染氟大鼠血清雌二醇水平与生精细胞端粒酶逆转录酶表达关系的研究

目的了解氟中毒大鼠雌激素水平与生精细胞端粒酶表达的关系。方法将30只雄性SD大鼠随机分为对照组、低剂量染毒组、高剂量染毒组,分别按0、10和20mg/kg体重的染毒剂量隔日腹腔注射氟化钠(NaF)溶液39天后,用放射免疫法测定大鼠血清中雌二醇含量,用原位杂交法检测端粒酶逆转录酶(TERT)表达情况。同时镜检成熟精子质量和睾丸组织病理学改变。结果染毒各组大鼠血清雌二醇含量低于对照组(P<0·05);且随着染毒剂量的增加,雌二醇含量逐渐降低。染毒各组大鼠生精细胞TERT阳性表达率分别低于对照组(P<0·05);且随着染毒剂量的增加,TERT阳性表达率逐渐降低。各染毒组大鼠精子数量和精子存活率低于对照组(P<0·05);精子畸形率高于对照组(P<0·05);随着染毒剂量的增加,精子数量、精子存活率降低(P<0·05),精子畸形率升高(P<0·05)。各染毒组大鼠血清雌二醇含量与生精细胞TERT表达率均呈正相关,低剂量染毒组r=0·941,P<0·01;高剂量染毒组r=0·929,P<0·01。结论NaF很可能是通过雌激素/雌激素受体-端粒酶逆转录酶-精子途径对生殖系统造成损害的,各染毒组大鼠血清雌激素含量与生精细胞TERT表达率呈显著正相关。     

稀土氟化钕对雄性大鼠睾丸毒性的影响

目的探讨稀土氟化钕(Nd F3)对雄性大鼠睾丸的影响。方法将48只SPF级健康成年雄性SD大鼠随机分为对照组和低、中、高剂量Nd F3染毒组,每组12只,采用非暴露式气管注入法建立大鼠损伤模型。3个染毒组分别灌注不同剂量的Nd F3溶液,染毒剂量分别为70、210、280 mg/kg,对照组予以相应体积的生理盐水,初次染毒间隔15 d后再次染毒,于第42天称重后处死。检测大鼠血清睾酮含量及附睾精子数量、精子存活率、精子畸形率。采用电感耦合等离子体质谱法测定大鼠睾丸组织Nd F3水平,在普通光镜下观察大鼠组织病理学改变,采用TUNEL法进行睾丸细胞凋亡检测,用透射电子显微镜进行睾丸组织超微结构检测。结果与对照组比较,各染毒组大鼠睾丸内Nd F3含量均增加,差异有统计学意义(P0.05);与对照组相比,低、高剂量组大鼠血清睾酮含量升高,中剂量组睾酮含量下降,且高剂量组睾酮含量低于低剂量组、高于中剂量组,差异均有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,中、高剂量组大鼠精子数量、精子存活率降低,精子畸形率、睾丸细胞凋亡指数升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论低剂量Nd F3颗粒物可促进大鼠睾丸发育,但中剂量Nd F3可损伤睾丸组织,进而可能影响雄性大鼠生殖功能。     

染氟大鼠生精细胞凋亡和血清雌二醇水平的关系

目的探讨染氟大鼠生精细胞凋亡和血清雌二醇水平的关系。方法雄性Wistar大鼠30只,随机分为6组,即对照28d组、低剂量染毒28d组、高剂量染毒28d组、对照38d组、低剂量染毒38d组和高剂量染毒38d组。通过腹腔注射NaF溶液的方法建立氟中毒模型,采用酸浸-氟离子选择电极法测定睾丸氟含量,放射免疫的方法检测血清雌二醇水平,采用TUNEL方法检测凋亡的生精细胞。结果随着染毒剂量加大和时间延长,染氟大鼠血清雌二醇水平显著下降(P<005),睾丸氟含量显著升高(P<005),生精细胞凋亡率显著升高(P<005),且血清雌二醇水平与睾丸氟含量和生精细胞凋亡率均呈负相关(P<005)。结论氟在一定剂量和作用时间内可致血清雌二醇水平紊乱,是导致生精细胞凋亡的重要原因之一。     

