Integrin β1对胃癌细胞SGC7901多药耐药性的影响

目的:探究整合素β1(integrinβ1)对胃癌多药耐药性的影响及可能的作用机制。方法:Western blot法及q PCR实验检测胃癌细胞株SGC-7901及胃癌耐药细胞株SGC-7901/DDP中integrinβ1的表达情况。采用integrinβ1反义寡核苷酸转染,敲减胃癌耐药细胞株SGC-7901/DDP中integrinβ1的表达,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测integrinβ1、Bcl-2/Bax、cleaved caspase-3/caspase-3、细胞色素C(CytC)和p-AKT/AKT的蛋白水平。结果:耐药细胞株SGC7901/DDP中integrinβ1的mRNA及蛋白表达水平均明显高于亲本细胞株;并且在亲本细胞株SGC7901中加入顺铂、长春新碱及5-氟尿嘧啶等化疗药物刺激后,integrinβ1的蛋白表达水平明显升高。敲减integrinβ1的表达可诱导胃癌耐药细胞SGC7901/DDP的凋亡,增加细胞对化疗药物的敏感性;此外下调Bcl-2/Bax、p-AKT~(Ser473)和p-AKT~(Thr308)的蛋白水平,同时促进线粒体Cyt-C的释放,上调cleaved caspase-3的蛋白水平。结论:敲减胃癌顺铂耐药细胞SGC7901/DDP的integrinβ1表达可恢复细胞对化疗药物的敏感性,促进细胞经线粒体路径的凋亡,其机制可能与抑制AKT的磷酸化,阻断该信号通路有关。     

阻断Sonic Hedgehog信号对不同人肝癌细胞生长的影响

 目的: 研究阻断Sonic Hedgehog (Shh)信号对不同人肝癌细胞生长的影响,探讨阻断Shh信号抑制肝癌细胞生长的机制。方法: RT-PCR法检测Shh信号分子在3株人肝癌细胞(BEL-7402、Huh7和HepG2)中的表达,并检测Shh阻断抗体作用后BEL-7402细胞Shh信号效应分子表达变化;MTT法检测人肝癌细胞增殖活性;流式细胞术检测人肝癌细胞凋亡;Western blot 检测凋亡相关蛋白表达。结果: Shh信号分子在3株人肝癌细胞中均有表达,Shh阻断抗体可以下调Shh信号效应分子patched (Ptch)、Gli1和Gli2的表达;Shh阻断抗体可以抑制3株肝癌细胞生长,增加G₀/G₁期细胞,并诱导细胞凋亡;Shh阻断抗体作用后,BEL-7402细胞pro-caspase-3、pro-caspase-8和pro-caspase-9蛋白表达水平下降,cleaved caspase-3、cleaved caspase-8和cleaved caspase-9蛋白表达水平升高。结论: 阻断Shh信号可抑制Shh高表达的人肝癌细胞生长,阻滞细胞周期于G₀/G₁期,并诱导肝癌细胞凋亡。     

Sulindac对人肝癌细胞HepG2增殖及β-catenin表达的影响

目的　观察Sulindac对人肝癌细胞HepG2增殖、凋亡及β-catenin蛋白表达的影响,探讨Sulindac抗肝癌的可能机制。 方法　不同浓度的Sulindac作用HepG2细胞后,采用MTT实验检测细胞增殖抑制作用;采用Hoechst33258染色法检测Sulindac对HepG2细胞凋亡的影响;利用RT-PCR及Western blotting检测HepG2细胞在Sulindac作用后Wint通路中β-catenin的表达变化。 结果　Sulindac对人肝癌细胞HepG2有增殖抑制作用,且呈剂量时间依赖关系;Hoechst33258结果显示,Sulindac作用24 h后HepG2细胞凋亡数目明显增多;随着Sulindac浓度的增加,β-catenin mRNA及蛋白表达量逐渐下降。 结论　Sulindac能够抑制人肝癌细胞HepG2增殖,通过阻断Wnt信号传导通路,降低β-catenin表达,诱导人肝癌细胞HepG2的凋亡。     

