明胶酶在脑胶质瘤大鼠中的活性

目的：通过观察脑胶质瘤大鼠动物模型中明胶酶的活性变化，为以明胶酶为靶点的脑胶质瘤治疗奠定实验基础。方法：实验于2004-10／2005-12在解放军军事医学科学院野战输血研究所干细胞生物学研究室完成。9L大鼠胶质瘤细胞购自广州南方医科大学。①选取清洁级健康成年雄性Fisher344大鼠27只，24只建立大鼠脑胶质瘤模型，造模后随机数字表法分为建模后7，14，21，28d组，6只／组，每组3只用于灌注固定做免疫组化分析，另3只用于反转录多聚酶链反应和明胶酶谱分析。剩余3只大鼠作为正常对照。②采用反转录多聚酶链反应技术、免疫组织化学和明胶酶谱等方法检测胶质瘤中明胶酶2（matrix metalloproteinase 2，MMP-2）和明胶酶9（matrix metalloproteinase 2，MMP-9）的活性变化。结果：实验选取清洁级健康成年雄性Fisher344大鼠27只，全部进入结果分析。①MMP-2和MMP-9mRNA的表达：9L胶质瘤细胞中均可见MMP-2和MMP-9mRNA的表达，MMP-2的表达量高于MMP-9；大鼠脑胶质瘤组织中可见两者mRNA的表达，而正常脑组织MMP-2mRNA低表达，检测不到MMP-9mRNA的表达；随着肿瘤的生长，MMP-9mRNA的表达量增高。②MMP-2和MMP-9免疫组织化学观察结果：9L胶质瘤细胞的免疫组化显示，MMP-2和MMP-9均呈现阳性染色，主要为胞浆和胞膜染色；肿瘤组织MMP-2和MMP-9染色阳性，为胞浆染色，在血管内皮和肿瘤侵袭边缘细胞胞阳性染色明显。随脑胶质瘤的生长，MMP-2和MMP-9染色程度加深。③MMP-2和MMP-9酶活性检测结果：9L细胞无血清培养上清中可见Pro—MMP2（Mr72000）与Pro—MMP9（Mr92000）及其活化形式activeMMP-2（Mr 66000）与activeMMP-9（Mr83000）的表达，MMP-2的表达量较高；MMP-2酶原与活化的MMP-2在脑胶质瘤组织中明显表达，而在正常脑组织低表达。MMP-9酶原与活化的MMP-9在脑肿瘤组织中表达，正常脑组织中未检测到其表达。④MMP-2和MMP-9在肿瘤组织中的定位情况：脑胶质瘤组织冰冻切片原位明胶酶谱结果显示，肿瘤组织因表达活性的明胶酶降解载片上的明胶，致使不被染色，肿瘤部位很透亮。对侧脑组织因不表达明胶酶，不能降解明胶，被染黑。结论：脑胶质瘤模型中表达高活性的MMP-2和MMP-9，且与胶质瘤生长速度密切相关。     

脑胶质瘤PS值与MMP-2和MMP-9表达相关性的实验研究

目的 运用CT灌注成像评价大鼠C6脑胶质瘤生长过程中血管通透性的变化及其与MMP-2、MMP-9表达的相关性.方法 采用立体定向方法在30只雌性Wistar大鼠右侧尾状核接种C6细胞,于接种后1 W、2 W、3 W分别进行CT灌注成像,每次检查结束后留取鼠脑标本作病理学检查.结果 各组肿瘤区PS值均比对侧正常脑组织PS值增大(P＜0.01),荷瘤2 W及3 W组肿瘤中心区PS值比相应肿瘤周边区PS值增大(P＜0.01),与荷瘤1 W组比较,荷瘤2 W和3 W组肿瘤中心、肿瘤周边区PS值增大(P＜0.05);肿瘤区MMP-2和MMP-9阳性表达随肿瘤生长而增加;肿瘤周边区PS值与MMP-9表达呈正相关(rx=0.540,P＜0.05).结论 PS值可反映大鼠C6脑胶质瘤生长过程中肿瘤不同区域血管通透性的动态变化,肿瘤周边区域PS值变化与MMP-9表达密切相关.     

