硫酸镁对兔脊髓缺血再灌注损伤的保护

背景硫酸镁用于脑缺血再灌注损伤的治疗已取得了较满意的疗效,但对脊髓缺血再灌注损伤的作用机制尚不十分清楚.目的观察硫酸镁对兔脊髓缺血再灌注损伤的保护效果,进一步探讨其作用机制.设计以实验动物为研究对象,随机对照的重复测量设计.单位一所大学医学院中心实验室.对象实验于2003-04/2004-06在西安交通大学医学院中心实验室完成.健康成年新西兰大白兔27只,体质量1.9～2.5 kg.随机抽签法分为硫酸镁组、生理盐水组和假手术组,每组9只.方法夹闭腹主动脉肾下段30min后恢复血流再灌注48 h,建立兔脊髓腰骶段缺血模型.硫酸镁组给予静脉灌注硫酸镁(0.25 mL/kg·h),生理盐水组用等量生理盐水代替.假手术组仅行中线剖腹术,不结扎动脉.在缺血前,缺血30 min及再灌注后1,2,8,16,24 h对动物行体感诱发电位监测,再灌注24及48 h后对硫酸镁组、生理盐水组动物行运动功能评分.再灌注后48 h处死动物,对脊髓行组织病理学检查.主要观察指标①运动功能评分.②体感诱发电位监测.③脊髓组织病理学检查.结果缺血30 min时硫酸镁组体感诱发电位(N1)潜伏期明显延长;再灌注后前2 h潜伏期较缺血时明显恢复,其后又显著延长.缺血30 min时生理盐水组波形消失.假手术组体感诱发电位没有明显变化,动物均完全康复.硫酸镁组各时间点潜伏期恢复均明显高于生理盐水组(P＜0.05);再灌注24和48 h后,硫酸镁组的神经功能评分分别为(3.7±0.5)和(3.4±0.7)分,均显著高于生理盐水组[(3.0±0.7)和(2.6±0.9)分](P＜0.05);再灌注48 h后硫酸镁组的脊髓前角正常神经细胞计数显著高于生理盐水组(23.4±3.4,12.3±3.2,P＜0.01).结论硫酸镁具有减轻兔脊髓缺血再灌注损伤及保护神经功能的作用.     

大鼠胰腺缺血再灌注损伤微循环改变的实验

目的：探讨胰腺缺血再灌注后微循环的改变与胰腺损伤的关系。方法：实验于2002—12／2004—01在徐州医学院神经生物学研究中心实验室，解放军第九十七医院实验科、徐州市心血管研究所实验室完成。24只大鼠随机分为假手术组，缺血再灌注1h组，缺血再灌注6h组，每组8只。测定血淀粉酶，脂肪酶了解胰腺外分泌功能；光镜、电镜观察胰腺组织结构改变；微循环显微镜检测胰腺微循环的血管直径、血流速度、血流状态；测定胰腺组织干／湿比，了解组织含水量的变化。结果：24只大鼠全部进入结果分析。①胰腺缺血再灌注后血清淀粉酶、脂肪酶含量：缺血再灌注1h组淀粉酶和脂肪酶含量高于假手术组[(26．67&;#177;9．99)μkat／L,(5．24&;#177;1．82)μkat／L,(14．53&;#177;3．98)μkat／L,(2．83&;#177;1．64)μkat／L，(t=2．60，349，P&;lt;0．05)]，缺血再灌注6h时明显高于假手术组[(41．59&;#177;10．95)μkat／L，(10．66&;#177;2．61)μkat／L，(t=7．35，7．54，P&;lt;0．01)]。淀粉酶、脂肪酶随着再灌注时间延长而增加。②胰腺缺血再灌注后形态学改变：缺血再灌注1h组光镜下呈现急性水肿性胰腺炎表现，缺血再灌注6h组损伤加重，出现出血、坏死。③胰腺缺血再灌注后微循环的改变：缺血再灌注1h组和缺血再灌注6h组的微动脉口径小于假手术组[(18&;#177;6)μm，(20&;#177;9)μm，(22&;#177;8)μm，(t=2．42—3．85，P&;lt;0．05)]。缺血再灌注1h组和缺血再灌注6h组的微静脉口径均较假手术组扩张[(30&;#177;8)μm，(35&;#177;15)μm，(25&;#177;10)μm，(t=2．42—3．85，P&;lt;0．05)]，缺血再灌注6h组较缺血再灌注1h组微静脉口径明显扩张(t=3．69，P&;lt;0．05)。缺血再灌注1h组与缺血再灌注6h组的血流速度均较假手术组减缓[(0．44&;#177;0．12)mm／s，(0．21&;#177;0．04)mm／s，(0．56&;#177;0．03)mm／s，(t=2．42—4．19．P&;lt;0．05—0．01)]，并且缺血再灌注6h组较缺血再灌注1h组血流速度显著减缓(t=5．19，P&;lt;0．01)。④胰腺再灌注后胰腺组织干湿比的改变：缺血再灌注1h组胰腺干湿比明显少于假手术组[(26．5&;#177;2．3)％，(30．1&;#177;2．1)％，(t=3．23，P&;lt;0．05)]，缺血再灌注6h组胰腺干湿显著减少[(20．4&;#177;2．2)％，(t=8．23，P&;lt;0．01)]。结论：胰腺缺血再灌注1h时即发生微循环障碍及组织损伤，再灌注6h微循环障碍进一步恶化，胰腺缺血再灌注后，胰腺组织损伤与微循环紊乱的发展呈现一致性。     

