cklfsf 2a在小鼠睾丸发育中的基因表达和蛋白定位

目的研究趋化素样因子2a（cklfsf 2a）在小鼠睾丸中的基因调控和蛋白定位。方法采用RT-PCR方法检测cklfsf 2a基因在不同周龄小鼠睾丸组织中的表达情况，制备cklfsf 2a多克隆抗体，分别采用免疫组织化学和原位杂交方法检测cklfsf 2a蛋白和mRNA在小鼠睾丸组织中的定位。结果cklfsf 2a mRNA在出生后14d内出现，表达量逐渐增加，在成年前达到高峰并持续表达。cklfsf 2a蛋白和mRNA均特异性的表达于睾丸初级精母细胞。结论cklfsf 2a基因存在发育的表达调控，随着睾丸发育的日趋成熟，表达量逐渐增加，其作用可能和精母细胞的发育有关。     

GATA-4在小鼠睾丸中的表达定位研究

目的:观察小鼠睾丸内GATA-4免疫反应产物的特征与分布。方法:选取刚出生、2、4、6周雄性B6SJLF1/J小鼠各6只,取睾丸进行石蜡切片,应用免疫组化ABC法,DAB显色,观察GATA-4在不同时期睾丸中的表达情况。结果:GATA-4免疫反应产物在以上4个阶段小鼠睾丸Sertoli细胞、Leydig细胞均有分布,且4、6周组小鼠睾丸Leydig细胞阳性率比刚出生和2周组小鼠更高(P<0.01);但4、6周组小鼠,除以上两种细胞外,生精细胞中也有分布,6周组小鼠比4周组小鼠阳性细胞率高(P<0.01)。结论:小鼠睾丸内存在GATA-4,为研究GATA-4在睾丸性别决定和分化以及激素调控方面提供了形态学依据。     

Attractin蛋白在大鼠睾丸和附睾中的免疫组织化学定位

目的 :探讨Attractin蛋白在成熟大鼠睾丸和附睾组织中的分布。　方法 :健康成年雄性SD大鼠 2 0只 ,灌流取睾丸和附睾组织固定 ,石蜡包埋和冰冻切片。用免疫组化法和间接免疫荧光方法检测Attractin蛋白在成熟大鼠睾丸和附睾组织中的表达。　结果 :睾丸组织间质细胞、睾丸精曲小管管周肌样细胞和各级生精细胞 (精原细胞、初级精母细胞和精子细胞 )、支持细胞呈阳性反应 ,主要表达于胞膜及胞质。睾丸间质细胞表达略强于生精细胞。附睾头、体、尾均未见表达。　结论 :Attractin蛋白在成熟大鼠睾丸组织间质细胞和生精细胞中有较强的表达 ,其生理功能尚有待进一步探讨。     

趋化素样因子超家族在小鼠睾丸中的基因发育表达调控和蛋白表达定位

目的研究CKLFSF2小鼠同源序列cklfsf26基因在睾丸组织发育中的表达和定位,为其功能研究做出提示。方法利用RT-PCR方法检测cklfsf26基因在不同周龄小鼠睾丸组织中的表达情况；制备cklfsf2b多克隆抗体,利用免疫组织化学方法,检测cklfsf2b蛋白在小鼠睾丸组织中的表达定位。结果cklfsf2bmRNA在出生后第2周内出现,表达量逐渐增加,在成年前即达高峰并持续表达。cklfsf2b蛋白特异性的表达于睾丸Leydig细胞和Sertoli细胞,阳性信号均位于胞质内。结论cklfsf2b基因存在发育的表达调控,随着睾丸发育的日趋成熟,表达量逐渐增加：在Leydig细胞和Sertoli细胞的特异性表达表明其在睾酮合成和精子发生中均可能发挥作用,但其具体功能还需深入研究。     