AG490阻断肝癌细胞Stat3信号通路逆转免疫抑制的实验研究

目的：检测Stat3 mRNA在肿瘤细胞中的表达，研究JAK酶抑制剂AG490阻断Stat3信号通路对免疫抑制因子基因表达的影响，探讨应用AG490阻断肿瘤细胞Stat3信号通路逆转免疫抑制的可行性。方法：RT-PCR法检测Stat3 mRNA表达；动态检测AG490作用前后肝癌细胞Stat3 mRNA表达以及VEGF、TGF-β和IL-10等免疫抑制因子基因的表达情况。结果：在所检测的人肿瘤细胞中5种有Stat3 mRNA的表达；AG490阻断肝癌细胞Stat3通路后，免疫抑制因子VEGF、TGF-β和IL-10等的mRNA表达减弱甚至消失。结论：AG490可通过阻断Stat3信号转导通路逆转免疫抑制，发挥抗肿瘤效应。     

RNA干扰抑制磷脂酰肌醇3-激酶p110β的表达增加氟尿嘧啶诱导人胃癌细胞凋亡的能力

目的探讨沉默磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)p110β因子的表达增加氟尿嘧啶(FU)诱导人胃癌细胞凋亡的能力。方法运用RNA干扰(shRNA)技术构建携带靶向抑制PI3Kp110β分子的慢病毒载体LV-sh PI3Kp110β并感染人胃癌细胞株AGS(sh PI3Kp110β组),未转染的细胞为空白对照组(Con组),转染无义序列的对照慢病毒载体LV-shRNA为阴性对照组(sh NC组),荧光显微镜观察慢病毒的感染效率,RT-PCR和Western blot方法验证慢病毒感染后PI3Kp110β mRNA和蛋白在Con、shNC和shPI3Kp110β各组细胞中的表达水平,并用嘌呤霉素筛选PI3Kp110β静默的稳转细胞。在稳转细胞中和对照细胞中加入不同浓度FU分别作用24、48和72 h,通过MTT法检测Con、shNC和shPI3Kp110β各组细胞在加入氟尿嘧啶后细胞增殖的情况,并用Western blot方法检测可能涉及的凋亡相关信号分子的变化。结果慢病毒干扰RNA(shRNA)感染人胃癌细胞株AGS后,能有效下调PI3Kp110β在细胞内的表达水平并成功筛选PI3Kp110β静默的AGS稳转细胞;FU可抑制AGS细胞的增殖,其作用呈现浓度的依赖性;在该细胞中下调PI3Kp110β的表达可增加该细胞对FU抑制细胞生长的敏感性;下调胃癌细胞AGS内shPI3Kp110β分子的表达可显著增加FU诱导凋亡相关蛋白PARP的裂解,抑制Bcl-2蛋白的表达,从而促进胃癌细胞的凋亡。结论 PI3Kp110β shRNA转染人胃癌细胞AGS可有效下调该细胞中PI3Kp110β的表达,增加5-Fu抑制人胃癌细胞生长及促进其凋亡的敏感性,促进凋亡信号通路相关蛋白的活化。     

β-榄香烯对宫颈癌细胞PI-3K/Akt信号通路活化和凋亡相关蛋白表达的影响

目的研究β-榄香烯对人宫颈Hela细胞凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-9表达和PI-3K/Akt信号通路的影响。方法实验分为对照组和β-榄香烯处理组,应用AnnexinV-FITC凋亡检测试剂盒及流式细胞仪检测细胞凋亡率,并采用免疫荧光、Western Blot方法检测Akt、p-Akt、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3),天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶9(caspase-9)、凋亡诱导因子(AIF)、细胞色素C(Cyto c)蛋白表达。结果β-榄香烯以剂量和时间依赖方式抑制宫颈癌细胞增殖和细胞活性。与对照组相比,β-榄香烯处理组凋亡细胞数量和相关凋亡蛋白(caspase-3、caspase-9、AIF、Cyto c)表达水平升高,β-榄香烯作用组p-Akt的表达水平明显升高。结论β-榄香烯抑制宫颈癌细胞增殖和诱导细胞凋亡可能与上调凋亡相关蛋白表达和PI-3K/Akt信号通路相关。     