大鼠C6脑胶质瘤VEGF,MMP-2,MMP-9表达与其MRI相关性的实验研究

目的:运用磁共振成像动态监测大鼠C6脑胶质瘤模型的生长并评价MRI所测某些参数及其与VEGF、MMP-2、MMP-9表达之间的相关性。材料和方法:采用立体定向方法在30只雌性Wistar大鼠右侧尾状核接种C6细胞,并于接种后1周、2周、3周行MR扫描。在各序列图像上测算肿瘤体积、肿瘤强化程度和EI,分析三者之间及其与标本免疫组化结果之间的相关性。结果:24只大鼠荷瘤成功,其MR表现与文献报道相似。随着C6细胞植入时间的延长,肿瘤细胞密度增加并血管生成增多,肿瘤体积增大、强化程度和瘤周水肿程度加重,并且彼此之间呈正相关。VEGF、MMP-2、MMP-9在肿瘤周边表达明显且表达区域相似,VEGF和MMP-9与肿瘤体积、肿瘤强化程度和EI均呈正相关,MMP-2与肿瘤强化程度和EI呈正相关,P<0.05。结论:MRI能够比较清晰的显示大鼠脑胶质瘤的生长,所测肿瘤体积、强化程度和EI之间呈正相关,且与VEGF,MMP-2和MMP-9表达密切相关。     

脑损伤大鼠水肿区脑组织明胶酶B基因的表达

背景:明胶酶B基因在脑血管病变中表达已有报道,但在脑损伤脑水肿形成中是否起重要作用?目的:了解大鼠脑损伤后脑组织明胶酶B基因表达情况,探讨其与脑水肿发生的关系。设计:随机对照的实验研究。地点和材料:实验地点:解放军第二五二医院动物室及中心实验室,40只Wistar大鼠,雌雄各半,体质量(410±50)g。干预:40只大鼠,于伤后不同时间取水肿区脑组织及正常脑组织:提取组织总RNA:用共扩增反转录定量PCR方法测定MMP-9基因表达水平。主要观察指标:观察MMP-9大鼠脑损伤后12,24,48h表达水平,并与正常脑组织表达水平比较。结果:脑损伤水肿区脑组织MMP-9基因表达水平明显高于正常脑组织(0.66±0.14):伤后12h表达最强(2.63±0.14),24,48h表达逐渐下降犤(1.71±0.30)和(1.30±0.26)犦,但仍高于正常对照组,差异有显著性意义(t=3.43,3.90,P<0.01)。结论:明胶酶B在脑损伤脑水肿形成中可能起重要作用。     

基质金属蛋白酶-9在大鼠重度脑创伤中的表达及意义

【目的】研究大鼠重度脑创伤后脑组织基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase,MMP-9）mRNA的表达,探讨其在脑创伤中的作用。【方法160只健康成年SD大鼠随机分为假手术组和脑创伤组,每组又按处死时间点即伤后4h、1d、3d、5d和7d分为五个亚组,每亚组6只。取伤区脑组织用干湿重法测含水量、反转录聚合酶链式反应（RT—PCR）法测MMP-9mRNA和电镜检查。【结果】大鼠重度脑创伤后脑组织含水量和MMP-9mRNA在伤后4h开始升高,1d达高峰,持续至3d,然后下降,7d达最低;除7d外脑组织含水量和MMP-9mRNA均明显高于假手术组,差异有统计学意义（P〈0．05）。【结论】大鼠重度脑创伤诱导MMP-9mRNA表达,MMP-9可能参与了脑水肿的形成,在脑创伤后继发性脑损伤中起重要作用。     

