叶酸受体介导99mTc标记c-erbB2癌基因反义寡核苷酸的乳腺癌细胞摄取率

目的 研究叶酸受体介导的^99mTc标记c-erbB2癌基因反义寡核苷酸乳腺癌细胞的摄取率。方法用双功能螯合剂次已酰双半胱氨酸(EC)连接15mer寡脱氧核苷酸(ODN)和叶酸(FA),形成ODN-EC-FA,用^99mTc标记,形成^99mTc-ODN-FA。同样的方法不加叶酸,形成^99mTc-ODN。加2μCi的^99mTc-ODN-FA和^99mTc-ODN到10^7cell／瓶对数生长期乳腺癌细胞MDA-MB-231,分别于20、40、60、120、180、240分钟测定细胞的摄取率。结果乳腺癌细胞对^99Tc-ODN-FA的摄取率明显高于^99Tc-ODN。结论叶酸配体与受体的特异结合使寡核苷酸的乳腺癌细胞摄取率明显增加。     

EGF受体介导c-erbB2癌基因反义寡核苷酸对p185蛋白表达的影响

目的 研究c-erbB2癌基因反义寡核苷酸探针^99mTc-ASODN-EGF对SK-Br-3乳腺癌细胞c-erbB2蛋白表达的影响。方法将反义寡脱氧核苷酸与次乙酰双半胱氨酸偶联,用锝(^99mTc)标记,再与表皮生长因子联合,形成分子复合物^99mTc-ASODN-EGF。将该复合物给予SK-Br-3乳腺癌细胞,用免疫组化方法测定细胞膜c-erbB2蛋白的表达。结果 ^99cmTc-ASODN-EGF明显抑制c-erbB2蛋白表达,免疫组化的平均光密度值最低,对照正义和无义组对蛋白表达的影响较小。结论 c-erbB2反义寡脱氧核苷酸明显抑制目的基因表达,使p185蛋白减少,细胞活力减弱。     

HER-2癌基因反义寡脱氧核苷酸对乳腺癌细胞放射敏感性的影响

目的探讨癌基因HER-2反义寡核苷酸联合放疗对乳腺癌细胞的影响。方法实验分组如下:HER-2反义寡脱氧核苷酸组、HER-2正义寡脱氧核苷酸组、叶酸对照组和空白对照组。用RT-PCR方法、MTT法及平板克隆形成实验检测乳腺癌细胞SK-Br-3受药物处理后,经60Coγ射线照射,HER-2表达水平、细胞存活分数和集落形成率的改变。结果经HER-2反义寡核苷酸-叶酸处理的细胞,对60Coγ射线的放射敏感性增加,细胞的HER-2癌基因表达水平降低,存活分数及集落形成率与正义寡核苷酸、叶酸和空白对照组比较明显降低(P<0.05),而正义寡核苷酸、叶酸与空白对照组相比无明显差异(P>0.05)。结论HER-2反义寡核苷酸抑制癌基因表达的作用增加乳腺癌细胞SK-Br-3对放疗的敏感性。     

HER-2寡脱氧核苷酸-叶酸药物的生物学特性

目的研究HER-2寡脱氧核苷酸(oligodeoxynucleotides,ODN)与叶酸连接药物的生物学特性。方法 HER-2反义、正义和无义寡脱氧核苷酸与叶酸联接,形成ODN-FA,标记放射性核素锝(99mTc),与新鲜人血浆孵育1．5h、4h和6h,测定血浆蛋白结合率。在新鲜人血清37℃孵育 0．5h、2h、4h和6h,用纸层析法测定血清稳定性。结果 99mTc-ODN-FA的血浆蛋白结合率为反义、正义和无意义寡核苷酸分别为10．58％、12．24％和11．01％;6h血浆蛋白结合率明显升高,分别为 24．45％、23．58％和24．33％,差异具有显著意义(P<0．01)。99mTc-ASODN-FA、99mTc-SODN-FA和 99mTc-NODN-FA 6h放化纯分别为92．20％、92．12％和91．31％,与0．5 h相比略有降低,差异无显著意义。结论 HER-2寡脱氧核苷酸叶酸药物的血浆蛋白结合率6h时为24％,在血清中6h内稳定,能够满足体内外分析的要求。     