卵泡刺激素调节大鼠卵巢颗粒细胞中Smad2/Smad3蛋白的表达及磷酸化

目的:研究卵泡刺激素(FSH)对大鼠卵巢颗粒细胞中Smad2/Smad3蛋白的调节。方法:21dSD雌鼠,腹腔注射孕马血清20IU,对颗粒细胞进行原代培养,用转化生长因子β受体Ⅱ(TβRⅡ)抗体中和卵巢颗粒细胞表面TβRⅡ,以阻断TGFβ/Smads信号通路,再以不同浓度的FSH对细胞进行不同时间的处理,免疫印迹法检测TGFβ信号通路中TβRⅡ、Smad2/Smad3及P-Smad2/P-Smad3蛋白的表达。结果:TβRⅡ、Smad2/Smad3、P-Smad2/P-Smad3蛋白的表达量与FSH的作用呈时间依赖性显著增强;TGFβ/Smads信号通路被阻断后再用FSH处理,Smad2/Smad3、P-Smad2/P-Smad3蛋白的表达量没有明显变化;细胞表面TβRⅡ恢复后,Smad2/Smad3、P-Smad2/P-Smad3蛋白的表达量有少量增加。结论:FSH刺激大鼠卵巢颗粒细胞中Smad2/Smad3的表达和磷酸化;FSH对Smad2/Smad3的激活作用在相当程度上依赖于TβRⅡ。     

CXCL12/CXCR4轴通过调节自噬促进乳腺癌细胞对多柔比星的化疗抗性北大核心CSCD

目的:探究CXCL12/CXCR4轴在乳腺癌细胞多柔比星(Dox)化疗抗性中的作用及相关机制。方法:体外培养乳腺癌细胞系MCF-7,通过MTT实验检测在CXCL12作用下乳腺癌细胞对Dox的敏感性变化,RT-PCR和Western blot检测上述细胞中CXCL12受体CXCR4与CXCR7的mRNA及蛋白的表达水平;采用siRNA干扰技术靶向沉默乳腺癌细胞中CXCR4表达,RT-PCR和Western blot检测转染效率后,依次使用MTT、Annexin V-FITC/PI流式细胞术及Western blot明确在CXCL12作用下沉默CXCR4表达对Dox介导的乳腺癌细胞的抑制率,凋亡、自噬及PI3K/Akt信号通路表达的影响。结果:CXCL12能够通过促进CXCR4的表达,提高乳腺癌细胞对Dox的化疗抗性;转染siRNA能够显著抑制乳腺癌细胞中CXCR4的mRNA及蛋白的表达水平;而沉默CXCR4能显著改善CXCL12作用下的乳腺癌细胞对Dox的敏感性,提高Dox诱导的细胞凋亡率,并通过抑制自噬相关蛋白LC3B与Beclin1表达,下调乳腺癌细胞中的自噬水平;同时,沉默CXCR4能通过抑制PI3K/Akt信号通路中PI3K蛋白表达及Akt蛋白磷酸化水平,下调抗凋亡蛋白BCL-2,促进凋亡相关蛋白Bax与cleaved Caspase-3表达。结论:CXCL12/CXCR4在乳腺癌细胞Dox耐药性中具有重要作用,而沉默CXCR4表达能通过下调MCF-7细胞的自噬水平,提高Dox诱导的细胞凋亡,从而改善肿瘤细胞对Dox的敏感性。     

