胶质细胞源性神经营养因子对大鼠脊髓损伤后后肢运动功能及其运动诱发电位的影响

目的：探讨胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）对大鼠脊髓损伤后后肢运动功能及其运动诱发电位（MEP）的影响。方法：将30只SD雄性大鼠（200－250g)随机分为对照组、等渗盐水（NS）组和GDNF组,每组10只,改良Allen方法致T13段脊髓不完全损伤,蛛网膜下腔分别给予NS或GDNF20μl,伤后1,5h和1,3,5d评定后肢出现运动功能（Salzman评分）和检测MEP。结果：脊髓损伤后后肢运动障碍。MEP波幅（P1－N1峰峰值）降低,潜伏期延长,对照组无变经。伤后1,5h和1,3,5d,NS组波幅分别恢复至伤前的36．7％、38．9％、47．1％、74．1％和92．3％,潜伏期恢复至112．5％、111．2％、111．3％、105．0％及103．5％;伤后5h和1,3dGDNF组波幅恢复明显优于NS组,伤后1,3dGDNF组潜伏期恢复优于NS组（P＜0．05）。伤后1,5h后肢运动功能无恢复,伤后1d开始恢复,伤后3,5d明显恢复,其中GDNF组恢复显著优于NS组（P＜0．01）。结论：GDNF能够早期促进MEP波形的恢复,增强后肢运动功能的恢复;MEP恢复早于后肢运动功能恢复。     

真皮多能干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的实验研究

目的：观察真皮多能干细胞（dMSCs）移植对脊髓损伤大鼠运动功能的修复作用。方法：32只SD大鼠在L4水平制成脊髓全横断损伤模型，并随机分为真皮多能干细胞移植组（A组）及损伤对照组（B组），每组10只大鼠。伤后1w，移植组于伤处移植大鼠真皮多能干细胞（dMSCs），而对照组仅注射等量PBS。分别于移植后1d、1w、8w、12w对两组大鼠进行动物行为学（BBB）评分和脊髓诱发电位（SEP和MEP）检测，并于移植后12w进行损伤脊髓的大体观察和组织学检测。结果：BBB评分4w以后组间比较差异有统计学意义（P〈0．05），移植组明显高于对照组（P〈0．05）；SEP和MEP潜伏期和波幅值在8、12w后组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）；移植后12w，移植组损伤脊髓结构的修复明显优于对照组。结论：移植治疗脊髓损伤，能明显改善其运动功能和神经形态，dMSC对脊髓损伤大鼠有治疗作用。     

Lentivirus介导神经营养因子-3促进脊髓损伤大鼠功能恢复

目的探讨Lentivirus介导分泌神经营养因子-3(NT-3)直接体内转基因治疗大鼠脊髓损伤作用和机制。方法将28只Wistar大鼠在T10水平制成半横断损伤模型,随机分为体内转基因治疗组和损伤对照组,每组14只;用携带NT-3和绿色荧光蛋白(GFP)的Lentivirus对大鼠行直接体内转基因治疗;荧光显微镜观察体内转基因表达,后肢运动功能评分法(BBB评分)检测大鼠后肢功能恢复情况。结果用荧光显微镜检测到损伤脊髓内有较多的持续表达转基因的细胞;BBB评分结果显示,从伤后第4周开始,实验组大鼠后肢功能较对照组明显恢复(P<0.01),至第10周时,实验组和对照组BBB分差增大,达3.3分。结论Lentivirus是一种有效的转基因载体,由Lentivirus介导分泌NT-3的直接体内转基因治疗能够明显促进损伤脊髓的功能恢复。     