99mTc直接法标记抗心肌肌钙蛋白Ⅰ单克隆抗体

目的 探索99mTc直接法标记抗心肌肌钙蛋白Ⅰ单克隆抗体(AcTnIMA)的方法,并研究标记产物的体外稳定性.方法 用氯化亚锡(SnCl2)还原法进行AcTnIMA标记,并用正交实验设计筛选抗体量、SnCl2量、反应体系pH值及放射性活度四个因素的最佳组合;用纸层析法测定标记产物的标记率;用柱层析法测定标记物中99mTc-AcTnIMA的纯度;将标记物在室温(22℃)下放置0、2、4、6 h,观察其体外稳定性.结果 99mTc直接法标记AcTnIMA的最佳标记条件为抗体量30 μh,SnCl2量80 μg,反应体系pH值7.0,放射性活度50 mCi,标记率可达99%以上;标记物中99mTc-AcTnIMA的纯度较高;标记产物放置6 h后,标记率仍大于95%.结论 用99mTc直接法标记AcTnIMA简单高效,标记产物在体外有很好的稳定性.     

叶酸偶联的青霉素G酰化酶对叶酸受体阳性肿瘤细胞的靶向作用

目的 研究叶酸偶联的青霉素G酰化酶(F-PGA)对叶酸受体阳性肿瘤细胞的靶向作用.方法 用激光共聚焦显微镜观察宫颈癌HeLa、卵巢癌SKOV3和肺癌A549细胞对F-PGA以及游离叶酸(F-A)的摄取,并进一步用同位素示踪法加以验证和定量检测.结果 F-PGA与F-A相似,均能被叶酸受体阳性的HeLa和SKOV3肿瘤细胞选择性摄取,且有饱和性、可逆性、温度依赖性和高亲和性的特点,但不能被叶酸受体阴性的A549细胞摄取.结论 F-PGA与F-A都是通过叶酸受体介导,从而特异性地靶向于叶酸受体阳性肿瘤细胞的.     

叶酸抑制大剂量甲氨蝶呤细胞毒性的试验研究

目的:研究叶酸抑制大剂量甲氨蝶呤(MTX)细胞毒性的作用。方法:通过体外Caco-2细胞的摄取试验方法结合高效液相联用双质谱技术,分别测定在1、10、100μmol.L-1叶酸存在下,Caco-2细胞与1μmol.L-1MTX共孵育30min后细胞所摄取MTX的量,并设立无叶酸对照组,以细胞中药物量/介质中药物量(C/M)的比值为指标。结果:共孵育30min后,无叶酸对照组C/M=5.13(n=4),而在1、10、100μmol.L-1叶酸存在条件下,C/M比值分别为4.91、4.22、3.74(n=4),与无叶酸对照组比较,100μmol.L-1叶酸存在条件下细胞摄取MTX的比例明显减少(P<0.05)。结论:当叶酸浓度为100μmol.L-1时有抑制大剂量MTX(1μmol.L-1)细胞毒性的作用,对细胞具有一定的保护作用。     

HER-2癌基因反义寡核苷酸对乳腺癌细胞化疗敏感性的影响

目的研究HER-2癌基因反义寡脱氧核苷酸联合叶酸对乳腺癌细胞SK-Br-3化疗敏感性的影响。方法通过叶酸受体将HER-2反义寡脱氧核苷酸导入乳腺癌细胞,给予不同剂量的阿霉素和顺铂,用四氮唑盐(MTT)方法检测细胞存活率。结果反义寡脱氧核苷酸-叶酸(ASODN-FA)显著增加SK-Br-3细胞对阿霉素和顺铂的敏感性,使细胞存活率明显降低。结论HER-2反义寡脱氧核苷酸能增加乳腺癌细胞对阿霉素和顺铂的化疗敏感性。     

用连接叶酸的脂质体增加对体外培养的HeLa细胞的输送

在传代培养的ＨｅＬａ细胞上观察了叶酸对脂质体靶向摄取功能的影响。将内含钙黄绿素的叶酸．脂质体和脂质体分别加入ＨｅＬａ细胞中培养,并以荧光法检测细胞摄取量。共同培养４ｈ,细胞摄取叶酸一脂质体量为脂质体４倍以上,在０．４５ｍｇ·　ｍＬ~（－１）时达饱和;过量游离叶酸竞争抑制细胞对叶酸－脂质体的摄取;磷脂酶Ｄ或磷脂酰肌醇特异性磷脂酶Ｃ通过影响叶酸受体而抑制细胞对叶酸－脂质体的摄取。因此,ＨｅＬａ细胞主要通过叶酸受体途径介导摄取叶酸－脂质体：叶酸受体高表达或高活性细胞摄取叶酸－脂质体的能力较未接叶酸的脂质体显著提高。