影响LUCY-2型化学发光仪结果的常见因素与对策

LUCY-2型化学发光仪即半自动化学发光免疫分析仪,是将化学发光或生物发光体系与免疫反应相结合,用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术。其检测原理与放射免疫和酶免疫相似,不同之处是以发光物质代替放射性核素或酶作为标记物,并籍助自身的发光强度直接进行测定,光     

时间分辨荧光免疫分析技术在医学领域的应用

<正>标记免疫分析技术是在抗原与抗体特异性反应的基础上标记各种可测量的标记物,是目前在微量检测领域独具优势的免疫分析技术。20世纪60年代初期,Yallow和Berson创立了放射性免疫分析方法(RIA),因其具有极好的微量分析性能而迅速被应用于临床诊断和医学科学研究,但因其放射性危害、试剂昂贵且保存期短等劣势被限制了进一步发展。此后酶     

标记免疫测定技术的研究进展

近年来检验医学迅速发展,临床实验室使用的免疫测定技术也日新月异。作为临床免疫测定技术的一个重要分支———标记免疫测定技术是最为活跃的,也是发展最快的,其基本原理是利用抗原抗体反应的高度特异性,加上各种标记物的可测量性来达到方便敏感地检测体内各种微量生物活性物质的目的。美国学者Yalow和Berson于1959年建立了放射免疫测定(R IA),开创标记免疫分析的先河[1]。R IA采用放射性核素作为标记物,一般分3个步骤:抗原抗体的竞争抑制反应、结合态(B)与游离态(F)的分离及放射性的测量。其后在R IA基础上又出现了免疫放射测定(IR…     

影响IFMA效果的常见问题与对策

IFM A是时间分辨免疫荧光分析测定法的简称,是继免疫吸附试验和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。它以免疫学反应为基础,将抗原与抗体的特异性反应与金属铕标记抗体作用相结合,再加入增强液将复合物标记抗体上的Eu3 解离到溶液中,并与增强液中有效成分形成高荧光强度     

自检HBV免疫标志物ELISA试剂是否失效

酶联免疫吸附试验(EL ISA)是建立在酶免疫技术上的,是以酶标记的抗体(或抗原)作为主要试剂,将抗原抗体反应的特异性和酶高效催化反应的专一性相结合的一种免疫检测技术,即将生物反应(抗原抗体反应)与酶促反应组合在一起的免疫-酶促反应。其基本原理为:将抗体(或抗原)包被在固相     

胶体金免疫比色法测定血清h-FABP水平的初步研究

目的初步建立一种基于胶体金均相免疫比色技术定量检测血清心脏型脂肪酸结合蛋白(hFABP)的方法。方法依据均相比色原理定量测定样本中抗原或抗体水平的免疫学检测技术原理,制备直径为80nm左右的胶体金颗粒并标记抗体,利用胶体金吸附标记物在540、660nm处吸收峰的变化初步建立用于检测血清h-FABP水平的方法。结果制备的胶体金颗粒液相分布均匀,制备的胶体金颗粒标记抗体呈均相分布,符合检测实验要求。通过实验确定反应体系组成为标本用量为30μL,h-FABP抗体标记量为100μg/100mL胶体金溶液,反应时间为10min,反应温度为37℃,以实验确定h-FABP≤3.6ng/mL为界限值,对临床标本进行初步分析并与免疫比浊的检测结果比较,符合率达95.09%。结论初步完成了h-FABP的胶体金免疫比色法的建立,与成熟的免疫比浊方法检测结果具有一定的符合性,有必要进行更深一步的研究。     

酶联免疫吸附试验质量控制的探讨

酶联免疫吸附试验（ELISA）是将抗原、抗体反应的高度特异性与酶对底物催化作用的高效性相结合起来检测液体标本中微量的免疫物质的一种方法。自20世纪70年代问世以来，已成为临床实验室应用最广泛的免疫学技术之一。ELISA法所用的试剂，如抗原、抗体、酶标记物等均为生物制剂，相对来说生物制剂是不稳定的，不同批次的质量可能有差别，同批次不同保存时间、不同条件下质量也各异。     

