地黄多糖干预对低剂量X线照射小鼠生精细胞P53和bcl-2蛋白表达的影响

目的探讨地黄多糖干预对低剂量X线照射损伤小鼠生精细胞中p53和bcl-2蛋白水平表达的影响。方法选择70只雄性昆明小鼠(5~6周龄;体重22±2g),随机分为:单纯照射组(1~3组),给药照射组(4~9组)和正常对照组(10组)。所有小鼠自照射前5d开始每天灌胃一次,分别给予0.2mL生理盐水灌胃(1~3组和10组)和地黄多糖(溶于0.2mL生理盐水)200mg/Kg(4~6组)、800mg/Kg(7~9组),共24次。照射组自第6天起采用X线每天一次全身照射,共15次;单次照射剂量分别为0.025、0.075、0.100Gy,剂量率为0.025Gy/min。所有小鼠在末次照射结束后48小时内脱颈法处死摘取睾丸,经Bouin氏液固定24h后石蜡包埋、切片。采用HE染色观察睾丸生精小管形态结构,免疫组织化学法检测生精细胞中P53及bcl-2蛋白的表达水平。结果随着单次低剂量X线照射剂量增加,HE染色可见照射组小鼠睾丸生精小管各级生精细胞数目逐渐减少,结构排列出现不同程度的紊乱;免疫组织化学可见生精细胞中p53蛋白表达水平逐渐增加,而bcl-2蛋白表达水平则逐渐下降。给予200mg/Kg及800mg/Kg地黄多糖灌胃能下调生精细胞中p53蛋白和上调bcl-2蛋白表达水平,但后者对p53及bcl-2蛋白表达水平调节作用更明显,两者具有显著统计学意义(P0.05)。结论地黄多糖对低剂量X线全身照射小鼠的损伤生殖功能有一定保护作用,其抗辐射作用机制部分可能与下调生精细胞中p53蛋白、上调bcl-2蛋白表达水平有关。     

锌缺乏影响小鼠睾丸TGF-β1和FAK的表达并致圆形精子细胞脱落

目的:探讨锌缺乏致小鼠精子发生障碍的机制。方法:4周龄CD-1雄性小鼠随机分为实验组(n=20)和对照组(n=20),实验组喂食低锌饲料(锌离子浓度为0. 85 ppm),对照组喂食锌正常饲料(锌离子浓度为30 ppm)。喂养5周后取睾丸和附睾标本,原子吸收光谱法检测睾丸组织中锌离子浓度,HE染色观察睾丸和附睾组织病理改变;采用H1T2和TRA54抗体进行免疫荧光双重染色鉴定脱落细胞的性质,Western印迹检测睾丸中ZO-1、FAK、TGF-β1、TGF-β2、TNF-α、Par6的表达。结果:实验组锌离子浓度显著低于对照组[(140. 59±16. 22)μg/gvs(218. 44±31. 92)μg/g,P 0. 05]。HE染色见对照组睾丸组织结构正常,生精小管密集,生精上皮完整,各级生精细胞层次清楚、排列有序,异常的生精小管占全部生精小管比例为0. 01±0. 01;实验组睾丸生精上皮退化,精子细胞数量减少,支持细胞胞质空泡化,生精小管闭塞,异常的生精小管数(0. 75±0. 04)显著多于对照组(P 0. 01),并在异常的生精小管和附睾的头、体、尾部发现脱落的细胞。H1T2和TRA54免疫荧光双重染色结果显示实验组附睾中脱落的细胞可能是圆形精子细胞。Western印迹结果显示对照组和实验组的蛋白表达水平分别为:ZO-1(1. 130±0. 054、0. 904±0. 052),FAK(0. 219±0. 048、0. 144±0. 047),Par6(0. 145±0. 047、0. 129±0. 049),TGF-β1(0. 586±0. 048、0. 024±0. 058),TGF-β2(0. 142±0. 048、0. 116±0. 047),TNF-α(0. 458±0. 023、0. 469±0. 022),其中实验组FAK和TGF-β1蛋白表达水平显著低于对照组(P 0. 05、0. 01)。结论:锌缺乏能够引起小鼠睾丸组织病理改变,导致睾丸圆形精子细胞脱落,FAK和TGF-β1蛋白可能在锌缺乏引起小鼠睾丸病理改变过程中有重要的作用。     