神经调节蛋白对小鼠睾丸精原细胞增殖作用的研究

目的:研究神经调节蛋白(NRG)对小鼠睾丸精原细胞增殖的影响。方法:将纯化的NRG1β或NRG3的类EGF区域的重组蛋白分别添加到DMEM培养液中,终浓度分别为50、100、200 ng/m l,进行小鼠睾丸断片的器官培养,随后进行B rdU免疫组化染色,检测精原细胞的增殖效应。结果:添加NRG后可以促进精原细胞的增殖活性,与对照组相比具有显著性差异(P<0.05)。按NRG1β50、100、200 ng/m l、NRG3 50、100、200 ng/m l的顺序,精原细胞的增殖活性分别是对照组的1.69、1.55、1.86、1.35、1.54、2.11倍。结论:NRG1β、NRG3能促进小鼠精原细胞的增殖。可以期待NRG应用在男性不育症的治疗上。     

Dctn1在小鼠睾丸和精子中的定位及在变形过程中的功能初探

目的:探讨动力蛋白激活蛋白1(Dctn1)在小鼠精子变形过程中的作用。方法:通过Western印迹及间接免疫荧光技术分析Dctn1在小鼠睾丸及精子中的表达和定位。分别运用体外GC2-spd细胞系以及在体两种策略筛选出具有最高干扰效率的Dctn1的小干扰RNA(siRNA),进而应用睾丸网微注射技术,将混有示踪剂(0.4%台盼蓝)的Dctn1 siRNA注射至3周ICR小鼠的生精小管内,对照侧的睾丸注射阴性对照siRNA,正常组为不加任何处理的3周ICR小鼠。在注射后第3周取附睾尾部精子进行形态学分析。结果:Dctn1主要定位于精子的尾部。干涉后Dctn1 siRNA组的精子尾部畸形率为(23.57±0.55)%,明显高于对照组[(12.35±2.29)%,P<0.01,n=3],而正常组精子尾部畸形率为(3.37±0.69)%。结论:Dctn1在精子变形中可能发挥重要作用,它主要影响精子尾部的形成。     

GGNBP2与GGN在小鼠睾丸生精细胞定位及作用

目的探讨配子生成素结合蛋白2(GGNBP2)和配子生成素(GGN)在小鼠睾丸生殖过程中的细胞定位以及作用,初步阐明GGNBP2缺失引起睾丸生精功能障碍的机制。方法采用免疫沉淀方法检测GGNBP2与GGN相互作用;免疫荧光、免疫组化检测GGNBP2与GGN细胞定位;PCR检测野生型Ggnbp2基因敲除型小鼠睾丸生殖细胞GGN mRNA表达;Western blot检测其GGN蛋白表达。结果 GGNBP2与GGN相互作用,两种蛋白共同定位于精母细胞和精子细胞(Golgi phase,Cap phase)中的细胞核和胞浆,精子细胞(Acrosome phase,Maturation phases)中的顶体和尾部,GGNBP2缺失引起GGNmRNA水平和蛋白水平减低,在精母细胞中GGN定位改变。结论 Ggnbp2基因敲除引起小鼠生精功能缺陷可能通过降低GGN表达,改变GGN细胞定位,DNA双链损伤修复机制受损。     

双向凝胶电泳和质谱技术在睾丸蛋白表达研究中的应用

目的 :探讨双向凝胶电泳和质谱技术在睾丸蛋白表达研究中的应用。　方法 :用双向凝胶电泳分离成年雄性ICR小鼠睾丸总蛋白 ;从胶上切下 2个蛋白点 ,经胶内原位酶解后 ,用质谱仪测得其肽质量指纹谱 ;再通过数据库检索鉴定蛋白质。　结果 :从胶上切下的 2个蛋白点数据库检索结果是小鼠血清白蛋白和蛋白质二硫化物异构酶。　结论 :用双向凝胶电泳分离睾丸蛋白样品取得了很高的分辨率 ,质谱技术鉴定蛋白快速方便 ,可用于从蛋白质组水平上研究睾丸表达的蛋白     