急性脊髓损伤后运动诱发电位与MRI表现相关性研究

目的：研究实验性脊髓急性创伤后动态MR表现和运动诱发电位评分间的相关性。材料和方法：23只家兔建立脊髓液压损伤模型，其中对照组5只，脊髓按不同损伤程度分A、B两纽，各9只．于伤后24h、72h、7d行MRI与运动诱发电位评分。结果：脊髓损伤A组创后24h出现高低混杂信号．MEP未引出且随时间延睫未见恢复；72h出现血肿信号特征．7d创区大部分坏死信号．其功能未见恢复。损伤B组24h见点状水肿信号．MEP潜伏期明显延长．72h-7d范围扩大，MEP表现山脊髓功能部分恢复。结论：脊髓功能的MEP评判准确地提供了量化标准。高场MRI发现72h表现出脊髓血肿的信号提示脊髓功能缺失严重，而72h的点状高信号提示脊髓不完全损伤．并可有恢复。     

大鼠中度脊髓损伤后两种后肢行为学评估标准的比较研究

目的对大鼠中度脊髓损伤后两种后肢行为学评估标准进行评价。方法24只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组和损伤组。损伤组采用Alleng打击法制作脊髓损伤模型，假手术组仅行椎板切除术。术后1、3、7、14、21天分别采用Tarlov评分和BBB（basso，beattie and bresnahan）评分对两组大鼠后肢运动功能恢复情况进行评估。结果两组大鼠BBB评分值在伤后各时间点差异均非常显著（P〈0．01），Tarlov评分值在伤后各时间点有显著性差异（P〈0．05），但只在1、3、7天时差异才非常显著（P〈0．01）；评分值按百分制换算后，假手术组大鼠两组评分值之间的一致性较好，仅在伤后7天时有显著性差异（P〈0．05），损伤组大鼠两组评分值之间的差异较大，伤后1、3、7天时差异非常显著（P〈0．01）。结论BBB评分的敏感性和区分度优于Tarlov评分，能更准确、客观地反映大鼠中度脊髓损伤后运动功能恢复情况。     

人神经干细胞移植对脊髓损伤大鼠后肢运动功能恢复的影响

目的:探讨人神经干细胞(hNSCs)移植对脊髓损伤大鼠后肢运动功能恢复的影响及可能机制。方法:取2～3个月流产胎儿海马区组织,体外培养神经干细胞;采用通用型脊髓打击器将24只成年SD大鼠制成脊髓损伤模型,伤后第8天随机分为移植组和对照组,于损伤中心分别注入CM-DiI标记的hNSCs悬液和DMEM/F12培养液。分别于hNSCs移植后当天及1、2、3、4、6、8周采用Basso,Beattie,Bresnahan(BBB)行为功能评定量表评估大鼠后肢运动功能恢复情况。移植后第4、8周取损伤部位脊髓,行病理切片,免疫组化方法观察移植细胞的存活和迁移,并检测损伤脊髓处胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、神经元核心抗原(NeuN)、2,3-环核苷酸磷酸二酯酶(CNPase)、神经巢蛋白(Nestin)等抗原的表达。结果:移植组后肢运动功能评分随时间延长而逐渐升高,移植1周时后肢运动功能有所改善,与对照组无明显差异(6.4±0.99 vs 6.0±0.93,P>0.05);移植4周时后肢运动功能比1周时有明显恢复,BBB评分明显高于对照组(9.7±1.04 vs 7.4±0.95,P<0.05);移植的hNSCs可在损伤脊髓处长时间存活(至少8周),并分化为神经元、少突胶质细胞和星形胶质细胞。结论:人神经干细胞可在损伤脊髓处向神经元和神经胶质细胞分化,并能促进脊髓损伤大鼠后肢运动功能的部分恢复。     

大鼠中度脊髓损伤后两种后肢行为学评估标准的比较研究

目的 对大鼠中度脊髓损伤后两种后肢行为学评估标准进行评价.方法 24 只雄性 Wistar 大鼠随机分为假手术组和损伤组.损伤组采用Allen's打击法制作脊髓损伤模型,假手术组仅行椎板切除术.术后1、3、7、14、21天分别采用Tarlov评分和BBB(basso,beattie and bresnahan)评分对两组大鼠后肢运动功能恢复情况进行评估.结果 两组大鼠BBB评分值在伤后各时间点差异均非常显著(P<0.01),Tarlov评分值在伤后各时间点有显著性差异(P<0.05),但只在 1、3、7天时差异才非常显著(P<0.01);评分值按百分制换算后,假手术组大鼠两组评分值之间的一致性较好,仅在伤后7天时有显著性差异(P<0.05),损伤组大鼠两组评分值之间的差异较大,伤后1、3、7天时差异非常显著(P<0.01).结论 BBB评分的敏感性和区分度优于Tarlov评分,能更准确、客观地反映大鼠中度脊髓损伤后运动功能恢复情况.     