单次热应激处理对小鼠睾丸生精细胞的影响

目的:探讨单次热应激对小鼠睾丸生精功能可复性研究。方法:C57雄性小鼠36只,随机按1、7、14 d各分为对照组(n=6)和热应激组(n=6)。热应激组和对照组小鼠下腹部分别在43℃和25℃水浴中干预15 min,于处理后1、7、14 d取材。计算睾丸器官指数,HE染色观察睾丸组织结构变化,免疫组化染色检测早幼粒白血病锌指蛋白(PLZF)和联会复合体蛋白3(SCP-3)在睾丸组织中的定位及表达,Western印迹检测PLZF蛋白表达水平。结果:热应激组小鼠睾丸器官指数明显低于对照组(P0.01)。HE染色可见,热应激组与对照组相比,热应激后第1天生精细胞排列松散,散落在生精小管中;第7天生精小管萎缩,排列疏松,生精细胞明显减少;第14天生精小管排列较为紧密,生精细胞数量增加,生精细胞层数增多。与对照组相比第1、7天热应激组SCP-3标记的精母细胞明显减少,第14天精母细胞数量开始恢复。Western印迹检测结果显示,PLZF蛋白在热应激处理后1 d表达量显著降低(0.19±0.02 vs 0.64±0.03,P0.01),第7、14天又迅速增加(0.77±0.02、0.77±0.02),且显著高于对照组(P0.01)。结论:小鼠睾丸热应激处理后可致生精功能发生障碍,随着时间的推移,这种损伤具有可复性。     

苯甲酸雌二醇诱导不育小鼠睾丸中生精细胞增殖紊乱的研究

目的:探讨外源性雌激素苯甲酸雌二醇(EB)对诱导雄性不育小鼠中生精细胞增殖紊乱的影响。方法:60只雄性昆明小鼠随机分为3组,对照组肌肉注射150μl玉米油,EB处理组注射浓度分别为5、10 mg/kg的EB,隔天1次,持续4周。实验结束后取睾丸称其质量并计算睾丸指数;睾丸、附睾尾常规石蜡切片,HE染色;附睾尾制备精子悬液进行精子计数;免疫组化检测睾丸PCNA表达;qRT-PCR分析睾丸细胞周期蛋白A1、细胞周期蛋白B1、VASA、p53的表达变化;Western印迹检测p53及磷酸化p53蛋白表达。结果:与对照组相比,EB处理组小鼠睾丸指数显著下降[(0.56±0.09)%vs(0.43±0.08)%、(0.38±0.10)%,P0.05],精子悬液镜下观察未见精子,HE染色附睾管内未见精子;生精小管中精原细胞、初级精母细胞及支持细胞数量显著下降(P0.05)。免疫组化结果显示,与对照组相比,EB处理组生精小管中细胞PCNA阳性表达细胞数量显著下降(P0.05)。qRTPCR结果表明EB处理组PCNA、细胞周期蛋白A1、细胞周期蛋白B1、VASA mRNA表达与对照组相比显著下降(P0.05);p53表达随EB剂量升高而显著升高(P0.05)。Western印迹结果显示,与对照组相比,EB处理组p53及磷酸化p53蛋白表达水平显著升高,且存在剂量依赖效应,10 mg/kg组显著高于5 mg/kg组(P0.05)。结论:EB以剂量依赖的方式下调细胞周期相关因子表达抑制生精细胞的增殖,是导致雄性不育小鼠睾丸中生精细胞增殖紊乱的重要原因。     

磷酸甘油酸变位酶1在单次热应激小鼠睾丸中的表达变化

目的:探讨磷酸甘油酸变位酶1(PGAM1)在单次热应激致小鼠睾丸中的表达变化。方法:C57雄性小鼠32只,随机分为对照组(n=16)和热应激组(n=16)。热应激组和对照组小鼠下腹部分别置于43℃和25℃水浴中干预15 min,于处理后1、7 d取睾丸组织。HE检测睾丸组织细胞形态改变,免疫组化染色检测PGAM1蛋白定位及表达,Western印迹检测PGAM1蛋白表达水平。结果:HE结果显示,在热应激后小鼠睾丸体积显著减小,生精小管结构紊乱,细胞数量减少,第7天后细胞基本消失。免疫组化显示,PGAM1蛋白在睾丸生精小管广泛表达,热应激1天后睾丸组织中PGAM1的表达显著高于对照组,第7天睾丸组织中PGAM1表达较第1天下调,但仍显著高于对照组。Western印迹检测显示,与对照组相比,热应激后PGAM1蛋白表达明显增加。结论:小鼠睾丸热应激处理后PGAM1蛋白表达量在睾丸中出现动态变化,这种变化与热应激后睾丸生精细胞的增殖分裂相关。     