RXFP2在己烯雌酚染毒小鼠睾丸引带细胞中的作用机制研究

目的通过检测己烯雌酚(DES)对小鼠睾丸引带细胞形态与增殖性影响过程中松弛素家族肽受体2(RXFP2)的表达水平,探讨RXFP2在外源性雌激素影响小鼠睾丸引带细胞中的可能作用机制。方法小鼠睾丸引带组织进行细胞培养,传代后随机分为正常组、溶剂对照组及实验组,实验组分别加入DES终浓度为0.01、0.10、1.00、10.00μg/m L作用48 h。观察细胞形态变化,CCK-8检测其增殖情况,应用免疫荧光和Western Blot对小鼠睾丸引带细胞中RXFP2进行定位和蛋白定量分析。结果正常组细胞呈成纤维细胞型生长,同源性好。各实验组随DES剂量增加细胞数及细胞生存率均下降,细胞增殖明显受抑制,失去正常形态,胞浆收缩,胞体形态不规则。免疫荧光显示RXFP2高表达于细胞膜上。蛋白定量分析发现各实验组RXFP2水平与正常组相比表达降低,且差异有统计学意义。结论DES可影响小鼠睾丸引带细胞形态与增殖性以及RXFP2蛋白的表达,推测DES可能通过影响RXFP2信号系统介导睾丸引带的发育,进而影响睾丸的下降。     

内质网蛋白27(ERp27)在小鼠卵母细胞的定位及在精卵融合中的作用

目的探讨内质网蛋白27(ERp27)在小鼠卵母细胞的表达定位,以及该蛋白在小鼠精卵融合中的作用。方法将性成熟后的小鼠促排卵后,取出卵母细胞,并分为空白对照组(不做任何处理)、阴性对照组(与正常血清IgG共孵育)、抗ERp27抗体封闭组(与抗ERp27单克隆抗体共孵育),用免疫荧光法检测ERp27在小鼠卵母细胞上的定位;通过穿卵实验观察抗ERp27抗体对受精率、受精指数的影响。结果免疫荧光结果显示ERp27在小鼠MI期卵母细胞主要分布在胞浆的周边区域中,在MⅡ期卵母细胞则均匀分布于卵母细胞胞质;穿卵实验结果显示,空白对照组、阴性对照组及抗ERp27抗体封闭组受精率分别为90.91%、89.13%和76.00%,差异无统计学意义(P0.05),受精指数分别为(5.20±1.32)、(5.40±1.07)和(3.20±0.92),抗ERp27抗体封闭组的受精指数显著低于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论 ERp27在小鼠MⅠ及MⅡ期卵母细胞中均有表达,该蛋白可能与精卵融合有关。     

TNP2基因在小鼠睾丸组织中的表达研究

目的 筛选与精子发生相关的基因.方法 将4d、9d、18d、35d、54d和6月龄小鼠睾丸组织cDNA探针与Affymetrix全基因组芯片进行杂交,筛选出差异表达的基因.通过RT-PCR分析差异表达基因在小鼠睾丸不同发育阶段中的表达.结果 对Affymetrix全基因组芯片杂交结果分析后,筛选得到1个差异表达杂交点,通过NCBI网站与小鼠全基因组序列Blast分析可知,该差异表达基因是TNP2基因.小鼠TNP2基因全长724bp,其编码框大小为375bp.RT-PCR结果表明TNP2基因在小鼠21d龄及之前的睾丸中没有表达,在35d龄睾丸开始高表达.结论 TNP2基因为小鼠年龄依赖性表达基因,小鼠TNP2基因的表达与小鼠精子发生过程有很强的一致性,因此,可以推测该基因在精子发生中可能起重要作用.     