督脉电针治疗大鼠全横断性脊髓损伤的实验研究

目的　探讨督脉电针对大鼠全横断性脊髓损伤的行为和结构修复的影响。方法　用BBB评分法和爬网格试验检测全横断性脊髓损伤及督脉电针治疗后大鼠的运动功能 ,荧光金逆行标记法检测再生神经元 ,用生长相关蛋白 - 43(GAP - 43)免疫组织化学夫观察脊髓损伤区周围神经元GAP - 43表达。结果　督脉电针治疗后大鼠后肢运动功能有明显地恢复 ,损伤区脊髓组织退变减轻 ,躯体感觉运动区内锥体细胞层及红核内的神经元密度增大 ,脊髓组织内GAP - 43阳性神经元增多 ,在脊髓横断头侧端灰质内、躯体运动感觉区及红核内有少量被标记细胞。结论　督脉电针治疗可减轻脊髓损伤后的继发性损伤 ,促进脊髓下行纤维再生和脊髓功能恢复。     

同种胚胎脊髓移植促进大鼠脊髓伤后解剖与运动功能恢复的研究

目的：研究同种胚胎脊髓移植物能够促进脊髓伤后的可塑性代偿，并修复其组织结构及运动功能的可行性．方法：在急性半切洞损伤的成年大鼠脊髓内，植入大鼠胚胎脊髓，术后进行行为观察、ＨＥ染色、尼氏染色、Ｈｏｌｍｅｓ还原银染色，以及脊髓运动诱发电位检查．结果：８０％的移植物能够存活，并能生长、分化，不同程度地修复宿主脊髓的组织损伤；能明显减少宿主脊髓损伤部位结缔组织、胶质瘢痕形成；诱导宿主未损伤神经元轴突侧支发芽；改善宿主损伤脊髓的神经传导，促进伤后运动功能的恢复．结论：移植同种胚胎脊髓能促进大鼠脊髓伤后解剖与运动功能的恢复     

脊髓腹侧压迫损伤后运动功能恢复的变化规律

目的 观察脊髓侧压迫致伤后脊髓功能变化的规律。方法 先制作脊髓腹侧压迫损伤模型、造成脊髓不完全损伤,应用后肢功能评分、神经电生理检查等手段,观察受试动物双后肢的功能变化。结果 脊髓受压致脊髓不完全损伤后,随着观察时间的延长,受试动物后肢功能呈不同程度的恢复,但以伤后2周功能恢复最快。脊髓完全损伤后受试动物后肢功能无明显变化。结论 脊髓损伤后其功能恢复机制目前尚不完全清楚,如果脊髓功能在伤后2周内有明显恢复,将预示着脊髓功能最终有较好的恢复。     