单链DNA标记免疫探针的构建用于免疫聚合酶链反应的初步研究

免疫聚合酶链反应 (免疫ＰＣＲ)是近年出现的全新的标记免疫分析技术。它以一段ＤＮＡ作为标记物来代替酶等常规标记物 ,标记在抗体或抗原上 ,在抗原抗体反应完成后 ,用ＰＣＲ技术对标记的ＤＮＡ进行扩增将信号放大 ,然后 ,根据ＰＣＲ产物的有无及量的多少测定待测抗原或抗体。本研究以碳化二亚胺为连接分子构建单链ＤＮＡ标记的免疫探针 ,并将其用于免疫ＰＣＲ中 ,现将结果报道如下 :一、材料和方法1 .ｓｓＤＮＡ标记的羊抗人ＩｇＧ免疫探针的构建 :(1 )以 5′ ＴＴＧＡＴＣＴＴＣＡＴＧＧＴＧ (ＧＣＡ )ＴＡＧＧＡＧＣＧＡＧＧＧＣＡ 3′…     

梅毒螺旋体抗体快速检测试纸条的应用

梅毒螺旋体 (简称 TP)血清学检测方法可分为非特异性抗体和特异抗体检测两大类。非特异性抗体检测常用 TURST,该试验多用于筛查人体内的非特异性抗体 ,如抗心拟脂抗体 ,此方法的主要缺点是缺乏特异性 ,不能作为确诊梅毒感染的标准。特异性抗体检测如 TP血球凝集实验 (TPHA) ,可以作为梅毒的确诊实验 ,但是 ,该法需制备大量梅毒病原体 ,且价格昂贵 ,不利于大量样本的筛查。 TP快速检测试纸条是根据双抗原夹心免疫层析原理 ,在硝酸纤维素膜上包被 TP重组抗原 ,在玻璃纤维上吸附胶体金标记 TP重组抗原 ,样品中的 TP抗体首先与金标抗原…     

免疫荧光分析技术的发展现状

本世纪40年代,Coons等采用荧光素标记抗体检测可溶性肺炎球菌多糖抗原,首次创建了荧光抗体检测技术以来,荧光检测与免疫分析技术结合应用在微量、超微量物质分析测定中已取得巨大发展。本文就目前发展的几种以荧光检测为基础的免疫分析技术综述如下:     

免疫学检验的热点与难点

免疫学检验是临床免疫学的重要组成部份。外源性和内源性抗原均可通过不同的抗原递呈途径诱导机体的免疫应答 ,在体内产生特异性抗体和特异性Ｔ细胞的克隆扩增和效应增强。免疫学检验的任务主要是利用抗原、抗体特异结合反应 ,建立各种特异检测方法 ,协助临床医师对疾病进行诊断 ,其范围可参看表 1。表 1　免疫学检验的任务与范围判断机体的免疫功能状态　非特异免疫功能 (细胞、免疫活性物质的数量与功能 ) ;体液免疫功能 (免疫球蛋白的量与质 ,特异性抗体的产生 ) ;细胞免疫功能 (Ｔ淋巴细胞的量与质 ,细胞因子 )检测抗原　病原物质 (细菌…     

免疫分析标记物技术的革新

本文综述标记物技术的历史及新进展,并概述新的标记物使用在经典免疫分析及免疫测量分析的优缺点.讨论:酶标记物技术的新进展如渠道(channeling)技术、酶受体—供体系统,酶蛋白重激活分析.荧光偏振化免疫分析,时间分辨荧光分析是二种较新的荧光技术.发光标记物如叮啶酯,由于其稳定、敏感、检测容易而有希望.若干新的粒子标记技术已研究成功,其中最有意义的是溶液粒子标记物及脂质体标记物.比较了这些新的标记物和放射性标记物的优缺点.其主要原理是患者标本中的抗原与放射性标记抗原互相竞争固定数量的抗体结合部位.     

名词注释

用放射性同位素标记已知抗原(或抗体),利用抗原抗体的特异性反应,检测待检样本中的相应抗体(或抗原)的免疫学方法。结果借助于放射性强度显示。以定量的放射性同位素标记的抗原和待测样本中的抗原,与对应抗体的作用,使这两种抗原与抗体竞争性结合。通过测定抗原和抗体复合物(B)和游离抗     

影响酶联免疫吸附试验结果的操作因素

酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)是利用酶标记物作为指示物,以抗原-抗体的特异性结合反应为基础,在酶标记物同抗原-抗体结合后,由于酶的催化放大作用,使得ELISA既保持抗原-抗体反应的特异性,又体现酶催化放大的敏感性.整个反应过程的完成是在非均相反应体系中,即固相免疫吸附.为此反应的每一步都经过洗涤程序,不仅除去未反应物质,还除去某些非特异的干扰物质,从而进一步提高了检测的特异性[1].     