EPCs示踪大鼠脑原位胶质瘤的动态MRI研究

目的：探讨超微型超顺磁性氧化铁粒子（USPIO）标记的外源性内皮祖细胞（EPCs）在大鼠脑原位胶质瘤内的动态归巢特点,为利用磁性标记的EPCs作为MRI示踪细胞载体提供可行性的实验依据。材料与方法将SD大鼠分为假肿瘤组、肿瘤组和对照组3组,每组16只,肿瘤组和对照组在脑组织内移植C6胶质瘤细胞,而假肿瘤组仅刺破脑组织不移植胶质瘤细胞。待肿瘤组和假肿瘤组模型建立后第8天从尾静脉内注射2＆#215;106 USPIO-EPCs,分别在EPCs移植前、移植后1、3、5 d和7 d进行MRI扫描,观察病变区域在T2WI、SWI上信号和T2值的变化情况。在相对应时间点获取组织标本进行病理学分析,用普鲁士蓝染色检测有无阳性结果,并观察CD34＋、SDF-1、MMP-9、VEGF等蛋白的表达以及与普鲁士蓝阳性细胞分布的关系。结果假肿瘤组在MRI上各时间点均无变化,T2值无明显变化,对照组肿瘤体积逐渐增大,但其内信号无明显变化,肿瘤组在移植USPIO-EPCs第1天后外周区在SWI上出现低信号,随着瘤龄的增长低信号逐渐增多并向肿瘤内部迁移,兴趣区T2值随时间逐渐下降。假肿瘤组普鲁士蓝染色见零星阳性细胞,肿瘤组移植USPIO-EPCs第1天见蓝染细胞主要分布于肿瘤外周区,之后逐渐向内迁移分布于肿瘤内部。同时,USPIO-EPCs移植后早期发现CD34＋、SDF-1和MMP-9在肿瘤外周区表达较多,在USPIO-EPCs移植后第7天在肿瘤中央区域表达增多,且与肿瘤外周区并无明显差异,VEGF随着瘤龄的增长表达逐渐增多,但各时间点肿瘤中央区及肿瘤外周区表达无明显差异。结论MRI可以动态观察USPIO-EPCs在大鼠原位脑胶质瘤内归巢的变化过程,肿瘤组织不同区域SDF-1和MMP-9表达变化与USPIO标记的EPCs在肿瘤内的分布变化有相似性,这一发现表明SDF-1和MMP-9可能是促使移植的外源性EPCs由肿瘤周边向肿瘤中央区域迁     

基质金属蛋白酶-2与乳腺癌血管生成和肿瘤生物学行为的关系

目的:基质金属蛋白酶能够降解细胞外基质和基底膜,在肿瘤的浸润和转移过程中起重要作用。研究基质金属蛋白酶-2(matrixmetallopro-teinase2,MMP-2)及其mRNA在乳腺癌组织和细胞中的表达,探讨其与血管生成及肿瘤生物学行为的关系。方法:实验于2002-01/2004-01在吉林大学基础医学院病理生物学教育部重点实验室完成。应用免疫组织化学、免疫细胞化学、原位杂交、侵袭实验、明胶酶谱分析及形态定量分析方法,对76例乳腺癌组织和体外培养的MCF-7细胞中MMP-2及其mRNA、微血管密度(MVD)进行检测。结果:乳腺癌组织中MMP-2及其mRNA的表达均高于癌旁正常组织;MMP-2及其mRNA主要表达于肿瘤细胞胞浆中,其阳性率分别为77.63%和71.05%;MMP-2及其mRNA的表达均与乳腺癌组织学分级、淋巴结转移密切相关。MVD与乳腺癌组织学分级、淋巴结转移密切相关。MMP-2或其mRNA表达阳性组MVD值明显高于阴性组。MCF-7细胞中MMP-2及其mRNA均为阳性;MMP-2抗体可使MCF-7细胞侵袭细胞数由(56.21±3.68)个/400倍下降为(20.32±3.24)个/400倍;直接培养于培养瓶的MCF-7细胞可以分泌MMP-2酶原,培养于I型胶原包被培养瓶的MCF-7细胞MMP-2酶原表达增强并且出现活化形式。结论:乳腺癌组织和细胞具有较强的分泌MMP-2的能力,MMP-2促进肿瘤的侵袭和转移,     