K506促进神经干细胞移植后损伤脊髓神经传导通路的修复

目的 观察他克莫司(FK506)促进神经干细胞(neural stem cels,NSCs)移植后损伤脊髓神经传导通路修复的作用.方法 显微镜下动脉瘤夹压迫SD大鼠T8脊髓,建立压迫型脊髓损伤动物模型.损伤后7 d按随机数字表法分为三组:对照组,于损伤中心定向注射等渗盐水;细胞移植组,于损伤中心定向注射NSCs;FK506组,于损伤中心定向注射NSCs,同时按1 mg·kg-1·d-1连续7 d腹腔注射FKS06.连续观察1,2,4,8周,通过BBB评分、BDA顺行示踪、体感诱发电位(SEP)与运动诱发电位(MEP)监测,比较观察大鼠脊髓神经传导功能的恢复情况.结果 伤后后肢运动功能均有不同程度的恢复,4周时恢复速度最明显,8周时BBB最高评分可达6分;BDA顺行示踪,FK506组和细胞移植组在1周后有部分神经纤维通过,8周时各组均有部分BDA阳性标记的皮质脊髓束再生通过脊髓损伤部位,特别是FK506组可延续至距损伤中心1.7 cm.诱发电位结果显示,FKS06组在2周时SEP的潜伏期即明显缩短(P<0.05).4周后,FK506组MEP潜伏期与各组比较明显缩短(P<0.05),表明应用免疫抑制剂能促进NSCs对损伤脊髓的恢复,缩短SEP和MEP的潜伏期,早期对SEP改善明显,后期对MEP改善明显.结论 脊髓损伤大鼠移植NSCs后,系统应用FK506后具有神经保护和神经营养作用,可加快神经传导功能的恢复.

Abstract：

Objective To observe the effect of tacrolimus(FK506)in promoting repair of the injured spinal cord pathway after neural stem cell transplantation in rats. Methods A neurysm clip was used to compress the T8 spinal cord segment of SD rats under microscope to establish model of spinal cord injury.The rats were randomly divided into three groups seven days after injury,ie,control group (injection of normal saline at the injury center),transplantation group(injection of neural stem cells,NSCs,at the injury center),FK506 group(injection of NSCs at the injury center plus 7 days of intrapernerve conduction was compared by using the Basso-Beatfle-Bresnahan (BBB) scale,BDA tracing,somatosensory evoked potential(SEP)and motor evoked potentials(MEP)monitoring at 1,2,4 and 8weeks. Results The motor function of the hind limb after injury was recovered in various degrees with time,with the most significant recovery at 4 weeks.The BBB score reached 6,the maximum at 8 weeks.BDA tracing showed that some nerve fibers were found crossing the injured center of the spinal cord one week later in FK506 group and cell transplantation group,that BDA-positive labeled corticospinal tract fibets were seen across the injury site in all groups by the end ofthe eight weeks.In the FKS06 group,the regeneration could be observed even as 1.7 cm away from tlle injury center.SEP latency was significantly shorter in the FK506 group after two weeks(P<0.05)and the MEP latency in the FK506 group was shortened significantly at four weeks compared with the other groups(P<0.05),indicating that the immunosuppressants could promote the recovery of the injured spihal cord,shorten the latency of SEP and MEP,improve SEP at early stage and MEP at late stage．Conclusions Systemic application immuno suppressive agents FK506 plays an important role in neuroprotection and neurotrophy,which promotes the repair of the injured spinal cord after neural stem cell transplantation．     

转TrkC基因神经干细胞移植对脊髓损伤的治疗作用

目的 研究转酪氨酸激酶C（tyrosine kinase C，TrkC）基因神经干细胞（neural stem cells，NSCs）移植治疗脊髓损伤的作用。方法 60只SD大鼠随机分成正常对照组（A组）、脊髓半切组（B组）、NSCs移植组（C组）、NSCs移植＋神经营养素（NT）-3局部使用（D）组、转TrkC基WNSCs移植组（E组）和转TrkC基因NSCs移植＋NT-3局部使用组（F组），每组10只。脊髓损伤后第9天进行细胞移植。各组大鼠在细胞移植后2个月，行体感诱发电位（SEP）和运动诱发电位（MEP）检查以及脊髓运动功能（BBB）评分。结果 细胞移植后2个月SEP和MEP发生潜伏期和峰峰波幅以及右后肢BBB评分的恢复均以下组最佳，与其他各组比较，差异有统计学意义（P＜ 0．05，0．01）。结论在局部给予的NT-3作用下，转TrkC基因NSCs能较好地促进损伤脊髓功能的恢复。     