缺血预处理对兔脊髓缺血再灌注损伤的延迟保护作用

目的：脊髓缺血再灌注损伤机制复杂，各种单一药物保护作用有限。为此探讨缺血预处理(ischemic preconditioning，IPC)对兔脊髓缺血再灌注损伤的延迟保护作用。方法：将大白兔随机分为3组。缺血组和IPC组各30只，采用肾下腹主动脉阻断法，建立脊髓缺血再灌注模型；假手术组10只，手术开始步骤同其他两组，但不做肾下腹主动脉阻断即缝合伤口。IPC组先阻断腹主动脉5min，开放10min，重复3次，48h后阻断腹主动脉35min后开放灌注，缺血组阻断腹主动脉35min后开放灌注。于术后4，8，24，48h，7d分别进行神经功能评分，观察脊髓标本的病理学改变，细胞凋亡情况及脊髓组织中白细胞介素8(IL-8)的水平测定。结果：各时间点假手术组所有动物神经功能正常。缺血再灌注8，24，48h，7d神经功能Jacobs评分，缺血组分别为(1．90&;#177;1．65)，(1．34&;#177;1．76)，(0．71&;#177;0．75)，(0．61&;#177;0．57)分，IPC组分别为(3．50&;#177;1．46)，(3．80&;#177;1．60)，(3．77&;#177;1．75)，(3．50&;#177;1．29)分，两组比较差异有非常显著性意义(t=3．98～11．12，P&;lt;0．01)。IPC组组织病理学变化各时间点明显好于缺血组，凋亡细胞数明显低于同时间点缺血组。再灌注8，24，48hIL-8水平，缺血组分别为(5877．32&;#177;530．40)，(6015．49&;#177;441．55)，(5050．49&;#177;271．22)pg／g，IPC组为(5086．34&;#177;284．16)，(5215．61&;#177;411．66)，(4385．86&;#177;230．93)pg／g，两组比较差异有显著性意义(t=2．63-3．69，P&;lt;0．05)。结论：IPC组通过调动机体内源性抗损伤机制对缺血脊髓发挥延迟保护作用。     

兔脊髓缺血再灌注损伤与硫酸镁和抑肽酶保护作用的效应差异

目的：观察硫酸镁和抑肽酶对兔脊髓缺血再灌注影响的差异。方法：实验于2003—05／2004—02在西安交通大学医学院中心实验室完成。①造模分组及干预方法：27只新西兰大白兔采用腹主动脉肾下段夹闭造成兔脊髓缺血模型，随机分为3组，每组9只。硫酸镁组实验全程持续给予150g／L硫酸镁0．25mL／（kg&;#183;h）静脉灌注，抑肽酶组于缺血前10min静注抑肽酶509．1 kat／kg，缺血开始后持续注入169．7kat／mL抑肽酶1mL／（kg&;#183;h）直至实验结束，对照组给予同硫酸镁组等量的生理盐水静注。②定量定性评估：监测缺血前、缺血30min、再灌注1，2，8，16，24h后的潜伏期变化，使用丹麦PANTEC公司生产的Kepoy型四导联诱发电位仪；再灌注24，48h后对动物后肢运动神经功能评分（5分制法：后肢完全瘫痪为0分；后肢严重不完全瘫痪为1分；后肢可运动，但不能跳跃为2分；后肢可跳跃，但有明显不稳为3分；后肢可跳跃，但有轻微不稳为4分；后肢运动功能完全正常为5分）；缺血再灌注48h后，观察并计数脊髓前角运动神经元，应用免疫组织化学单克隆神经微丝抗体染色后切片。结果：进入结果分析实验兔3组27只。①各组体感诱发电位潜伏期：硫酸镁组和抑肽酶组再灌注1，2，8，16，24h均短于对照组俨〈0．05）；硫酸镁组再灌注8，16，24h短于抑肽酶组[（33．9&;#177;1．5），（38．4&;#177;1．8），（39．3&;#177;1．9）ms和（35．6&;#177;1．4），（40．5&;#177;1．9），（41．7&;#177;1．6）ms，P〈0．05]。②各组神经功能评分：再灌注24和48h硫酸镁组、抑肽酶组高于对照组[（3．94&;#177;0．37）和（3．73&;#177;0．95）分，（3．98&;#177;0．44）和（3．02&;#177;0．22）分。（2．81&;#177;0．56）和（2.31&;#177;0．35）分，P〈0．01]，再灌注48h硫酸镁组高于抑肽酶组（P〈0．05）。⑧各组脊髓前角正常运动神经元计数：再灌注后48h，硫酸镁组，抑肽酶组均明显高于对照组（P〈0．05）。④各组组织病理学改变：硫酸镁组缺血再灌注后48h，前角运动神经元轮廓清楚，胞质均匀。大部分细胞核居中，轮廓清晰可见，神经微丝抗体染色呈丝网状均匀分布于胞浆中，前索轴突分布均匀。抑肽酶组缺血再灌注后48h，前角运动神经元轮廓清楚，多极形，细胞核大多位于中央，核仁清晰可见，尼氏体呈网状均匀排列于核周，胞浆均匀深染前索分布均匀。对照组前角运动神经元空泡变性，中央尼氏体溶解消失。核固缩变小，呈三角形，胞核结构大多萎缩消失，神经微丝抗体染色阳性，神经丝紊乱，稀疏结构大多萎缩消失，数量明显减少。结论：硫酸镁与抑肽酶均能改善脊髓缺血损伤后的神经功能恢复，减轻病理损伤。虽然两者的脊髓保护作用在缺血期及再灌注早期无明显差异，但随着再灌注时间的延长，前者的保护作用较后者有显著增强的趋势。但两者合用可否有协同增强效应尚需观察。     

