对兔耳增生性瘢痕的抑制作用与曲安奈德相近,局部注射能够抑制兔耳增生性瘢痕.     

高三尖杉酯碱对大鼠椎板切除术后硬膜外粘连的影响

目的 :探讨局部应用不同浓度高三尖杉酯碱(homoharringtonine,HHT)对L1椎板切除术后大鼠硬膜外瘢痕粘连的预防效果。方法:将36只成年雄性SD大鼠,2月龄,体重279.42±32.58g(260～320g),随机分成A组(HHT 0.2mg/ml组)、B组(HHT 0.1mg/ml组)、C组(生理盐水组)。制作L1椎板切除术模型,显露硬脊膜,C组生理盐水冲洗后直接逐层闭合切口,A、B组分别用浸泡有不同浓度HHT的棉垫放入骨缺损区5min,生理盐水冲洗后再逐层闭合切口。术后1个月时,行大体标本及组织病理学(HE染色)观察硬膜外瘢痕粘连情况,并使用Image Pro Plus软件进行成纤维细胞计数以及胶原光密度值分析。结果:A组无明显粘连,B组存在轻度粘连,C组形成紧密的硬膜外瘢痕粘连。A组硬膜外瘢痕中胶原光密度值(0.063±0.014)及成纤维细胞计数(8.43±2.52个)较C组(0.186±0.005和22.47±2.37个)明显降低,且优于B组(0.126±0.017和14.60±1.67个)(P 0.05)。结论 :局部应用高三尖杉酯碱对预防硬膜外粘连有效,可减少椎板切除术后瘢痕形成。且局部应用0.2mg/ml的高三尖杉酯碱防粘连效果更佳。     

他莫昔芬软膏对兔耳增生性瘢痕中TGF-β2表达的影响

目的 观察不同浓度他莫昔芬软膏对兔耳增生性瘢痕成纤维细胞和转化生长因子的影响,并探讨其防治增生性瘢痕的可行性.方法 采用兔耳增生性瘢痕模型,将96只新西兰长耳兔共576个耳创面随机分为实验A、B、C组和对照组D组,每组创面144个,实验A、B、C组分别外涂不同浓度(0.5%,1%,2%)的他莫昔芬软膏,D组则涂以空白软膏,分别于术后30、60、90 d切取增生的瘢痕组织,测量瘢痕厚度、观察瘢痕组织形态学变化,并检测成纤维细胞密度及瘢痕组织中TGFβ2 含量变化.结果 ①30 d时,A、D组与B、C组瘢痕厚度差异有统计学意义(P＜0.05),A、D组＜B组＜C组;成纤维细胞密度与TGF-β2 含量则相反,A、D组＞B组＞C组(P＜0.05).② 60、90 d时,4组瘢痕厚度、成纤维细胞密度及TGF-β2 含量差异有统计学意义(P＜0.05),A、B、C、D组TGF-β2含量60 d时分别为:(43.97±3.63)μg/L、(41.92±3.91)μg/L、(36.69±4.15)μg/L、(54.90±4.71)μg/L,90 d时分别为:(45.69 ±2.63)μg//L、(40.43±3.87)μg/L、(38.76±3.24)μg//L、(52.59±4.92)μg/L;成纤维细胞密度60 d时A、B、C、D组分别为:(4 392.07±327.84)个/mm2、(4 208.57±329.76)个/mm2、(4 033.44±427.91)个/mm2、(4 863.03±387.98)个/mm2,90 d时分别为:(4 418.41 ±432.52)个/mm2、(4 077.65 ±386.70)个/mm2、(3 844.53 ±354.29)个/mm2、(4 838.64±390.52)个/mm2,D组＞A组＞B组＞C组(P＜0.05).结论 外用他莫昔芬可降低TGF-β2,减少成纤维细胞数目,引起瘢痕萎缩,从而防治瘢痕增生.