麒麟丸对无精子症模型小鼠睾丸生精功能的影响

目的:探讨麒麟丸是否促进无精子症模型小鼠生精功能恢复,揭示其调控睾丸生精功能的机制。方法:取15只4周龄ICR雄性小鼠,随机分成模型组、麒麟丸低剂量组、麒麟丸高剂量组,每组5只。采用白消安建立无精子症小鼠模型。建模后麒麟丸组每天给予不同剂量麒麟丸灌胃给药[低剂量组和高剂量组分别为2 000、8 000 mg/(kg·d)],模型组予正常饮食处理,28 d后颈椎脱臼法处死小鼠。HE染色检测小鼠附睾和睾丸组织显微结构,Western印迹检测小鼠睾丸中各级生精细胞、支持细胞和间质细胞特异性标志物表达情况,免疫荧光染色检测睾丸内这些标志物的定位与表达情况。结果:模型组小鼠睾丸中各级生精细胞数量明显减少,大多数附睾管中未见精子; Johnsen评分(5. 2±0. 5)分。麒麟丸高剂量组小鼠生精小管腔内生精细胞排列紧密、层次分明,附睾管腔中见大量精子,未见非精子细胞成分; Johnsen评分(9. 4±0. 6)分。麒麟丸低剂量组小鼠睾丸中各级生精细胞数量相比较模型组有所提升,但是对比高剂量组仍明显减少,部分附睾管中可见精子; Johnsen评分(7. 6±0. 6)分。Johnsen评分模型组显著低于麒麟丸高、低剂量组(P 0. 01),而且麒麟丸高、低剂量组间也有统计学差异(P 0. 05)。Western印迹结果显示,支持细胞标志物GATA4、WT1、SCF、BMP4的表达水平模型组均显著低于麒麟丸高、低剂量组(P 0. 01),高剂量组显著高于低剂量组(P 0. 05或0. 01);精原干细胞和未分化精原细胞标志物UCHL1、STRA8、NGN3、PLZF 3组小鼠间无显著差异;精母细胞标志物DMC1、SYCP3模型组也均显著低于麒麟丸高、低剂量组(P 0. 05或P 0. 01),高剂量组显著高于低剂量组(P 0. 05或P 0. 01)。免疫荧光染色结果显示,SYCP3的表达与Western印迹结果一致; Ki67荧光信号分布在精原细胞,其荧光信号强度模型组低于麒麟丸高、低剂量组;精子顶体标志物PNA主要分布在生精小管内,模型组小鼠没有出现明显的点状信号,麒麟丸高、低剂量组可见大量的荧光信号。结论:麒麟丸可能是通过改善睾丸中支持细胞的功能,从而促进精原细胞进入减数分裂,增加精子的生成。     

六味地黄丸降低手机频率电磁辐射对大鼠睾丸组织的损伤

目的:观察六味地黄丸对手机频率电磁辐射雄性大鼠睾丸组织形态学、氧化损伤和细胞凋亡的影响。方法:30只雄性SD大鼠随机分为正常组、辐射组、六味地黄丸组,每组各10只。正常组不辐射,辐射组和六味地黄丸组大鼠每天暴露于900 MHz手机频率辐射4 h共18 d;六味地黄丸组大鼠每日灌胃六味地黄丸悬液(1 ml/100 g体重),其他组大鼠每天灌胃等量纯净水。实验结束后腹腔麻醉取材处死大鼠,分别取睾丸组织固定和冷冻,常规HE染色观察组织形态学变化,比色法检测睾丸组织丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)水平,免疫组化法观察睾丸细胞bax,bcl-2蛋白表达的平均光度值。结果:与正常组相比,辐射组大鼠睾丸生精小管细胞结构松散,精母细胞层数减少,内有空洞出现;睾丸组织MDA水平显著升高[(0.36±0.07)μmol/g prot vs(0.25±0.06)μmol/g prot,P0.05],GSH水平显著降低[(42.10±5.08)mg/g prot vs(52.29±4.16)mg/g prot,P0.05];辐射组大鼠睾丸生精细胞bax蛋白表达显著增强(0.91±0.10 vs 0.21±0.01,P0.01),bcl-2蛋白表达显著减弱(0.18±0.07 vs 0.70±0.94,P0.01)。六味地黄丸组大鼠睾丸组织形态学接近正常,与辐射组比较,睾丸组织MDA含量显著降低[(0.30±0.05)μmol/g prot,P0.05],GSH含量无明显变化[(45.34±5.21)mg/g prot,P0.05],睾丸生精细胞bax蛋白表达(0.41±0.05)明显减弱(P0.01),bcl-2蛋白表达(0.27±0.08)明显增强(P0.01)。结论:六味地黄丸可改善手机频率电磁辐射造成的大鼠睾丸组织结构损伤,降低睾丸组织氧化损伤,减少睾丸细胞凋亡。     