c-Flip的基因表达在肝癌细胞对TRAIL诱导凋亡耐受中的作用

目的:观察c-Flip基因的表达变化在肝癌细胞对TRAIL诱导凋亡耐受中的作用。方法:以肝癌细胞HepG2、Hep3B为研究对象,制备c-FlipsiRNA的细胞模型,应用流式细胞仪分析两种细胞模型对TRAIL作用后细胞周期的变化,Western blot检测其在c-Flip基因沉默前后凋亡信号传导蛋白Caspase-8、Caspase-3等的表达变化。结果:转染c-FlipsiRNA后,细胞恢复了对TRAIL诱导凋亡的敏感性,当TRAIL浓度为100 ng/ml时,HepG2及Hep3B转染组的细胞生存率为57.34%±6.13%和43.98%±4.54%,显著低于对照组的96.44%±5.43%和101.85%±6.41%(P<0.01);细胞生存周期SubG1期为74.68%±6.95%和78.34%±7.64%,显著高于对照组的0.78%±0.07%和3.62%±0.38%(P<0.01),转染组TRAIL单独作用,可以引起HepG2siRNA及Hep3BsiRNA凋亡传导通路上传导蛋白Caspase-8、Caspase-3的裂解。结论:肝癌细胞对TRAIL诱导凋亡的耐受可能与其传导通路上c-Flip蛋白的表达相关,抑制其表达可以导致凋亡传导蛋白Caspase-8、Caspase-3的裂解,促使凋亡的发生,恢复肝癌细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感性。     

五味子乙素通过Wnt/β-catenin信号通路调节人胰腺癌细胞增殖、凋亡和侵袭

目的 研究五味子乙素对人胰腺癌细胞Panc-1细胞增殖,凋亡和侵袭的调控作用及对Wnt/β-catenin信号通路的影响.方法 不同、浓度的五味子乙素(12、24、48μg/ml)处理胰腺癌Panc-1细胞后,采用CCK8法检测Panc-1细胞增殖变化,Transwell法检测细胞侵袭情况,流式细胞术检测细胞凋亡的变化,Western blot检测细胞中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Wnt/β-catenin通路相关蛋白的表达变化.结果 五味子乙素能显著抑制人胰腺癌细胞Panc-1细胞增殖和侵袭能力,且呈剂量和时间依赖性,促进细胞凋亡,并上调Bax/Bcl-2的表达比例,显著抑制Wnt4、Wnt5a、β-catenin蛋白表达水平.结论 五味子乙素明显抑制Panc-1细胞的增殖和侵袭,促进凋亡,与抑制Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达有关.     

补中益气汤含药血清调控GSK-3β介导的Wnt/β-catenin信号通路增强A549细胞对顺铂敏感性的研究北大核心CSCD

目的:探讨补中益气汤含药血清增强A549细胞对顺铂敏感性的机制是否与GSK-3β介导的Wnt/β-catenin信号通路有关。方法:制备补中益气汤含药血清作用于A549细胞株,随机分为a组(对照血清组)、b组(顺铂组)、c组(补中益气汤组)、d组(补中益气汤含药血清联合顺铂组)。流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测GSK-3β、p-GSK-3β^(ser9)、p-GSK-3β^(tyr216)、β-catenin、survivin蛋白表达。结果:补中益气汤含药血清联合顺铂可降低p-GSK-3β^(ser9)、β-catenin、survivin蛋白表达,提高晚期细胞凋亡率。结论:抑制GSK-3β介导的Wnt/β-catenin信号通路激活可能是补中益气汤含药血清增强A549细胞对顺铂敏感性的作用机制之一。     

乙肝病毒X 蛋白结合蛋白可能通过PI3K / Akt 信号通路影响肝癌细胞的增殖和迁移

目的:探讨乙肝病毒X蛋白结合蛋白(HBXIP)通过调控PI3K/Akt信号通路对肝癌细胞增殖和迁移的影响。方法:qRT-PCR和Western blot检测人正常肝脏细胞HL7702和肝癌细胞HepG2、Hep3B、Huh7中HBXIP mRNA和蛋白表达;以肝癌细胞HepG2为研究对象,MTT实验、划痕实验检测过表达HBXIP及抑制HBXIP对肝癌细胞增殖和迁移的影响,Western blot检测过表达HBXIP的肝癌细胞中PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达,分析PI3K抑制剂(LY294002)对过表达HBXIP的肝癌细胞增殖和迁移的影响。结果:与HL7702细胞比较,肝癌细胞HepG2、Hep3B、Huh7中HBXIP mRNA和蛋白相对表达水平均明显升高(P0.05);过表达HBXIP能够促进肝癌细胞增殖和迁移能力,促进肝癌细胞中p-PI3K、p-Akt蛋白表达,而沉默HBXIP后肝癌细胞增殖和迁移能力降低;使用LY294002阻断PI3K/Akt信号通路能够逆转过表达HBXIP对肝癌细胞增殖和迁移的促进作用。结论:HBXIP在肝癌细胞中高表达,可能通过激活PI3K/Akt信号通路促进肝癌细胞增殖和迁移。     