肝素对急性肺损伤大鼠基质金属蛋白酶2和9活性的影响

目的 探讨肝素对急性肺损伤( ALI)大鼠体内基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)蛋白及mRNA表达的影响.方法 18只雄性Wistar大鼠,按随机数字表法分成3组,每组6只.经尾静脉注射脂多糖(LPS)6 mg/kg复制ALI大鼠模型;肝素组在注射LPS前15 min经尾静脉注射普通肝素100 U/kg,对照组注射等量生理盐水.分别于制模后1、3、6h取股静脉血,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清中MMP-2、MMP-9蛋白表达;制模后6h处死动物,取左肺,应用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肺组织中MMP-2及MMP-9的mRNA表达.结果 与对照组比较,ALI组血清MMP-2( μg/L)、MMP-9( μg/L)蛋白表达增高,6h达到高峰(MMP-2:2.86±0.40比1.21±0.24,MMP-9:2.54±0.29比1.15±0.34,均P＜0.01);应用肝素后在6h时MMP-2、MMP-9蛋白表达明显降低(MMP-2:1.92±0.31比2.86±0.40,MMP-9:1.82±0.26比2.54±0.29,均P＜0.05).制模后6h,ALI组肺组织MMP-2、MMP-9的mRNA表达明显高于对照组(MMP-2 mRNA:1.88±0.09比1.00±0.10,MMP-9 mRNA:3.15±0.47比1.00±0.17,均P＜0.01);肝素组MMP-2、MMP-9的mRNA表达较ALI组明显降低(MMP-2 mRNA:1.26±0.14比1.88±0.09,P＜0.01;MMP-9 mRNA:2.06±0.68比3.15±0.47,P＜0.05),但仍高于对照组(均P＜0.05).结论 ALI大鼠体内MMP-2、MMP-9表达增加,肝素能够减少血清及肺组织中MMP-2、MMP-9的表达,从而减轻肺损伤.     

大鼠心肺复苏后脑组织基质金属蛋白酶及其组织抑制剂表达的研究

目的探讨心肺复苏早期脑组织基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、MMP-9及基质金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）的mRNA表达变化。方法用窒息法建立大鼠心肺复苏模型。80只SD大鼠随机分为假手术对照组和复苏组，然后依据时间分为假手术或复苏自主循环恢复（ROSC）后即刻及0．5、3、6和9h组。检测各组大鼠脑组织MMP-2、MMP-9及TIMP-1的mRNA表达情况。结果心肺复苏后3h大鼠脑组织MMP-9及TIMP-1的mRNA表达水平均开始上升，6h时显著增高，MMP-9／TIMP-1比值也相应增大。MMP-2 mRNA水平在心肺复苏后9h内未见明显升高。结论心肺复苏后早期就出现MMP-9、TIMP-1的mRNA表达增加及比例失衡，而MMP-2 mRNA水平在早期无明显变化。     

MMP-9和PTEN蛋白在胶质瘤中的表达特点及意义

目的探讨基质金属蛋白酶9（MartixMetalloproteinase9,MMP-9）和PTEN在胶质瘤中的表达状况,并探讨它们之间的相关性及临床意义。方法应用组织芯片技术和免疫组织化学EnVision法检测67例胶质瘤、8例正常脑组织中MMP-9、PETN的表达。结果MMP-9蛋白在胶质瘤组织和正常脑组织中的表达差异没有统计学意义（P〉0．05）,随着胶质瘤恶性程度的增加,MMP-9蛋白表达增加（P〈0．05）。PTEN蛋白在脑胶质瘤组织和正常脑组织中的表达差异有统计学意义（P〈0．05）。随着胶质瘤恶性程度的增加,PTEN蛋白表达降低（P〈0．05）。MMP-9与PTEN在各级胶质瘤组织中的表达无相关性（P〉0．05）。结论胶质瘤MMP-9与PTEN的表达没有相关性。MMP-9高表达与PTEN表达下降提示胶质瘤的侵袭性增高。