小鼠睾丸消化细胞异体移植重构生精小管的研究

目的:采用免疫缺陷小鼠作为受体,通过对小鼠睾丸消化细胞异位移植后不同时期移植物的研究,观察生精小管重构、生精细胞归巢及精子发生情况。方法:取新生ICR小鼠的睾丸消化成单细胞悬液,将其与Matrigel基质胶混匀后移植于雄性裸鼠背部皮下,术后裸鼠行去势。移植后分别于4、6、8、10周处死5只裸鼠,计算移植成功率,取移植物测量直径,并进行HE染色和免疫组化检测,观察生精小管的重构、生精细胞归巢及精子发生情况。结果:20只受体鼠接受睾丸消化细胞移植后全部存活。睾丸消化细胞移植后10周内可见明显隆起的包块,包块直径由第4周的(3.91±0.71)mm增加到(6.69±0.50)mm,移植物表面有血管生成。对移植物石蜡切片进行HE染色可见生精小管样结构,部分生精小管管腔内可见由精原细胞发育至精子细胞的各级生殖细胞,未见明显精子产生。对8周移植物进行免疫组化观察,可见生殖细胞标志物Mvh、支持细胞标志物Gata4和间质细胞标志物P450Scc表达。结论:新生小鼠睾丸消化细胞移植于裸鼠背部皮下后可重构生精小管,为研究睾丸组织工程及睾丸发育和精子发生过程中睾丸各组成细胞之间的相互作用提供了理想的研究模型。     

JMY蛋白在小鼠睾丸中的定位和作用研究

目的研究JMY蛋白在小鼠睾丸组织中的表达与定位,探索JMY在小鼠生精上皮中的功能。方法通过免疫荧光技术和免疫印迹技术确定JMY在小鼠睾丸中的表达和定位情况。随后,分别建立支持细胞和原始生殖细胞特异性的Jmy条件基因敲除小鼠模型,并利用形态学分析、生殖能力评估和血睾屏障功能分析探索JMY缺失对精子发生的影响。结果 JMY在睾丸支持细胞和精子细胞表达。支持细胞特异性的Jmy条件基因敲除可导致雄鼠生育力、精子运动力和精子数量显著下降(P0.05),且生精小管中细胞排列紊乱,生精细胞大量脱落,血睾屏障完整性受损;另一方面,原始生殖细胞特异性的Jmy条件基因敲除雄鼠与野生型小鼠相比,其生育力、精子质量、睾丸结构无显著差异。结论在生精小管支持细胞中,JMY参与维持血睾屏障功能,进而对生精上皮结构和精子发生具有重要作用。     

pH2AX蛋白在单次热应激致小鼠睾丸生殖功能可逆性中的表达变化

目的:探讨pH2AX在单次热应激致小鼠睾丸生殖功能可逆性中的表达变化。方法:C57雄性小鼠24只,随机按1、7、14 d分为对照组(n=6)和热应激组(n=6)。热应激组和对照组小鼠下腹部分别置于43℃和25℃水浴中干预15 min,于处理后1、7、14 d取睾丸组织。TUNEL检测睾丸细胞凋亡情况,免疫组化染色检测pH2AX蛋白定位及表达,Western印迹检测pH2AX蛋白表达水平。结果:TUNEL结果显示,在热应激后的第1天生精小管中的凋亡细胞数量最多,第7、14天细胞凋亡基本消失。免疫组化显示,pH2AX蛋白在睾丸生精小管基底膜处细胞核表达。Western印迹检测显示,与对照组相比,热应激后的第1天,pH2AX蛋白表达明显增加(0.47±0.02 vs 1.61±0.04,P0.01);第7天(0.85±0.03)与热应激处理第1天相比pH2AX蛋白表达显著减少(P0.01);第14天(1.72±0.02)与热应激处理第1、7天及对照组相比pH2AX蛋白表达显著增加(P均0.01)。结论:小鼠睾丸热应激处理后pH2AX蛋白表达量在睾丸中出现动态变化,这种变化与热应激后睾丸生精细胞的增殖分裂相关。     