烟草烟雾对大鼠生精细胞凋亡及血清睾酮和抑制素B水平的影响

目的探讨烟草烟雾对大鼠生精细胞凋亡及血清睾酮、抑制素B表达的影响。方法将40只8周龄雄性SD大鼠随机分成4组,分别为对照组及轻、中、重度吸烟组(每天分别暴露于4、8、12支香烟烟雾,早晚各1次),连续染毒8周后成功建立大鼠被动吸烟毒性模型。采用TUNEL法检测睾丸生精细胞凋亡数,分别以直接化学发光和ELISA法检测大鼠血清中睾酮、抑制素B的表达水平。结果对照组及轻、中、重度吸烟组大鼠生精细胞凋亡指数分别为(6.62±0.58)%,(7.08±1.02)%,(8.71±0.76)%,(10.17±1.18)%,各染毒组生精细胞凋亡指数均高于对照组,差异有统计学意义(P0.01)。各染毒组大鼠血清睾酮、抑制素B水平均低于对照组,且均随染毒剂量的增加而降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论烟草烟雾可诱导大鼠睾丸生精细胞凋亡,并影响血清抑制素B及睾酮分泌。     

农达对小鼠生精作用的影响

目的探讨农达(roundup,活性成分为草甘膦)对小鼠生精作用的影响。方法将24只成年SPF级雄性Balb/c小鼠随机分为阴性对照(蒸馏水)组和20、200、2 000 mg/kg农达染毒组,每组6只。采用经口灌胃方式进行染毒,染毒容量为20 ml/kg,每天1次,连续染毒30 d。测定小鼠精子数量、精子活动率和血清中睾酮(T)浓度及睾丸生精细胞的凋亡情况。结果与阴性对照组相比,200、2 000 mg/kg农达染毒组小鼠精子数量减少、精子活动度降低;各剂量农达染毒组小鼠血清睾酮浓度均降低,而睾丸生精细胞的凋亡率均升高,差异均有统计学意义(P0.05)。结论在本实验染毒时间和剂量范围内,农达对雄性Balb/c小鼠的生精功能有一定的毒性作用。     

锌对乙醇长期摄入致大鼠睾丸损伤保护作用

目的 观察锌对乙醇长期摄入所致大鼠睾丸损伤的保护作用机制.方法 30只健康雄性成年SD大鼠随机分为对照组、乙醇组、乙醇+葡萄糖酸锌组,各组每日分别灌胃0,7.5g/kg乙醇、7.5g/kg乙醇+7.7mg/kg葡萄糖酸锌,连续13周后检测精子计数、活动率、精子畸形率,血清睾酮;光、电镜观察睾丸的形态改变,同时测定睾丸线粒体中丙二醛(MDA)的产生量,免疫组织化学法和蛋白印迹(western-blot)检测睾丸组织中诱导型一氧化氮合酶(iN-OS)的表达.结果 与对照组(38.0±7.9)×106/mL比较,乙醇组精子计数为(8.2±5.1)×106/mL,减少了78%(P<0.05),精子活动率下降了71%(P<0.05),精子畸形率明显升高(P<0.05),血清睾酮水平明显降低(P<0.05);睾丸生精上皮结构破坏,支持细胞和各级生精细胞均有退化变性;睾丸生精细胞iNOS表达明显增强(P<0.05);睾丸线粒体丙二醛含量明显升高.乙醇+葡萄糖酸锌组较单纯乙醇组精子计数、精子活动率上升,生精细胞退化变性程度减轻,睾丸生精细胞iNOS表达减弱(P<0.05),睾丸线粒体MDA减少,但血清睾酮仍低于对照组.结论 长期摄入乙醇会抑制精子生成和睾酮合成,补充锌可以抑制乙醇引起的睾丸过氧化损伤,保护睾丸的生精功能.     