抑肽酶预处理对家兔脊髓缺血再灌注损伤的保护作用

目的：抑肽酶具有保护血小板功能、减少纤维蛋白溶解等作用，已广泛用于体外循环心血管手术，进一步观察抑肽酶对家兔脊髓缺血再灌注损伤的保护效果。方法：家兔27只，随机分为抑肽酶处理组、缺血组和假手术组，每组9只。夹闭腹主动脉肾下段30min，建立兔脊髓腰骶段缺血模型。恢复血流再灌注48h。抑肽酶处理组于缺血前10min一次性静注抑肽酶3&;#215;10^7IU／kg，继之以微量泵输注1&;#215;10^7Iu／(kg&;#183;h)，缺血组用生理盐水代替，阻断和再灌注时间同抑肽酶处理组。假手术组仅行中线剖腹术，不结扎动脉。在缺血前、缺血期间及再灌注后60min对动物行体感诱发电位(SEP)监测，对各组动物行运动功能评分。再灌注后48h后处死动物，对脊髓行组织病理学检查。结果：假手术组的SEP没有明显变化，动物均完全康复。缺血30min时缺血组波形消失，抑肽酶处理组波幅降下30％。再灌注60min后，抑肽酶处理组，缺血组SEP波幅分别渐升至基线的72％和53%(P＜O．01)，再灌注60min时SEP的N1，P1波峰潜伏期分别为(28．5&;#177;1．8)ms和(56．8&;#177;2．9)ms，与缺血前及生理盐水组相比差异有显著性意义(P＜O．05)；再灌注24h和48h后，抑肽酶处理组的神经功能评分均显著高于缺血组(P＜O．05)；再灌注48h后抑肽酶处理组的脊髓前角正常神经细胞计数显著高于缺血组(P＜O．05)。结论：抑肽酶具有减轻兔脊髓缺血再灌损伤及保护神经功能的作用。     

肿瘤坏死因子-α在大鼠脑缺血再灌注中的表达及对神经细胞凋亡的影响

目的：观察大鼠脑缺血再灌注损伤后肿瘤坏死因子-α(tumor necmsis factor-alpha，TNF-α)表达及细胞凋亡情况，探讨TNF-α在脑缺血再灌注损伤中的作用。方法：采用大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型，分为3组：脑缺血再灌注组大鼠大脑中动脉阻塞2h，再灌注2，6，12，24，48，72，96h、假手术组及永久缺血组，分别测定TNF-α表达(用免疫组织化学法)及细胞凋亡数(原位凋亡检测试剂盒)。结果：脑缺血再灌注组TNF-α表达水平[6h：(15．0&;#177;3．21)个／mm^2，12h：(47．0&;#177;0．87)个／mm^2，24h：(49．0&;#177;10．3)个／mm^2，48h：(44．8&;#177;6．9)个／mm^2，96h:(37．9&;#177;6.4)个／mm^2、细胞凋亡数[2h：(33．3&;#177;0．8)个／mm^2，6h:(56．6&;#177;1．6)个／mm^2，12h:(72．3&;#177;4.2)个／mm^2．24h：(86．6&;#177;5．5)个／mm^2，48h：(96．8&;#177;0．9)个／mm^2]明显高于假手术组(P&;lt;0.01)及永久缺血组(P&;lt;0.05)；且TNF-α表达与细胞凋亡数关系密切(r=0．567．P&;lt;0，01)。结论：大鼠脑缺血再灌注损伤后TNF-α在神经元迟发性坏死中起着重要作用。     

亚低温对缺血再灌注大鼠海马CA1区Bcl-2和Bax表达动态变化的影响

目的：研究脑缺血再灌注后全身亚低温的脑保护作用及其对Bcl-2和Bax表达的动态影响，探讨亚低温脑保护作用的机制。方法：实验于2002-01／12在江苏省麻醉医学研究所(省级重点实验室)完成。实验动物选择126只SD雄性大鼠随机分为假手术组、常温缺血组和亚低温缺血组。采用Pulsinelli四血管阻断法制作大鼠全脑缺血再灌注模型，即刻全身亚低温4h，分别在再灌注后4，8，24，48，72，96h，7d，7个时间点取脑标本，进行Bcl-2和Bax免疫组织化学及苏木精-伊红染色。结果：与常温组相比，全身亚低温组海马CA1区死亡细胞数明显减少[常温比亚低温24h：(195&;#177;18)比(214&;#177;20)个／mm，P&;lt;0．05；48h：(185&;#177;17)比(215&;#177;21)个／min．P&;lt;0．01；72h：(130&;#177;20)比(200&;#177;17)个／mm，P&;lt;0．01)]；Bcl-2蛋白免疫反应强度峰值增高，持续时间延长[灰度值：常温比低温：24h(40&;#177;8比57&;#177;8，P&;lt;0．01)；48h(42&;#177;6比55&;#177;8，P&;lt;0．01)；72h(38&;#177;4比41&;#177;6，P&;lt;0．01)]。Bax蛋白免疫反应强度峰值减低，持续时间缩短[灰度值：常温比低温24h(32&;#177;4比24&;#177;5．P&;lt;0．05)；48h(30&;#177;7比24&;#177;6，P&;lt;0．05)；72h(26&;#177;4比22&;#177;5，P&;lt;0．05)]。结论：全身亚低温对缺血性锥体细胞损害有较好的保护作用。可增强具有抗凋亡的Bcl-2蛋白的表达，延长其表达持续时间，而减弱具有促凋亡的Bax表达，同时缩短其表达持续时间，此可能是亚低温对缺血性脑组织损害产生保护作用的分子机制之一。     