内质网应激介导糖原合成酶激酶-3β促进肝细胞凋亡

目的 探讨细胞内信号分子GSK3β在内质网应激(ERS)诱导肝细胞凋亡中的作用.方法 以小鼠肝癌细胞株Hepa 1细胞为研究对象,化学药物衣霉素(20 μg/ml)为ERS诱导剂,建立肝细胞凋亡模型.化学药物SB216763特异性抑制GSK3β活性,在衣霉素诱导细胞凋亡前1h给予干预处理.乙酰氧基甲酯(AM)/碘化丙啶(propidium iodide,PI)对活细胞/凋亡细胞进行检测;再利用培养细胞上清乳酸脱氢酶(LDH)的检测评价细胞死亡情况;Western blot检测p-GSK3β蛋白、ERS相关凋亡蛋白GRP78、CHOP、caspase-12以及caspase-3、cleaved caspase-3蛋白的表达.结果 研究表明,衣霉素诱导的ERS促进GSK3β活性升高;抑制GSK3β活性缓解了衣霉素诱导的ERS:GRP78、CHOP和caspase-12的表达被抑制;与此同时抑制GSK3β活性显著减轻了ERS诱导的Hepa 1细胞凋亡.与ERS诱导Hepa 1凋亡模型组相比,SB216763干预组PI染色的凋亡细胞显著减少,培养细胞上清中的LDH显著下降;此外,Western blot结果显示GSK3β活性抑制减少了cleaved caspase-3活性蛋白的表达.结论 GSK3β是ERS诱导细胞凋亡通路中的一种重要信号分子,抑制GSK3β活性通过减轻ERS而改善肝细胞凋亡.     

Zeste基因增强子同源物2通过调控Wnt/β-catenin信号通路影响脑胶质瘤细胞凋亡

目的:探讨zeste基因增强子同源物2(EZH2)通过调控Wnt/β-catenin信号通路对脑胶质瘤细胞凋亡的影响。方法:以RT-q PCR和Western blot检测胶质瘤U87、H4和U251细胞及正常人脑星形细胞(NHA)中EZH2的表达水平。在H4细胞中转染EZH2 siRNA和siRNA control,MTT测定细胞活力,流式细胞术测定细胞凋亡,分光光度计法检测caspase-3的活性,Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路中关键蛋白β-连环蛋白(β-catenin)和下游靶分子c-Myc的蛋白表达。用Wnt/β-catenin信号通路激活剂处理转染EZH2 siRNA的H4细胞,流式细胞术测定细胞凋亡,Western blot测定β-catenin和c-Myc的表达。结果:胶质瘤U87、H4和U251细胞中EZH2的mRNA和蛋白水平均明显高于NHA(P0.05),并且H4细胞中EZH2 mRNA和蛋白水平高于U87和U251细胞(P0.05)。EZH2 siRNA可以明显下调H4细胞中EZH2的mRNA和蛋白水平。EZH2表达下调后的H4细胞从48 h开始细胞活力降低,并且细胞凋亡率也明显升高,细胞中caspase-3活性也明显升高(P0.05),同时EZH2表达下调还可以抑制β-catenin和c-Myc的表达。Wnt/β-catenin信号通路的激活剂可以减少EZH2诱导的H4细胞凋亡,降低细胞中caspase-3的活性。结论:EZH2在脑胶质瘤细胞中过度表达,下调其表达可以通过抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活而诱导胶质瘤细胞凋亡。     