锌和维生素A对酒精致大鼠睾丸损伤的保护作用

[目的]观察锌和维生素A(VA)对长期摄入酒精致大鼠睾丸损害的保护作用及可能机制.[方法]40只健康雄性成年SD大鼠随机分为对照组、酒精组、酒精+葡萄糖酸锌组、酒精+VA组,各组每日分别灌胃给予酒精0、7.5 g/kg、酒精7.5 g/kg+葡萄糖酸锌7.7mg/kg、酒精7.5 g/kg+VA50μg/kg,连续13周.对各组大鼠的精子计数、精子活动率、精子畸形率、血清睾酮(T)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)含量进行检测,光、电镜观察睾丸的形态改变.同时测定睾丸线粒体中丙二醛(MDA)的产生量,免疫组织化学法检测睾丸组织中iNOS的表达.[结果]与对照组相比,酒精组大鼠精子计数减少,精子活动率下降,精子畸形率升高(P＜0.05),血清T、LH、FSH水平明显降低(P＜0.05);睾丸生精上皮结构破坏,支持细胞和各级生精细胞均有退化变性;睾丸生精细胞iNOS表达明显增强(P＜0.05);睾九线粒体丙二醛含量明显升高(P＜0.05).与酒精组相比,葡萄糖酸锌组和VA组精子计数、精子活动率有所上升,生精细胞退化变性程度减轻,睾丸生精细胞iNOS表达减弱(P＜0.05),睾丸线粒体MDA减少,但血清T、LH、FSH水平仍低于对照组.[结论]长期摄入酒精不仅抑制精子发生和睾酮合成,还使下丘脑-垂体轴生殖内分泌功能受损.补充锌和VA可以限制酒精引起的睾丸过氧化损伤,保护睾丸的生精功能,但仍有生殖内分泌激素合成障碍.     

姜黄素对砷致大鼠睾丸生精细胞凋亡的拮抗作用

目的研究姜黄素对砷致大鼠睾丸生殖细胞凋亡的拮抗作用。方法将50只健康清洁级Wistar雄性大鼠随机分为5组,分别为对照(双蒸水)组和亚砷酸钠(100 mg/L)染毒组及低、中、高剂量姜黄素(100 mg/L亚砷酸钠+25、50、100mg/kg姜黄素)干预组,每组10只。亚砷酸钠采用自由饮用方式进行染毒;姜黄素采用经口灌胃方式染毒,每周3次,连续8周。测量生精小管平均直径;测定大鼠血清睾酮浓度及睾丸生精细胞凋亡指数。结果与对照组比较,亚砷酸钠染毒组大鼠血清睾酮的水平降低,生精小管直径缩小,而睾丸生精细胞凋亡指数升高,差异有统计学意义(P0.01)。与亚砷酸钠染毒组比较,中、高剂量姜黄素干预组大鼠血清睾酮的水平升高,生精小管直径增大,而睾丸生精细胞凋亡指数下降,差异均有统计学意义(P0.05)。且随着姜黄素染毒剂量的升高,大鼠血清睾酮水平和生精小管直径均呈上升趋势,而睾丸生精细胞凋亡指数呈下降趋势。结论姜黄素对砷致大鼠睾丸生殖细胞凋亡具有拮抗作用。     

酒精对雄性大鼠生精功能和生殖激素的影响

目的　观察酒精对雄性大鼠睾丸生精功能及血清睾酮 (T)、黄体生成素 (LH )、卵泡刺激素 (FSH )的影响。方法　 40只健康雄性成年SD大鼠随机分为 4组 ,各组每日分别灌胃给予酒精 0 ,2 7,4 5,7 5g/kg ,连续 13周。测定各组大鼠精子计数、精子活动率、精子畸形率 ,血清T、LH、FSH含量 ,并在光镜下观察睾丸组织的病理变化。结果　与对照组相比 ,酒精组大鼠精子计数减少 ,精子活动率下降 ,精子畸形率升高 (P <0 0 5) ,光镜下酒精组动物睾丸生精细胞退化变性 ,且随剂量增大损伤加重。各酒精组动物血清T水平明显降低 (P <0 0 1) ,血清LH、FSH含量亦较对照组明显降低 (P <0 0 5)。结论　酒精是一种睾丸毒物 ,一方面直接作用于睾丸 ,抑制精子发生和睾酮合成 ,另一方面还使下丘脑 -垂体轴生殖内分泌功能受损     