缺血预处理对兔脊髓缺血损伤后的保护作用及其机制

目的：探讨缺血预处理对兔脊髓缺血损伤的保护作用及机制。方法：24只雄性新西兰大白兔随机数字表法分3组(每组8只)：即缺血组(IC组)、缺血预处理组（IPC组)及假手术组（S组)。IC组夹闭兔腹主动脉肾下段20min，制作兔脊髓缺血模型；IPC组预先使脊髓缺血6min，再灌注30mm后再次阻闭兔腹主动脉肾下段20mm；S组除不夹闭腹主动脉外，其余处理同IC组。再灌注后8，12，24和48h分别对动物神经功能评分；再灌注后48h，测定血浆血栓素B2(TXB2，TXA2的稳定代谢产物)的含量及6-酮前列素(6-keto-PGF1α，PGI2的稳定代谢产物)的含量，然后处死动物取脊髓，测定脊髓组织中TXB2及6-keto-PGF1α的含量。结果：IPC组神经功能评分各时间点均明显高于IC组。与IC组相比，IPC组血浆和脊髓中TXB2含量明显减少，分别为(108&;#177;20)mg／L，(733&;#177;64)ng／g(P&;lt;0．05，F=27．93，132.887)，而IPC组血浆和脊髓中6-keto—PGF1α含量明显增多，分别为(75&;#177;14)mg／L，(502&;#177;37)ng／g(P&;lt;0．05，F=13．185，64．141)。IPC组血浆和脊髓中TXB2／6-keto-PGF1α分别为(145&;#177;0．17)，(1．47&;#177;0.19)，明显低于IC组(P&;lt;0．05，F=20．83，29．447)。结论：缺血预处理对脊髓缺血损伤有显著的保护作用，保护机制与缺血预处理改善脊髓缺血损伤后TXA2-PGI2平衡失调有关。     

实验性大鼠急性脑缺血细胞凋亡与相关蛋白表达的关系

目的：研究大鼠脑缺血再灌注后细胞凋亡及p53，Bcl-2蛋白家族表达的变化，并探讨它们在细胞凋亡中的作用。方法：实验在华北煤炭医学院形态实验室完成。54只大鼠用随机数字表法随机分成3组：脑缺血组(42只)、假手术组(6只)和正常组(6只)。脑缺血组又分为7组：即缺血2h再灌注1，3，6，12，24，48和72h组(n=6)。采用线栓法制作局灶性脑缺血再灌注模型，用TUNEL法检测细胞凋亡的变化，用免疫组化法检测p53，Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。结果：①缺血2h再灌注1h皮质区可见凋亡细胞[(7．83&;#177;1．72)个／高倍视野]，24～48h达高峰[(43．33&;#177;5．20)个／高倍视野，(48．50&;#177;6．25)个／高倍视野]，72h开始下降[(26．67&;#177;3．56)个／高倍视野](P&;lt;0．05，P&;lt;0．01)；缺血2h再灌注1h皮质区可见p53蛋白阳性细胞[(14．35&;#177;1．92)个／高倍视野]，24h达高峰[(48．00&;#177;6．42)个／高倍视野]，48h后开始下降[(31．00&;#177;6．60)个／高倍视野](P&;lt;0．05，P&;lt;0．01)；缺血2h再灌注1h皮质区可见Bcl-2蛋白阳性细胞[(28．62&;#177;6．80)个／高倍视野]，3h达高峰[(56．50&;#177;7．87)个／高倍视野]，6h后开始下降[(45．00&;#177;6．63)个／高倍视野](P&;lt;0．01)；缺血2h再灌注1h皮质区可见Bax蛋白阳性细胞[(45．83&;#177;4．07)个／高倍视野]，24h达高峰[(61．00&;#177;8．88)个／高倍视野]，48h开始逐渐下降[(45．83&;#177;6．49)个／高倍视野](P&;lt;0．05，P&;lt;0．01)。②缺血再灌注后不同时间点细胞凋亡数与p53及Bax蛋白的阳性表达数呈正相关(r=0．843，P&;lt;0．001；r=0．840，P&;lt;0．001)，与Bcl-2蛋白的阳性表达数呈负相关(r=-0．387，P&;lt;0．05)。结论：大鼠脑缺血再灌注后，缺血周边区发生明显的细胞凋亡，同时伴有p53及Bax蛋白表达增加及Bcl-2表达降低，p53及Bax蛋白表达对细胞凋亡起促进作用，而Bcl-2蛋白表达则对细胞凋亡起抑制作用。     