Abstract：

Objective To observe the effect of different concentration of Tamoxifen ointment on the fibroblasts and transforming growth factor (TGF-β2) of hypertrophic scar at rabbit ears, so as to explore the possibility of treatment of hypertrophic scar with Tamoxifen. Methods The hypertrophic scar model was established in 96 New Zealand rabbits' ears. The wounds were divided into four groups (A, B, C and D) , with 144 wounds in each group. Different concentration of tamoxifen ointment(0. 5% ,1% ,2% ) was topically administered in groups A, B and C respectively, and blank ointment in group D. On postoperative (54. 90 ±4. 71) μg/L, respectively, on 60th day; and (45. 69 ±2.63) μg/L, (40. 43 ±3.87) μg/L, (38. 76 ±3. 24) μg/L, (52. 59 ±4. 92) μg/L, respectively, on 90th day. The fibroblasts density of scar in groups A, B, C, D was (4 392. 07 ± 327. 84 ) point/mm2, ( 4 208. 57 ± 329. 76 ) point/mm2, (4 033.44 ±427.91) point/mm2, (4 863.03 ±387.98) point/mm2, respectively, on 60 th day; and (4 418. 41 ±432. 52) point/mm2, (4 077. 65 ±386. 70) point/mm2, (3 844. 53 ±354. 29) point/mm2,(4 838.64 ±390.52) point/mm2, respectively, on 90th day. The content of TGF-β2 and fibroblasts density of scar were lined up as group D ＞ group A ＞ group B ＞ group C ( P ＜ 0. 05 ) . Conclusions Topical Tamoxifen'can reduce the content of TGF-β2 and fibroblast, decrease fibroblasts density and the formation of hypertrophic scar at rabbit ears. It offers a new way for the treatment of the hypertrophic scar.     

shRNA慢病毒转染串珠素对大鼠硬膜外瘢痕中成纤维细胞增殖能力的影响

目的 通过研究经shRNA慢病毒转染串珠素的大鼠硬膜外瘢痕组织成纤维细胞的增殖能力,探讨其对硬膜外瘢痕组织形成的影像. 方法 30只Wistar大鼠行椎板切除术,建立模型,于培养4周后提取硬膜外瘢痕组织.通过组织块贴壁法培养硬膜外瘢痕组织中的成纤维细胞并将细胞分为3组:未转染组(空白对照组)、荧光蛋白(GFP)慢病毒转染组(GFP组)和shRNA慢病毒转染组(shRNA组,内含GFP).成纤维细胞转染成功后,分别通过Western-blot、荧光定量PCR及MTT法检测3组的成纤维细胞的RNA、蛋白质表达及细胞增殖的差异. 结果 Western-blot检测显示shRNA组串珠素蛋白明显低于空白对照组和GFP组.荧光定量PCR检测显示shRNA组串珠素RNA表达低于空白对照组和GFP组.MTT检测显示0h各组吸光度(A)值差异均无统计学意义(P＞0.05),24 ～ 96 hshRNA组吸光度值(A)低于空白对照组和GFP组,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 经shRNA慢病毒转染串珠素能抑制大鼠硬膜外瘢痕组织成纤维细胞的增殖.     

7.0T micro-MRI评价局部应用丝裂霉素C和消旋聚乳酸膜抑制大鼠硬膜外粘连及瘢痕形成

目的应用7.0Tmicro-MR比较单独应用丝裂霉素C（MMC）、消旋聚乳酸（DL-PLA）膜以及二者联合应用（MMC＋DL-PLA膜）时抑制大鼠椎板切除术后硬膜外粘连的效果。方法将16只SD大鼠随机分为4组,每组4只,椎板切除术后于硬膜外给予不同局部处理：单纯MMC组局部应用MMC 0.67mg/ml;单纯DL-PLA膜组给予生理盐水和0.05mm厚DL-PLA膜;MMC＋DL-PLA膜组给予MMC 0.67mg/ml和0.05mm厚DL-PLA膜;对照组单纯应用生理盐水。术后4周处死大鼠,分别行7.0Tmicro-MR扫描及瘢痕组织面积测定,并于镜下观察硬脊膜与后方瘢痕组织粘连情况。结果单纯MMC组和单纯DL-PLA膜组硬膜外瘢痕组织较疏松,瘢痕面积小,与硬脊膜部分粘连。MMC＋DL-PLA膜组硬膜外瘢痕组织较疏松,瘢痕面积更小,与硬脊膜未形成明显粘连。对照组标本硬膜外瘢痕组织致密,瘢痕面积大,与硬脊膜形成紧密粘连。结论局部单独应用浓度为0.67mg/ml的MMC或0.05mm厚的DL-PLA膜均能减少硬膜外瘢痕组织增生,二者联合应用时效果更显著。