嗅鞘细胞促使脊髓挫裂伤后神经再生和功能恢复的研究

目的：研究嗅鞘细胞在脊髓挫裂损伤后不同时期植入能是否帮助轴突再生、穿过瘢痕和神经功能恢复。方法：用NYU打击器制造Log Evans Hooded大鼠的脊髓挫裂损伤模型,在伤后即刻和二周后植入嗅鞘细胞,采用BBB方法做行为学观察三个月,经运动皮层注入神经示踪剂（BDA）后行组织化学研究。结果：部分大鼠鞘细胞植入后比对照组的神经功能恢复好,组织学发现这些神经功能恢复好（BBB分数＞10）的大鼠,再生神经轴突能穿过损伤瘢痕区到达损伤下段。结论：嗅鞘细胞在脊髓挫裂损伤后即刻和二周后植入均能帮助轴突再生、穿过瘢痕和神经功能恢复。     

嗅球成鞘细胞植入大鼠挫伤脊髓内的迁移分布特征

目的 观察嗅球成鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)在损伤脊髓内的迁移分布与脊髓功能恢复的关系.方法 用NYU-impactorⅡ装置以10 g·25 mm损伤大鼠T10脊髓,1周后将急性分离、纯化、鉴定的绿色荧光蛋白(GFP)-大鼠OECs植入脊髓损伤部位及其首尾两侧,OECs的移植量为90 000/μl.在移植后13周时间内,镜下定性观察OECs在冰冻切片上的迁移分布特征,然后对其分布面积和长度进行半定量观察.脊髓运动功能用BBB评分法测定.结果 移植后早期OECs主要聚集在移植部位,并逐渐向周围迁移扩散,但主要沿脊髓纵轴向首尾方向扩展,脊髓空腔内也可见移植的OECs.OECs的分布面积和长度分别由术后1周时的1.33 mm2和4.23 mm逐步扩大到13周时的3.30 mm2和7.68 mm.与此同时,大鼠损伤脊髓的运动功能也得到逐步恢复.结论 OECs植入挫伤脊髓后可以迁移游走,且与大鼠脊髓运动功能恢复有一定关系.

Abstract：

Objective To observe the migration and distribution of OECs in injured spinal cord and discuss their relation with the recovery of spinal cord function. Methods The rats were contused by a force of 10 g · 25 mm with NYU-impactor at T10 level. The OECs acutely isolated from green fluorescence protein (GFP) rats were purified, identified and then transplanted into the injured site and the rostral and caudal parts of the spinal cord one week after injury, with total volume of the transplanted OECs for 90 000/μl. Within 13 weeks after transplantation, the migration and distribution of OECs were qualitatively observed on the cryo-sections under fluorescence light microscope. The area and the length of OECs distribution were semi-quantitatively determined. The locomotor function of the spinal cord was appraised by BBB score. Results OECs were located collectively in the transplanted site at early stage after transplantation and then spread gradually mainly along the long axis of the cord. OECs could be found in the cavity of the contused spinal cord. The area and the length of OECs distribution were increased from 1.33 mm2 and 4.23 mm respectively at one week to 3.30 mm2 and 7.68 mm respectively at 13 weeks after transplantation. In the meantime, the locomotor function was gradually improved. Conclusion OECs can migrate within the contused spinal cord, as may contribute to the recovery of locomotor function.     

壳聚糖复合絮凝剂选择性絮凝双黄连水提取液的工艺研究

摘 要：目的 优化壳聚糖复合絮凝剂用于双黄连水提取液选择性絮凝的最佳工艺条件。方法 以绿原酸和黄芩苷保留率、鞣质脱除率为考察指标,分别考察复合絮凝剂制备工艺、絮凝剂用量、絮凝时间以及壳聚糖性能指标对絮凝效果的影响,优化选择性絮凝工艺条件。结果 双黄连水提取液絮凝的优化工艺条件：膨润土经 450 ℃灼烧 4 h 改性后负载壳聚糖制备复合絮凝剂,絮凝剂用量 60 g/L,絮凝时间 24 h,所用壳聚糖最佳性能指标：脱乙酰度 95%、黏度 60 cps。结论 经高温改性的膨润土负载壳聚糖所制备的复合絮凝剂具有良好的选择性絮凝性能,絮凝效果显著优于《中国药典》2010 年版方法。     