氯乙酸甲酯亚慢性染毒大鼠睾丸组织和血清睾酮水平变化

目的研究氯乙酸甲酯亚慢性染毒大鼠睾丸功能和组织学变化。方法将55只雄性大鼠随机分成5组,4个剂量组分别给予4.3、8.6、17.2和34.4mg/kg的氯乙酸甲酯,对照组给予生理盐水共13周,观察睾丸和附睾组织形态学的变化,检测精子活力、精子计数以及精子畸形率,血清睾酮水平和睾丸细胞的凋亡率。结果高剂量染毒组睾丸脏器系数、血清睾酮水平、睾丸细胞凋亡率[0.85±0.05、(5.93±2.75)μg/L、(18.22±7.03)%]与对照组[0.80±0.09、(14.70±8.04)μg/L、(6.40±4.51)%]之间差异有显著性(P<0.05)。结论最高剂量氯乙酸甲酯处理大鼠睾丸和血清睾酮水平有变化。     

不同剂量慢性染氟对大鼠学习记忆行为的影响

目的:探讨不同剂量慢性染氟对大鼠学习记忆能力的影响。方法:选用Wistar大鼠46只,随机分为对照组、低氟组、高氟组3组,分别饮用自来水(对照组),100 mg/L(低氟组),200 mg/L(高氟组)的氟化钠溶液,5个月后用Y—迷宫实验观察慢性氟中毒对大鼠学习记忆行为的影响。结果:与对照组大鼠Y—迷宫实验学会所需次数(58.83±25.12)相比,低氟组(73.95±9.77)和高氟组(77.37±8.69)的大鼠学会所需次数明显增加(P<0.05),且随染氟剂量的增加学会所需次数亦增加,但无统计学意义(P>0.05)。结论:提示慢性氟中毒对大鼠学习记忆能力有显著的影响。     

牛磺酸锌对慢性氟接触大鼠海马的保护性研究

目的探讨牛磺酸锌(TZC)对慢性染氟大鼠海马损害的保护机制。方法Wistar大鼠30只,随机分为对照组、低氟组、高氟组、低氟补锌组、高氟补锌组,每组6只。自由饮纯净水(对照组),100mg/L(低氟组和低氟补锌组)的氟化钠(NaF)溶液,200mg/L(高氟组和高氟补锌组)的NaF溶液。5个月后,低氟补锌组、高氟补锌组分别隔日交替饮用各自浓度的NaF溶液及340mg/L的浓度TZC溶液,继续喂养1个月。后采用ABC免疫组化法观察大鼠海马一氧化氮合酶(nNOS)阳性神经元的变化。结果与对照组比较,各实验组大鼠海马CA1区的nNOS阳性神经元数目均明显减少(P<0.01),且改变与染氟剂量的增加呈量-效关系(P<0.01);除低氟补锌组外,其他各组大鼠海马CA3区、DG区nNOS阳性神经元数目亦均比对照组明显减少(P<0.01);与染氟组比较,补锌组大鼠海马各区的nNOS阳性神经元数目均相应增多(P<0.01)。结论TZC对慢性染氟大鼠海马损害具有保护作用。     