睾丸特异性基因TSF22在小鼠中的表达研究

目的 筛选与精子发生相关的基因。方法 将4、9、18、35、54日龄和6月龄小鼠睾丸组织cDNA探针与Affymetrix全基因组芯片进行杂交，筛选出差异表达的基因。利用网络信息资源对该基因进行生物学信息分析。RT-PCR分析该基因在小鼠睾丸不同发育阶段及小鼠不同组织中的表达。结果 芯片结果分析筛选出一个差异表达杂交点（GenBank登录号：NM_199034），生物信息学分析发现该基因全长1597bp，含有570bp的完整ORF，编码190个氨基酸、分子量为22．106kDa的蛋白质，我们将其命名为TSF22。RT-PCR分析表明TSF22基因特异性表达于睾丸组织及18日龄小鼠睾丸中。结论 TSF22基因的表达与小鼠精子发生的过程一致，可能在精子发生中起重要作用。     

睾丸特异性新基因TSC23在小鼠和人睾丸组织中的表达分析

目的筛选与精子发生相关的睾丸特异性新基因，并探讨其在精子发生过程中所起的作用。方法将不同发育阶段的小鼠睾丸组织cDNA探针与Affymetrix全基因组芯片进行杂交，通过杂交信号的比较，筛选出差异表达的基因。用生物学信息软件对该基因进行生物学信息分析。RT-PCR分析该基因在小鼠不同发育阶段睾丸、小鼠不同组织及人不同组织中的表达。结果通过4、9、18、35、54d和6月龄小鼠睾丸的芯片信号比较筛选出一个差异表达基因（GenBank登录号：AK016041），全长有803bp，含有606bp的完整ORF，编码一个有201氨基酸、分子量为22．686kDa的蛋白质，我们将其命名为TSC23。亚细胞定位预测显示TSC23基因可能在细胞核中表达。SMART功能域分析表明氨基酸序列1-18区域为信号肽功能域，36-58区域为穿膜功能域。TSC23蛋白在人的同源基因GenBank登录号为XM-371248，在201个氨基酸区域内有75％的同源性。RT-PCR分析表明TSC23基因特异性表达于人和小鼠睾丸组织中，且只在38d和6月龄小鼠睾丸中表达。结论TSC23为人和小鼠睾丸特异性表达基因，只在38d和6月龄小鼠睾丸中表达，提示其可能在精子发生中起着重要作用。     

Tesmin基因在小鼠睾丸中的表达分析

目的 研究Tesmin基因的表达特点值.方法 将4d、9d、18d、35d、54d和6月龄小鼠睾丸组织提取RNA,通过RT-PCR分析差异表达基因Tesmin在小鼠睾丸不同发育阶段中的表达.结果 基因芯片结果显示4d、9d、18d、35d、54d和6月龄小鼠睾丸中分别是31.4(A)、34(A),1292(P)、865.6(P)、977.2(P) 和830.7(P),代表Tesmin基因在4d,9d小鼠中无表达,18d龄后开始高表达,RT-PCR结果表明小鼠Tesmin基因在小鼠9d龄及之前的睾丸中没有表达,在18d龄后睾丸中开始高表达,与基因芯片分析结果相一致.结论 Tesmin基因为小鼠年龄依赖性表达基因,小鼠Tesmin基因的表达与小鼠精子发生有很强的一致性,推测该基因可能在精子发生中起重要作用.     

Cox7a2荧光载体构建及其在小鼠睾丸Leydig细胞表达和定位研究

目的构建Cox7a2的荧光表达载体,研究其在小鼠睾丸Leydig细胞中的表达和定位。方法原代培养小鼠睾丸Leydig细胞并利用3β-HSD染色法鉴定,应用PCR方法研究Cox7a2在小鼠睾丸Leydig细胞中的表达。利用BglⅡ和EcoRⅠ酶切位点把Cox7a2克隆到pEYFP-N1。细胞转染和细胞荧光显微镜技术观察YFP-Cox7a2定位。结果Cox7a2表达在原代培养的小鼠睾丸Leydig细胞中。绿色荧光的YFP-Cox7a2和红色荧光的线粒体标记物- Mitotracker有完全的共定位。结论Cox7a2在小鼠睾丸Leydig细胞表达,成功构建Cox7a2真核荧光蛋白表达载体,明确YFP-Cox7a2定位在Leydig细胞的线粒体。这些结果将对老年男性睾丸间质细胞合成功能障碍的研究提供重要的信息。     