牙体牙弓颌骨阻力中心及其临床意义

牙体、牙弓及颌骨的阻力中心在正畸矫治力系统中具有重要的意义,也是正畸学领域争论较多的一个问题。Dermaut等研究表明,当力作用于物体阻力中心时,物体将发生平动,否则将发生平动和转动的复合运动。目前,国内外多数学者认为牙体、牙弓及颌骨存在阻力中心,但其位置存在争议。本文就牙体、牙弓及颌骨的阻力中心及其临床意义作一综述。     

Hazards and complications of endoscopic transurethral ureterolithotripsy and lithoextraction and means of prevention

Complications related to ureterolithotomy and ultrasonic ureterolithotripsy performed under the control of visual endoscope were analyzed in 86 ureterolithiasis patients, methods of their prevention discussed. All the aforementioned complications were distributed into three groups: inapplicability of surgery due to anatomic and functional defects of lower and upper urinary tracts, intraoperative, and postoperative complications. The commonest ones were ureteral abruption and perforation, acute pyelonephritis, temporary vesicoureteral reflux. Their control measures were considered as relative methods of treatment: immediate surgical intervention in case of ureteral abruption, renal catheterization in patients with insignificant ureteral perforation or acute pyelonephritis. Adequate ureteroscopy, careful consideration of pro- and contraindications, catheterization of renal pelvis and urinary bladder performed within 2-3 days after the surgery and adequate antibacterial therapy are the most decisive steps in the control of aforementioned complications.     

Characterisation and differentiation of chondroblastomas and chondromyxoidfibromas - presence and expression of collagen types I and II

AIM: Chondroblastomas and chondromyxoidfiibromas are rare benign skeletal neoplasms with reported overlapping histology. Aim of this study was to analyse the biochemical composition of the matrix of these tumour entities in order to further characterise the cellular phenotypes of these neoplasms using typical cell biological marker genes. METHODS: The matrix compositions of chondroblastomas and chondromyxoidfibromas were analyzed by HE-histology, histochemistry, and immunolocalization techniques. Cellular gene expression patterns were detected by mRNA in situ hybridization. RESULTS: Chondroblastomas are rich in collagen type I and show foci of an osteoid-like matrix, whereas collagen type II as a typical marker of chondrocytic differentiation was not detected in any of the specimens. Chondromyxoidfiibromas had foci of chondroid appearance with chondroblastic cellular differentiation characterised by collagen type II expression. CONCLUSION: These results characterise chondroblastomas and chondromyxoidfiibromas as skeletal neoplasms that have a different biology and which can be distinguished by matrix protein expression products: collagen type II, the typical marker of chondroblast differentiation, could only be detected in chondromyxoidfibromas, but not in chondroblastomas. Thus, both neoplasms are clearly different on the cell biological level.     

Histochemical and contractile properties of striated muscles of urethra and levator ani of dogs and sheep

AIMS: To understand their possible importance in long- and short-term control of continence, some properties of the striated muscles of the urethra and pelvic floor (levator ani) of dogs and sheep were investigated, especially fiber types and contractile characteristics. MATERIALS AND METHODS: Striated muscles of urethra and levator ani of 29 male and 6 female dogs and 11 male and 6 female sheep were removed and cut into strips. Some strips were frozen and stained for ATPase at pH 9.4 and 4.3 for fiber typing; others were set up in an organ bath to study contractile responses to nerve stimulation. RESULTS: All muscles contained both type I (slow) and type II fibers, ranging from 97% type II in female greyhound urethra to 60% in female sheep levator ani. For each muscle, there were fewer type II muscles in sheep than in dog. The diameters of the urethral fibers were about 60% of the levator ani in dogs and 34% in sheep. Contraction of the urethral muscle was faster than for levator ani and declined to about 80% of the peak, 500 msec after the beginning of stimulation at 20 Hz. The levator ani contraction rose to a steady level as long as stimulation continued. CONCLUSIONS: Both the levator ani and urethral striated muscles contain slow and fast fiber types. The levator ani muscles are capable of sustained contraction with rapid onset which will produce long-term closure of the urethra. The circular urethral muscle contraction was faster but less well maintained.