胰岛素对大鼠脑缺血再灌注时神经元凋亡及其相应基因的调控

目的 观察胰岛素（insulin,RI)对缺血再灌注损伤后细胞凋亡及其相应基因的调控作用。评估RI对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法 将健康wistar大鼠56只，随机分为对照组、缺血再灌注盐水组(NS)、缺血再灌注胰岛素组(RI)。采用pulsinelli4血管阻塞模型，观察RI、NS在4．24，48h海马CA1区存活神经元数目，TUNEL阳性细胞数目，Bcl-2蛋白的表达，以观察比较缺血再灌注阶段细胞凋亡的变化。结果 再灌注NS组CA1区神经元数目(36&;#177;6)个／mm^2较再灌注RI组(88&;#177;9)个／mm^2少(t=3．34，P&;lt;0．01)。再灌注后CA1区细胞凋亡数：4h时再灌注NS组(12&;#177;3)个／mm^2高于再灌注RI(8&;#177;1)个／mm^2和假手术组(2&;#177;1)个／mm^2：组间比较，F=127．66，P&;lt;0．001。Bcl-2对海马CA1细胞凋亡评估4h时。再灌注NS组43．0&;#177;9．8,高于再灌注RI组24．0&;#177;5．4和假手术组2．7&;#177;0．8。结论 全脑缺血再灌注时急用RI可减轻脑缺血再灌注神经元凋亡,对脑缺血再灌注损伤引起的神经元延迟性坏死有保护作用。     

大鼠脑缺血再灌注时脑水肿的实验研究

目的：利用大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型，研究脑缺血再灌注(cerebral ischemic reperfusion，CIR)时脑水肿(brain edema，BE)的发生、发展变化规律。方法：健康雄性普通级Wister大鼠52只，体质量200—250g，单纯随机分成正常组、假手术组和缺血再灌注组。缺血再灌注组为缺血2h．根据再灌注时间分为12，24，48，72h，5，7d组，假手术组又分为术后12，24，48，72h，5，7d组，每组4只。应用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)再灌注模型，采用干、湿重法测定脑组织水含量。结果：脑缺血再灌注12h时MCAO侧大脑半球脑水含量增加（80．12&;#177;0．31)％，48h-5d达到高峰(84．38&;#177;0．32)％，7d时仍处于较高水平(82．32&;#177;0．41)％。与正常侧(78．51&;#177;0．32)％、假手术组(78．45&;#177;0．33)％和正常组(78．53&;#177;0．35)％相比，差异均有显著性意义(P&;lt;O.01)。结论：脑缺血再灌注时造成脑水肿。脑水肿为脑缺血再灌注损伤的重要机制之一。     

黄芩苷对大鼠脑缺血再灌注脑组织超氧化物歧化酶和丙二醛的影响

目的：探讨黄芩苷对大鼠脑缺血再灌注自由基损伤的保护作用，为脑缺血再灌注损伤防治提供新的药物。方法：将大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注组及黄芩苷治疗组。动物模型采用大脑中动脉缺血再灌注模型，用黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥法分别测定脑组织缺血再灌注3，6h时超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛的含量及黄芩苷对其的影响。结果：脑缺血2h再灌注后3，6h时，脑组织SOD分别为(24．5&;#177;0．28)，(16．27&;#177;0．20)NU／mg，丙二醛分别为(0．66&;#177;0．32)．(1．62&;#177;0．52)μmol／g，与假手术组比较，脑组织SOD明显降低(P&;lt;0．01)，丙二醛则明显增高(P&;lt;0．01)；黄芩苷治疗后脑组织SOD分别为(30．19&;#177;0．36)，(25．74&;#177;0．28)NU／mg，丙二醛分别为(0．42&;#177;0．26)．(0．78&;#177;0．37)μmol／g，与模型组相比，脑组织SOD有所增高(P&;lt;0．01)．而丙二醛则有所降低(P&;lt;0．01)。并且，治疗组大鼠神经功能缺损评分较模型组增高(P&;lt;0．05)。结论：黄芩苷对脑缺血再灌注自由基损伤有一定保护作用。     

黄芪和当归注射液对兔肾缺血再灌注损伤时腺苷三磷酸酶的影响

背景：近年研究表明，黄芪和当归具有抗自由基的作用，对肾缺血再灌注损伤具有保护作用。目的：观察黄芪、当归注射液在肾缺血再灌注损伤中对腺苷三磷酸酶(ATP酶)的保护作用及机制。设计：以实验动物为研究对象的观察对比实验。单位：一所医学院的生理教研室及肾功能保护研究室。材料：本实验于2001-01／2001—03在泸州医学院生理实验室完成。选择健康成年日本大耳白兔33只，由泸州医学院实验动物中心提供，雌雄不拘，体质量(1．63&;#177;0．22)b。按随机数字表法分为假手术对照组8只、单纯缺血再灌注组8只、黄芪注射液+缺血再灌注组(黄芪组)8只、当归注射液+缺血再灌注组(当归组)9只。方法：术前1d、手术当天、术后1d，黄芪组、当归组每天分别静脉注射药物(黄芪1．25g／kg、当归12、5g／kg)，对照组和单纯缺血再灌注组每天注射生理盐水5mL／kg。肾缺血lh再灌注48h后，下腔静脉采血，取右肾上极组织置入30mL／L戊二醛固定，下极组织制成组织匀浆。电镜检查肾组织超微结构，测血清肌酐含量及肾组织中ATP酶活性。主要观察指标：肾组织超微结构、血清肌酐含量及肾组织中ATP酶活性。结果：单纯缺血再灌注组肾组织变性显著，黄芪组、当归组病变较单纯缺血再灌注组明显减轻。单纯缺血再灌注组血清肌酐含量明显高于假手术对照组(P&;lt;0．05)；黄芪组、当归组血清肌酐含量较单纯缺血再灌注组降低(P&;lt;0、05)。单纯缺血再灌注组Mg^2+-ATP酶、Na^+-K^+-ATP酶、Ca^2+-ATP酶含量分别为(0．155&;#177;0．020)，(0、179&;#177;0、018)，(0、150&;#177;0、022)nkat／g，与假手术对照组[(0、174&;#177;0、012)，(0、198&;#177;0．012)，(0．18l&;#177;0．017)nkat／g]相比明显降低(t=2．344，2．438，3．014，P&;lt;0．05)；黄芪组及当归组的Mg^2+-ATP酶、Na^+-K^+-ATP酶、Ca^2+-ATP酶活性分别为(0．172&;#177;0．023)，(0．196&;#177;0．077)(0．175&;#177;0．016)(0．177&;#177;0．015)(0．200&;#177;0．011)和(0．181&;#177;0．025)nkat／g，除黄芪组Mg^2+-ATP酶活性较单纯缺血再灌注组差异无显著性外，余均较单纯缺血再灌注组高(t=2．372．2．786，P&;lt;0．05)。结论：黄芪、当归具有抑制ATP酶下降和改善肾局部血流调节紊乱的作用，为其通过保护ATP酶而减轻肾缺血再灌注损伤提供实验学基础。     