下调TPD52基因表达通过Wnt信号通路对子宫肌瘤细胞活力、凋亡及TNF-α和IL-6表达的影响

目的:探讨下调肿瘤蛋白D52(TPD52)基因表达通过Wnt信号通路对子宫肌瘤细胞活力、凋亡及肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)表达的影响。方法:将针对TPD52的特异性si RNA(si-TPD52)及其阴性对照转染原代培养的子宫肌瘤细胞,并加入Dickkopf-1(DKK1)作为Wnt信号通路抑制剂,转染48 h后,用Western blot检测TPD52及Wnt信号通路关键分子β-catenin和相关靶蛋白cyclin D1和survivin的蛋白表达; MTT及流式细胞术分别检测细胞活力和凋亡率的变化; RT-qPCR检测TNF-α和IL-6的m RNA表达。结果:TPD52在转染si-TPD52的子宫肌瘤细胞的表达显著低于空白对照组和阴性对照组(P 0. 05);与阴性对照组比较,si-TPD52组细胞活力明显受到抑制,凋亡率增加,TNF-α的m RNA表达降低,IL-6的m RNA表达升高,β-catenin、cyclin D1和survivin的蛋白表达降低(P 0. 05);加入DKK1后si-TPD52对细胞活力和凋亡的影响更明显。结论:下调TPD52基因表达可通过Wnt信号通路抑制子宫肌瘤细胞生长和诱导凋亡,同时下调TNF-α和上调IL-6表达。     

IL-6促进小鼠小胶质细胞系BV2坏死性凋亡

目的 探究在神经炎性反应中小胶质细胞凋亡的调控机制。方法 脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导小鼠小胶质细胞系BV2,构建神经炎性反应细胞模型,使用白介素-6(IL-6)拮抗剂塞妥昔单抗(siltuximab)处理LPS诱导的BV2细胞。CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞测量术检测细胞凋亡;ELISA检测IL-6与TNF-α含量;RT-qPCR检测BV2细胞M1极化标志物IL-1β、IFN-γ与M2极化标志物CD206、Arg-1表达;Western blot检测JAK-STAT3信号通路关键蛋白及坏死性凋亡相关蛋白(RIP1)和RIP3表达。结果 LPS诱导后BV2细胞的增殖活力下降,凋亡增加,炎性因子IL-6与TNF-α含量增加(P<0.01)。M1极化标志物IL-1β、IFN-γ表达增加(P<0.01),M2极化标志物CD206、Arg-1表达减少(P<0.01)。JAK-STAT3通路关键蛋白磷酸化增加(P<0.01),RIP1、RIP3蛋白表达增加(P<0.01)。IL-6拮抗剂siltuximab处理细胞后,JAK-ST...     

地西他滨联合丙戊酸钠促进肝癌细胞凋亡的ERK 通路研究

目的:本研究对地西他滨联合丙戊酸钠促进肝癌细胞凋亡的相关机制进行研究,为临床治疗和新药研发提供参考。方法:肝癌细胞HepG2经地西他滨联合丙戊酸钠孵育后,MTT法检测二者对HepG2细胞的抑制率,Real-time PCR及免疫印迹法检测细胞凋亡蛋白Caspase3/9、Bax及Bcl2和ERK信号通路关键蛋白的表达情况。结果:地西他滨联合丙戊酸钠能够有效抑制肝癌细胞的增殖,且二者联用的抑制率明显高于单独应用(P0.05),同时与对照组相比,细胞凋亡蛋白Caspase3、Caspase9及Bax表达明显增强(P0.05),Bcl2表达明显降低(P0.05),且ERK信号通路关键蛋白Ras、Raf及MEK和ERK1/2的表达明显升高,与对照组细胞有显著的统计学差异性(P0.05)。结论:地西他滨联合丙戊酸钠主要通过激活MEK/ERK信号转导通路抑制肝癌细胞HepG2的增殖过程。     