神经干细胞与原浆型星形胶质细胞联合移植对大鼠脊髓半切空洞损伤的修复作用

目的 观察神经干细胞(NSC)与原浆型星形胶质细胞(PAS)联合移植对大鼠损伤脊髓功能和形态的修复作用. 方法 60只Wistar大鼠,制成脊髓L1～L2左侧半切空洞损伤模型,采用随机数字表法分为损伤组(A组)、损伤后移植PAS组(B组)、移植NSC组(C组)、NSC和PAS按2:1比例联合移植组(D组),每组15只.伤后1,4,8周进行伤侧下肢BBB评分、体感诱发电位(SEP)和运动诱发电位(MEP)检测;8周损伤部位脊髓组织进行HE、Nissl、Holmes银染,观察移植物在损伤脊髓中的形态学变化. 结果 (1)行为学观察:4周时,各组间开始出现差异;8周时,组间差异更为明显,尤其D组大鼠最明显,已能行走,行走时频繁足底离地,并能与前后肢体协调运动,B、C组功能有一定改善,可支重性足底踏步,前后肢共济协调,但仍和D组存在明显差距,A组后肢关节活动幅度增加,足底仍不能着地支重.(2)电生理检查:1周时,各组MEP峰潜时(以N1波计算)和SEP峰潜时(以P1波计算)开始出现差异,至4,8周,B、C、D组峰潜时明显缩短,但D组缩短最为显著(P<0.01).(3)病理观察:8周时,A组缺损严重,新生组织较少,B、C、D组缺损组织基本填补完全,损伤空洞闭合,未见明显的炎症反应,B组损伤处可见大量形态不同、大小不等的新生胶质细胞,胶质纤维排列紊乱,病理染色未见神经元;C组损伤处新生组织较多,以神经胶质细胞为主,少量神经元分布,且可见再生纤维连接;D组损伤处新生组织填补缺损完全,胶质纤维中可见形态典型的新生神经元,数量明显多于C组. 结论 NSC和PAS联合移植到损伤脊髓组织后,能够存活、分化并从结构和功能上较好地修复组织缺损区域.     

兔坐骨神经牵拉伤MTR值与肢体功能的相关分析

目的：探讨兔坐骨神经急性牵拉伤后不同时间点牵拉远段神经磁化传递率（MTR）与肢体功能的相关关系。方法：选取20只新西兰大白兔,右后肢为损伤侧,建立坐骨神经牵拉伤模型;左后肢为假手术侧。随机将实验兔分为两组,A组（n=12）于术前1天、术后1和3天以及1、2、4、6和8周分别行双侧后肢磁化传递MRI扫描,测量牵拉远段神经及假手术侧神经的MTR值;同时对实验兔的肢体功能进行展趾反射和改良Tarlov评分,分析术后1～8周MTR值与肢体功能的相关性;B组（n=8）于上述各时间点进行病理学检查。结果：牵拉远段神经的MTR值于损伤后1天明显降低,2周时达最低值,4～8周逐渐升高至正常水平,各时间点MTR值与假手术侧相比差异均有统计学意义（P〈O．05）。牵拉伤后1天兔展趾反射及Tarlov评分降至最低;伤后1天～1周评分保持较低水平;伤后2～8周评分逐渐增高、肢体功能逐渐恢复。伤后1～8周牵拉远段神经MTR值与肢体功能评分呈正相关（r=0．638,P％0．01）。病理检查显示术后1周神经开始退变,2周时髓鞘退变最显著,4周后开始恢复。结论：牵拉远段神经的MTR值与肢体功能评分呈正相关,提示MTR值可用于监测伤后神经功能退变及再生的情况。