促红细胞生成素对全脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和诱导型一氧化氮合酶蛋白的影响

目的：观察促红细胞生成素(EPO)对短暂性全脑缺血再灌注后海马CA1区iNOS蛋白表达的影响，探讨其对缺血脑组织保护的可能机制。方法：应用四动脉血流阻断法制作大鼠短暂性全脑缺血再灌注模型；于再灌注开始时经腹腔注射EPO(3000U／kg)；48h灌注取脑。苏木精一伊红染色和TUNEL法染色观察海马CA1区神经细胞坏死和凋亡。应用免疫组织化学方法检测iNOS蛋白的表达。结果：短暂性全脑缺血15min再灌注后48h，苏木精一伊红染色海马CA1区存活神经元细胞数正常组(211．28&;#177;7．95)个／视野，假手术组为(209．28&;#177;11．34)个／视野，EPO治疗组海马CA1区存活神经元细胞数为(170．28&;#177;8．12)个／视野，缺血组为(146．84&;#177;8．35)个／视野。EPO治疗组与缺血组比较差异有显著性意义(P&;lt;0．01)。TUNEL法凋亡细胞测定，正常组无阳性细胞，假手术组阳性细胞(152．48&;#177;18．52)个／视野，EPO治疗组有(1797．51&;#177;151．35)个／视野，缺血组有(2250．41&;#177;180．06)个／视野，两者比较差异有显著性意义(P&;lt;0．01)。iNOS蛋白的表达测定，正常组无阳性细胞，假手术组海马CA1区阳性细胞区灰度值为5．36&;#177;1．54，EPO治疗组为31．80&;#177;6．42，缺血组为49．46&;#177;8．96。EPO治疗组与缺血组比较，两者差异有显著性意义(P&;lt;0．01)。结论：EPO可减少大鼠短暂性全脑缺血再灌注后神经元的死亡和凋亡，抑制iNOS蛋白的表达。     

地塞米松对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型TNF-α表达的干预

目的 研究地塞米松对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型肿瘤坏死因子（TNF-α）表达的影响。方法 大脑中动脉线栓法复制局灶性脑缺血再灌注模型。实验随机分为3组：（1）正常假手术组。（2）生理盐水组。（3）地塞米松组[0.5mg/（kg&;#183;d）]。生理盐水组与地塞米松组分别于缺血2h后再灌，6，12，24，48h。采用HE、免疫组化及酶联免疫吸附实验（ELISA）等方法观察地塞米松对缺血再灌性脑损伤脑组织TNF-α表达的影响。结果 脑缺血再灌注性损伤后TNF-α阳性细胞数，生理盐水组和地塞米松组各时间点明显多于假手术组（3.0&;#177;7.2）（q=9.38-17.98，P&;lt;0.01），再灌注6，12h，地塞米松组（45.1&;#177;5.4，81.4&;#177;17.4）明显多于生理盐水组（34.2&;#177;7.2，60.4&;#177;15.4）（q=4.67，P&;lt;0.01；q=3.50，P&;lt;0.05）。结论 脑缺血再灌注后TNF-α表达的增强可能是地塞米松加重缺血再灌注性脑损伤的机制之一。     

巴曲酶对大鼠局灶性脑缺血再灌注后血小板活化因子和血小板活化因子受体mRNA表达的影响

背景：巴曲酶是目前比较公认的治疗缺血性脑血管病的理想药物之一，被广泛地应用于临床，因此对其在脑缺血再灌注损伤中的保护作用进行深入认识很有必要。目的：探讨巴曲酶对大鼠局灶性脑缺血再灌注后血小板活化因子(PAF)水平及PAF受体基因(PAF-RmRNA)表达的影响。设计：完全随机区组设计。地点和对象：实验于2004-03／12在哈尔滨医科大学附属第二医院科研中心完成。选择40只健康Wistar雄性大鼠，体质量200～250g，随机分为5组，每组8只。I组：假手术组；Ⅱ组为生理盐水组：Ⅱa为缺血6h再灌注6h组，Ⅱb为缺血6h组；Ⅲ组为巴曲酶组：Ⅲa为缺血6h再灌注6h组，Ⅲb为缺血6h组。方法：线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞(MCA0)及再通模型。应用RT-PCR技术检测MCA0及再通后缺血半暗带皮质PAF受体基因表达，同时用ELISA检测对应血浆PAF值。主要观察指标：不同时间点各组缺血半暗带皮质PAF mRNA表达及血浆PAF值。结果：生理盐水组中再灌组及缺血组PAF值均明显升高，Ⅱa，Ⅱb分别为(1480&;#177;249)和(1052&;#177;199)ng／L，而PAF-RmRNA表达降低，分别为0．44&;#177;0．06和0．48&;#177;0．05，分别与对应假手术组比较非常显著性意义(P&;lt;0．01)。巴曲酶组中再灌注及缺血组PAF值均降低，为(848&;#177;80)和(743&;#177;105)ng／L，PAF-RmRNA表达增强(0．63&;#177;0．08和0．67&;#177;0．06)，与对应生理盐水组比较差异有显著性意义(P&;lt;0．01)。结论：巴曲酶可降低脑缺血再灌注后血浆中PAF水平，并且可能对脑缺血再灌注缺血半暗带皮质组织PAF-RmRNA表达有影响，以期为预防性干预提供试验数据。     