乙肝病毒X蛋白通过激活JAK2/STAT3信号通路调节肾小管上皮细胞凋亡

 目的：观察乙肝病毒X蛋白(HBx)对肾小管上皮细胞凋亡的作用,并探讨其在乙型病毒肝炎相关性肾炎(HBVGN)发病中的分子机制。方法：将构建好的HBx真核表达载体pcDNA3.1(+)-HBx转染至体外培养的人肾近曲小管上皮细胞(HK-2细胞)中。Western blotting法检测转染后目的蛋白的表达及JAK2/STAT3信号通路的活化。细胞免疫荧光检测STAT3及p-STAT3表达水平。CCK-8法检测细胞增殖活性。Hoechst 33342染色观察细胞的形态学改变。透射电镜观察细胞的超微结构及凋亡。Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率。结果：转染目的基因HBx后,p-JAK2及p-STAT3表达水平均显著增加;同时,细胞增殖明显受抑。透射电镜、Hoechst 33342染色及Annexin V/PI双染流式细胞术检测发现HBx促进HK-2细胞凋亡。AG490（JAK2/STAT3信号通路阻断剂）孵育后能够部分阻断JAK2/STAT3信号通路,减少HBx所致细胞凋亡。结论：HBx通过激活JAK2/STAT3信号通路导致肾小管上皮细胞凋亡,可能参与了HBV直接损伤肾组织的致病机制。     

紫杉醇联合顺铂通过Wnt/β-catenin信号通路抑制鼻咽癌肿瘤干细胞增殖并促进其凋亡北大核心

背景:肿瘤干细胞具有自我更新和分化成新肿瘤的能力,会导致肿瘤放化疗不敏感,是肿瘤发生和复发的根源。目的:探索紫杉醇联合顺铂对鼻咽癌干细胞增殖和凋亡的影响并探索其作用的信号通路。方法:免疫磁珠的方法分离培养鼻咽癌干细胞,紫杉醇和顺铂处理细胞,Western blot检测凋亡相关蛋白caspase-3、活化的caspase-3、Bcl-2和β-catenin及下游原癌基因c-myc的表达,用RNA干扰技术敲降β-catenin表达或者使用抑制剂XAV939抑制Wnt/β-catenin通路活性,MTT法检测细胞增殖率,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果与结论:(1)紫杉醇或顺铂均会抑制鼻咽癌干细胞的增殖,促进其凋亡,并且凋亡标志蛋白活化caspase-3表达上升,凋亡抑制蛋白Bcl-2表达下降,联合用药具有协同作用,(2)紫杉醇或顺铂均会抑制Wnt/β-catenin通路的活性及下游靶基因c-myc的表达,抑制Wnt/β-catenin通路活性抑制鼻咽癌干细胞的增殖,促进其凋亡。(3)结果表明,紫杉醇和顺铂可能是通过Wnt/β-catenin信号通路调控鼻咽癌干细胞的增殖和凋亡。     

PARP-1抑制剂对人肝癌细胞HepG2增殖和迁移的抑制作用

目的 研究证实聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(poly ADP ribose polymerase,PARP-1)抑制剂对肿瘤细胞的增殖、凋亡和侵袭有影响,但对肝癌细胞生物学特性的影响尚不清楚,此研究的目的是观察3种不同的PARP-1抑制剂对人肝癌细胞株HepG2增殖、凋亡及迁移的影响及可能机制.方法 MTT检测体外不同浓度的PARP-1抑制剂AG014699,BSI-201,AZD-2281处理后HepG2细胞的增殖;随后选择抑制效果明显的抑制剂AG014699和BSI-201处理HepG2;Western印迹法检测HepG2细胞Casepase3、Casepase8、Bax、Bcl-2、PTEN、Timp3、MMP3蛋白的表达水平.Transwell实验检测AG014699和BSI-201对HepG2细胞迁移的影响.结果 AG014699,BSI-201,AZD-2281均具有抑制HepG2细胞增殖的作用,具有时间和浓度依赖性,作用HepG2细胞48 h后的Caspase3、Caspase8、Bax、PTEN、Timp3蛋白的表达水平随药物浓度的增加而增高,而Bcl-2和MMP3蛋白水平随药物浓度的增加而降低且与对照组相比有显著性差异(P<0.01).结论 在体外PARP-1抑制剂AG014699、BSI-201、AZD-2281明显抑制HepG2细胞的增殖,但AG014699和BSI-201展示较好的敏感性,同时二者诱导肝癌细胞凋亡和抑制肝癌细胞的迁移,这其中的机制可能与影响凋亡信号的通路以及迁移相关蛋白的表达有关.