冷诱导RNA结合蛋白在BALB/c小鼠睾丸生精细胞凋亡中的作用及机制

我们利用RNA体内干扰技术降低正常小鼠睾丸组织中冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)蛋白的表达,观察RNA干扰后小鼠睾丸重量、生精小管形态学变化及生精细胞凋亡的改变,探讨CIRP与生精功能的关系. 一、材料与方法 1.实验动物:30只BALB/c雄性,鼠龄8周,体质量18 ～20 g. 2.动物模型的建立:(1)小干扰RNA(siRNA)干扰组:在体视显微镜下于睾丸网内注入30μl的siRNA序列和转染试剂混合物.(2)siRNA阴性对照组即将siRNA序列换作无意义的RNA序列,其他同上.(3)正常对照组:未作任何处理.     

金属硫蛋白在男性生殖系统中的定位及作用

金属硫蛋白(MT)是一类低相对分子质量、富含半胱氨酸的细胞内蛋白,在人类至少有10种MT功能性基因亚型存在。MT与机体许多病理生理学过程有关,如金属离子的稳态和解毒,抗氧化损伤,细胞增殖和凋亡,对放、化疗药物的抗药性等。在男性生殖系统中MT也广泛分布,本文就MT在男性生殖系统中定位及作用做一综述。     

ERp29蛋白在BALB／c小鼠附睾头部和尾部精子中的鉴定和定位

目的 对在BALB/c小鼠附睾精子中内质网蛋白29(endoplasmic reticulum protein 29,ERp29)进行鉴定以及定位.方法 应用免疫印迹方法鉴定BALB/c小鼠附睾头、尾部精子ERp29蛋白,同时利用激光共聚焦显微镜和间接免疫荧光定位的方法研究ERp29在附睾头、尾部精子上的定位.结果 证实ERp29蛋白存在于BALB/c小鼠附睾头部和尾部精子中,且其在尾部精子中含量较头部明显增高.ERp29蛋白主要定位于BALB/c小鼠附睾头部精子的头部前端,而在附睾尾部精子则主要定位于头部和尾部主段.结论 通过对ERp29蛋白在BALB/c小鼠附睾头部和尾部精子上的鉴定和定位,可以帮助进一步研究该蛋白对小鼠精子的作用.     

AAT蛋白在人精子中的鉴定和定位

目的对α1-抗胰蛋白酶（AAT）在人精液和精子中进行鉴定以及定位。方法应用免疫印迹方法鉴定AAT蛋白，利用激光共聚焦显微镜和间接免疫荧光定位的方法研究AAT在精子上的定位。结果证实在人精浆和精子里都存在AAT蛋白，且其主要定位于精子的头部，尤其在赤道板处有强荧光。结论通过对AAT在人精子上的鉴定和定位，可以帮助进一步研究该蛋白对精子的作用。     

输精管结扎后小鼠睾丸热休克蛋白表达

目的 :探讨热休克蛋白 70 ( HSP70 )在输精管结扎术前后小鼠睾丸中的表达。方法 :60只昆明小鼠行双侧输精管结扎术 ,并设 3 0只假手术小鼠为对照组。分别于术后 1、2、3个月观察。睾丸组织行常规制片后进行免疫组化染色检测 HSP70的表达 ,小鼠血清采用精子凝集和精子制动试验进行抗精子抗体检测。结果 :在结扎组及对照组睾丸生精细胞中均有 HSP70表达。对照组与结扎术后 2个月组 HSP70表达水平均较低 ,两者之间无显著差异 ;结扎术后 2个月组及 3个月组与对照组及结扎术后 1个月组相比 ,HSP70表达水平显著上升 ( P<0 .0 1 )。结论 :输精管结扎术后一段时间内 ,睾丸的生精过程经历从抑制到恢复正常的变化。这一变化可能与 HSP70相关。