线粒体功能与骨骼肌缺血再灌注损伤的关系

目的：观察骨骼肌缺血再灌注后呼吸链电子漏、呼吸控制率、丙二醛和髓过氧化物酶的变化，评价3—硝基—N—甲基水杨酰胺(3-nitro-N-methy solicy solicy lamide，NSMA)对肢体缺血再灌注损伤的影响。方法：实验于1998—10／2000—05在解放军第三○四医院创伤外科研究室完成，制备缺血再灌注模型。将35只健康Wistar大白鼠，饲养环境清洁，合格证号军医动字第B98008号。随机分为7组(对照组、缺血2h、缺血2h再灌注1h、缺血2h用NSMA再灌注1h、缺血6h、缺血6h灌注1h、缺血6h用NSMA再灌注1h)，选取不同时点骨骼肌标本，提取骨骼肌线粒体、测定线粒体呼吸控制率、抗氰呼吸、经皮测量动脉氧分压及局部相对血流量、测定骨骼肌丙二醛含量和髓过氧化物酶活性、对骨骼肌线粒体超微结构进行透射电镜检测。结果：缺血2h(1．45&;#177;0．10)、缺血2h再灌注1h(1．49&;#177;0．13)、缺血6h(0．79&;#177;0．08)、缺血6h灌注1h(1．32&;#177;0．07)RCR比对照组(2．82&;#177;0．25)、缺血2h用NSMA再灌注1h(2．93&;#177;0．47)、缺血6h用NSMA再灌注1h(2．19&;#177;0．38)显著下降(P&;lt;0．01)；缺血2h用NSMA再灌注1h组线粒体氧化磷酸化偶联程度与对照组相似，缺血6h用NSMA再灌注1h组与相应的缺血2h、缺血2h再灌注1h、缺血6h、缺血6h灌注1h组明显提高；缺血2h(3．02&;#177;0．24)、缺血2h再灌注1h(3．30&;#177;0．08)、缺血6h(3．36&;#177;0．22)、缺血6h灌注1h(3．74&;#177;0．21)组抗氰呼吸分别比缺血2h用NSMA再灌注1h(0．22&;#177;0．05)、缺血6h用NSMA再灌注1h(1．46&;#177;0．30)组增加(P&;lt;0．01)；随缺血的时间的延长，丙二醛浓度显著增加(P&;lt;0．01)，髓过氧化物酶的活性显著升高(P&;lt;0．01)，再灌注后丙二醛仍继续增加(P&;lt;0．01)，髓过氧化物酶的活性持续升高(P&;lt;0．01)，相应肢体组织的PO2在阻断期0～1mmHg，2h后再灌注的最初2min血流量先恢复随即减慢，但在阻断6h再灌注时血流基本停止，此时被阻断的肢体无痛觉反应；病理改变在缺血再灌注后最为严重，缺血后预先应用NSMA再灌注骨骼肌大部分线粒体完整。结论：伴随着电子漏增加、线粒体活性降低，丙二醛浓度增加和髓过氧化物酶的活性增高与组织的损伤程度呈正相关；NSMA能影响呼吸链电子传递，使氧自由基减少，进而维持线粒体结构的完整性和线粒体的功能活性，使细胞进行正常的氧化磷酸化，减轻骨骼肌缺血再灌注损伤。     