染氟对大鼠生精细胞端粒酶与增殖细胞核抗原表达的影响

目的了解氟对大鼠雄性生殖系统的危害。方法30只雄性SD大鼠随机分为对照组、高剂量染毒组、低剂量染毒组,分别腹腔注射蒸馏水及20、10mg/kg NaF溶液,39 d后观察大鼠体重、精子数目变化,采用原位杂交法检测睾丸生殖细胞端粒酶逆转录酶(TERT)表达,用免疫组化法检测睾丸生殖细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果低、高剂量染毒组体重分别为(273.39±20.68)、(240.00±21.39)g,低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);TERT表达率分别为(13.89±4.86)%、(6.33±4.42)%,PCNA表达率分别为(0.71±0.05)%、(0.60±0.08)%,均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);精子数目分别为(18.31±1.20)×10~(10)/L、(9.17±1.38)×10~(10)/L,低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论氟可降低生殖细胞TERT、PCNA的表达,对雄性生殖系统造成损害。     

急性氟中毒小鼠大脑皮层神经元DNARNA和NOS的活性观察

目的:探讨急性氟中毒对小鼠神经系统损害的机制。方法:选用昆明种小鼠24只,分为对照组、低氟组、中氟组、高氟组,每组6只,染氟组分别腹腔注射氟化钠(NaF)8.75、17.53、5 mg/kg,对照组同期注射等剂量生理盐水。分别采用黄递酶(NADPH-d)染色和吖啶橙荧光染色法,观察动物大脑皮层一氧化氮合酶(NOS)活性的变化和皮层DNA及RNA荧光染色强度。结果:与对照组相比,中、低氟组阳性神经元数量明显增多(P<0.05),而高氟组差异不明显(P>0.05);给药组皮层DNA和RNA吖啶橙染色后的荧光强度弱于对照组,且随给药浓度加大强度越弱。结论:急性氟中毒可增强小鼠皮层NOS阳性神经元的表达,对皮层神经元DNA和RNA亦有损伤作用。     

氟对大鼠骨组织Osterix mRNA及其蛋白表达影响

目的观察氟对大鼠股骨中成骨细胞特异性转录因子Osterix(OSX)mRNA及其蛋白表达的影响。方法 36只SD大鼠按体重随机分为对照组、低氟组(饮水含氟50 mg/L)、高氟组(饮水含氟5 mg/L),饲养6个月后股动脉放血处死。用免疫组织化学法检测各组大鼠股骨组织中OSX蛋白表达;实时荧光定量PCR检测OSX mRNA表达。结果高氟组大鼠OSX阳性成骨细胞数[(51.47±3.37)个]增多,明显高于低氟组[(36.80±2.83)个]和对照组[(27.00±2.92)个],差异有统计学意义(P<0.05);低氟组OSX mRNA是对照组的2.10倍,高氟组OSX mRNA是对照组的2.82倍,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论氟可导致大鼠骨组织OSX mRNA及蛋白表达水平增高,OSX可能参与氟引起的骨骼损伤的发生机制。     

氟对体外大鼠睾丸支持细胞雄激素结合蛋白和抑制素B mRNA表达的影响

目的研究氟对体外培养大鼠睾丸支持细胞雄激素结合蛋白(ABP)和抑制素B(INHB)转录水平的影响。方法建立支持细胞体外培养模型,以浓度分别为2.5、5.0、10.0和20.0mg/L氟化钠溶液染毒细胞,用RT-PCR方法检测ABP和INHB mRNA的相对表达量。结果①ABP mRNA相对表达量在各剂量组与对照组相比,2.5mg/L组高于对照组,且差异有统计学意义(P0.05);5.0mg/L高于对照组,但差异没有统计学意义;其余各组低于对照组,但差异没有统计学意义(P0.05)。②INHB mRNA相对表达量在各剂量组与对照组比较,2.5和5mg/L组均高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05);其余两组低于对照组,但是差异均无统计学意义(P0.05)。结论在2.5～20.0mg/L剂量范围内,未观察到氟对体外培养大鼠睾丸支持细胞ABP和INHB mRNA的表达有明显影响。     