对应用单克隆抗体作“两部位一步夹心免疫试验”检测人甲胎蛋白所作的评价

作者使用对甲胎蛋白(AFP)的两个不同抗原决定簇的单克隆抗体的两部位夹心免疫试验(2-Sitesandwich immunoassay)以检测人AFP。包被抗体(即固相出抗体)与放射标记抗体都分别用对AFP两个不同特异性抗原决定簇的抗体。由于两种抗体与其相应抗原的反应互不干扰,因而有可能将血清标本与标记抗体一并加入(即一步法),使洗涤等步骤得以减化。这是一种新型的简便而精确的定量方法。但作者在试验本法的过程中,将其与两步法对比观察时,发现原法有一些缺点,即当AFP浓度高于一定程度就产生抑制现象,出现假阴性或结果偏     

细菌感染的血清学检测及其诊断价值

血清学(serology)是研究体外抗原抗体间相互反应的学科,其检测可用于感染性疾病的诊断[1]。血清学试验有2种,一种是用已知抗体检测标本中未知的病原体抗原或鉴定病原体;另一种是用已知抗原检测患者血清中相应的抗体诊断感染性疾病和     

临床免疫学和免疫学检验练习题

一、单选题(A1/A2型题)1.最早将抗原抗体反应原理及方法应用于临床血清学诊断的学者是()A.WidalB.LandsteinerC.KǒhlerD.ManciniE.Coons2.下列各项用于反映B细胞功能的试验是()A.淋巴细胞转化B.血清免疫球蛋白检测C.迟发型超敏反应皮肤试验D.移动抑制试验E.CD3检测3.对流免疫电泳的沉淀线出现在抗原抗体之间且靠近抗原孔可说明()A.抗原强阳性B.抗原弱阳性C.抗原阴性D.抗体弱阳性E.抗体阴性4.下列何种抗原是触发移植排斥反应的首要抗原()A.HLA-A、B、CB.HLA-DPC.HLA-DQD.HLA-DRE.HLA-D5.人类MHC基因位于第几对染色…     

免疫印迹技术检测ENA实验中常见问题及注意事项

免疫印迹技术 (immunblotting technique,IBT)是从分子水平识别各种自身抗体与特异性蛋白多肽结合的分子量 [1 ]。ENA是盐水可提取抗原的英文缩写 ,又称可提取性核抗原抗体 ,该部分核抗原可溶于盐水 ,许多自身免疫性疾病 (例如 :系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、干燥综合征、硬皮病等 )患者可产生针对可提取核抗原的抗体 ,例如 :抗 Sm、抗 U1RNP、抗 SSA、抗SSB、抗 Sc L- 70等十几种抗体 ,因此该检测对疾病的诊断有重大的帮助。免疫印迹法检测可提取核抗原即 ENA多肽抗体谱的实验原理是 :将已知的与自身免疫性疾病相关的抗原通过…     

双抗原夹心酶联免疫技术检测丙型肝炎病毒抗体

1993年3月，国家卫生部下发文件要求对献血员进行抗HCV抗体的检测，随后有10几家检测HCV抗体的ELISA试剂上市，并进行批批检定，但全是间接ELISA法。由于间接法技术自身的缺陷及各生产厂家的产品存在一定的质量问题，导致了一些误诊和漏检。为此，应从根本上解决试剂本身的质量问题，建立双抗原夹心ELISA技术检测抗HCV抗体可大大提高检测试剂的特异性和敏感性。目前双抗原夹心法大多用于检测抗HIV和Tp抗体。此类试剂的敏感性和特异性均优于标记抗人免疫球蛋白的间接法。而丙型肝炎病毒抗体的检测仍采用间接ELISA技术，目前已有快速金标试剂采用双抗原夹心法原理，通过免疫层析检测抗HCV抗体。但灵敏度较低，不能用于献血员的筛选。我们通过对基因工程抗原进行改造，以适应标记辣根过氧化物酶，建立双抗原夹心ELISA法检测抗HCV抗体。     

磁性分离酶联免疫测定技术的应用

磁性分离酶联免疫技术是80年代中期瑞士serono(史郎洛)诊断中心发明的一种非同位素免疫检测的先进技术,称为磁性抗体免疫技术(MAIA)。使双抗体夹心(或双抗原竞争)酶联免疫技术在游离型标记抗体—抗原—抗体(或游离型标记抗体和酶标记抗原)复合物分离中具有分离完全和快速的特点,也为磁性分离酶联免疫技术的推广创造了条件。