促红细胞生成素对大鼠脑组织缺血再灌注海马CA1区神经元的作用

目的：观察促红细胞生成素对缺血再灌注大鼠脑组织海马CA1区神经元数量以及凋亡细胞数量变化、热休克蛋白70表达的影响。方法：实验于2003—03／2004-12在解放军第三军医大学新桥医院中心实验室完成。选择健康清洁级Wistar大鼠66只，随机分为正常对照组6只、缺血再灌注生理盐水组30只(生理盐水对照组)、缺血再灌注促红细胞生成素组30只(促红细胞生成素治疗组)。线栓法制备大鼠大脑中动脉阻断局灶性脑缺血模型，缺血2h后再灌注，促红细胞生成素治疗组经腹腔按200U／b注入生理盐水稀释的重组人红细胞生成素(200U／mL)，生理盐水对照组经腹腔注入等量的生理盐水。再灌注后观察时相点为2，6，12，24，48h，应用苏木精-伊红染色观察脑海马CA1区细胞数量情况，应用末端脱氧核苷酸转移酶缺口标记法检测海马CA1区神经元凋亡情况，应用免疫组织化学法测定热休克蛋白70表达情况。结果：66只大鼠全部进入结果分析。①脑海马CA1区细胞的计数：生理盐水对照组再灌注后12，24，48h比正常对照组细胞数明显减少[(268．6&;#177;44．5)个／视野。(240．8&;#177;22．5)个／视野，(201．8&;#177;30．7)个／视野，(337．3&;#177;45．3)个／视野，t=2．845—5．587，P&;lt;0．01]，促红细胞生成素治疗组再灌注后12，24，48h比生理盐水对照组细胞数明显增加[(286．7&;#177;33．8)个／视野，(271．9&;#177;30．4)个／视野，(258．3&;#177;29．5)个／视野，t=3．189—5．589，P&;lt;0．01]。②脑海马CA1区凋亡细胞计数：生理盐水对照组再灌注后2，6，12，24、48h比正常对照组脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记阳性细胞数明显增多[(16．5&;#177;3．5)个／视野，(28．4&;#177;6．5)个／视野，(48．8&;#177;7．6)个／视野，(60．7&;#177;10．2)个／视野，(81．6&;#177;12．3)个／视野，(8．8&;#177;2．1)个／视野，t=2．985—6．324，P&;lt;0．01]，促红细胞生成素治疗组再灌注后2，6，12，24，48h比生理盐水对照组脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记阳性细胞数明显减少[(12．7&;#177;3．4)个／视野，(21．5&;#177;5．8)个／视野，(32．7&;#177;4．6)个／视野，(42．8&;#177;6．6)个／视野，(51．8&;#177;9．5)个／视野，t=3．457—6．347，P&;lt;0．01]。③脑海马CA1区热休克蛋白70表达水平：生理盐水对照组再灌注后2，6，12，24，48h比正常对照组热休克蛋白70表达明显增多(0．264&;#177;0．027，0．328&;#177;0．053，0．475&;#177;0．067，0．587&;#177;0．095，0．512&;#177;0．063，0．225&;#177;0．024，t=3．254—6．028，P&;lt;0．01)，促红细胞生成素治疗组再灌注后2，6，12h比生理盐水对照组热休克蛋白70表达明显增多(0．335&;#177;0．033，0．448&;#177;0．055，0．647&;#177;0．078，t=3．262—5．483．P&;lt;0．01)。结论：促红细胞生成素治疗可增加大鼠局灶性脑缺血再灌注组织海马CA1区细胞存活数量，对海马CA1区细胞凋亡具有阻抑作用，使热休克蛋白70表达上调，从而起到了对神经细胞的保护作用。     

磁共振波谱分析灯盏细辛对实验性缺血再灌注脑损伤的影响

目的：探讨蛋白激酶C抑制剂灯盏细辛对活体实验性脑梗死大鼠脑组织氮一乙酰天门冬氨酸(naeetyl aspartate，NAA)及乳酸等代谢产物的影响。方法：18只大鼠分为假手术组、缺血再灌注组、灯盏细辛治疗组，每组动物6只。建立活体动物大脑中动脉栓塞再灌注模型，采用磁共振波谱技术，分别对缺血再灌注组及灯盏细辛治疗组鼠脑组织NAA及乳酸等代谢产物变化进行观察和比较。结果：在缺血60min再灌注1，3，6h灯盏细辛均能有效减少脑缺血后乳酸／磷酸肌酸+肌酸的上升(灯盏细辛治疗组分别为1．09&;#177;0．18，0．81&;#177;0．23，0．79&;#177;0．27；缺血再灌注组分别为0．55&;#177;0．23，0．57&;#177;0．12，0．58&;#177;0．13)和NAA／磷酸肌酸+肌酸的下降[灯盏细辛治疗组分别为0．09&;#177;0．07，0。20&;#177;0．11，0．19&;#177;0．12；缺血再灌注组分别为1．09&;#177;0．34，0．99&;#177;0．37，1．16&;#177;0．27](P&;lt;0．01)。结论：灯盏细辛具有显著的缺血后脑保护作用。     

黄芩素甙对沙土鼠脑缺血再灌注损伤的影响

目的：研究黄芩素甙对脑缺血再灌注损伤的作用及其对三磷酸腺苷(ATP)及羟自由基含量的影响。方法：沙土鼠前脑缺血再灌注模型，缺血时间10min。动物分为假手术组、对照组、黄芩素甙Ⅰ组(45mg／kg，腹腔注射)、黄芩素甙Ⅱ组(90mg／kg，腹腔注射)。高倍镜下计数海马CA1区存活锥体细胞数目，ATP及羟自由基含量测定采用高效液相法。结果：再灌注4d时，对照组海马CA1区存活锥体细胞数目仅为假手术组的5％[(5&;#177;2)，(96&;#177;12)&;#215;10^4／mm^2，t=8．607，P&;lt;0．01]，而黄芩素甙Ⅰ组和Ⅱ组分别为假手术组的23％和42％，明显多于对照组[(22&;#177;8)，(40&;#177;9)，(5&;#177;2)&;#215;104／mm^2，t=1．747，3．622，P&;lt;0．01]。再灌注60min，黄芩素甙Ⅰ组和Ⅱ组ATP含量均高于对照组，[(0．70&;#177;0．08)，(0．81&;#177;0．15)，(0．51&;#177;0．19)mmol／kg，t=1．277，1．562，P&;lt;0．05]，但两组间差异无显著性意义。缺血末和再灌注60min，黄芩素甙Ⅱ组羟自由基含量低于对照组[(0．43&;#177;0．12)，(0．65&;#177;0．16)mmol／L，t=1．871，P&;lt;0．05；(0．42&;#177;0．15)，(0．72&;#177;0．13)mmol／L，t=2．747，P&;lt;0．01]。结论：黄芩素甙(45mg／kg和90mg／kg)可减轻脑缺血再灌注损伤，其机制可能与其减轻细胞能量代谢障碍和减少羟自由基产生有关。