硒对氟致大鼠血清 肾和股骨中铜 锌 铁影响的研究

给大鼠饮用含氟化钠 ( 1 50 mg/kg)及同时分别加入不同浓度亚硒酸钠 ( 0 .5～ 2 .0和 4.0mg/L)的饮水共 1 0周 ,观察氟及氟与硒联合作用对大鼠血清氟、尿氟和股骨氟的影响 ,以及大鼠血清 ,肾组织和股骨中铜、锌、铁含量的变化。结果表明 ,氟暴露可使血清、尿和股骨氟水平显著升高及血清、肾、股骨的铜、锌、铁代谢紊乱。同时给予 2 .0 mg/L亚硒酸钠可使血清氟和尿氟进一步升高 ,而股骨氟含量降低 ,并对氟致血清、肾组织和股骨中铜、锌、铁的代谢紊乱具有显著调整作用 ,但 0 .5和 4.0 mg/L亚硒酸钠的这种作用较弱。可以认为 ,亚硒酸钠对尿氟排泄具有显著促进作用 ,对氟诱导的微量元素代谢紊乱具有明显拮抗作用 ,2 .0 mg/L是拮抗1 50 mg/L氟化钠引起的微量元素代谢紊乱的最佳浓度。     

Angiostatin和Fas基因对人结肠癌的协同抑制作用

目的 探讨血管生成抑素Angiosmtin(AS)基因和Fas基因对人结肠癌细胞系LOVO的协同抑制作用.方法 构建pcDNA3-AS和pcDNA3-Fas质粒,用脂质体法分别将AS、Fas、AS和Fas基因转染体外培养的人结肠癌细胞系LOVO,用Western blot法检测目的 基因的表达,用MTT法检测转染AS和Fas基因对体外培养的人结肠癌细胞生长的影响.通过瘤内注射分别将AS、Fas、AS和Fas基因转染裸鼠皮下移植的人结肠癌肿瘤,检测首次基因转染后14 d肿瘤的大小.结果 基因转染后12、24、48和72h,Fas和AS共转染组及Fas组对人结肠癌LOVO细胞的抑制作用明显强于对照组(P＜0.01).质粒转染后14 d,Fas和AS共转染组小鼠的肿瘤体积明显小于对照组、Fas组和AS组(P＜0.05);Fas组和AS组的肿瘤体积明显小于对照组(P＜0.05).结论 AS和Fas基因对体内人结肠癌有协同抑制作用.     

氟对大鼠成骨细胞SPARC mRNA及其蛋白表达的影响

目的观察慢性氟中毒时大鼠成骨细胞中成骨相关蛋白SPARC mRNA及其蛋白表达水平的影响,并探讨SPARC在氟骨症发病机制中的可能作用。方法 36只健康SD大鼠按体重、性别随机分3组,对照组自由饮用自来水(氟<1mg/L),低、高氟组分别饮用添加氟化钠5、50mg/L的自来水。饲养8个月后,股动脉放血处死大鼠,用氟离子选择电极法测各组尿氟、骨氟含量。HE染色后光镜下观察股骨下段骨组织的病理学改变及形态计量学测量。免疫组织化学和原位杂交技术检测成骨细胞中SPARC蛋白及其mRNA的表达水平。结果低氟组大鼠尿氟、骨氟含量[(6.09±0.56)mg/L、(12.65±3.07)μg/g]显著高于对照组[(1.36±0.51)mg/L、0.67±0.16)μg/g],差异有统计学意义(P均<0.05),高氟组[(7.69±0.64)mg/L、(26.53±5.88)μg/g]较低氟组升高,差异有统计学意义(P均<0.05)。染氟组大鼠股骨下段呈骨质硬化表现。低氟组大鼠SPARC蛋白及其mRNA表达水平(125.24±1.91、100.90±1.13)明显高于对照组(109.70±1.70、88.03±1.26),差异有统计学意义(P均<0.05),高氟组(139.47±1.03、119.22±1.23)较低氟组升高,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论过量氟可通过上调大鼠成骨细胞中SPARC蛋白及其mRNA表达水平来调节成骨细胞的增殖、分化、成熟等过程,使骨形成增加,表现为骨硬化型。